Revista de cromatografía líquida y tecnologías

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ISSN: 1082-6076 (impresión) 1520-572X (en línea) Página de inicio del diario: https://www.tandfonline.com/loi/ljlc20

Cromatografía de capa fina en el análisis del cannabis y

sus componentes y cannabinoides sintéticos.

Joseph Sherma y Fred Rabel

Para citar este artículo: Joseph Sherma y Fred Rabel (2019): cromatografía de capa fina en el análisis del
cannabis y sus componentes y cannabinoides sintéticos, Journal of Liquid Chromatography & Related
Technologies, DOI: 10.1080 / 10826076.2019.1663529

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Publicado en línea: 13 Sep 2019.

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REVISTA DE CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA Y TECNOLOGÍAS RELACIONADAS
https://doi.org/10.1080/10826076.2019.1663529

Cromatografía de capa fina en el análisis del cannabis y sus componentes y cannabinoides

sintéticos.

Joseph Sherma una y Fred Rabel si

una Departamento de Química, Lafayette College, Easton, PA, EUA; si ChromHELP, LLC, Woodbury, NJ, EE. UU.

RESUMEN PALABRAS CLAVE

El cannabis se ha utilizado como planta medicinal durante miles de años. Ahora hay más de 700 variedades de Cannabidiol; cannabinoides; canabis;
CBD CBN; análisis de drogas; hachís;
cannabis que contienen cientos de compuestos, incluidos los cannabinoides grasos que son los principales
cáñamo; HPTLC; marijuana; preparación
componentes biológicamente activos y los terpenos volátiles que tienen olores distintos. Esta es una revisión selectiva
de muestra; tetrahidrocannabinol; TLC; re
que incluye ejemplos importantes del análisis y estudio del cannabis y sus componentes y cannabinoides sintéticos
9- THC
por cromatografía en capa fina (TLC) relacionada con sus usos médicos y recreativos. Los métodos de TLC descritos
en esta revisión complementan los métodos de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), HPLC /
espectrometría de masas (HPLC / MS), cromatografía de gases (GC) y GC / MS más costosos y difíciles de realizar.
Estos métodos de TLC son especialmente valiosos y a menudo suficientes para su uso en países con recursos
limitados.

GRÁFICAMENTE ABSTRACTO

Introducción

El cannabis se ha utilizado como planta medicinal durante miles de años. Los cannabinoides que son los principales componentes biológicamente activos y

Ahora hay más de 700 variedades de cannabis que contienen cientos. los terpenos volátiles que tienen olores distintos. Los dos cannabinoides más

de compuestos, incluso graso frecuentes y comúnmente conocidos en el

CONTACTO Fred Rabel f.rabel@comcast.net ChromHELP, LLC, 136 Progress Ave., Woodbury, NJ 08096, EE. UU.
Las versiones en color de una o más de las figuras del artículo se pueden encontrar en línea en www.tandfonline.com/ljlc . 2019 Taylor & Francis Group,

LLC
2 J. SHERMA Y F. RABEL
planta de cannabis son re 9- tetrahidrocannabinol ( re 9- THC) y cannabidiol (CBD). extracción para recuperación de cannabinoides a partir de material vegetal. La
El THC se distribuye rápidamente a los tejidos grasos como el cerebro, y el
sistema citocromo P450 lo metaboliza a 11-hidroxi-THC psicoactivo. El
cannabis y los cannabinoides se han utilizado para tratar una variedad de
afecciones médicas y son legales en muchos estados de los Estados Unidos
para este propósito. Se ha publicado un resumen de la historia, la
farmacología y los usos médicos del cannabis. [ 1 ] Esta es una revisión selectiva
que incluye ejemplos importantes del análisis y estudio del cannabis y sus
componentes y cannabinoides sintéticos por cromatografía de capa delgada
(TLC) relacionados con usos médicos y recreativos, que también se están
legalizando cada vez más en muchos estados de los Estados Unidos y en
otros países, así como el uso de productos ilegales. Esta es la primera revisión
dedicada solo al TLC del cannabis en la literatura.
Canabis es un género de plantas floreciendo en el
Familia Cannabaceae, que consta de tres especies principales:
Cannabis sativa, indica, y ruderalis. El cáñamo es un término utilizado para clasificar las
variedades de cannabis que contienen 0.3% o menos de contenido de THC por peso
seco, que generalmente no son tóxicos y se cosechan para producir una variedad de
productos industriales, alimenticios, medicinas y otros productos. La marihuana
(también deletreada marihuana en muchas publicaciones) se usa para clasificar
variedades que contienen más de 0.3% de THC y pueden inducir efectos psicotrópicos
o eufóricos en un usuario. El CBD derivado del cáñamo es legal si contiene 0.3% de
THC o menos, mientras que el CBD derivado de la marihuana es ilegal y se clasifica
como una sustancia controlada, independientemente del porcentaje de THC; La
estructura molecular y la farmacología asociada del CBD derivada de ambas fuentes
son idénticas. 2 ] La marihuana y el hachís se han diferenciado como material vegetal
derivado de piezas secas de la planta de cannabis, principalmente brotes de flores,
para el primero y de resina comprimida de flores de la planta para el segundo. Hombre
y mujer Cannabis sativa las variedades generalmente se definen como productoras de
polen o productoras de brotes, respectivamente.
TLC es una técnica bien conocida actualmente utilizada para el análisis de
cannabis, [ 3 ] y los métodos descritos en esta revisión complementan los métodos
de cromatografía líquida (HPLC), HPLC / espectrometría de masas (HPLC / MS),
cromatografía de gases (GC) y GC / MS más caros y difíciles de realizar. Son
especialmente valiosos y a menudo suficientes para su uso en países con
recursos limitados. [ 4 4 ] Ventajas de HPTLC según lo enumerado por Badyal et al. [ 5
5] incluir la capacidad de analizar muestras crudas que contienen componentes
múltiples; fácil separación y detección de compuestos coloreados; análisis paralelo
de varias muestras en la misma placa que resulta en un alto rendimiento,
velocidad y bajo costo; las separaciones bidimensionales (2D) son fáciles de
realizar; diferentes modos de evaluación, que permiten la identificación de
compuestos que tienen diversas características de absorción de luz o colores; y
riesgo de exposición minimizado de efluentes orgánicos tóxicos y reducción de
problemas de eliminación y contaminación ambiental.
Metodología de extracción y técnicas de TLC
Citti y col. [ 6 6 ] revisó los usos reportados de extracción sólido-líquido,
extracción de punto de nube, y supercrítico líquido
extracción de muestras biológicas mediante extracción líquido-líquido y extracción
en fase sólida se cubrió en esta revisión. Se discutió la TLC para la determinación
cualitativa / semicuantitativa de los cannabinoides en plantas, y el método
validado de HPTLC publicado por Fischedick et al. (discutido a continuación, ref. 42
) para una cuantificación precisa y precisa. Se observó que la identificación se
basa en R F valores comparados con los compuestos estándar auténticos, la
solución acuosa azul B rápida aplicada a una placa desarrollada por inmersión o
pulverización es un reactivo selectivo para los cannabinoides, y placas de gel de
sílice polar (RP) de fase inversa (RP) de gel de sílice polar y no polar C18
(octildecilsililo) (generalmente Merck) RP-18) se utilizan para obtener órdenes de
elución opuestas complementarias para la confirmación de la identidad del analito
objetivo. Las placas RP-18 se han informado para muchos análisis como la fase
estacionaria óptima para la separación requerida de muestras, por ejemplo, para
la detección de THC, cannabidiol (CBD), cannabinol (CBN) y cannabicromene
(CBC) en aceites de cannabis disponibles comercialmente. utilizando la fase móvil
de acetonitrilo con reactivo de pulverización azul rápido B básico. [ 7 7 ] Se utilizaron
láminas de microfibra de vidrio (ITLC) para el cribado muy sensible. re 9- ácido
tetrahidrocannabinol-9-carboxílico en orina mediante desarrollo con hidróxido de
amonio concentrado con cloroformometanol (85: 15: 2) y detección mediante
pulverización con solución BB azul rápida [0,5% en metanol-agua (1: 1)] para dar
una mancha rosada eso se puede ver en ambos lados de la hoja a niveles muy
bajos. [ 8 ] El producto ITLC era bastante frágil, era una lámina de microfibra
impregnada con silicatos y ya no se comercializa.
El uso de BB azul rápido en lugar del azul B rápido y la pulverización con
dietilamina mostraron cromatogramas que tenían colores planos más brillantes y
podían conservarse durante un período de tiempo más largo. 9 9 ] Se ha informado que
el cloruro de di-o-anisidina tetrazolio es un reactivo de pulverización alternativo a las
sales azules rápidas para la detección de cannabinoides. [ 10 ] En otro estudio, el
reactivo de dapsona diazotada se describió como un aerosol para la detección de
cannabinoides como estándar y del extracto de cloroformo de cannabis en capas de
gel de sílice G de 0,25 mm con norte-
hexano-acetona (85:15) o norte- hexano-dietil éter (8: 2); La LOD para CBN fue de 600
ng para CBN en comparación con 10 ng para la sal azul B rápida, y los colores
característicos fueron diferentes para ayudar en la identificación de manchas. [ 11 ] Otros
reactivos de visualización informados en el análisis de cannabis incluyen
3-metil-2benzotiazolinona (MBTH) y sulfato de amonio cérico. [ 12 ]
El desarrollo de la fase móvil ascendente única se informa principalmente
para el análisis de TLC, pero el doble [ 13 ] o triple [ 14 ]
El desarrollo de la fase móvil se ha utilizado en ciertos casos para mejorar la resolución
de la muestra. 2D TLC [ 15 ] en placas de gel de sílice G desarrolladas con
heptano-diclorometano-butan-2-ona
(83: 5: 12) y con norte- hexano-acetona (86:14) después de 90 rotaciones separaron
47 puntos cannabinoides diferentes de un extracto ácido de cloroformo de las cimas
florecientes de Cannabis sativa
L .; cinco fueron identificados como re 9-THC, trans- re 8-THC, CBC, CBN y
CBD usando controles auténticos basados ​en distancias de migración en las
dos direcciones y colores característicos cuando la placa se vio bajo luz UV
de 254 nm y luego se roció con 0,1% de sal azul B rápida en etanol al 45%.
Los autores compararon favorablemente su método con el uso de

