MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo es una solución de nutrientes que permite el desarrollo de

microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe
sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van
a crecer y multiplicarse para dar colonias.

El procedimiento para la preparación de cultivos es el siguiente:

Leer cuidadosamente las instrucciones de preparación del medio de cultivo asignado. Pesar
la cantidad exacta del medio deshidratado o las porciones correctas de cada uno de los
ingredientes. Disolver la porción pesada de acuerdo con las indicaciones del fabricante. Si
es necesario calentar se debe tener cuidado de no sobrecalentar. Ajustar el pH final de cada
lote de medio preparado, preferiblemente a temperatura ambiente (25°C). Para ello se debe
tomar una alícuota de 50 mL, medir el pH y de ser necesario ajustar al pH indicado
utilizando HCl 0,1N o NaOH 0,1N. Luego hacer el ajuste de pH al resto del medio de
cultivo utilizando la solución correspondiente pero 1 N. Distribuir el medio de cultivo e
identificar el lote de medio de cultivo preparado indicando su nombre, distribución y fecha
de preparación. Por último, esterilizar de inmediato el medio de cultivo donde se tapan con
tapón de algodón o aluminio y luego se llevan a la autoclave.

Tipos y usos de medios de cultivo

Según la naturaleza de sus constituyentes

NATURALES
Son los preparados a partir de sustancias
naturales de origen animal o vegetal como
ser extractos de tejidos o infusiones.
Ejemplos: un trozo de papa. Agar jugo de
manzana, Agar durazno, Agar y jugo de
vegetales.
SINTÉTICOS
Son aquellos que contienen en su
composición exclusivamente sustancias
químicas conocidas y disueltas en agua
destilada en proporciones determinadas,
resultando un medio de composición
perfectamente definida. Se utilizan para
obtener resultados reproducibles.

Según su estado físico

LÍQUIDOS SÓLIDOS SEMISÓLIDOS

Se denominan caldos y
contienen los nutrientes en
solución acuosa. Se utiliza
fundamentalmente cuando
se pretende la obtención de
una suspensión bacteriana
de una determinada
concentración.
Se preparan añadiendo un Contienen 7,5 g de agar
agar a un medio líquido /litro de caldo. Se utilizan
(caldo) a razón de 15g/litro. para determinar la
Este conjunto movilidad de las especies
convenientemente en estudio.
esterilizado puede ser
vertido en placas de Petri o
en tubos de ensayo y
presentan la posibilidad de
 aislar y diferenciar
bacterias, "procesos que
antes no eran posibles en
medio líquido".

Según sus propósitos de uso

a) COMUNES: Son aquellos que poseen los componentes mínimos para que pueda
producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales. Es el
medio más frecuentemente utilizado para mantener colonias microbianas. Por ejemplo: agar
común o caldo común.

b) ENRIQUECIDOS: Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales,

incorporan una serie de factores  indispensables para el crecimiento de microorganismos
exigentes, por ejemplo: sangre, suero, líquido ascítico, etc. El gonococo, por ejemplo,
necesita cistina y cisteína para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre
calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate).

c) SELECTIVOS: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas

bacterias contenidas en una población polimicrobiana. Un ejemplo de medio selectivo es el
caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del
resto de enterobacterias.

d) DIFERENCIALES: Son medios de cultivos que nos permiten distinguir entre varios
géneros y especies de microorganismos. El citrato de Simmons es un medio cuya única
fuente de carbono es el citrato sódico, entonces en él solo crecerán las bacterias capaces de
desarrollarse utilizando como única fuente de carbono ese componente; o el medio
MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los gérmenes que fermentan
la lactosa de aquellos que no lo hacen.

e)DE ENRIQUECIMIENTO: Son medios líquidos que contienen un agente que inhibe
las especies no deseadas pero que favorece el crecimiento irrestricto del agente infeccioso.
El medio de Muller - Kauffman, permite el crecimiento de Salmonella inhibiendo a su vez
el de numerosos coliformes.

f)DE TRANSPORTE: Son utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin

multiplicación significativa de los microorganismos desde el momento de su extracción
hasta su posterior estudio. Los medios de transporte más frecuentemente utilizados son los
de Stuart, Amies y Carey - Blair.

