UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ESPE

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA

SISTEMAS BIOLÓGICOS

PROYECTO INTEGRADOR

NIVEL: PREGRADO- PRIMER NIVEL

“INCIDENCIA DEL AGUA AHUMADA EN LA GERMINACIÓN DEL CACAO”

GRUPO DE PROYECTO

MENA ESTEBAN

MENA KELVIN

NICKELSEN UWE

SANGOLQUI - 2018

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1.-Título del proyecto:

Evaluación de la incidencia del agua ahumada en la germinación de Theobroma cacao

L.

2.- Definición y Justificación del Problema

El cacao a lo largo de la historia del Ecuador ha sido considerado una de sus

principales fuentes de ingresos siendo el “50% de las exportaciones totales del país,

representando las dos terceras partes de los ingresos tributarios” (UTEPI, 2007), sin embargo,

su cultivo conlleva varios problemas para los agricultores, tales como lo son las plagas

(Insectos y hongos), la variación del precio del producto y de la semilla, la cual puede llegar a

costar hasta $88,00 el quintal con períodos estables en la economía del país, y esto sin la

confianza de que todas germinarán, por ello, varios sectores han optado por realizar sus

propios viveros y así garantizar una mayor probabilidad de éxito, proceso que tarda de dos a

tres semanas.

Se ha optado por el uso del agua ahumada debido a sus propiedades positivas en la

germinación de varios tipos de semilla, así, la producción de plantas jóvenes de buena calidad

a partir de cenizas que podrán ser generadas a partir de los propios residuos de las

plantaciones y cosechas, de modo que el factor tiempo en períodos en los que se necesita ser

precisos en fechas por la presencia de lluvias ya no sea un problema.

3.- Objeto de estudio

Se estudiará la etapa de germinación del Theobroma cacao L. debido a la incidencia y

el margen de efecto de las soluciones de agua ahumada como promotora del crecimiento de

la semilla.

4.- Campo de investigación

2
 Departamento de Ciencias de la Vida

1. Ciencias Vegetales

-Química y Biología

5.-Sistema de Objetivos

Objetivo General.

Evaluar la incidencia de los componentes activos del agua ahumada en la germinación

del cacao en función de cada muestra.

Objetivos Específicos.

1 Preparar dos soluciones a distinta concentración de agua ahumada a base de restos

de cacao

2 Demostrar de la incidencia de los componentes activos del agua ahumada en la

germinación del cacao.

3 Comparar de la tasa de crecimiento del cacao afectado por ambas concentraciones

para establecer el margen de efectividad.

6.- Hipótesis

El componente activo del agua ahumada desencadena reacciones germinantes en las

semillas de cacao a usar.

7.- Metodología

Para el desarrollo del experimento se requiere el siguiente material:

Con el fin de realizar el experimento, es necesario la adquisición de 100g de sustrato

de macetas, 9 macetas, 200g de cáscara seca de cacao y 75 semillas de cacao para la

plantación. Para el cálculo de procesos se utilizarán una balanza electrónica, equipo de

temperatura controlada y regla de medición.

3
 Posteriormente se necesitará un tamiz de tela, 3 vasos precipitados, mechero de

bunsen, encendedor a gas, rejilla metálica, arco metálico, mortero, y una capsula de porcelana

con el fin de realizar el agua ahumada que será utilizada posteriormente.

Al realizar este compuesto necesitaremos de 300 ml de agua des ionizada para

producir el agua ahumada a dos concentraciones (5 g y 15 g) y el control.

Para elaboración de agua ahumada:

1.- Hacer arder los restos de cáscara de cacao en la cápsula de porcelana.

2.- Triturar con el mortero los restos solidos después de la combustión.

3.- Colocar 5 g de la sustancia combustionada en un vaso de precipitado de 250 ml y 15 g en

otro.

4.- Verter 100 ml de agua des ionizada en los vasos de 5g y 15 g de sustancia combustionada

y dejar reposar por 6 horas.

5.- Colocar la mezcla de agua ahumada de 5 g y 15 g en un tercer y cuarto vaso Berzelius

utilizando el tamiz de tela, asegurándose que solo traspasen restos líquidos.

Para germinación de semillas de cacao.

1.- Ajustar el equipo de control de temperatura a 30°C

2.- Ubicar las 9 macetas en el equipo de control de temperatura, en donde 3 serán agregadas

concentraciones de 5 g en 100 ml de agua ahumada, otras 3 con concentraciones de 15 g en

100 ml de agua ahumada y las ultimas 3 macetas serán las muestras de control.

3.- Poner 10,0 g del sustrato para masetas medidos en la balanza electrónica en las 9 macetas.