placas tratadas con amina, TLC termo-micro, desarrollo múltiple e
impregnación de capa [por ejemplo, gel de sílice G impregnado con tetracloruro
de carbonato de dimetilformamida (DMF) (6: 4) y éter de petróleo-éter dietílico
(4: 1) en fase móvil ]. [ dieciséis ]
Sin embargo, las placas de gel de sílice impregnadas con nitrato de plata se han aplicado con
éxito a las separaciones de cannabinoides en varios estudios citados a continuación. [ 12 ]
TLC para el estudio de la actividad biológica del cannabis.
Cultivos en suspensión celular de Cannabis sativa L., fam.
Moraceae, se examinaron junto con semillas y hojas de plantas intactas para
cannabinoides activos y otros metabolitos. No se encontraron grandes cantidades
de ninguno de los principales cannabinoides en extractos de células, pero la TLC
demostró manchas de otros compuestos fenólicos que tienen una actividad
antimicrobiana significativa contra Bacillus magaterium, Staphylococcus aureus,
y Escharichia coli. Los sistemas de TLC utilizados para el análisis de extractos de
éter de petróleo fueron kieselguhr-carboximetilcelulosa
platos impregnado con NORTE- metilformamida /
fase móvil de ciclohexano, placas de gel de sílice impregnadas de nitrato de plata
/ benceno y gel de sílice G / hexano-éter dietílico (4: 1) para extractos de éter de
petróleo, y alúmina G / acetonametanol (1: 1) o acetato de etilo-metanol-glacial
ácido acético (84: 24: 3) y gel de sílice / cloroformo-dietilamina (9: 1) para
fracciones básicas y neutras. Los reactivos aplicados para detectar manchas
incluyeron azul B rápido, Gibbs, vainillina, azul del Nilo y yodoplatinato de
potasio. [ 17 ]
La actividad antimicrobiana de Cannabis sativa contra
resistente a la meticilina Staphylococcus aureus Se estudió MRSA utilizando
extracción metanólica de hojas y evaluación de la presencia de compuestos
bioactivos mediante huellas digitales HPTLC. La quercetina, el ácido gálico y la
catequina se identificaron y cuantificaron en placas de aluminio Merck gel de
sílice 60 F (F designa la presencia de un fósforo fluorescente en la capa)
desarrolladas con norte- butanol-ácido acético glacial agua (80: 6: 20) fase
móvil. Se usó un CAMAG Linomat 4 para la aplicación de solución estándar y
de muestra, y se realizó una determinación densitométrica después de la
derivatización con reactivo anisaldehído-sulfúrico mediante escaneo a 350ºC.
289 y 270 nm, respectivamente. Se encontró que el extracto de hoja de Cannabis
sativa tenía potencial para el control de SARM tanto en el hospital como en la
comunidad. [ 18 años ]
El artículo de Schurr et al. (árbitro. 59 ) en la sección PTLC
A continuación se muestra otro ejemplo de estudios publicados sobre la actividad biológica del
cannabis.
Análisis de hombres y mujeres. cannabis sativa variedades
Análisis cualitativo y cuantitativo de plantas masculinas y femeninas de Cannabis
sativa fueron realizados por TLC, GC y MS. Se compararon cuatro partes de cada
sexo: cimas en flor, pequeñas hojas superiores que rodean las flores, hojas
grandes de la parte inferior del tallo y partes inferiores de los tallos. Los
cannabinoides se extrajeron con petróleo ligero moliendo con una mano de
mortero en un mortero, los extractos se separaron en placas de gel de sílice G
impregnadas con 20% de DMF en acetona mediante
REVISTA DE CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA Y TECNOLOGÍAS RELACIONADAS 3
desarrollando con la fase móvil 20% de éter dietílico en petróleo ligero, y las
manchas se detectaron pulverizando con 0,2% de azul B rápido en hidróxido de
sodio acuoso 2M. Se demostró que el cannabis masculino y femenino contiene
cantidades similares de
re 1-THC y CBD en proporciones similares. [ 19 ]
Separación por TLC, detección e identificación de cannabis
Se publicó un informe sobre la determinación cualitativa de TLC de los
componentes del cannabis presentes en el material vegetal y el análisis
cuantitativo de orina por GC. [ 20 ] R F Se tabularon valores con 11 fases móviles
en capas de gel de sílice G de 0,3 mm y colores y sensibilidad de detección
usando 14 reactivos diferentes re 1- THC re 6- THC, CBN, ácido cannabinólico
(CBNA) y re Acetato de 1-THC.
Las láminas de plástico de gel de sílice impregnadas con nitrato de plata por
inmersión en una solución etanólica y desarrollo unidimensional (1D) con
isooctano-piridina (8: 2) en un tanque cerrado, equilibrado por vapor de fase
móvil, separaron seis puntos característicos de un macerado de cloroformo de
cannabis, que incluye re 1- THC, CBN y CBD, que se detectaron con 0.1% de sal
azul B rápida en etanol al 70%. La TLC 2D en un tanque abierto con fase móvil de
tolueno en ambas direcciones y la exposición de la lámina a los vapores de
amoníaco antes de la segunda ejecución proporcionó una mayor resolución que
muestra 19 puntos separados del extracto. 21 ] Al año siguiente, el mismo autor
publicó un método 1D con fase móvil de tolueno para el análisis de los
componentes del cannabis en láminas impregnadas de nitrato de plata que
calificó como más simple, más rápido y mucho más sensible [límites de detección
(LOD) 1-5 ng] que otros procedimientos de TLC disponibles. [ 22 ]
Se demostró que el origen geográfico de las plantas de cannabis (cáñamo)
está relacionado con la ocurrencia en diferentes partes de la planta de re 9- THC,
CBD, CBN y otros componentes. El material de las plantas se extrajo agitando
con éter de petróleo, y los extractos se sometieron a TLC 1D usando láminas de
plástico de gel de sílice desarrolladas con tolueno o fase móvil de xileno o TLC
2D con un segundo revelado usando tolueno-dietilamina (98: 2). El reactivo de
pulverización de sal azul B rápido [0,1% en agua-metanol (1: 3)] proporcionó
colores planos naranja, violeta y escarlata que se usaron con R F valores
comparados con los estándares de referencia para la identificación de
compuestos. [ 23 ]
La prueba RIM (identificación de Rutgers para marihuana) combina
técnicas de cromatografía histoquímica y TLC y elimina la necesidad de un
paso de extracción por separado para obtener una muestra adecuada para
TLC. Muestra clara de la prueba histoquímica microscópica se detectó en un
Merck
Capa G de gel de sílice de 0,25 mm de grosor con una micropipeta, seguido de
desarrollo con fase móvil de benceno y pulverización con reactivo B azul rápido
(0,2 g en etanol al 80%).
La confirmación de que una muestra contiene marihuana fue la aparición de manchas
de re 9- THC, CBD y CBN con colores característicos y R F los valores relativos a los
estándares de referencia se ejecutan en la misma placa. [ 24 ] Un total de 526 muestras
de plantas que no son de marihuana que representan 427 especies de plantas
diferentes se sometieron a la prueba RIM, y aunque algunas muestras dieron puntos
reactivos B azules rápidos por TLC, fueron fácilmente distinguibles
44 J. SHERMA Y F. RABEL
de las manchas de cannabinoides de marihuana, y no se exhibieron resultados falsos
positivos. [ 25 ]
Las cimas secas de floración y fructificación de Cannabis sativa
de ocho regiones diferentes del norte de la India se analizaron cualitativamente
para CBN, CBD y re 1- THC por TLC en capas de gel de sílice G impregnadas con
DMF. Las muestras se extrajeron repetidamente con cloroformo, y los ácidos
cannabinoides se descarboxilaron calentando el extracto en tolueno hirviendo
durante 20 minutos. La fase móvil fue éter dietílico-éter de petróleo (1: 4), y los
cannabinoides se detectaron usando una solución acuosa al 0,5% de
azul rápido B seguido de 0.1M de sodio
hidróxido.[ 26 ]
Las placas de gel de sílice se desarrollaron dos veces hasta 15 cm con
benceno. norte- hexano-dietilamina (25: 5: 0.5) para la separación de THC, CBD y
CBN extraídos usando metanol en una licuadora de Cannabis sativa L. Una
solución acuosa al 0.1% de sal azul B rápida proporcionó manchas rojas, amarillas
y violetas, respectivamente. El contenido de los componentes se obtuvo por
raspado, elución con etanol y espectrometría de absorción visible. 27 ]
Se usó TLC para la separación e identificación de los componentes del
cannabis del humo. El humo de cannabis se produjo en una cámara
especialmente diseñada y pasó a través de una serie de solventes orgánicos no
polares a polares y muestras de orina, saliva y agua. 28 ] Se aplicaron muestras
de los disolventes orgánicos directamente y extractos de éter de muestras
acuosas a placas G de gel de sílice neutras y alcalinas (impregnadas con una
solución acuosa de hidróxido sódico 0,1 M) que se desarrollaron con
tolueno-dietilamina (20: 1) y norte- acetato de hexaneetilo (9: 1)
respectivamente. Se detectaron manchas con
0,2% de sal rápida de brentamina (o-dianisidina) en solución de NaOH 0,1 M (para
desarrollar cromatogramas neutros y solución acuosa de sal de brentamina rápida
de 0,2% (para desarrollar cromatogramas alcalinos) e identificados comparando la
migración con la de las manchas estándar en la misma placa .
Diecisiete 17 cannabinoides diferentes se separaron con éxito de los
extractos de cloroformo de hojas de plantas de cannabis, copas de flores y
resina en 20 20 cm de gel de sílice de 0.25 mm
Capas G usando norte- hexano-acetona (87:13) fase móvil. Se identificaron
cuatro puntos como re 9- THC, CBC, CBN y CBD basados ​en la detección al ver
bajo luz ultravioleta (UV) de 254 nm y pulverizar con una solución de 0.1% de
sal azul B rápida en 45% de etanol, lo que dio lugar a manchas más compactas
y de colores característicos
que una solución acuosa de
el reactivo [ 29 ]
Se demostró que los laboratorios sin tecnología GC-MS pueden
identificar con precisión re 9- THC, CBD y CBN por TLC, HPLC-UV y GC con
un detector de ionización de llama (GC-FID) en muestras de cannabis. El
procedimiento de TLC incluyó extracción por ultrasonido mezclando con
hexano-cloroformo (9: 1), desarrollo de placas de gel de sílice Merck 60 F
con hexano-cloroformo-dioxano (89: 8.75: 2.25) y medición de espectros de
puntos separados escaneando desde 200-300 nm con un escáner CAMAG
2. [ 30 ]
Los siguientes métodos de TLC se describieron en detalle para la identificación
de productos de cannabis: TLC de fase normal (NP) 1D en placas G de gel de sílice
con una capa de 0,25 mm desarrollada con benceno, benceno. norte- hexano (6: 4) o
benceno norte- fase móvil de hexanodietilamina (70: 25: 5); TLC 2D sobre gel de
sílice
con norte- heptano-diclorometano-butan-2-ona (83: 5: 12)
desarrollo seguido por norte- hexano-acetona (86:14) después de la rotación de 90
placas; RP TLC en placas Merck RP-18 HPTLC desarrolladas con
acetonitrilo-agua (9: 1); 45 mg de sal azul B rápida disuelta en 20 ml de hidróxido
de sodio 0,1 M o 0,5 g en 10 ml de reactivo de pulverización de color
agua-acetona (1: 9); y extracción de
aceite de cannabis, resina, y planta muestras
con tolueno. [ 31 ]
Separaciones de cannabigerol monometil éter (CBGM), CBD,
cannabidivarol (CBDV), ácido cannabidólico (CBDA), cannabigerol
etano éter (CBGD), cannabiciclol
(CBL), re 8-THC, re 9- THC re 9- tetrahidrocannabivarol ( re 9-
THCV), cannabigerol (CBG) y CBN en placas G de gel de sílice
prerrecubiertas se informaron para las fases móviles metanoldioxano-hexano
(1: 2: 7), hexano-acetato de etilo (4: 1), éter de petróleo-éter dietílico (4 : 1), y
hexano-dietil éter (4: 1). La pulverización con 0,5% de sal azul rápida B
seguida de hidróxido de sodio acuoso 0,1 M dio los colores amarillo, rojo,
naranja-violeta y violeta característicos que ayudaron a la identificación del
compuesto. [ 32 ]
Las ventajas y desventajas de HPTLC, el desarrollo múltiple
automatizado (AMD) y la cromatografía en capa sobrepresionada (OPLC;
JC Scientific Co. Ltd, Hong Kong) se presentaron para la separación e
identificación de componentes de cannabis como estándares y en extractos
de hexano de resina e India. cáñamo. Se eligieron placas Merck de gel de
sílice 60 F con fase móvil de hexanodietil éter (8: 2), una cámara Desaga
MAT y reactivo de detección rápido de sal azul B como condiciones óptimas
para la separación por HPTLC de re 8- THC re 9- THC, CBN y CBD. Se usó un
gradiente de fase móvil de 20 pasos con acetona, éter diisopropílico con el
dispositivo AMD CAMAG, y fase móvil isooctano-dietil éter (9: 1) para OPLC
analítica y éter de hexano-dietil (8: 2) para OPLC semipreparativo con
recolección de componentes por elución en lugar de la capa habitual de
raspado y elución de bandas. [ 33 ]
Se recogieron datos de TLC para ocho cannabinoides principales neutros y
ocho ácidos de Cannabis sativa material vegetal, así como dos metabolitos
humanos de re 9- THC usando un sistema RP [placas F de gel de sílice unidas
Merck C18 con metanol 5% de fase móvil de ácido acético (19: 1)] y un sistema
polar (gel de sílice F de Merck con cloroformo-metanol (19: 1)]. Las placas se
desarrollaron en una cámara saturada, y la visualización general de los
compuestos se realizó mediante pulverización con ácido anisaldehído-sulfúrico y
visualización selectiva con 0,5% de sal azul B rápida en agua seguida de
hidróxido de sodio 0,1 M. HPLC, GC, espectrometría UV, espectrometría
infrarroja (IR), y también se presentaron datos de EM. [ 34 ]
Las Naciones Unidas (ONU) publicaron un manual de métodos de TLC para
el cannabis y sus productos para su uso en laboratorios nacionales de análisis de
drogas. [ 35 ] La extracción ultrasónica de cannabis, resina y aceite a base de
hierbas utilizando éter de petróleo se especificó para cannabinoides neutros y
libres y tolueno o cloroformo para ácidos cannabinoides. Se desarrollaron placas
de gel de sílice con extractos y patrones apropiados con éter de petróleo-éter
dietílico (8: 2), ciclohexano-di-isopropil-éter-dietilamina (52: 40: 8), o norte- hexano-dioxano-meta
(7: 2: 1) en un tanque acondicionado con vapor de fase móvil durante 30 minutos
con papel por un lado. La visualización fue hecha por

