UNIVERSIDAD MILITAR NUEVA GRANADA

COMPLEMENTO HEMOLITICO (CH50) (10)

Identificación:
GL-AA-F-1
Guías de Prácticas de Número de
Páginas:
Revisión No.:
Laboratorio 4
2

Fecha Emisión:
2018/01/31
Laboratorio de:

MICROBIOLOGIA (5)

Titulo de la Práctica de Laboratorio:

COMPLEMENTO HEMOLITICO (CH50)
– INMUNOLOGIA FISIOLOGIA APLICADA (6) –

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

Doctora Aida Ricardo

DIANA PACHON
DOCENTE
Co. Med (RA)
Facultad de Medicina Jefe de Laboratorios JORGE ENRIQUE LUQUE
Bogota Facultad de Medicina
Decano

El uso no autorizado de su contenido así como reproducción total o parcial por cualquier persona o entidad, estará en
contra de los derechos de autor
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Control de Cambios

Fecha de
Descripción del Cambio Justificación del Cambio Elaboración /
Actualización
Practica Inicial 0 2007/10/30
Reforma Curricular 1 2009/04/17
Actualización de conceptos 1 2010/01/18
Actualización Bibliográfica 1 2015/09/03
Supresión y adición de Actualización del formato 2018/10/16
algunos elementos del formato
de guía de Laboratorio.

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1. FACULTAD O UNIDAD ACADÉMICA: MEDICINA Y CIENCIAS DE LA

SALUD

2. PROGRAMA: MEDICINA(12)

3. ASIGNATURA: FISIOLOGIA APLICADA- INMUNOLOGIA(13)

4. SEMESTRE: TERCERO(14)

5. OBJETIVOS: (15)
Evaluar la integridad funcional de la vía clásica del complemento.

6. COMPETENCIAS A DESARROLLAR: (16)

Establecer la vía clásica del complemento

7. MARCO TEORICO: (17)

El sistema de complemento hace parte de una de las primeras lineas de defensa

contra las infecciones gracias a que: fortalece la fagocitosis, incrementa los
mecanismos de inflamación, crea un puente entre la inmunidad innata y la
adquirida, intensifica la inmunidad humoral y ayuda a la eliminación de complejos
inmunes y cuerpos apoptoticos.
La prueba de laboratorio, determina la actividad de una de las vías del
complemento, la vía clásica y principalmente del componente C3; es también, una
prueba que indica la presencia de los componentes terminales C5-C9 (MAC)
funcionalmente activos, pero no las variaciones en el nivel de estos componentes.
Hay muchas formas de realizar esta prueba, pero la técnica más reproductible y
aplicable clínicamente es la descrita por Mayer. Esta prueba determina la
capacidad del suero para lisar una suspensión estándar de glóbulos rojos de
cordero (GRC) sensibilizados óptimamente con Ac de conejo anti GRC.

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La cuantificación de los niveles séricos de complemento en pacientes con diversas
enfermedades relacionadas con este sistema, se lleva a cabo utilizando la
capacidad hemolítica del suero del paciente cuando se adiciona una cantidad
definida de eritrocitos de carnero recubiertos con hemolisina (anticuerpos anti-
eritrocito de carnero). Si en el suero están presentes y funcionales todos los
componentes de la vía clásica, se observa la lisis de los eritrocitos sensibilizados; la
hemoglobina liberada se cuantifica en el espectrofotómetro y la densidad óptica
obtenida se relaciona con el valor dado por la lisis total de la misma cantidad de
eritrocitos. El resultado se da como la dilución mas alta (reciproco de la dilución)
que lisa al 50% de los eritrocitos sensibilizados, por lo cual a esta medida se le
conoce como CH 50.

La cantidad de lisis en un sistema estandarizado describe una curva sigmoide

cuando los valores son graficados contra las cantidades crecientes de
complemento añadido. La curva tiene una forma de S, pero en la región intermedia
cerca del 50% de hemólisis, existe una relación casi lineal entre el grado de
hemólisis y la cantidad de complemento presente. En esta gama, el grado de
eritrocitos lisados es muy sensible a cualquier alteración en la concentración del
complemento. Para fines clínicos, la medición de la actividad hemolítica total del
suero es tomada a nivel del 50% de hemólisis.

