1

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

SEDE MEDELLÍN

Cromosomas politénicos
Una mirada al fenómeno de la endorreduplicación

Cristina Duque Marín

Ingeniería Biológica, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Colombia Sede Medellín
criduquemar@unalmed.edu

Marzo 17, 2016

___________________________________________________________________________________________________________

Resumen

Los cromosomas politénicos deben su origen a la endorreplicación durante el ciclo celular, fenómeno que consiste en ciclos de
replicación específicos en los que las cadenas de DNA se replican una y otra vez sin una posterior cariocinesis, ni división celular o
citocinesis. Los cromosomas quedan detenidos en interfase, representando incluso más de 1000 copias de una misma cromátida, por
lo cual son más grandes que los cromosomas “normales”. El objetivo de esta práctica es observar y reconocer las estructuras de los
cromosomas politénicos y sus características. El desarrollo se llevó a cabo tomando larvas en tercer estadio de Drosophila
melanogaster, se colectaron y se pusieron en una solución de NaCl al 0.9%. Luego se procedió a observarlas en el estereoscopio para
realizar la disección, la cual se debió hacer de tal manera que los ganchos de la boca junto con las glándulas salivales se
desprendieran del cuerpo para extraer estas últimas; sin embargo esta es una técnica compleja. Con la observación de los cromosomas
en 40X y 100X, luego del proceso de tinción con aceto orceína por un periodo de 15-20 min, se procedió al análisis de las estructuras,
obteniendo fotografías que permitieran hacerlo. Se llega al hecho de que los cromosomas politenicos, efectivamente, son uno de los
casos más comunes del fenómeno de endorreduplicación y que sus principales marcadores moleculares son las bandas e interbandas
que presentan.

Palabras Clave: Anillos de Balbiani, ADN, puff, cromocentro, marcadores cromosómicos, polipliodización..
________________________________________________________________________________________________________________________

1. Introducción citológicamente como una secuencia repetida y no periódica

En 1881 Balbiani evidenció unas estructuras peculiares en los
núcleos de ciertas células secretoras de Chironomus.
Posteriormente Heitz y Bauer en 1933 y Painter en 1934
identificaron esas estructuras como cromosomas; hoy se sabe
que se encuentran en las células de los tejidos de secreción
tales como: túbulos de Malpighio, recto, intestino y glándulas
salivares de los Díptera. También se han hallado en algunas
plantas y unos pocos animales [2].
Los cromosomas politénicos son cromosomas interfásicos
transcripcionalmente activos y con una expresión
amplificada. El incremento del tamaño es el resultado de
replicaciones repetidas en las cromátidas durante la interfase,
sin una subsecuente separación de dichas cromátidas
hermanas. Un apareamiento de los cromosomas homólogos
en los tejidos somáticos contribuye totalmente a la formación
de dichos cromosomas en los Dípteros, en los cuales estos
mismos se conocen y han estudiado más ampliamente [1].
Debido a esa no separación, o fenómeno de no disyunción de
las cromátidas hermanas, cada cromosoma politenico consiste
de muchas fibras paralelas dispuestas a lo largo de su eje con
los cromómeros formando un patrón de bandas características
de cada brazo y de cada especie [2]. Dicho patrón de bandeo
es precisamente la característica más distintiva de los
cromosomas politénicos, el cual puede ser descrito
de bandas de alta intensidad de coloración y concentración de
masa (bandas o cromómeros), conectados por secciones con
muy poca concentración de masa y coloración (interbandas o
intercromómeros). Estas bandas pueden variar en grosor y
forma, lo cual puede ser un reflejo de la cantidad de DNA y
de la estructura cromosómica [3].
Las células con cromosomas politenicos difieren de las
células mitóticas normales y de aquellas que presentan
endomitosis. Primero, la fomación de estos cromosomas está
asociada con la eliminación completa de los mecanismos de
la mitosis después de cada duplicación y como resultado de
esto el ciclo celular de estas células consiste sólo en dos fases:
la fase de síntesis o fase S y la fase intersintética o fase G.
Segundo, al final de cada periodo de replicación, las hebras de
DNA no se segregan, por lo cual permanecen unidas [4]. Este
cambio en el mecanismo de la mitosis, donde si bien hay
duplicación del material genético, no se presenta una división
celular apropiada y se nombra como endorreduplicación.
La endorreduplicación es una forma de poliploidización
nuclear que resulta en múltiples y uniformes copias de los
cromosomas; este proceso es común en plantas y animales,
especialmente en aquellos tejidos que presentan una alta
actividad metabólica, lo cual generalmente ocurre en células
que están completamente diferenciadas. Este método de