pulverización con solución rápida de sal azul B (50 mg / 20 ml de hidróxido de sodio
0,1 M o con dietilamina seguido de solución rápida de sal azul B (50 mg / 1 ml de
agua þ 20 ml de metanol). Las placas se documentaron almacenando en bolsas de
plástico transparente o mediante escaneo densitométrico o fotografía.
Ingredientes farmacéuticos activos Cannabis sativa, Embleia ribes,
Myristica fragrans, y Piper longum presentes en la formulación herbal
ayurvédica Jatiphaldya se separaron e identificaron por TLC en capas de gel
de sílice G con la fase móvil micelar 5% de dodecil sulfato de sodio acuoso
(SDS) metanol (7: 1) en una cámara de doble cilindro CAMAG saturada de
vapor. Los extractos de etanol-agua (4: 1) se detectaron con una micropipeta,
y los reactivos de detección fueron vapor de yodo, 1% de vainillina en ácido
sulfúrico metanólico y ácido anisaldehidosulfúrico. [ 36 ]
La monografía analítica Cannabis flos flowers incluyó un método de
identificación por TLC. [ 37 ] Las flores fueron molidas y extraídas por
homogeneización con etanol. Las placas de gel de sílice Merck 60 F se
desarrollaron con éter de petróleo (40 - 60 60 C) éter dietílico (4: 1) en una cámara
saturada, y el reactivo de pulverización era una solución de etanol acuosa azul B
rápida. Las variedades Bedrocan, Bedrobinol, Bedica y Bedropuur dieron una
mancha roja de ácido tetracannabidiólico (THCA), y Bedolite y Bediol dieron una
mancha naranja de CBDA; El r F Los valores de todos estos puntos característicos en
las soluciones de muestra coincidieron con la R F valores de
extractos de referencia cromatografiados en la misma placa.
Se usó HPTLC combinado con análisis de imagen para la evaluación de
similitud de 70 hierbas medicinales, incluyendo Cannabis sativa L. semillas de
cáñamo. Se emplearon placas de gel de sílice 60 F, acetato de etilo, metil etil
cetona-98% de ácido fórmico-agua (5: 3: 1: 1) en fase móvil, y reactivos de
detección de Liebermann-Buchard y anisaldehído. Análisis de imagen basado en
Cannys '
Se utilizó el método para determinar los tamaños de punto de cada imagen de
HPTLC. Un algoritmo de búsqueda de similitud fue capaz de calcular el tamaño del
punto y R F valores. Los valores de similitud fueron 75 - 96% para los cromatogramas cuantificación de re 9THC con el uso de estándares de referencia de
de hierba seleccionados con los de la misma hierba en la base de datos. Presentó
mejores resultados que el análisis de componentes principales (PCA), los árboles
de clasificación y regresión (CART) y el análisis discriminante de mínimos
cuadrados parciales (PLS-DA). El método de extracción fue sonicación-maceración
con metanol, y un CAMAG TLC Sampler 4 (ATS 4), cámara de revelado
automático (ADC)
2), y TLC Visualizer se emplearon para llevar a cabo HPTLC y registrar
cromatogramas. [ 38 ]
El sitio web de la Asociación HPTLC [ 39 ] contiene separaciones de cannabis
NP y RP adecuadas para la toma de huellas digitales. El cannabis herbario se
sonicó con metanol-hexano (9: 1) (NP) o metanol (RP) para preparar muestras de
prueba cromatografiadas con patrones de referencia. NP HPTLC estaba en gel
de sílice Merck Si 60 F, la fase móvil era norte- ácido heptano-dietiléter-formico
(75: 25: 0.3), y se especificó sal azul rápida para derivatización por pulverización
o inmersión. RP HPTLC estaba en fase estacionaria Merck Si 60 RP-18 F con
fase móvil de metanol-agua-ácido acético (70:15:15) y reactivo de derivatización
de ácido sulfúrico y vainillina. Figuras 1 y 2 ilustrar los cromatogramas NP y RP,
respectivamente.
REVISTA DE CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA Y TECNOLOGÍAS RELACIONADAS 55
Cuantificación de densitometría TLC
Se administraron métodos de densitometría por TLC para el análisis de tejidos de
autopsia (hígado, riñón, bazo, estómago e intestino) en un caso de intoxicación
mortal por re 9- THC norte- Los extractos de hexano se cromatografiaron en capas G de
gel de sílice de 0,25 mm de espesor mediante desarrollo con norte- hexano-acetona
(87:13) en una cámara saturada, y re 9- El THC se identificó rociando con
0.1% de sal azul B rápida en 45% de etanol. Las cantidades encontradas escaneando
puntos con un densitómetro fotoeléctrico fueron 3.75,
4.2, 1.2, 0.8 y 0.2mg / 100 g, respectivamente. [ 40 ]
Los cannabinoides se separaron, aislaron y cuantificaron a partir de extractos
de metanol-cloroformo (9: 1) por OPLC en láminas de gel de sílice Merck 60 F con
bordes sellados. La bomba se configuró para suministrar la fase móvil de
tolueno-dioxano (60: 1) a
0,3 - 0.7mL / min resultando en velocidades lineales entre 0.8 y
1,5 cm / min. Las muestras se aplicaron con un CAMAG Linomat 3, y las
bandas se visualizaron bajo luz UV y con reactivo B azul rápido. Los
cannabinoides neutros se identificaron y cuantificaron utilizando un escáner
Shimadzu CS-920 a 215 nm en comparación con los compuestos estándar.
OPLC en línea de
Cannabis satvia L. extracto con detección UV fracciones aisladas de las cuales la
identidad de cannabinoides fue confirmada por GC-FID. [ 41 ]
En un intento por mejorar la sensibilidad de la cuantificación, se ideó un
método para la derivación fluorescente de dansilo de cannabinoides antes de la
separación en gel de sílice mediante el desarrollo con isooctano-acetato de
etilo-ácido acético glacial (30: 20: 1). Los componentes se pudieron observar
después de pulverizar con Triton X100-cloroformo- norte- hexano (1:20:80) y
cuantificado por densitometría de fluorescencia a 340 nm. El método se aplicó a
muestras de plasma usando compuestos de referencia, y los LOD se estimaron
en 13, 20 y 40 ng / ml para CBD,
re 9- THC y CBN, respectivamente. [ 12 ]
Se desarrolló y validó un método de densitometría HPTLC de acuerdo con
las pautas de la Conferencia Internacional de Armonización (ICH) para la
cannabinoides puros y dos cultivares de cannabis medicinal. La precisión se
determinó comparando los resultados con los obtenidos de un método de
HPLC validado. El método también fue útil para la detección cualitativa de los
principales cannabinoides neutros encontrados en los cultivares de cannabis.
Merck 20
10 cm de gel de sílice 60 alumi-
Se emplearon placas numéricas, fase móvil de cloroformo en la cámara de
doble canal CAMAG y un aplicador CAMAG ATS 4 y un escáner TLC 3
controlado por el software winCATS versión 1.4.3. 42 ]
OPLC separación de re 9- Se logró THC, CBD, CBN, CBG y CBC en
amino unido a sílice (NH 2) Placas F con diclorometano
soltero componente móvil fase.
Empleando el desarrollo bidireccional (desde ambos extremos hasta la placa y el
centro), se analizaron 30 muestras en una placa de 10 x 20 cm en 4 minutos. La
evaluación se realizó por densitometría a 200 nm con un escáner de ranuras CD
Desaga. Las muestras de plantas se extrajeron ultrasónicamente con
metanolcloroformo (9: 1), y los extractos y estándares se aplicaron con un 1 metro L
Jeringa Hamilton como bandas de 2 mm. OPLC con velocidad de fase móvil
optimizada y consistente puede proporcionar
66 J. SHERMA Y F. RABEL