4.- Colocar 5 semillas de cacao en cada una de las macetas y enterrarlas en el sustrato a una

profundidad constante de 0,5 cm de manera que se ubiquen en los bordes para poder ser

observadas sin alterarlas.

4
5.- Agregar 10 ml de agua des ionizada a las 3 macetas del grupo de control y la misma dosis

de agua con concentraciones de 5 g a 3 macetas y 15 g a las 3 restantes.

6.- Contar el número de semillas germinadas (distinguibles por la emergencia de la plántula)

al cabo de 10 días.

7.- Medir la altura de las plántulas emergentes desde la superficie del suelo hasta la parte más

alta del tallo.

8.- Realizar los cálculos de dependencia con la prueba de hipótesis Chi cuadrado donde se

determinará si las tres variables están relacionadas o no.

8.- Marco teórico

Cacao, árbol de pequeña talla, perennifolio, de 4 a 7 m de altura o 20 m o más

(silvestre).

Según investigaciones recientes de Zarrillo et al. (2018) afirman que la planta es

originaria del país ya que el uso de cacao identificado por tres líneas independientes de

evidencia arqueológica (granos de almidón de cacao, residuos de teobromina absorbida y

ADN antiguo) datan de aproximadamente 5,300 años atrás recuperados del sitio de Santa

Ana-La Florida (SALF) en el sureste de Ecuador. (p.1) Dato relevante que conlleva fuerte

relación con la producción y reconocimiento del producto a nivel mundial, mismo que lo

hace de carácter notable para nuestra investigación.

De este modo, se pretende corroborar si compuestos potenciales para la germinación

como la butenolida 3-metil-2H-furo [2,3-c] pran-2-one promueven la estimulación de la

semilla de cacao, tal y como se ha comprobado en investigaciones de diversas plantas tanto

que se relacionan con el fuego como las que no, así, tenemos aquellas que se activan después

de un incendio como Baloskion tetraphyllum donde según Guo-Hua, Bunn, Dixon y Flematti

(2016) las semillas cultivadas en medios que contienen butenolida germinaron 6 días antes

5
con los máximos de germinación entre 7 y 14 días (…) el segundo efecto es que el butenolide

mejoró la semilla total. (p.306). Por otro lado, tenemos aquellas que no se relacionan con el

fuego, empero, tienen efectos análogos, como la lechuga, donde a más de comprobar sus

efectos positivos en presencia de butenolida se evidenció según Light, Burger y Stade (2005)

que los compuestos activos pueden formarse a partir de reacciones entre una cantidad de

aminoácidos y azúcares diferentes (p.7). Entonces, siendo el cacao una planta que nace en

una precipitación de “1,300 a 2,800 mm por año con una estación seca corta, menor de 2

meses y medio. El clima debe ser constantemente húmedo, con temperatura media diaria

entre 20 y 30 ºC, con una mínima de 16 ºC” (Species Plantarum s.f. p.254) y por ende bajo

condiciones que divergen de las susodichas plantas se pretende probar que el 3-metil-2H-furo

[2,3-c] pran-2-one también desencadena reacciones a germinación en el cacao pese a que su

ambiente es tropical y húmedo.

En cuanto al 3-metil-2H-furo [2,3-c] pran-2-one, este es estable a altas temperaturas

(su punto de fusión es de 118 ° a 119 ° C), soluble en agua, activo en un amplio rango de

concentraciones (1 ppm a 100 ppt), y capaz de germinar una amplia Gama de especies que

siguen al fuego. El butenolide se deriva de la combustión de celulosa, que, como componente

de todas las plantas, representa un sustrato de combustión universal.(Flematti, Ghisalberti,

Dixon y Trengove, 2004, p.977) esta es una molécula altamente bioactiva producto de las

combustión de las paredes celulares de las plantas, en especial de la celulosa, que también se

puede sintetizar a partir de las mezclas de ciertos aminoácidos, ya que, se ha observado de

acuerdo a Light, Burger y Stade (2005).Que las hemicelulosas, que abundan tanto en las

paredes celulares primarias como en las secundarias de plantas, son polímeros de azúcares

tales como arabinosa, manosa y xilosa, el azúcar pentosa, que mostró una buena germinación.

(p.7). Por lo que ha sido dable demostrar que esta butenolida es un agente promotor y

estimulante de reacciones de germinación, aunque según investigaciones como las de

6
Downes, Lamont, Light y Staden (2010). sugieren que esto no se aplica universalmente. Esto

sugiere que otras sustancias químicas en el agua de humus pueden desempeñar un papel

importante en la estimulación de la germinación de ciertas especies. (p.383). A pesar de ello,

su experimentación en estado puro no se ha realizado, por lo que su influencia en el cacao es

desconocida.