replicación proporciona un mecanismo para incrementar el
nivel de expresión génica. Algunos estudios sugieren que la
endorreduplicación requiere de la pérdida de la actividad de
las quinasas dependientes de ciclinas (Cdks) en la fase M del
ciclo celular y la oscilación de la actividad de las mismas en
la fase S [5]. La endorreduplicación a menudo se describe
como un nuevo ciclo celular eucariota debido a que los
cromosomas se replican, pero el núcleo y el citoplasma no se
dividen.
La morfología de los cromosomas politenicos puede variar
ampliamente dependiendo del grado de diferenciación y la
sinapsis de las hebras de DNA; así, cada hebra dentro del
cromosoma debe ser designada como cromátida. Por ejemplo,
si la conjugación de las cromátidas homólogas es máxima se
observa el clásico cromosoma politénico (cables cilíndricos
con un patrón de bandeo distintivo), tales como los que se
observan en Drosophila melanogaster. Sin embargo, el grado
de la conjugación de las cromátidas puede variar: si este es
mínima, se forman núcleos polipliodes con estructuras
reticulares. En algunos casos, la conjugación de las
cromátidas se encuentra perturbada en un solo cromosoma del
conjunto [4]. Un conjunto de morfologías que se pueden
observar en los cromosomas politenicos son (ver figura 1) [6]:
 Los puff: Regiones de configuración que
corresponden a las zonas más desenrolladas y de
mayor actividad genética. Algunos son
amplificaciones locales de las regiones
eucromáticas.
 Cromocentro: Es la unión de las regiones
centroméricas de todos los cromosomas que
conforman el conjunto de un cromosoma politénico.
La unión de estas regiones se realiza en una región
común.
 Anillo de Balbiani: Corresponde a una estructura un
poco más ensanchada y redonda que el resto del
cromosoma. Se diferencia con facilidad, puesto que
como su nombre lo indica, presenta una forma
parecida a la de un anillo. Son puff un poco más
grandes.
Fig. 1. Identificación de estructuras de los cromosomas politenicos
(Cromocento, Anillo de Balbiani, Telómero y Puff).Obtenida de: López,
J.B. Cromosomas politenicos. Asignatura de Genética, Escuela de
Biociencias. Facultad de Ciencias. Universidad Nacional de Colombia,
Sede Medellín. Medellín, Colombia.
2
Además de las estructuras morfológicas típicas que se
observan en un cromosoma politenico, en Drosophila, por
ejemplo, se pueden observar 3 pares de cromosomas
acrocéntricos que son los autosómicos, y un par sexual;
observando así 5 brazos de cromosomas en el caso de que la
larva de la que se extraen sea una hembra o 6 en caso de que
sea macho. Estos brazos son nomenclados de la siguiente
manera [7]:
 X, unión de los brazos largos del cromosoma X.
 2L y 2R, izquierdo y derecho del par II.
 3L y 3R, izquierdo y derecho del par III.
 Par IV y cromosoma Y, apenas si sobresalen del
cromocentro.
La importancia de los cromosomas politenicos radica en el
hecho de que son un sistema importante para el estudio de la
expresión de genes y diferenciación celular [3]; además son
ideales para el estudio de la evolución ya que debido a su
mayor grosor y replicación activa, se suelen observar lazos y
bucles en la estructura debido a deleciones y duplicaciones
sufridas en solo uno de los homólogos; en caso de hacer
híbridos es posible delatar inversiones durante el proceso de
especiación.
Para esta práctica se observan cromosomas politenicos
obtenidos de las glándulas salivares de Drosophila
melanogaster, con el objetivos de aprender a obtener y
analizar, a través de la observación, cromosomas de este tipo,
teniendo en cuenta la importancia genética de los mismos.
2. Metodología
Los cromosomas politénicos se obtuvieron de larvas de
Drosophila melanogaster en tercer estadio, las cuales
presentaron un histoblasto maduro de color oscuro, que
evidenció la madurez de los filamentos branquiales. Estas
larvas debieron ser levantadas en medio enriquecido con
levadura.
Para garantizar el desarrollo de las larvas, estas debieron ser
preparadas desde la cría o el cruzamiento de los padres. Su
desarrollo tuvo que ser lento, con temperaturas del medio que
se mantuvieron al ambiente. Luego del tercer o cuarto día de
vida larval, donde se esperó que las larvas se encontraran en
tercer instar, donde se debió adicionar diariamente dos
goteros de solución de levadura, lo que sirvió como alimento.
Cuando se observó que algunas larvas comenzaron el periodo
de pupación, se seleccionaron las más gordas y con pocos
movimientos, para luego transferirlas a una caja de Petri.
Una vez que las moscas adultas se sacaron del frasco, se
procedió a la colecta de las larvas de interés: por medio de
unas pinzas finas, con cuidado de no punzarlas y producirles
la muerte, se tomó cada una de las larvas y se pasaron a una
caja de Petri que contenía solución salina para disección:
solución salina al 0.9% de NaCl, Carnoy (3 metanol: 1 ácido
acético), Carnoy diluido (1 Carnoy: 19 agua destilada) y ácido
acético al 50%. Luego de tener las larvas en esta solución
diluida por un tiempo corto, se pasaron de a una larva a una