Figura 1. NP huellas digitales de los estándares de cannabis (Pistas 1 - 4) Cannabis sativa inflorescencias (5 - 9), inflorescencia descarboxilada (10) y fibra (11).

Figura 2. RP huellas digitales de los estándares de cannabis (Pistas 1 - 8) e inflorescencias (9 - 12)


selectividad mejorada en comparación con el desarrollo de placa ascendente de flujo
capilar en algunas aplicaciones. [ 43 ]
El THC, el CBD y el CBN se cuantificaron en la marihuana incautada por la
policía chilena utilizando un procedimiento de densitometría HPTLC validado de
acuerdo con la Oficina de las Naciones Unidas contra la Droga y el Delito
(UNODC) [ 44 ] Se aplicaron extractos de plantas de acetonitrilo y soluciones
estándar a placas de gel de sílice Merck 60 F con un muestreador automático
CAMAG ATS 4 y desarrollo con fase móvil. norte- el hexano-dietil éter (8: 2) se
llevó a cabo en una cámara de revelado automático CAMAG ADC 2 sin saturación.
Las áreas de bandas en placas secas se midieron por densitometría de absorción
con un escáner CAMAG TLC 4 a 206 nm, y el en el lugar espectro de cada pico se
registró en el 190 - Rango de 400 nm. El contenido de THC en 15 extractos varió de
4.8 a 26% (p / p).
TLC-Bioensayo
El perfil de bioactividad de los pasteles de semillas de cáñamo, lino y canola se
realizó mediante HPTLC combinado con un grupo de bioensayos, a saber,
2,2-difenil-1-picrylhydrazyl (DPPH ) captación, inhibición de la acetilcolinesterasa
(AChE), estrógeno de levadura plana (pYES) y antimicrobiano Bacillis subtilis y
Aliivibrio fischeri ensayos Estos análisis dirigidos no dirigidos permitieron el
descubrimiento de compuestos bioactivos previamente desconocidos
en estos extractos de torta de semillas oleaginosas, que se
caracterizaron por TLC-ESI (ionización por electropulverización) -MS a través de la
interfaz TLC-MS basada en el cabezal de elución CAMAG. La bioactividad
demostrada de estos compuestos puede guiar su aislamiento para la producción
de piensos funcionales / suplementos alimenticios. La extracción de polifenoles de
las harinas de torta de semillas desgrasadas se realizó con metanol-acetona-agua
(7: 7: 6) en un baño ultrasónico. Se aplicaron extractos en bandas a placas de gel
de sílice HPTLC 60 F usando un muestreador automático de TLC CAMAG 4 (ATS
4), y se desarrollaron placas con agua tolueno-acetato de etilo-ácido fórmico (15:
30: 5: 3) en un CAMAG Cámara de Desarrollo Automático (ADC 2). El bioensayo
pYES se realizó en placas Merck RP-18 WF (W designa una capa tolerante al
agua) con norte- fase móvil hexano-tolueno-acetato de etilo (8: 3: 2). La
derivatización opcional para la detección de bandas separadas se realizó
sumergiendo la placa en
0,005 g / ml de reactivo de producto natural en metanol seguido de solución de
polietilenglicol (PEG) -400 metanólico al 5%. Los cromatogramas se
documentaron a la luz del día y bajo luz UV de 254 y 366 nm con un
visualizador CAMAG TLC o un sistema de documentación DigiStore. [ 45 ]
Análisis forense del cannabis.
La TLC se empleó para obtener información detallada sobre la edad y el origen de
las muestras de cannabis con importancia en el análisis forense. [ 46 ] La ausencia de
CBD y, si está presente, su proporción de THC en extractos de éter de petróleo o
cloroformo fueron los criterios más útiles en la asignación de origen, y el contenido
aparente de CBN
reflejó la edad de la muestra. TLC en
Las láminas de poliéster de gel de sílice de cromograma con fase móvil de tolueno en un
tanque no equilibrado permitieron el análisis de una sola muestra reproducible en 10
minutos y dos análisis de seis muestras en
REVISTA DE CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA Y TECNOLOGÍAS RELACIONADAS 77
menos de 2 h. La TLC 2D que implica el desarrollo de una muestra manchada en una
esquina de una placa con una segunda fase móvil que proporciona un mecanismo de
separación complementario [toluendietilamina (98: 2)] en ángulo recto se utilizó para
obtener puntos de diagnóstico extra resueltos para la confirmación del origen de la
muestra. Para una resolución de muestra aún mejor,
el único
método " duplicado TLC 2D " que comprende la aplicación de una muestra en una
esquina de la placa inferior, el desarrollo de la placa en una línea central de la
placa con la primera fase móvil, la aplicación de un punto de comparación en la
esquina inferior opuesta correspondiente, el giro de la placa a través de 180 y el
desarrollo de la placa segundo punto hasta la misma línea central, luego girando
la placa nuevamente a través de 90 y desarrollando ambos puntos en su
segunda dimensión con la segunda fase móvil. La movilidad de los analitos
también se cambió para una mejor resolución en TLC 1D y 2D por impregnación
de placas de gel de sílice con nitrato de plata y DMF. Chromogram fue el nombre
de marca dado a las placas TLC flexibles preparadas por Kodak con una capa
especialmente delgada (100 metro metro). Esta placa de TLC funcionó mejor con
el desarrollo de la cámara sándwich, que rara vez se usa hoy en día. Kodak ya
no fabrica esta placa, pero esta referencia se mantuvo para demostrar las
técnicas de TLC descritas para su uso con otras placas de TLC disponibles.
Se analizaron los depósitos dentales obtenidos con un palillo de dientes
cubierto con un bastoncillo de algodón empapado en unas gotas de éter de
petróleo o cloroformo para probar el consumo de cannabis. El hisopo se agitó
mecánicamente durante 30 minutos. en presencia de 5 - 10 ml de benceno, y los
extractos se limpiaron en una microcolumna de Florisil eluida con benceno. La
TLC se realizó en capas de gel de sílice impregnadas con DMF usando la fase
móvil de ciclohexano, y las manchas se localizaron y diferenciaron mediante
pulverización con 0,5% de azul rápido B en agua (1: 1). 47 ]
Un estudio para permitir que los químicos forenses sepan si los materiales
obtenidos de plantas locales fueron capaces de producir resultados falsos positivos
para el cannabis cuando se examinaron por TLC y la visualización rápida de la sal
azul B se realizó mediante el análisis de extractos de hojas, flores y tallos de éter de
petróleo preparados. de 118 especies de plantas autóctonas de Dakota del Norte,
EE. UU. El sistema de TLC que consiste en gel de sílice G desarrollado con
cloroformo-éter de petróleo (6: 4) produjo cromatogramas sin manchas rojas,
violetas o naranjas características del cannabis, por lo que estas plantas no
produjeron una reacción falsamente positiva. [ 48 ]
El análisis sin reactivo de detección requerido y menos interferencias en los
cromatogramas se informó en base a la derivatización de los cannabinoides
antes de la TLC. La derivación se realizó mediante acoplamiento oxidativo de
cannabinoides con 3-metil2-benzotiazolinona hidrazina en presencia de sulfato
de amonio cérico ácido como oxidante. Los extractos de cloroformo de la
mezcla de reacción se detectaron en placas de gel de sílice Merck 60 que se
desarrollaron en un tanque insaturado con benceno-metanol (98: 2). Se
obtuvieron patrones de color característicos para cannabis y derivados
cannabinoides estándar de re 9-THC, CBN, CBD y CBG a la luz del día. Ciertos