9. Resultados Esperados

La realización de este proyecto tiene como objetivo demostrar la efectividad del agua

ahumada a base de restos de cacao en la germinación del mismo. Es por esto que como

expectativas se mantiene el hecho de que la planta reduzca su tiempo de germinación de un

rango de 15 a 20 días, a un rango de 10 a 15 días, lo que permitiría solucionar el problema

planteado. De esta manera, los agricultores, no solo de nuestro país sino de otros adyacentes

puedan identificar las plantas útiles en un menor tiempo, y así las plantas se aprovecharían en

su estación óptima para la germinación. Esta resolución del problema permitiría a los

agricultores evitar pérdidas en su ingreso económico, y así generar un bienestar en la

economía del sector agrícola en general.

7
 Resultados Obtenidos

Los datos recolectados nos indican el margen de efectividad del agua ahumada con

presencia de butenolida, permitiendo que las plantas que experimentaron la aplicación del

compuesto germinen en un 50%-60% más rápido que aquellas que simplemente

experimentaron la aplicación de agua común. Podemos entender que la presencia de

butenolida estimula la rapidez de germinación y la captación de sustratos y minerales del

suelo, permitiéndola germinar en un menor tiempo.

Tabla 1. Germinación de semillas de cacao en una semana

Tipo de agua Ensayo Numero Media %

germinado (/50)
Desionizada 1 10 11 44
2 12
Ahumada al 5% 1 13 15 60
2 17
Ahumada al 15% 1 23 22 88
2 21
Fuente: Ficha de recolección de datos de numero de semillas de cacao germinadas en una semana
Elaborado por: Mena, K. Mena, E. Nickelsen, U.

A partir de los datos procesados que nos informan sobre el número de semillas

germinadas con éxito, podemos ver claramente que el agua ahumada hace germinar, por

término medio.

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 Grafico de germinacion de semillas con agua destilada

11

14

Porcentaje de semillas de cacao germinadas con agua destilada

Porcentaje de semillas de caco no germinadas con agua destilada

Grafico de germinacion de semillas con agua ahumada al 5%

10

15

Porcentaje de semillas de cacao germinadas con agua ahumada al 5%

Porcentaje de semillas de caco no germinadas con agua ahumada al 5 %

Grafico de germinacion de semillas con agua ahumada al 15%

3

22

Porcentaje de semillas de cacao germinadas con agua ahumada al 15%

Porcentaje de semillas de caco no germinadas con agua ahumada al 15 %

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 Test Chi cuadrado

Se realizó una prueba de chi cuadrado para ver si existe dependencia entre la

germinación de las semillas de cacao tratadas con agua ahumada al 5% y 15% y agua

destilada.

Hipótesis nula: El componente activo del agua ahumada a base de restos de cacao no

desencadena reacciones germinantes en las semillas de cacao.

Hipótesis alternativa: El componente activo del agua ahumada a base de restos de

cacao desencadena reacciones germinantes en las semillas de cacao.

Tabla 2. Tasa de germinación de semillas de cacao en una semana

Agua destilada Agua ahumada al 5% Agua ahumada al 15% Total de filas

Germinadas 11 15 22 48

Sin Germinar 14 10 3 27

Total de columnas 25 25 25 75

Fuente: Ficha de recolección de datos de numero de semillas de cacao germinadas en una semana
Elaborado por: Mena, K. Mena, E. Nickelsen, U.

Tabla 3. Tasa esperada de germinación de semillas de cacao en una semana

Agua destilada Agua ahumada al 5% Agua ahumada al 15%

Germinadas 16 16 16

Sin Germinar 9 9 9
Fuente: Ficha de recolección de datos de numero de semillas de cacao germinadas en una semana
Elaborado por: Mena, K. Mena, E. Nickelsen, U.

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 Calculamos Chi cuadrado
( fo−fe) 2
x 2 cal=∑
fe
2
x cal=10,76
X 2crit=9,210 para p= 0,99
V=2

Debido a que el valor del x 2 cal=10,76es mayor que el X 2 crit = 9 , 2 1 se acepta la

hipótesis alternativa, donde el componente activo del agua ahumada a base de restos de

cacao desencadena reacciones germinantes en las semillas de cacao.

Efecto del agua ahumada y del agua destilada sobre el crecimiento de las

plántulas de cacao.

En base a los datos recogidos sobre la extensión de las raíces de las semillas ya

germinadas, se puede observar que la solución aplicada no solo permite que las semillas

germinen con una mayor rapidez, sino que al seguir aplicándola influye en la fase de

reproducción celular, asociada al tamaño de las raíces en relación al tiempo transcurrido. Es

decir, que, con la aplicación de la solución, la planta genera mayor raíz, en un menor periodo.

