SELECCION DE LA CEPA ADECUADA DE ARTEMIA

Determinación de las características de eclosión: eficiencia (EE) y

porcentaje (E%) de eclosión

PREPARACION DE LOS ANÁLISIS: ECLOSIÓN DE QUISTES BAJO CONDICIONES ESTÁNDARES

PROCEDIMIENTO

- eclosión bajo condiciones estándares

28°C (iluminación permanente, temperatura
constante: 28 °C)
- tiempo t=0: incubación de 2 g de quistes en
800 ml de agua de mar
- tiempo t=2: añadir 200 ml de agua de mar
(para re-suspender los quistes pegados a
la pared del recipiente)
- tiempo t=24: toma de muestras (100 µl
utilizando una micro-pipeta automática)

0 2 24
duración de la eclosión (h)

DETERMINACION DE LA EFICIENCIA DE ECLOSION (EE)

PROCEDIMIENTO
LUGOL
- fijar la muestra con unas gotas de LUGOL
- observación microscópica y conteo del número de
nauplios: N (= 42 en el ejemplo ilustrado)
- cálculo de la EFICIENCIA DE ECLOSIÓN (EE)
- cantidad de quistes incubados: C = 2 g
- volumen de la eclosión: V = 1000 ml
- volumen de la muestra: M = 100 µl = 0.1 ml

- EFICIENCIA DE ECLOSIÓN

EE N x V 42 x 1000

= = = 210000 nauplios.g-1
M ×C 0.1 × 2

DETERMINACION DEL PORCENTAJE DE ECLOSION (E%)

PROCEDIMIENTO

- la muestra previamente fijada con LUGOL y

analizada para la EE será tratada con
HIPOCLORITO DE SODIO
⇒ las cáscaras vacías y los quistes que no
eclosionaron se disuelven (descapsulación) HIPOCLORITO
⇒ de estos últimos quedan los embriones
- observación microscópica y conteo de los
embriones: E (=9 en el ejemplo ilustrado)
-cálculo del PORCENTAJE DE ECLOSIÓN (E%)
- número de nauplios: N (= 42 en el ejemplo
ilustrado)
- número de embriones: E (= 9 en el ejemplo)

- PORCENTAJE DE ECLOSIÓN

N 42
E% = = = 82.3 %
N+E 42 + 9
SELECCION DE LA CEPA ADECUADA DE ARTEMIA
Determinación de las características de la eclosión: Tasa de eclosión
PREPARACION DE LOS ANÁLISIS: ECLOSION DE QUISTES BAJO CONDICIONES ESTANDARES

28°C

0 2 14 15 16 24
duración
de la eclosión (h)

PROCEDIMIENTO
LUGOL
- eclosión bajo condiciones estándar (iluminación permanente,
temperatura constante: 28 °C)
- tiempo t=0: incubación de 2 g de quistes en 800 ml de agua
de mar
- tiempo t=2: añadir 200 ml de agua de mar (para re-
suspender quistes pegando a la pared del recipiente)
- tiempo t=14: toma de la primera muestras (100 µl utilizando
una micro-pipeta automática) y determinación del E%
- tiempo t = 15 , t = 16, ... t = 24: repite las acciones de t =14

EJEMPLO
Al final de la experiencia se calcula la para cada muestra la EE relativa a la EE después 24 h:
EE t
ERt = × 100
EE 24

t: duración de la 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
eclosión (h)
EE (× 106 nauplios.g-1 ) 5 10 25 50 100 140 165 185 195 205 210

ER 2.4 4.8 11.9 23.8 47.6 66.7 78.6 88.1 92.9 97.6 100

VALORES TÍPICAS DE LA TASA DE

ECLOSIÓN

- t90 , t50 y t10 : los tiempos después de los

cuales 90%, 50% y 10% de los quistes
viables han eclosionados

- ts = t90 - t10 : una valor teórica dando una

estimación de la sincronía de la eclosión;
lotes aceptables deben tener ts < 6 horas

- en el ejemplo ilustrado:
- t90 = 22 horas
- t10 = 15 horas
- ts = 7 horas
- t50 = 18.5 horas
SELECCION DE LA CEPA ADECUADA DE ARTEMIA
Determinación del tamaño de los nauplios recién eclosionados

CALIBRACION DEL OCULAR

cuadrilla del hemocitómetro

Calibración
cuadro estandard del
hemocitómetro: sss mm2 65 unidades de la escala del ocular
escala del ocular corresponden con 4 x sss mm

0 100 campo del micróscopio 1 unidad corresponde con ttt mm

MEDICION DEL DIAMETRO DE LOS QUISTES DE ARTEMIA

quiste de Artemia

hidratación de los quistes

2 h en agua de mar con observación microscópica y determinación del diámetro de los quistes
aireación suave para una estimación confiable se debe calcular el promedio de por lo menos
100 quistes
MEDICION DEL TAMAÑO (LONGITUD) DE NAUPLIOS DE ARTEMIA

incubación de los
quistes y eclosión nauplio de Artemia
de nauplios

LUGOL

preparación de la observación microscópica y determinación del tamaño de los nauplios

muestra para una estimación confiable se debe calcular el promedio de por lo
menos 100 nauplios

RELACION ENTRE EL DIAMETRO DE

LOS QUISTES DE ARTEMIA Y EL
TAMAÑO DE LOS NAUPLIOS RECIEN
ECLOSIONADOS
(según datos de Vanhaecke, 1983 y
Vanhaecke & Sorgeloos, 1980; en: Léger et
al., 1986)