Estudio cinético de la hidrólisis enzimática de la lactosa en el suero

En este trabajo se estudió la hidrolisis enzimática de la lactosa en el suero a temperatura

ambiente de 32 ºC, utilizando como base de análisis de datos el modelo cinético de
Michaelis-Menten. El principal componente del suero es la lactosa, y el suero es el
líquido que queda después de la separación de caseína / queso y grasa durante la
coagulación de la leche, el cual es el principal subproducto de la industria láctea. la
producción mundial de queso acumula más de 3,2 millones de toneladas de lactosa,
disuelta en suero, donde la mitad de esta cantidad se utiliza para la nutrición humana y
animal, pero el resto es desperdicio y es muy difícil deshacerse de esto, ya que podría
causar una grave contaminación ambiental.
En este trabajo se busca convertir la lactosa, un disacárido a azúcar fermentable a través
de hidrólisis enzimática utilizando la enzima β-galactosidasa disponible
comercialmente.

Por lo tanto, se han investigado varias posibilidades de utilización de la lactosa del

suero, y una de ellas es la hidrólisis enzimática de la lactosa. En este proceso la lactosa
se en dos simples monosacáridos, glucosa y galactosa. La hidrolisis de la lactosa
también ayuda a las personas a consumir productos alimenticios derivados de la leche
que sufren de intolerancia a la lactosa. La hidrolisis enzimática permite condiciones
suevas de pH y temperatura.
Metodologia:
1. El suero de caseína obtenido tiene un pH de 4,8 de color pajizo. El contenido de
lactosa del suero de leche formado se midió utilizando el método DNSA (ácido
dinitrosalicílico), y se midio la absorbancia de la solución a 540 nm con la ayuda
de la curva de calibración. Dado que la lactosa es un azúcar reductor, responde a
la prueba en la que el ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS) se reduce a ácido 3-
amino, 5-nitrosalicílico en condiciones alcalina s. La curva estándar de lactosa
se utilizó para determinar la concentración de lactosa en el suero, encontrándose
una cantidad de 3,2 %.
2. Para estudiar la cinética de la hidrólisis de la lactosa, se prepararon 5 soluciones
diferentes de lactosa de 10, 20, 30,40, 50 g / L. Se prepararon por separado
soluciones buffer de 0.01 M K2HPO4, 0.015 M KCL and 0.012 M
MgCl2.6H2O a pH 6.75 ajustadas con ácido nítrico. Se incubó 1 ml de la
muestra de lactosa con 1 ml de la solución de enzima (0,143 mmoles / l)
preparada en el mismo tampón durante 10 minutos a temperatura ambiente de 32
° C, y luego se extrajo 1 ml. La reacción se detuvo mezclando con 1 ml de 0.1N.
 ácido tricloroacético. Posteriormente, la concentración de glucosa se midió
mediante el método GOD-Perid en cada mediante la medición de la
absorbancia de la solución de colorante de quinoneimina a 505 nm en un
espectrofotómetro visible a la luz ultravioleta.
Se utilizó la ecuación de Michaelis-Menten para modelar la hidrólisis enzimática de la
lactosa.

Los parámetros Vmax y Km se estimaron utilizándola linealización lineweaver-Burk.

La Vmax es la velocidad alcanzada por el sistema en la condición máxima del sustrato,

la cual fue de 4.38 mmol/l/min, y la constante de Km la cual fue de 64.034 mM es la
concentración de sustrato a la cual la velocidad de reacción es la mitad de Vmax. Km es
un reflejo de la afinidad de la enzima por su sustrato y es característico de un sistema
particular de enzima-sustrato. Cuanto menor es el valor de Km, más fuertemente se une
la enzima al sustrato. El valor de Km significa que la unión al sustrato enzimático es
suficientemente fuerte.