De esta manera se podrá analizar, en un pequeño intervalo, que semillas van a ser utilizadas

en la producción agrícola, y evitar pérdidas temporales arraigadas a las estaciones de

germinación del cacao.

Altura de las plántulas de semillas germinadas

Tipo de agua Ensayo Altura media de Altura media total

plántulas del ensayo /mm±0,5mm
/mm±0,5mm
Destilada 1
2
Ahumada al 5% 1
2
Ahumada al 15% 1
2

10. Viabilidad

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Técnica:

Dentro del campo de estudio, a nivel teórico existe cierta dificultad debido a

conceptos que son ligeramente avanzados, sin embargo, gracias a la investigación y consulta

acerca de datos de distinta índole, se ha logrado aclarar aquella información. De esta manera

la viabilidad técnica para desarrollar el proyecto es favorable, tomando en cuenta también que

para el campo experimental ya se cuenta con los conocimientos necesarios.

Humana:

La cantidad de recursos humanos no es excesiva. Es así como los tres integrantes del

proyecto permiten que este sea viable en el campo de los recursos humanos. Como factor

extra contamos con el apoyo y tutoría de la ingeniera a cargo del proyecto, lo cual aporta a la

viabilidad humana.

Financiera:

El costo de la realización de la parte experimental de esta investigación es realmente

bajo, ya que contamos con la disposición del material de laboratorio de la universidad de las

fuerzas armadas ESPE, con la debida anticipación y permiso del docente a cargo. De igual

manera la adquisición de material para los experimentos es adquirido a un bajo costo gracias

a contactos agrícolas.

Ambiental:

La viabilidad ambiental de este proyecto es muy alta, debido a que se pretende solucionar

problemas relacionados con la agricultura del cacao, sin afectar de ninguna manera al

ambiente.

11. Cronograma

DICIEMBRE: ENERO:
17 a 31 de Diciembre 3 y 4 de Enero 7 de Enero 7 a 20 de Enero 21 a 25 de Enero

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Obtención de todo el Elaboración del agua Siembre, Mantenimiento y Mantenimiento de las

material requerido ahumada a 5 y 15 g en mantenimiento y cuidado de las semillas y tabulación

para la práctica. 100 ml de agua cuidado de las semillas de los datos

destilada. semillas registrados.

12. Bibliografía

-Downes, K., Lamont, B., Light, M. and Staden, J.(2010). The fire ephemeral Tersonia

cyathiflora (Gyrostemonaceae) germinates in response to smoke but not the

butenolide 3-methyl-2H-furo[2,3-c]pyran-2-one. Annals of Botany, 106, 381–384.

doi:10.1093/aob/mcq118, available online at www.aob.oxfordjournals.org

- Downes, K., Light, M., Posta, M., Kohout L. y Staden J.(2013). Comparison of germination

responses of Anigozanthos flavidus (Haemodoraceae), Gyrostemon racemiger and

Gyrostemon ramulosus (Gyrostemonaceae) to smoke-water and the smoke-derived

compounds karrikinolide (KAR1) and glyceronitrile. Annals of Botany, 111, 489–497.

doi:10.1093/aob/mcs300, available online at www.aob.oxfordjournals.org

- Flematti, G., Ghisalberti, E., Dixon, K. y Trengove R. (2004). A Compound from Smoke

That Promotes Seed Germination. Science, 305, 977. doi: 10.1126/science.1099944

13
- Guo-Hua, M., Bunn, E., Dixon, K. y Flematti, G. (2006). Comparative Enhancement Of

Germination And Vigor In Seed And Somatic Embryos By The Smoke Chemical 3-

Methyl-2h-Furo[2,3-C]Pyran-2-One In Baloskion Tetraphyllum (Restionaceae).

Society for In Vitro Biology, 42, 305–308. doi: 10.1079/IVP2006758

-Jain, N. y Staden, J. (2006). A smoke-derived butenolide improves early growth of tomato

seedlings. Plant Growth Regul, 50, 139–148.doi 10.1007/s10725-006-9110-x

- Light, M., Burger, B. y Staden, J. (2005). Formation of a Seed Germination Promoter from

Carbohydrates and Amino Acids. J. Agric. Food Chem, 53, 5936−5942. doi

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- Okema, A., Kulkarnia, M. Y Stadena, J. (2015). Enhancing Phytoremediation Potential of

Pennisetum clandestinum Hochst in Cadmium- Contaminated Soil using Smoke-

Water and Smoke-Isolated Karrikinolide. doi 10.1080/15226514.2014.981245

- Stevens, J., Merritt, D., Flematti, G., Ghisalberti, E. y Dixon, K. (2007). Seed germination

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one under laboratory and field conditions. Plant Soil, 298, 113–124. doi

10.1007/s11104-007-9344-z

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