lámina limpia y se le agregó una gota de solución para
disección contenida en la caja Petri, con la ayuda de un
gotero. La lámina con la larva se pasó a un estereoscopio para
proceder a hacer la disección. Con la ayuda de una platina
negra, que permitió una mejor visión de la larva; y dos agujas
de disección, se procedió de la siguiente manera: una vez se
enfoca la larva (la cual debe estar viva) se aseguraron los
extremos de su cuerpo con las agujas de disección, ejerciendo
presión con una aguja en cada punta de la larva, realizado esto
se separó lentamente la larva halando el extremo de la cola
(extremo en el que no se observó el histoblasto de color
oscuro) para lograr partirla por el abdomen. La disección se
debió hacer de tal manera que los ganchos de la boca junto
con las glándulas salivares se desprendieran del cuerpo. Este
procedimiento tuvo que realizarse cuantas veces fue
necesario, hasta que se lograron obtener las glándulas (figura
2).
Una vez se separaron las glándulas del resto del cuerpo, se
eliminó el tejido adiposo que las rodea con la ayuda de las
agujas, teniendo cuidado de no dañar la glándula. Ya que las
glándulas se tenían libres, se pasaron a una nueva lámina
limpia con una gota de solución colorante por 15-20 minutos:
2 gr de orceína en 50ml de ácido acético, ácido láctico al
85%, todo eso diluido en ácido acético al 60%. Sobre las
glándulas, en la lámina con solución colorante, se colocó una
laminilla para hacer aplastamiento de las mismas y obtener
cromosomas visibles. Luego de todo esto se realizó la
observación al microscopio en 40X y se tomó el registro
fotográfico a 100X.
Fig. 2. Disección de una larva de Drosophila con la ayuda de estiletes y
estereoscopio.
3. Resultados
Los cromosomas politenicos que se lograron observar a partir
de la extracción de las glándulas salivares de larvas en tercer
instar de Drosophila melanogaster se presentan en las figuras
del anexo 1. Sin embargo, debido a la mala calidad de las
imágenes obtenidos, en el anexo 2 se adjuntan las imágenes
facilitadas por otros compañeros, donde es posible observar
las estructuras morfológicas. En todas las imágenes se
presentan las estructuras morfológicas que fue posible ver.
3
4. Discusión
Obtener cromosomas politenicos de una larva tan pequeña
implica tener una muy buena técnica al momento de realizar
la disección puesto que dañar el tejido de interés o confundir
las glándulas con el aparato digestivo de las larvas es muy
fácil, precisamente por el pequeño tamaño del organismo.
Además de esto, es de suma importancia contar con buenos
materiales y equipos con el fin de que la observación y
disección se hagan de manera correcta.
De acuerdo con las imágenes que se adjuntan en los anexos,
los cromosomas politenicos pueden presentar todo el juego
cromosómico del individuo que los porta. Las larvas del
género Drosophila presentan un número cromosómico de
2n=8, con un genoma que mide alrededor de 165 millones de
bases y se estima que tiene unos 14000 genes [8]. Teniendo
en cuenta que el cromosoma Y de los machos es muy difícil
de observar y de la observación detenida de las imágenes
presentadas, se puede decir que el sexo de la larva a la cual
pertenecen los cromosomas es hembra XX. Se debe tener en
cuenta que aunque son 8 cromosomas, es posible observar 6
de ellos dado que los cromosomas autosomales del par IV son
muy pequeños (ver anexo 2), por lo cual verlos salir desde el
cromocentro es muy difícil y requeriría de otras técnicas,
como de marcadores moleculares, para poder verlos en un
microscopio.
Con respecto a los marcadores moleculares que tiene
Drosophila y que hacen que sea posible el análisis particular
de algunas regiones, se traen a coalición los que quizá son
más representativos. Primero se tiene en cuenta la
importancia de cualquier marcador molecular, pues ellos
permiten que se analice una región en específico del material
genético del organismo o la especie de interés.
 Los genes cnc de Drosophila fueron descubiertos
en 1900 en una región del tercer cromosoma, los
cuales han sido claves en la búsqueda de los genes
que involucran el desarrollo de estas moscas. Se ha
encontrado que estos genes codifican para factores
de transcripción con dominios de dimerización
[11].
 La vía de formación de la insulina, si bien ha sido
muy conservada en muchas especies (mamíferos y
Drosophila). La señalización de la insulina en las
moscas, como en los mamíferos, regula un gran
número de funciones fisiológicas, incluyendo el
metabolismo de los carbohidratos y lípidos, los
tejidos de crecimiento y la longevidad. Los
marcadores usados para hacer el seguimiento de
esta vía se llaman ILPs [12].
Sin embargo, si bien existen estos y otros marcadores
moleculares, los principales marcadores que tienen estos son
las bandas e interbandas que se pueden observar a partir de la
tinción de los cromosomas, ya que estos son únicos en cada
especie. Otros de los marcadores que se utilizan ampliamente
para la especie de Drosophila, son los marcadores NOR
(Región organizadora nucleolar), cuyas regiones son donde se
lleva a cabo la síntesis de RNAr [2].