puntos también se detectaron como puntos fluorescentes por debajo de 254 y
8 J. SHERMA Y F. RABEL
Luz UV de 366 nm. Las sustancias como la henna, la maza y la nuez moscada no
interfieren. 49 ]
Lillsunde y Korte [ 50 ] ideó un sistema integral simple y selectivo que utiliza la
detección por TLC y GC-MS para su confirmación. Fue utilizado en el Instituto
Nacional de Salud Pública, Departamento de Bioquímica, en Helsinki, Finlandia,
para analizar anualmente alrededor de 2.000 muestras de orina en caso de mal
uso, problemas de manejo, envenenamiento y otros casos forenses. Se pueden
detectar aproximadamente 300 medicamentos simultáneamente, incluidos 11- re 9- ácido
carboxílico, que se extrajo de la orina con
norte- hexano-acetato de etilo (7: 1) después de la hidrólisis de glucurónido. La TLC
extractos ultrasónicos de hexano de muestras de marihuana y otras hojas frescas y
se realizó sobre placas de aluminio Merck gel de sílice 60 desarrolladas con norte- hexano
- 1,4-dioxano-metanol (35: 10: 5) y detección utilizando 1% de sal K negra rápida en
agua seguido de hidróxido de sodio acuoso al 1%.
El registro de las características morfológicas más dos sistemas
cromatográficos de capa delgada se utilizaron para determinar los cannabinoides
presentes en muestras forenses de cannabis. [ 51 ] Las placas de gel de sílice Merck
60 F desarrolladas con hexano-éter etílico (4: 1) o hexano-acetona (4: 1) y la
detección con azul rápido 2B en metanol-agua (1: 1) proporcionaron separación e
identificación de re 8- THC re 9- THC, CBC, CBD, CBG y CBN.
Los métodos TLC y GC-MS MSD (detector selectivo de masas) se idearon
para permitir a los delincuentes confirmar la presencia de salvinorina A en un
material vegetal presentado que se sospecha que es la hierba psicoactiva Salvia
Divinorum. Trece otros
Salvia especies y Cannabis salvia L fueron analizados para probar los métodos.
Los extractos de metanol-cloroformo (1: 1) y el estándar de salvinorina A se
aplicaron en placas de gel de sílice Whatman K6 60 F (equivalente en Miles
Scientific: número de catálogo
43911) y separados por revelado con acetato de etilohexano (1: 1) fase móvil. gel de sílice Merck GF con un espesor de capa de 0,25 mm que se desarrollaron
Las salvinorinas se detectaron como manchas de color púrpura rosado y re 9- THCcon benceno en una cámara que tenía 10 ml de hidróxido de amonio al 25% en un
como una mancha azul al rociar con reactivo de vainillina. [ 52 ] canal en la parte inferior. Alternativamente, el ciclohexano era la fase móvil para las
Se diseñó un método de TLC para el análisis de cannabis a base de hierbas
(marihuana), cannabis de resina (hachís o charas) y cannabis líquido (aceite de
hachís) para CBN, CBD, THC y THCA por químicos forenses. La extracción de la
muestra se realizó mediante agitación con éter de petróleo, el desarrollo de
extractos y estándares se realizó con éter de petróleo-éter dietílico (8: 2) o
ciclohexano-diisopropiléter-dietilamina (52: 40: 8) en placas de gel de sílice, y la
visualización de manchas mediante pulverización con reactivo de sal azul B rápido
(50 mg en solución de hidróxido de sodio 0,1 M). La cuantificación se realizó
mediante GC-FID con una columna OV-17, SE-30 u OV-1. [ 53 ]
Fases móviles óptimas para la detección de THC, CBD y CBN en Cannabis
sativa L en gel de sílice Merck 60 F Se descubrió que las placas de vidrio de 0,25
mm de espesor eran éter de petróleo-dietilo
éter (8: 2), norte- hexano-tolueno-dietilamina
(15: 5: 1), y norte- hexano-dioxano-metanol (7: 2: 1). Las plantas de cannabis se
extrajeron agitándolas con tolueno o éter de petróleo, se aplicaron extractos y
estándares con un automuestreador, y se detectaron bandas rociando con sal
azul B rápida en hidróxido de sodio 0,1M. La separación por GC de los tres
compuestos también se estudió. [ 54 ]
Los productos de la reacción de prueba colorimétrica entre la sal BB azul
rápida y re 9- El THC fue identificado por ESI ( þ) - FTICR-MS (ionización por
electropulverización en modo positivo Fourier
transformar resonancia de ciclotrón iónico MS), CID-ESI ( þ) - MS / MS (MS de
tándem de disociación inducida por colisión) y espectrometría UV / visible (Vis).
Placas de TLC de gel de sílice desarrolladas con ciclohexano-tolueno-dietilamina
(75:15:10) fase móvil y detección con rápida sal azul BB revelada re 9- THC, CBN y
CBD como los tres cannabinoides principales en las muestras forenses de
marihuana analizadas. Se propuso un mecanismo para justificar la especificidad
de la prueba colorimétrica para la identificación de cannabinoides. [ 55 ]
Se describió un método de voltamperometría cíclica de bajo costo, confiable y
rápido para confirmar la identificación por TLC de marihuana ilícita. Se aplicaron
secas a las placas F de gel de sílice con respaldo flexible SigmaAldrich; desarrollo
con hexano-acetona (9: 1) separado re 9- THC, CBD, CBN y otros cannabinoides y
componentes presentes en la materia vegetal; y el reactivo B azul rápido detectó los
puntos que se identificaron mediante la comparación de R F valores para hacer
referencia a puntos estándar en la misma placa. re 9- Las manchas de THC se
rasparon de las placas y se eluyeron con DMF para investigación mediante análisis
voltamétrico. [ 56 ]
Otros documentos citados en secciones anteriores y posteriores de esta revisión
describen análisis de TLC que se aplicaron a muestras que potencialmente pueden ser
de interés forense.
Cromatografía preparativa de capa fina (PTLC)
El cannabivarichromene, un nuevo cannabinoide con una cadena lateral de propilo
en extracto de hachís asiático, se separó de otros cannabinoides por PTLC antes
de la determinación de la estructura por GC-MS. Se aplicaron extractos a placas de
placas impregnadas de DMF. La visualización se realizó bajo luz UV de 254 nm o
mediante pulverización con solución rápida de sal azul B. Los cromatogramas
mostraron dos puntos cannabinoides inusuales e intensos además de los
componentes principales re 9-THC, CBD y CBN. [ 57 ]
Se estableció un procedimiento de análisis cuantitativo para CBDA, ácido
cannabicromenico (CBCA), THCA y monometiléter de ácido cannabigerólico
(CBGAM) utilizando PLC y GC para un estudio de la edad, la estación y el sexo
de las hojas. Cannabis sativa L. material vegetal. Se aplicaron extractos de
benceno a Merck 20
Placas PLC de gel de sílice de 20 cm que se desarrollaron
con benceno fase móvil. Las bandas se rasparon y el polvo de gel de sílice
se eluyó con metanol para recuperar los compuestos separados antes de su
análisis por GC. [ 58 ]
Un estudio con PTLC que sugiere la presencia de cannabinoides en el
extracto de cannabis capaces de inhibir la monoaminooxidasa mitocondrial del
cerebro y el hígado humanos, especialmente la desaminación de
2-feniletilamina y bencilamina, enfatizó el potencial del cannabis como fuente
de agentes terapéuticamente activos. Las placas de gel de sílice GF PTLC se
utilizaron con fase móvil de tolueno-cloroformo-metanol (100: 10: 1), y la
detección de las fracciones separadas para ser raspadas se realizó mediante
visualización bajo luz UV de 254 nm. Eluyentes de cloroformo-tolueno (10: 1)
de las fracciones raspadas