El CH 50 es una unidad arbitraria que se define como la cantidad de complemento

necesario para la lisis del 50% de los GRC en condiciones estandar rigidas de
sensibilización con Ac ANTI –GRC
FIJACION DE COMPLEMENTO
Muchas reacciones antigeno-anticuerpo, tienen la característica de activar
complemento, y este lesiona y destruye la célula o microorganismo que ha sido
reconocido como Ag. Las reacciones Ag-Ac en las cuales se activa el
complemento no produce ninguna manifestación visible de por si, cuando se hace
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in Vitro. Se requiere el empleo de un sistema indicador, que consiste en glóbulos
rojos de carnero y Ac contra estos glóbulos. Este antígeno con estos Ac al
reaccionar, activan complemento consumiéndolo, de tal manera que al agregar el
sistema indicador , glóbulos rojos de carnero y hemolisina, éste no ser alisado. Por
lo tanto si en el suero en estudio no hay los anticuerpos buscados, no habrá
fijación de complemento al sistema ag-ac en la primera fase de la reacción y en
consecuencia este lisará al sistema indicador.

8. MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS, SOFTWARE, HARDWARE O

EQUIPOS DEL LABORATORIO:

DESCRIPCIÓN (Material,
reactivo, instrumento, software, CANTIDAD UNIDAD DE MEDIDA
hardware, equipo)
Mechero de gas 1 Unidad
Incubadora 37°c 1 unidad
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9. MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS, SOFTWARE, HARDWARE O

EQUIPOS DEL ESTUDIANTE:

DESCRIPCIÓN (Material
Biológico, reactivo, instrumento, CANTIDAD UNIDAD DE MEDIDA
software, hardware, equipo)
Batas 1 unidad
Guantes 1 par
Placas de inmunodifusión radial
1 unidad
C3 ó C4
Capilares 1 unidad

10. PRECAUCIONES CON LOS MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS

Y EQUIPOS A UTILIZAR:

Es obligatorio el uso de bata desechable y guantes para manipulación de

muestras y reactivos. Deseche el material contaminado, según el código de
colores (aprendido en la guia #1) lo que permitirá el cumplimiento de normas de
bioseguridad para usted y el ambiente.
Recuerde cumplir el procedimiento de manejo de los equipos

11. PROCEDIMIENTO, MÉTODO O ACTIVIDADES: INMUNODIFUSION RADIAL

PARA C3/C4

 Medición de C3 y C4 en suero Humano

Deposite 50 ul de muestra de suero en los pozos para el Ag
↓
Incube a temperatura ambiente entre 48 a 72 horas en cámara húmeda a
temperatura ambiente (20-24C)
↓
Leer el diámetro del anillo e informar la concentración del Ag

12. RESULTADOS ESPERADOS:

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Medición de las concentraciones del complemento en pacientes hospitalizados

13. CRITERIO DE EVALUACIÓN A LA PRESENTE PRÁCTICA:

Comparación de criterios normales y análisis de pruebas a solicitar para sus
pacientes.

1. Determinar el significado clínico de la prueba de fijación de complemento

2. Enumere las entidades clínicas que pueden presentar si hay una disminución y/o
aumento del sistema del complemento
14. BIBLIOGRAFIA

 ROSE, N. FRIEDMAN, H. EL LABORATORIO EN INMUNOLOGIA CLINICA.

Editorial medica Panamericana. Segunda edición. 1984
 ROJAS, W. ANAYA J.M., ARISTIZABAL, B., CANO LUZ H., GOMEZ L.,
LOPERA, D. INMUNOLOGIA DE ROJAS. Corporación para Investigaciones
Biológicas. Diecisieteava edición. 2015
 ZAMBRANO, S. MANUAL DE INMUNOLOGÍA BÁSICA Y CLÍNICA. JGH
Editores. 1998
 FERREIRA, A., ANAI, A., LANZA P., AGUILLON JC., SEPULVEDA, C.
INMUNOLOGIA BASICA Y CLINICA. Editorial Mediterraneo, 2005

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