La observación de cualquier cromosoma se logra gracias a los
diferentes métodos de tinción que existen, de los cuales
muchos se encargan de teñir la heterocromatina que
constituye la cromatina. Recordemos que la heterocromatina
es rica en bases Adenina (A) y Timina (T). Para la práctica en
cuestión, como se mencionó en la metodología, se usó aceto
orceína para realizar dicha tinción. Este reactivo tiñe la
heterocromatina [9] (material genético que no se traduce) y
gracias a su estructura molecular (ver anexo 2) esta es capaz
de intercalarse en el material genético, uniéndose en las
regiones heterocromáticas, y así generar una coloración
morada o rosada oscura en estas zonas. Por lo tanto, las
regiones que se observan más oscuras en las imágenes de los
cromosomas politenicos (ver anexos), son las regiones que no
están en expresión génica constantemente. Algunos reportes
de la literatura mencionan que es posible realizar con Giemsa
la tinción que se hace con aceto orceína, puesto que ambos
reactivos funcionan bajo el mismo principio [10].
El fenómeno de la endorreduplicación es un paso realmente
importante en la formación de los cromosomas politenicos
puesto que es necesario que ocurra un proceso que no
involucre ni la cariocinesis, ni la citocinesis y mucho menos
la separación de las cromátides hermanas. Es debido a esto
que se hace posible que ocurra una sinapsis en el juego de
cromosomas de las glándulas salivares de la larva y que se dé
una “unión” de los centrómeros de los mismos.
La importancia del estudio de los cromosomas politenicos
radica en que al tener en cuenta los datos morfológicos y las
características de estos, además de hacer el análisis de
variaciones dentro de una misma población, pueden definirse
las citoespecies o especies crípticas dentro de la morfoespecie
estudiada. Por lo tanto, los estudios citogenéticos basados en
el análisis de los cromosomas politenicos, revelan la
existencia de un complejo de especies y certifican su posición
taxonómica [2].
Conclusiones
 El fenómeno de la endorreduplicación es esencial para la
formación de cromosomas politenicos y la necesidad que
presentan algunos tejidos de traducir su material genético
constantemente y en cantidades mayores.
 La obtención de cromosomas politenicos a partir de
glándulas salivares de larvas de la mosca Drosophila
requiere de una buena técnica y manejo de los materiales
con los cuales se realice la obtención de los mismos.
 Identificar los sitios o el tipo de cromatina que se tiñe en
cualquier proceso de tinción cromatínica es muy
importante, debido que a partir de esta tinción es que se
realizará un análisis de la estructura de interés.
 Los marcadores moleculares universales de cualquier
especie, en definitiva, siempre serán sus bandas e
interbandas, debido a que son propios de cada una.
4
Referencias
[1] Edström, J.E. Polytene Chromosomes in Studies of Gene
Expression.
[2] Muñoz de Hoyos, P. (1990). La importancia de los cromosomas
politenicos en la determinación taxonómica de los Simulidos.
Publicado por Revista Académica Colombiana de Ciencias 16