se desarrollaron en placas analíticas de gel de sílice GF con la misma fase móvil,
y la presencia de cannabinoides se confirmó como manchas moradas producidas
por pulverización con solución de 1 mg / ml de sal K negra etanólica [ 59 ]
La siguiente sección sobre análisis de drogas de diseño contiene aplicaciones
adicionales de PTLC.
Tlc-ms
Se demostró que la TLC-MS que utiliza un dispositivo de extracción Advion Plate
Express y un espectrómetro de masas compacto es aplicable para la detección de
cannabis en material de contrabando, la detección y cuantificación de contaminantes
de pesticidas y la caracterización de los principales componentes de cannabis para
proporcionar productos etiquetados adecuadamente que los consumidores informados
pueden elegir. donde es legal hacerlo. Los extractos de muestra se separaron en
placas de gel de sílice Merck 60 F con éter de petróleo (60 - 80 C) dioxano (8: 2) fase
móvil. El dispositivo de extracción fue operado con un 200 metro Flujo L / min de ácido
metanol-fórmico (99: 1) y un área del cabezal de extracción de 1 2 mm. [ 60 60 ]
Análisis de orina.
El consumo de marihuana se determinó detectando re 9- ácido
tetrahidrocannabinol-11-oico en orina mediante el empleo de TLC de doble
desarrollo para la identificación basada en su característica R F
valor y color después de rociar la placa con sal azul rápida B. La
preparación de la muestra comprendió hidrólisis enzimática, extracción con
éter dietílico anhidro y purificación por tratamiento con NaHCO 3, seguido de
TLC en una secuencia de fase móvil alcalina y ácida. Las placas G de gel
de sílice Analtech se desarrollaron a su vez con
acetona-cloroformo-trietilamina (80: 20: 1) y éter de petróleo-éter
dietílico-ácido acético glacial (50: 50: 1.5). 61 ]
Un método cualitativo desarrollado para la identificación del metabolito
urinario 11-nor- re 9- El ácido tetrahidrocannabinol-9-carboxílico implicaba la
extracción en un material de extracción selectiva en fase sólida (Bond
Elute-THC) y TLC. Las muestras de orina se hidrolizaron con hidróxido de
sodio, se extrajeron por SPE con elución usando acetona, y el tratamiento del
extracto con diclorometano y hexano para eliminar el agua antes de la
aplicación con un tubo capilar sobre placas de gel de sílice Merck 60 F. La fase
móvil fue acetato de etilo-metanol-hidróxido de amonio concentrado en agua
(12: 5: 0,5: 1), y se visualizaron manchas después de la pulverización con 0,5%
de BB azul rápido en metanol-agua. 62 62 ] Este método SPE-TLC [también
llamado BPA (adsorción de fase unida) -TLC], junto con RIA
(radioinmunoensayo) y GC-MS, se utilizó para confirmar los resultados positivos
de cannabinoides de 100 muestras analizadas por EMIT (técnica de
inmunoensayo multiplicado por enzimas). [ 63 ]
Se revisó el uso de TLC para la detección de drogas de abuso en orina,
incluidos los cannabinoides como re 9- THC
Las ventajas citadas fueron el bajo costo del equipo, el análisis rápido y la
determinación simultánea de varios medicamentos y metabolitos. La
identificación preliminar por TLC se confirmó utilizando un análisis más específico
por GC-MS. [ 64 ]
Anys Technologies desarrolló el sistema Toxi-Gram THC IIPlus para
análisis de orina en el que se aplica una muestra
REVISTA DE CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA Y TECNOLOGÍAS RELACIONADAS 99
a una columna SPE de tipo disco ubicada en un orificio en una placa TLC que
se desarrolla en norte- ácido acético heptano-acetona-glacial (50: 50: 1), la
visualización se logra sumergiendo la placa en una solución de sal BB azul
rápida (0.1% en diclorometano) y luego exponiendo la placa al vapor de
etilamina. Usando este método, el metabolito THC 11-nor- re 9- El ácido
tetrahidrocannabinol-9-carboxílico se identificó en la orina. [ 12 ]
Duquenois-Levine, sal azul B rápida y pags- Se aplicaron pruebas de color
estándar de dimetilaminobenzaldehído a la orina de 102 pacientes varones
sospechosos de abuso de cannabis, y los resultados fueron confirmados por
HPTLC. La extracción de orina se realizó con acetato de etilo-isopropanol (85:15)
después de la hidrólisis alcalina a 60ºC. C y ajuste a pH 4 para 11-nor- re 9-
Ácido tetrahidrocannabinol-9-carboxílico y con pH alcalino mantenido para
CBD y CBN. Un aplicador de banda CAMAG Linomat aplicó soluciones
estándar y de muestra sobre placas de HPTLC de gel de sílice Merck, y se
usó una Cámara de Desarrollo Automatizado (ADC) CAMAG con hidróxido
de amonio concentrado con acetato de etilo y metanol (85: 10: 5) o éter de
petróleo-éter dietílico (9 : 1) fase móvil. Todas las pistas en la placa se
escanearon a 278 y 350 nm con un escáner CAMAG TLC para obtener R F valores
que se compararon con los compuestos estándar en placa y la biblioteca de
fármacos incorporada en el software del escáner para identificar las bandas
de cannabinoides. Se detectó abuso de cannabis en 64 de los pacientes. Se
demostró que el método HPTLC es de alto rendimiento, sensible,
reproducible y rentable en comparación con los kits comerciales disponibles,
y podría adaptarse fácilmente para el análisis cuantitativo de
los tres objetivos
cannabinoides. [ sesenta y cinco ]
Análisis de cabello
Las muestras de cabello de los usuarios de marihuana fueron analizadas
cualitativamente por TLC y cuantitativamente por GC-MS. Las muestras se extrajeron
tres veces durante 2 minutos cada una por sonicación con metanol-2-propanol (1: 1), y
los extractos combinados se colocaron en capas de gel de sílice GF con una
micropipeta. La separación se hizo por desarrollo con norte- hexano-tolueno (1: 1) y
manchas de re 9- El THC, el CBD y el CBN se visualizaron usando reactivo de sal azul B
rápido y se identificaron en comparación con los estándares manchados
conjuntamente. Las cantidades de cannabinoides en el cabello oscilaron entre
0.25-2.82 ng / mg de acuerdo con el método de GC-MS validado. [ 66 ]
TLC en el análisis de cannabinoides sintéticos
Las drogas de diseño, que también se denominan nuevas sustancias
psicoactivas (NPS), incluyen compuestos que se producen para imitar los
efectos del cannabis. Esta sección cubre la aplicación de TLC en su análisis.
El derivado de aminoalquil naftoil indol cannabimimético JWH-018 se
identificó como un adulterante en un producto a base de hierbas que se vende
en Japón por su efecto narcótico después del aislamiento por PTLC en placas
preparativas de gel de sílice Merck 60 con un espesor de capa de 2 mm. La
extracción de metanol del producto a base de hierbas se realizó por ultrasonidos,
y la fase móvil fue hexano-acetona (4: 1). La zona detectada fue
10 J. SHERMA Y F. RABEL

