LABORATORIO #3 OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS

Estefany Pérez López, estefanyperlop15@gmail.com

Nicolle Pulgarin Guisao, nicollepg022@gmail.com
Lorena Restrepo Ochoa, lorerestrepoo@hotmail.com
Arfay Rivera Pérez, arfayrivera17@gmail.com
Lorena Úsuga Carmona, lorenausugacarmona@gmail.com

Docente: Marta Lucia Zuluaga Salazar

Microbiología y laboratorio

Tecnológico de Antioquía, institución universitaria

Facultad de Ingeniería
Ingeniería Ambiental
Medellín, Colombia
16 de marzo de 2020
 1 INTRODUCCIÓN

El microscopio es una herramienta de gran importancia para la observación e

identificación de los microorganismos. Debemos distinguir entre las técnicas para
observación de microorganismos vivos y las preparaciones para tinción. Las tinciones
ofrecen una información adicional a la simple observación de la morfología, ya que ponen
de manifiesto características de la pared celular o la existencia de estructuras especiales,
como las esporas bacterianas. (Observación microscópica 2020).
De cualquier modo, la observación en el microscopio se utiliza con el objetivo de
inmersión (máximo aumento). Para ello se coloca sobre la preparación una gota de
aceite de inmersión. Para enfocar con este objetivo, colocar la preparación con el aceite en
la platina del microscopio, aproximarla con el tornillo macrométrico mirando desde fuera,
hasta que el objetivo toque el aceite. (microbiología/índice/observación-microscópica
2020).
Teniendo en cuenta que el estudio de la microbiología es de suma importancia
desde que los microorganismos son parte de nuestra naturaleza. Los microorganismos han
sido de utilidad para el hombre aun desde antes del conocimiento de su existencia, el
estudio de los microorganismos y el conocimiento sobre ellos ha sido aplicado en el ámbito
médico, industrial, económico y ambiental. Los microorganismos son tan pequeños que no
se pueden ver fácilmente sin la ayuda de microscopios. Sin embargo, sus efectos son claros,
decoloran el grano, producen malos sabores y olores, aumentan la temperatura, reducen la
germinación, producen semillas arrugadas y en algunos casos hasta toxinas.
(Microorganismos – Su importancia y control pg 1, año 2020).
Por lo tanto, en el laboratorio N°3 realizado en los días 2 y 9 de marzo de 2020 se
centró en la realización de placas con los diferentes montajes y técnicas para posterior a
esto proceder a las respectivas observaciones microscópicas, los resultados obtenidos en
este proceso fueron la observación de microorganismos en fresco (se observan
microorganismos vivos), observación de microorganismos coloreados (coloraciones
simples, coloraciones diferenciales, coloraciones especiales, coloración de Gram), teniendo
en cuenta que en la coloración de gran se emplean cuatro reactivos (cristal violeta, Lugol,
alcohol acetonas y safranina).
Con respecto al laboratorio, fue de gran importancia para nuestra carrera como personas
profesionales, ya que en él se encontró como es la observación de microorganismos vivos
detallando sus movimientos, morfología y agrupación en su estado natural, la realización
del frotis adecuado para posteriores coloraciones, también se aprendió mucho sobre las
diferencias y semejanzas entre coloraciones simples y coloraciones diferenciales y por
último se clasifico las bacterias teniendo en cuenta su morfología, agrupación y reacción a
la coloración de gram. Y en él se cumplieron los objetivos planteados.
 2 PROCEDIMIENTOS

2.1 Procedimiento para realizar montajes en fresco a partir de muestras sólidas

 Colocar una gota de solución salina en un portaobjetos.
 Con el asa de punta, tocar una colonia de un cultivo y hacer una emulsión con la
gota de solución salina.
 Colocar un cubre objetos sobre la emulsión evitando la formación de burbujas (para
evitar la formación de burbujas se coloca el porta objetos sobre la gota formando un
ángulo de 45 grados par luego dejarlo caer lentamente).
 Observar al microscopio con objetivo de 40X (dibuje).

2.2 Procedimiento para realizar montajes en fresco a partir de muestras líquidas.

 Colocar una gota de la muestra directamente sobre un portaobjetos.
 Colocar un cubre objetos sobre la muestra evitando la formación de burbujas.
 Observar al microscopio con objetivo de 40X (dibuje).

2.3 Procedimiento para realiza frotis:

 Si la muestra es líquida colocar sobre un portaobjetos de vidrio limpio y seco una
gota del material a estudiar y extenderlo con la ayuda del asa.
 Si el frotis se realiza a partir una muestra sólida, depositar una gota de agua
destilada o solución salina en el centro del portaobjetos, con el asa tomar una
pequeña porción de la muestra y mezclar con el agua hasta formar una suspensión
homogénea, extender con la ayuda del asa
 Dejar secar el portaobjetos al aire.
 Flamear por 3 veces para fijar la muestra.
 Dejar enfriar.