(66):511-520. Colombia.
[3] Bedoya, G; Barrera, L.F. (1980). Estudio de algunos aspectos
morfológicos en cromosomas politenicos. Departamento de
Biología. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.
Universidad de Antioquia. Medellín, Colombia. [Guía de
Laboratorio].
[4] Zhimulev, I.F; Koryakov, D.E. (2009). Polytene Chromosomes.
Departamento de Biología Celular y Molecular. Novosibirsk,
Rusia. Publicado en Encyclopedial of Life Sciencies, John
Wiley & Sons, Ltd.
[5] Larkins, B.A; Dilkes, B.P; Dante, R.A; Coelho, C.M; Woo, Y;
Liu, Y. (2000). Investigating the hows and whys of DNA
endoreduplication. Departamento de Ciencias de las Plantas.
Universidad de Arizona. Tucson, Estados Unidos. Publicado en:
Journal of Experimental Botany 52 (355): 183-192.
[6] López, J.B. Cromosomas politenicos. Asignatura de Genética,
Escuela de Biociencias. Facultad de Ciencias. Universidad
Nacional de Colombia, Sede Medellín. Medellín, Colombia.
[7] Ananina, G; Peixoto, A; Souza, W; Klaczko, L. (2002).
Polytene Chromosome Map and Inversion Polymorphism in
Drosophila mediopunctat. Publicado en Revista. Mem Inst
Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro 97 (5): 691-694. Rio de Janeiro,
Brazil.
[8] Goñi, B; Soler, A.N. Mapeo genético y mapas cromosomas
politenicos. Sección de Genética Evolutiva.
[9] Plaut, W; Nash, D. Localized DNA Synthesis in Polytene
Chromosomes and Its Implications. Departamente de Zoología.
Universidad de Wisconsin. Madison, Wisconsin.
[10] Zhimulev, I.F. (1996). Morphology and Structure of Polytene
Chromosomes. Publicado en Revista. Advances in Genetics 34:
1-490.
[11] Pitoniak, A; Bohmann, D. (2015). Mechanisms and functions of
Nrf2 signaling in Drosophila. Departamento de Genética
Biomédica. Centro Medico Universitario de Rochester.
Rochester, New York, Estados Unidos. Publicado en Revista.
Free Radical Biology and Medicine 88:302-313.
[12] Teleman, A,A. (2010). Molecular mechanisms of metabolic
regaulation by insulin in Drosophila. Centro Alemán de
Investigación del Cáncer. Heidelberg, Alemania. Publicado en
Revista. Biochem. J. 425: 13-26
 5

Anexos

Anexo 1

Fig. A1. Observación de los cromosomas politenicos luego de la tinción con

aceto orceína. De acuerdo al color de la flecha: Negro: Cromosoma politénico
Observación en 40X

Anexo 2

Fig. B2. Observación de los cromosomas politenicos y las estructuras que allí
se ven. Según el color de las flechas: Rojo: Cromocentro, azul: Puff, verde:
Telómero, morado: Región sináptica. Observación en 100X. Fotografía
brindada por Jhon Fredy.

Fig. B3. Cromosomas autosómicos y sexuales de Drosophila. Obtenida

de: Goñi, B; Soler, A.N. Mapeo genético y mapas cromosomas
politenicos. Sección de Genética Evolutiva.

Fig. B1. Observación de las estructuras de un cromosoma politenico extraído

de una larva. según el color de las flechas: rojo: cromocentro azul: puff negro:
anillo de balbiani verde: telómero morado: región sináptica observación en
100x. Fotografía brindada por jhon fredy.

Fig. B4. Estructura química de la orceína. Obtenida de:

http://www.iqb.es/diccio/o/images/orceina.jpg
6