Figura 3. Cromatogramas de muestra de especias vistos bajo luz UV de 254 nm.

raspado de la placa y eluido con cloroformo-metanol (2: 1) para dar la fracción Miles Scientific vende placas equivalentes a LKD6F con el número de catálogo
1. El PTLC repetido de esta fracción con hexano-cloroformo (1:20) aisló 44911. [ 69 ]

JWH-018 como un sólido blanquecino que se identificó por GC- MS, La especia es una mezcla de hierbas con cannabinoides sintéticos agregados
cromatografía líquida en columna de ultra rendimiento (UPLC) -ESI-MS, que se fuma para la euforia. Tres casos de " Espacio "
análisis directo en tiempo real (DART) -tiempo de vuelo (TOF) -MS y
se describió el uso de la marca Spice en el ejército, y se usó TLC para el análisis
espectrometría de resonancia magnética nuclear (RMN). [ 67 ]
de orina en dos de ellos dando resultados negativos. No se proporcionaron
detalles de la metodología de TLC, pero su valor para el análisis forense se dejó
Las placas PLC de gel de sílice Merck con un espesor de capa de 2 mm claro. [ 70 ] Figuras 3
también se usaron en la identificación del fenilacetil indol JWH-251 y el y 4 4 muestra cromatogramas de especias sobre placas de 60 F de gel de sílice
naftoilindol JWH-081 como medicamentos de diseño en productos herbales
HPTLC desarrolladas con tolueno-acetona-dietilamina (85: 10: 3) fase móvil en
ilegales con el uso de GC y UPLC junto con espectrometría de MS y NMR. La
una cámara de revelado automático CAMAG ADC 2 saturada (con papel de
fase móvil fue hexano-acetato de etilo (4: 1) para la separación del extracto
filtro, 33% de humedad) y vista bajo 254 y Luz UV de 366 nm.
ultrasónico de cloroformo, y la porción de la capa de gel de sílice que
contiene el compuesto objetivo se raspó y se eluyó con cloroformo-metanol
Una investigación química microcristalina anunciada como el
(3: 1) para obtener las fracciones 1 y 2. Cada fracción se purificó
cannabimimético compuesto [( NORTE- metilpiperidina-2-
adicionalmente reciclando HPLC preparativa para dar los dos compuestos
para análisis. 68 ] yl) metil] -3- (1-naftoil) indol (AM 1220), comprado a través de una
plataforma de comercio en Internet, analizado como AM 1220 puro por
GC-MS. Sin embargo, cuando se probó la pureza por TLC, se
La separación e identificación de cannabinoides sintéticos en mezclas de incienso
obtuvieron dos zonas, y después del aislamiento por PTLC y análisis
de hierbas disponibles en los Estados Unidos (llamado
de espectrometría de alta resolución MS y NMR, se confirmó que el
" K2 ") se realizó usando metanol y extracción combinada de ácido / base
isómero azepano de AM 1220 estaba presente. Más tarde, ambas
de material vegetal seco y triturado (flores, tallos y hojas); Whatman gel
sustancias se detectaron en varias mezclas de hierbas compradas en
de sílice 60 placas preadsorbentes con revestimiento LK6DF con un
diferentes tiendas de internet alemanas. La sustancia cristalina del
espesor de capa de 0.25 mm; y fases móviles de tolueno-dietilamina (9:
fármaco se disolvió en etanol, y las mezclas de hierbas se extrajeron
1) y acetato de etilo-diclorometano-metanol-hidróxido de amonio
mediante agitación vorticial con etanol. La prueba de pureza de los
concentrado concentrado. Los 21 compuestos estándar estudiados
extractos se llevó a cabo en placas de aluminio Merck gel de sílice 60
exhibieron absorción UV a 254 nm (enfriamiento de fluorescencia), y
F desarrolladas con ciclohexano-dietilamina (9: 1). Se detectaron
algunos blancos o amarillos fluorescentes a 366 nm. Además, los
zonas después de teñir con reactivo de yodoplatinato. 71 ]
reactivos de detección azul rápido B, fluorescamina, ninhidrina, ácido
sulfúrico al 10%, yodoplatinato, ácido nítrico al 50%, sulfato mercúrico y
4-dietilaminobenzaldehído se usaron para comparar estándares con
zonas en cromatogramas de extracto de muestra. HPLC, HPLC-MS y
GC-MS aplicados al análisis de varios productos disponibles La misma capa de PTLC, fase móvil y método de detección se utilizaron
comercialmente identificaron los cannabinoides sintéticos JWH-018, ¼ 8; en la caracterización estructural del material sintético.
cannabiciclohexanol), RCS-4, RCS-8, AM-2201 y AM-694, junto con otros cannabinoide 3- (1-adamantoil) -1-pentilindol
medicamentos no cannabinoicos encontrado en varios productos de incienso de hierbas comprados en una tienda
holandesa en Internet. [ 72 ] Las muestras se extrajeron en vórtice con etanol, y la
banda principal después de PTLC del extracto se raspó y extrajo para análisis por
incluyendo mitragynine (Kraton). espectrometría de RMN, MS de alta resolución y GC-MS / MS. Se encontró que el
Las placas Whatman ya no están disponibles comercialmente, pero