2.4 Procedimiento para realizar coloraciones simples

 Realizar 3 frotis en 3 portaobjetos.
 Marcar los frotis del 1 al 3.
  El frotis 1 cubrir con azul de metileno.
 El frotis 2 cubrir con cristal violeta.
 El frotis 3 cubrir con safranina.
 Dejar actuar los colorantes durante 2 minutos.
 Lavar con agua para arrastrar el exceso de colorante.
 Secar al aire o al calor suave.
 Observar al microscopio con objetivo de 100X utilizando aceite de inmersión.

2.5. Procedimiento para realizar la coloración de gram

 Realizar un frotis bucal (tomar un escobillón estéril, frotar sobre la encía y luego
dejar deslizar suavemente sobre el portaobjetos).
 Realizar un frotis de un cultivo líquido.
 Realizar un frotis de un cultivo sólido.
 Colorear los frotis con la coloración de gram así:

Coloración de gram
 Cubrir el frotis con cristal violeta por un minuto.
 Lavar con agua corriente y escurrir el exceso de agua.
 Cubrir con lugol por un minuto
 Lavar con agua corriente y escurrir el exceso de agua.
 Decolorar con alcohol cetona adicionando por 10 segundos, luego lavar con agua y
escurrir el exceso de agua.
 Cubrir con safranina por un minuto.
 Lavar con agua corriente y escurrir el exceso de agua.
 Secar al aire y observar con el objetivo de inmersión.
 3. RESULTADOS

3.1 Montaje en fresco a partir de muestras sólidas

La muestra fue tomada de un cultivo de bacterias en Agar nutritivo, al observar en el

objetivo 40 X, se observaron numerosos cocos, diplococos y estafilococos, estos de un
color amarillento.

3.2 Montaje en fresco a partir de muestras líquidas

La muestra fue tomada de un recipiente con agua retenida, donde al observar desde el
objetivo 40 X, se visualizan pequeños microorganismos de vida libre con movimiento
(Posiblemente protozoos) éste con una especie de cola, adicionalmente numerosos bacilos.

3.3 Coloraciones simples

3.3.1 Azul de metileno

La muestra fue tomada de un cultivo de bacterias en agar nutritivo, al fijar la muestra,

realizar la coloración simple con azul de metileno y posterior a esto realizar las debidas
observaciones en 100X, se pudieron observar cocos, estos cocos se encontraban solos, no
formaban ningún tipo de cada ni de ramificaciones, había gran cantidad de estas bacterias.

3.3.2 Cristal violeta

La muestra fue tomada de un cultivo de hongos de agar nutritivo, donde al fijar la muestra y
adicionar el colorante de cristal violeta, posterior se visualiza en el objetivo 100X, se logró
observar numerosos microorganismos como bacilos, estreptobacilos, cocos, diplococos,
estreptococos, estafilococos y tétradas, estos de color morado.
3.3.3 Safranina

Esta muestra fue tomada de un cultivo de bacterias localizado en agar nutritivo, al fijar la
muestra y luego realizar la coloración simple con safranina y posterior a esto realizar las
debidas observaciones en 100X, se pudo observar bacilos y estreptobacilos, los cuales se
encontraban en abundante cantidad.

3.4 Coloración de gram

3.4.1 Frotis bucal

Esta muestra fue tomada con un escobillón estéril de las amígdalas de la compañera Lorena
Restrepo, al realizar la debida tinción de gram y pasar a observar en el microscopio con el
objetivo de 100X, en este la observación fue limitada, pero se logró observar células
epiteliales y al lado de esta un único coco (Gram positivo) y se evidenciaron varios bacilos
juntos de carácter gram negativo.

3.4.2 Frotis de un cultivo líquido

Esta muestra se realizó con yogurt. Se realizaron los debidos procesos para realizar la
coloración de gram y proceder a observar en el microscopio con el objetivo de 100X, en
esta observación se pudo encontrar cocos (gram positivos). Pero la muestra estaba saturada
de colorante por lo tanto la observación fue limitada, solo en pequeñas regiones se pido
observar la cantidad de microorganismos.

3.4.3 Frotis de un cultivo sólido

Esta muestra fue tomada de un cultivo de hongos. Al realizar el proceso de tinción de gran
y proceder a observar en el microscopio con el objetivo de 100X, en esta observación se
pudo encontrar bacilos y diplobacilos (gram negativos).
 4. ANÁLISIS DE RESULTADOS

4.1 Montaje en fresco a partir de muestras sólidas

Esta muestra se tomó de un cultivo de bacterias que se encontraba en agar nutritivo, A esta
muestra de fresco no se le añade colorantes.

