PRACTICA: ANÁLISIS DE FLUCTUACIÓN DE LURIA Y DELBRÜCK

¿Cómo aparecen las mutaciones que, por ejemplo, permiten a las bacterias
ser resistentes a los antibióticos?

En principio, podría haber 2 posibilidades:

1ª. Al estar expuestas a los antibióticos, las bacterias se hacen resistentes como
resultado de la exposición a los mismos.

2ª. La resistencia a los antibióticos aparece por una mutación que ocurre al
azar, incluso antes de la exposición a los antibióticos.

En el primer caso las bacterias reaccionan ante los antibióticos volviéndose

resistentes a ellos.

En el segundo caso había bacterias mutantes que ya eran resistentes al antibiótico:

la población bacteriana estaba constituida por una mezcla de bacterias resistentes
y bacterias sensibles a los antibióticos. Al añadir el antibiótico, este selecciona a las
bacterias mutantes que ya eran resistentes al antibiótico y son las únicas que
sobreviven.

Se trata de una de las mayores polémicas de la biología. Intuitivamente tiende a

pensarse que las bacterias se hacen resistentes tras la exposición a los antibióticos.

Pero en 1943 Salvador Luria (médico) y Max Delbrück (físico cuántico)

demostraron que no era así, mediante un experimento que llamaron “Análisis de
Fluctuación”: las bacterias siempre conseguían su resistencia a los antibióticos
mediante mutaciones que ocurrían al azar antes de la exposición a los antibióticos.

La idea de que, por ejemplo, ya existan bacterias resistentes a un antibiótico que

aún no ha sido creado, resulta paradójica. Tal vez por eso, aunque Luria y Delbrück
recibieron el premio Nobel por su descubrimiento y muchos de los filósofos de la
ciencia consideran que el Análisis de Fluctuación es el experimento mejor
diseñado de la historia de la Biología, mucha gente, en el ámbito de las ciencias de
la salud, sigue pensando que las bacterias “se hacen resistentes” a los antibióticos.

Por supuesto, el análisis de fluctuación se puede aplicar al estudio de la adaptación

a cualquier tipo de sustancias. Se realizaron miles de análisis de fluctuación con
todo tipo de bacterias, levaduras, parásitos, microbios eucariotas, líneas celulares
vegetales, animales y humanas a para estudiar su adaptación a centenares de
sustancias dañinas, desde antibióticos hasta uranio, pasando por sustancias de
guerra química que nunca habían existido en la naturaleza, y el resultado siempre
fue que la mutación aparece por azar y no como consecuencia de la exposición a la
sustancia dañina.

El fundamento teórico del análisis de fluctuación se basa en como sería la

repetición de los resultados en un estudio de adaptación:
Supongamos que se estudia la adaptación de una especie de bacteria a un
antibiótico.

Representando lo que ocurre en el tiempo:

Se inicia el experimento a partir de una bacteria. Esta se divide en 2. Cada una de

las bacterias hijas se divide en otras 2 y así sucesivamente. Aquí solo se
representan 8 bacterias, pero en el experimento real se dejan crecer hasta que hay
miles de ellas. Una vez que han crecido añado el antibiótico y compruebo lo que
ocurre. En azul se representa a las bacterias sensibles; en rojo a las resistentes.

1. Las bacterias se hacen 2. En la tercera generación

resistentes tras añadir el aparece una bacteria resistente
antibiótico. que se divide dando 2 bacterias
resistentes que son las que
sobreviven al añadir el antibiótico.

Vemos que en ambos casos aparecen 2 bacterias resistentes. Así no podemos

averiguar el mecanismo por el que aparecen los resistentes.

Pero si repetimos el proceso varias veces, si podremos distinguir entre ambos

modelos debido a la fluctuación (dispersión) de los resultados obtenidos:
Modelo post-adaptativo: las bacterias
se vuelven resistentes tras la exposición
al antibiótico.
Modelo pre-adaptativo: las
bacterias consiguen la
resistencia por mutaciones que
aparecen al azar antes de la
exposición al antibiótico.

En el caso post-adaptativo en las 4 réplicas del experimento se encontrarían

resultados similares: en todos los casos las bacterias se enfrentan al antibiótico al
mismo tiempo y se adaptan o no a él.

En el caso pre-adaptativo, como la resistencia aparece por mutaciones que ocurren

al azar, lo importante es lo que pasa antes de añadir el antibiótico (que solo va a
revelar el resultado de la historia): en el primer caso la mutación ocurre en solo
una bacteria un poco antes de añadir el antibiótico y por eso solo aparecerá un
mutante resistente. En el segundo caso la mutación ocurre en la segunda
generación. Esta bacteria resistente se divide durante otras dos generaciones
dando lugar a 4 bacterias resistentes. En el tercer caso no ocurrió ninguna
mutación y por esos no aparece ningún resistente. En el cuarto caso la mutación
ocurrió en una bacteria 2 generaciones antes de añadir el antibiótico.
La genialidad de Luria y Delbrück estuvo en darse cuenta de que era la repetición
del mismo experimento muchas veces quien podía dar la clave del fenómeno,
analizando la variabilidad de los resultados obtenidos.

Una vez entendido este concepto, debes responder a las siguientes

cuestiones:

1º Recientes indicios indican que en la zona profunda de la corteza terrestre

hay comunidades de bacterias criptoendorlíticas, con un metabolismo muy
diferente a las bacterias de la superficie terrestre que nos resultan conocidas.
Apenas sabemos nada de ellas, aunque algunos investigadores piensan que su
masa total puede superar a la de toda la biosfera que conocemos.

Un investigador realiza un test de fluctuación de Luria y Delbrück obteniendo los

siguientes resultados:

Réplica Número de bacterias resistentes al

antibiótico
1 0
2 4
3 0
4 0
5 8
6 0
7 0
8 1
9 1
10 0
11 0
12 0
13 16
14 0
15 2

¿Cuál es el mecanismo de aparición de la resistencia al antibiótico en estas

bacterias criptoendorlíticas?

Actividad complementaria de la Práctica

Adjuntamos un artículo científico en formato pdf llamado:

Resistance_microalgae.pdf

Después de leerte el material y métodos contesta a las siguientes preguntas:

1. ¿Para que se hace el set 2 en el experimento de Luria y Delbrück?

2. ¿Qué estadística te permite inferir que se trata de un modelo Pre-
adaptativo?
3. ¿Cómo se calculan las tasas de mutación?

El documento con la respuesta a la actividad de la práctica y de la actividad

complementaria (en el caso de que se realice) deben subirse al campus
virtual en la pestaña de evaluación de prácticas en la tarea llamada: Práctica
5 Fluctuación