Técnicas de esterilización

La esterilización es un proceso a través del que se logra la destrucción total de los

microorganismos viables presentes en un determinado material. Los métodos de
esterilización se clasifican en físicos (calor húmedo, calor seco y radiaciones), mecánicos
(filtración) y químicos ( gaseosos como: oxido de etileno y no gaseosos como: aldehídos y
peróxido de hidrógeno.
 Métodos físicos

TIPO EQUIPO USO CONDICIONES DE

ESTERILIZACIÓN
Calor Húmedo Autoclave Pueden esterilizarse Presión del vapor: Vapor saturado
en autoclave con un título de 0.95 (95% de vapor
los objetos de acero y 5% de condensado) y libre de
inoxidable, vidrio y impurezas, utilizando agua blanda o
plásticos como el PP tratada.
(polipropileno), PMP
(polimetilpenteno) o Tiempo y temperatura: Estarán en
PTFE/PFA (teflón). relación directa con el grosor o el
tipo de empaque, definidos en los
estándares establecidos por
organismos internacionales.

Por ejemplo, en las autoclaves

gravitacionales y de prevacío, donde
el material es contenido en
empaques simples, utilizaremos:

Calor Seco Aire Caliente: se Las condiciones usuales de

emplea para la esterilización son de 160-180ºC
esterilización de durante 1-2 horas.
material de vidrio,
instrumentos
Horno quirúrgicos, agujas
de metal, materiales
no miscibles con el
agua, etc

Llama: Se utiliza
para la esterilización
de asas e hilos de
siembra, pinzas  así
como las bocas de
Llama mechero tubos y matraces
antes y después de
utilizarlos.

Radiaciones Radiaciones
ionizantes: se suele
utilizar la radiación
gamma para
 esterilizar alimentos,
medicamentos,
equipos de
laboratorio, sangre,
tejido y materiales
sanitarios.
Equipo Cobalto 60
Radiaciones Las de mayor actividad microbicida
ultravioleta: Se son las comprendidas entre las
utilizan en campanas longitudes de onda de 100 y 280 nm.
o gabinetes de
bioseguridad,
cámaras
especializadas
destinadas para el
estudio y análisis de
microorganismos,
células y material
biológico en general.
Esta forma de
esterilización permite
Esterilizador UV eliminar los
microorganismos
contaminantes tanto
de estas cámaras
como del
instrumental utilizado
para trabajar. Otro
uso que se da en los
laboratorios es para
esterilizar el agua
bidestilada (sin
sales), que se utiliza
para realizar diversos
análisis y preparación
de soluciones que
deben estar libre de
microorganismos
contaminantes.

Métodos mecánicos

TIPO EQUIPO USO CONDICIONES DE

ESTERILIZACIÓN
Filtración Utilizados para El material filtrante debe
esterilizar de ser inerte para no
soluciones reaccionar con los
termosensibles, componentes de la
Filtro de jeringa materiales solución, presentar
sensibles al resistencia mecánica y
 calor, tales como tener un tamaño de poro
ciertos medios de menor que los
cultivo, azúcares, microorganismos que
soluciones de deben ser retenidos.
antibióticos y Tradicionalmente se usan
otros filtros de nitrocelulosa
Equipo de medicamentos, desechables con tamaño
filtración al vacio etc. de poro de 0,45 o de 0,22
micras.

Métodos químicos

TIPO EQUIPO USO CONDICIONES DE

ESTERILIZACIÓN
Gaseosos Óxido de etileno: Concentración del
Se utiliza gas: Es activo en
principalmente concentraciones que
para esterilizar van de 300 mg/l a 600
Autoclave Óxido de productos mg/l.
etileno médicos y
farmacéuticos que Temperatura: Es
no soportan la activo en un rango de
esterilización temperatura que varia
convencional a desde 25º C a 55º.
alta temperatura,
como dispositivos Humedad: La
que incorporan Humedad relativa (HR)
componentes óptima para esterilizar
electrónicos, con óxido de etileno
envases o (OE) entre el 30% y el
recipientes de 50%.
plástico.
Tiempo de exposición:
Los tiempos varían de
acuerdo al tipo y
tamaño de la carga; de
la concentración; al tipo
de envoltorio; a la
temperatura; a la
humedad y a la
población microbiana
inicial.

No Gaseosos Aldehídos: El glutaraldehido

Destruyen muy cuando se usa al 2% en
bien las bacterias, soluciones alcalinas,
los hongos actúa como agente
microscópicos y esterilizante por sus
tienen también propiedades alquilantes.
una excelente
acción virucida.
Se emplean para
desinfectar
superficies,
aparatos e
instrumentos.