En esta se encuentran cocos y estafilococos de color amarillo y se alcanzó a ver algunos en

movimiento (vivos) por que estos no son plasmados ni se pasan por calor.

4.2 Montaje en fresco a partir de muestras líquidas

Se tomó una muestra del fondo de un recipiente con aguas contenidas. Se puede observar
pequeños microorganismos de vida libre (protozoos) los cuales se pueden observar en
movimiento, debido a que estos nunca pasaron por una llama (fuego) para ser plasmados a
la placa y se ven de coloración transparente debido a la ausencia de colorantes.

4.3 Coloraciones simples

4.3.1 Azul de metileno

Fue una muestra de agar nutritivo de bacterias del aire, a esta se le añade coloración (azul
de metileno) en el cual se encontraron únicamente cocos. En esta muestra no se alcanzó a
ver microorganismos en movimiento debido a que al ser expuestos al calor y estos quedan
plasmados y mueren y su coloración fue azul debido al azul de metileno al que fue expuesta
la muestra.

4.3.2 Cristal violeta

Se logra evidenciar que gracias a que el agar nutritivo es un medio de cultivo no selectivo
permite el crecimiento de diferentes microorganismos, adicional, como las muestras fueron
tomadas de puntos con altos focos de contaminación, la variedad microbiana fue mayor,
donde al tener una alta disponibilidad de nutrientes y una temperatura optima, se presentó
el crecimiento de bacilos, estreptobacilos, cocos, diplococos, estreptococos, estafilococos y
tétradas, siendo esta la muestra con mayor cantidad clases de cocos y bacilos.

4.3.3 Safranina

Se logra analizar que debido a que en el medio de cultivo (agar nutritivo) fueron sembrados
diferentes microorganismos del aire (la caja de Petri fue expuesta por 15 minutos en el
parqueadero y en este agar nutritivo se sembró todo tipo de microorganismos) se encontró
gran abundancia de bacterias de tipo bacilo y estreptobacilos, esto se puede deber a que el
medio de cultivo no fue selectivo y a que en el aire se encuentran gran cantidad de
microorganismos, que a la hora de encontrarse con un medio en el cual tengan las
condiciones óptimas para su crecimiento, ellos empiezan a crecer y reproducirse
rápidamente.

4.4 Coloración de gram

La observación de gram se clasifica en: Gram negativo y gram positiva. Se identifican con
los colores rosado y morado

4.4.1 Frotis bucal

En esta muestra se pueden observar ambos colores. aunque la muestra fue limitada debido a
que el medio del cual fue tomado la muestra se encontraba recién cepillado, solo se
encontraron células epiteliales y un único coco gram positivo (morado) y se encontraron
varios bacilos de color rosado los cuales se clasifican como gram negativos. Se analiza que
se pudo encontrar ambos tipos de bacterias debido a que en la cavidad bucal y más la zona
de las amígdalas que constantemente se encuentran en contacto con alimentos y el acceso a
ellas para limpiarlas es limitado, entonces por esto puede ser fácil el hallazgo de ambos
tipos por la flora bacteriana.

4.4.2 Frotis de un cultivo líquido

En esta muestra se toma una mínima cantidad de yogurt (con un asa estéril) se encontraron
únicamente gram positivos(violetas) la muestra estaba saturada de colorante, por lo tanto, la
observación fue limitada. Solo en pequeñas regiones se puede observar los cocos. Aunque
la lactosa esté conformada por lactobacilos, son bacilos microaerófilos, grampositivos; pese
a que el yogurt lleve lactosa, las bacterias vivas que del yogur contiene lactasa que al
liberarse en el intestino facilita la digestión facilita la digestión de la lactosa.

4.4.3 Frotis de un cultivo sólido

Fue tomado de un cultivo de hongos. En esta muestra se pueden observar bacilos (rosadas)
lo cual indica que la muestra es de tipo gram negativa. No se encuentra microorganismos
en movimiento por los colorantes y al ser pasadas por la llama.
 5. BIBLIOGRAFÍA
Google for education. (s.f.). Observación Microscópica. Obtenido de • (Observación
microscópica 2020). https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-
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Shareweb. (s.f.). Microorganismos - Su importancia y control. Obtenido de
https://www.shareweb.ch/site/Agriculture-and-Food-
Security/focusareas/Documents/phm_postcosecha_microorganismos.pdf
Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco. (s.f.). MICROSCOPIA Y
PREPARACIÓN DE MUESTRAS DE MICROBIOLOGÍA PARA MICROSCOPIA.
Obtenido de http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microgeneral/wp-
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