Figura 4. Cromatogramas de muestra de especias vistos bajo luz UV de 366 nm.
GC-MS identificó mal el compuesto antes de aplicar técnicas que
proporcionaran más información estructural.
Se llevó a cabo un estudio para aislar e identificar cualquier cannabinoide
sintético disfrazado en bolsas de aroma a base de hierbas conocidas como " Funky necesarios para su uso en las industrias de cannabis y cáñamo no solo en los
Green Stuff ", que están disponibles comercialmente en Kuwait. Los posibles Estados Unidos sino en todo el mundo, así como los métodos de consenso
cannabinoides sintéticos se extrajeron mediante filtración del contenido de la
bolsa en metanol seguido de filtración. El extracto se cromatografió en Miles
Scientific (anteriormente Analtech) 5
10 cm de gel de sílice F
placas con un espesor de capa de 0,25 mm utilizando la fase móvil
tolueno-metanol-dietilamina (80: 15: 5). El compuesto separado principal se
detectó como una zona naranja después de la pulverización con reactivo
Dragendorff. La separación cromatográfica en columna de gel de sílice flash aisló
este compuesto, y la espectrometría UV, IR y RMN lo identificó como
AB-FUBINACA. [ 73 ]
Los cromatogramas de algunos cannabinoides sintéticos se muestran en Figuras
requerirán más estudios para cumplir con los requisitos de SMRP de diferentes
5 y 6 6 en placas de gel de sílice HPTLC 60 F desarrolladas con norte- hexano-dioxano-metanol
(7: 2: 1) (como se indica arriba en Solvente C [ 35 ]) visto bajo luz UV de 254 y 366 nm métodos determinantes de cannabis. [ 76 ]
Resumen y perspectivas futuras
AOAC International ha lanzado el Programa de estándares analíticos de cannabis
(CASP), [ 74 ] Un programa dedicado a desarrollar requisitos de rendimiento de
métodos estandarizados (SMPR) para las pruebas de cannabis. Hasta ahora, se
han completado cuatro SMPR: cannabinoides en material vegetal, extractos de
plantas y chocolate (comestibles) y pesticidas en material vegetal de cannabis. El
programa apoyará completamente a la comunidad analítica del cannabis, incluidos
materiales de referencia, pruebas de competencia,
educación, formación, e ISO (Internacional
Organización para la Estandarización) acreditación 17025 como se aplica al análisis
de cannabis y sus componentes, así como el cáñamo. El gobierno de los Estados
Unidos todavía considera que el cannabis es una sustancia controlada de la Lista 1 a
nivel federal, pero más de 30 estados individuales han trabajado solos en la
elaboración de sistemas reguladores de análisis de cannabis para programas
médicos o un mercado recreativo. El objetivo de CASP es armonizar los estándares
y métodos analíticos de cannabis estatales y desarrollar un consenso basado en el
consenso mundialmente aceptado
REVISTA DE CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA Y TECNOLOGÍAS RELACIONADAS 11
estándares y métodos de prueba establecidos y lo más uniformes posible para su
uso si el gobierno federal se mueve para legalizar el cannabis. Se espera que los
métodos de TLC se desarrollen en el futuro para cumplir con los SMPR de AOAC
desarrollados por organizaciones como AOCS (American Químico de petróleo ' s
Society), USP (Convención de Farmacopea de los Estados Unidos) y ASTM
International trabajando con científicos y comunidades de partes interesadas. [ 75 ]
Se requerirán procedimientos de muestreo y procesamiento de muestras que
garanticen la homogeneidad, precisión y reproducibilidad para estos métodos
analíticos desarrollados. Se examinaron y compararon los mecanismos para el
procesamiento de muestras para las técnicas de preparación óptimas para analitos
específicos en el análisis de cannabis, y se descubrió que la molienda criogénica es
uno de los mejores métodos para la preservación de compuestos volátiles. Se
TLC continuará usándose junto con métodos cromatográficos y
espectrométricos de columna para identificar nuevos cannabinoides
encontrados en extractos de cannabis [ p.ej, 77 ] y para determinar los componentes
o metabolitos del cannabis en la orina como confirmación del uso legal o ilegal.
[ p.ej, 78 , 79 ] 11-nor- re 9-
El ácido THC-9-carboxílico es el principal metabolito urinario objetivo analizado por TLC
para mostrar el consumo de cannabis, con mayor frecuencia después de una hidrólisis
alcalina a 60 C antes de la acidificación y extracción con solventes tales como
hexano-acetato de etilo o por SPE. [ 80 ]
Los terpenos (terpenoides) presentes en el cannabis afectan los atributos de
fragancia y sabor de un producto, lo que puede ser importante en la preferencia del
consumidor. Todavía no se han asignado otros atributos de los terpenos en los
productos de cannabis, incluidas las propiedades medicinales. [ 81 ] La TLC se ha
utilizado ampliamente para analizar terpenos en muchos tipos de plantas utilizadas en
medicinas naturales tradicionales, por ejemplo, metabolitos secundarios fitoquímicos
con potencial para tratar el Alzheimer. ' enfermedad.[ 82 ] Sin embargo, solo se ha
publicado un estudio TLC del análisis de terpenos en cannabis, es decir, extracción
con cloroformo, separación en placas de gel de sílice 60 F con ciclohexano-acetona
(1: 1) móvil
12 J. SHERMA Y F. RABEL
Figura 5. Cromatogramas de cannabinoides sintéticos vistos bajo luz UV de 254 nm.
Figura 6 Cromatogramas de cannabinoides sintéticos vistos bajo luz UV de 366 nm.
fase y detección con reactivo de vainillina que proporciona colores específicos para
diferentes compuestos. [ 83 ] Se espera que se publiquen muchos más artículos en el
futuro cercano sobre los métodos analíticos de TLC de terpeno de cannabis que
comprenden separación, determinación de propiedades biológicas por EDA de
efecto acoplado (bioautografía directa de TLC) e identificación de estructuras
mediante métodos espectrométricos en línea, como TLC-MS, que utilizan principalmente
interfaces comerciales de cabeza de elución a medida que se acelera la exploración de sus
contribuciones a los valores de sabor, olor, salud y nutrición de las plantas y productos de
cannabis. 84 ] Figuras 7
y 8 mostrar cromatogramas de terpenos y terpenoides en fresco Canabis
sativa flores extraídas por vapor
 REVISTA DE CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA Y TECNOLOGÍAS RELACIONADAS 13

Figura 7 Cromatogramas de HPTLC de terpenos y terpenoides vistos bajo luz blanca después de derivatización con reactivo de anisaldehído. De izquierda a derecha: pista 1 linalool, pista 2 mycene, pistas 3-9 Cannabis sativa muestras
de flores cultivadas con diferentes condiciones.

Figura 8. La placa que se muestra en Figura 7 visto bajo luz UV de 366 nm.

destilación, separada en placas de gel de sílice 60 F usando fase móvil de
acetato de tolueneetilo (95: 5) con saturación de cámara y 33% de
humedad relativa, derivatizada con anisaldehído y vista bajo luz blanca y
luz UV de 366 nm, respectivamente.
Los flavonoides de cannabis (flavonas, flavonoles, flavanonas, flavan-3-ols,
isoflavonas y antocianidinas) también afectan los sabores y los aromas, pero no
se han publicado análisis TLC de ellos. Al igual que los terpenos, mucha
actividad analítica para su separación,
identidad, y se espera actividad biológica.
14 J. SHERMA Y F. RABEL
Figura 9 Cromatogramas HPTLC de flavonoides vistos bajo luz UV de 366 nm. Pistas 1-7, Cannabis satvia hojas cultivadas en diferentes condiciones.
Cromatogramas de flavonoides extraídos con metanol de secado Cannabis
sativa hojas, separadas en placas de gel de sílice 60 F por revelado con
acetato de etilo-ácido fórmico-agua (80:10:10) con saturación de cámara y
33% de humedad relativa, y detectadas con reactivo de producto natural
(2-aminoetil difenil borato; NP) seguido de una sobrepulverización de PEG
(como se discutió anteriormente, donde ahora se rocía el PEG, una
alternativa a sumergir la placa; dicho tratamiento posterior se usa para
estabilizar la reacción de visualización o hacerla más intensa) se ilustra en Figura
9.
Agradecimientos
Los autores agradecen a Karen F. Haduck, del Departamento de Préstamo Interbibliotecario de
Lafayette College, por proporcionar copias de muchos de los documentos citados en esta revisión,
sin los cuales no podría haberse escrito. La Dra. Melanie Broszat, Gerente de Desarrollo de
Negocios Científicos, CAMAG, Muttenz, Suiza, proporcionó en agosto de 2019 las fotografías
inéditas de las placas HPTLC que se muestran en Figuras 1 - 9 9 con permiso para usar en esta
revisión.
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