PRODUCCIÓN DE PENICILINA

Se usa penicillium notatum que es mantenida como esporos liofilizados o en

nitrógenolíquido. Otra alternativa es mantener el desarrollo vegetativo en nitrógeno líquido
o congelado a -70 °C.

Medio de cultivo para la fermentación

En la fermentación el medio de cultivo es diferente al de proliferación, ya que ahora se trata
defavorecer la elaboración del antibiótico por sobre el desarrollo del micelio. Los
antibióticos, asícomo los pigmentos, son metabolitos secundarios.Medio de producción
típico
Licos de maíz (solidos)……………..2% a 5%
Lactosa bruta………………………….2% a 3%
Carbonato de calcio…………………...0.5% a 1%

El medio de cultivo utilizado para la producción comercial de penicilina por lo general

contiene
material nitrogenado natural, nitrato, ácido α
-aminoadípico, harina de semillas de algodón oalcohol de maíz (un producto intermedio de
la industria de la molienda del maíz), lactosa,precursor de la cadena lateral, un agente
tensioactivo y sales minerales (incluido el sulfuro),también se adicionan compuestos
inorgánicos conteniendo hidrogeno, oxigeno, fósforo,azufre, potasio, magnesio, nitrógeno y
trazas de hierro, cobre y zinc. Después de ajustar el pH a4,5-5,0, el medio de cultivo se pasa
al fermentador.

Fermentadores
Para la fabricación de penicilina se utilizan tanques cerrados estacionarios, conocidos como
tanques fermentadores, con una capacidad de 20000 a 115000 litros. La mayoría de estos
tanques está provista de mezcladores a hélice o turbina y un dispositivo mecánico para
distribuir aire estéril, el cual se encuentra acoplado en la región del mezclador para alcanzar
un máximo efecto de dispersión y el agregado de otros materiales (estériles), como agentes
antiespuma,durante la fermentación. Todas las salidas de los tanques están constantemente
expuestas a un chorro de vapor para minimizar el riesgo de contaminación
El medio de cultivo se esteriliza mediante vapor a alta presión con enfriamiento
ulterior-.Durante el desarrollo del hongo la temperatura se mantienen automáticamente
entre 23°C y 25°C. El aire comprimido introducido en los fermentadores es esterilizado por
filtración a través de cartuchos de tamaño adecuado esterilizados al vapor y rellenados, por
ejemplo, con lana de vidrio.El aire estéril permite el crecimiento del hongo aerobio, y la
agitación facilita su uniforme distribución en el seno del líquido.
 La fermentación de penicilina es un proceso aeróbico con una velocidad de absorción
volumétrica de oxígeno de 0,4-0,8 mM/l min. La aireación presenta un problema especial en
esta fermentación, debido a que al incrementarse la biomasa, y por consiguiente la
demanda de O2, aumenta también la viscosidad del medio, lo cual crea una resistencia
importante para la transferencia de oxígeno. La velocidad de aireación requerida está entre
0,5-1,0 volúmenes de aire (volumen de líquido)-1 min-1 dependiendo de la cepa, del
biorreactor y del tipo de impulsor.Se debe cuidar en esta fase no tener un exceso de glucosa
debido a que el mismo puede ocasionar una inhibición de la actividad o de la síntesis de
enzimas involucradas en la biosíntesisde penicilina.Al cabo de unas 50 a 90 horas el
crecimiento se va haciendo más lento, lo que indica que el hongo se ha desarrollado por
completo.

Condiciones especiales del fermentador

Características específicas de penicilina que debe ser considerado cuando se intenta
fermentación:
•La mayoría de las penicilinas constituyen caldos filamentosos que son pseudoplástico(no
Newtoniano) en la naturaleza. Esto significa que pueden ser difíciles de mezclar,debido a su
alta (Y no constante) viscosidad. Asimismo, el aumento de la viscosidad del caldo puede
obstaculizar la transferencia de oxígeno. Lo que nos lleva al siguiente punto.
• La penicilina es un organismo aeróbico, por lo tanto la tasa de suministro de oxígeno es
crítico a la fermentación. Así, el reactor debe tener un suministro de oxígeno eficiente
sistema.
• El pH óptimo para el crecimiento de la penicilina es de 6,5. Así, el reactor debe mantener
pH eficientemente (esto se hace con frecuencia mediante la adición de NaOH).
• Los problemas de estabilidad de deformación no existen y el mantenimiento de la cepa
cuidado es obligatorio.
• Duplicación de la biomasa es de aproximadamente 6 horas.

Etapa III. Purificación

Actualmente la extracción con solventes es la base para la separación y purificación de la
penicilina. El primer paso consiste en separar el micelio del medio de cultivo empleando un
filtro rotatorio a vacío tipo cilíndrico. El filtrado rico en penicilina es luego enfriado en un
intercambiador de calor a 0 - 4 °C con el objeto de disminuir la degradación enzimática y
química durante las etapas de extracción posteriores

Las penicilinas G y V son ácidos fuertes (pKa entre 2.5 - 3.1). Las formas ácidas son solubles
en muchos solventes orgánicos y se pueden extraer con un alto rendimiento en acetato de
amilo ode butilo a pH 2.5 - 3.0. La extracción se puede realizar en operaciones continuas, a
contracorriente en extractores centrífugos en etapas múltiples, a temperaturas de 0 - 3 °C.
Otra posibilidad es el empleo de mezcladores estáticos o decantadores, los cuales tienen en
menor costo de inversión.
Así se han seleccionado cepas de P. chrysogeytum, que dan menor viscosidad en los caldos,
incrementando la transferencia de oxígeno.

Además de glucosa y lactosa, Peiticillittm chrysogenum puede utilizar una gran variedad de
fuentes de carbono y energía. Alternativamente se han usado sacarosa, almidón, dextrinas,
melaza, aceites vegetales y animales, etanol y glicerol. Un medio de cultivo en sistema batch
puede contener entre 30 y 40 g. 1 -1 de lactosa, en tanto que si se emplea un cultivo con
alimentación de fuente de carbo-no, se puede utilizar glucosa o melaza a una concentración
final de 100 g 1 -1

El azufre se incorpora como (NH 4 ) 2 SO 4 y con la fuente de nitrógeno orgánica(extractos,

peptona). ya que el nitrógeno es un sustrato importante en la producción del antibiótico.
Entre los factores que afectan q p se tienen el pH, la temperatura, la aireación y la velocidad
específica de crecimiento. El pH óptimo debe ser mantenido alrededor de 6.5, lo cual
permite además minimizar la hidrólisis de penicilina a ácido peniciloico. Se debe tener en
cuenta que el pH puede no ser constante debido a que el valor óptimo para crecimiento
puede ser diferente del de formación de producto. Los pocos estudios realizados con
respecto a la temperatura indican que el valor óptimo para crecimiento es de
aproximadamente 30 °C, en tanto que el óptimo de producción oscila entre 20 y 25 °C. Para
un proceso "batch" la temperatura puede variar entre 23 y 28 °C, en tanto que para el
"batch" alimentado esa variación está entre 25 y 27 °C. La aireación presenta un problema
especial en esta fermentación, debido a que al incrementarse la biomasa, y por consiguiente
la demanda de 0 2 , aumenta también la viscosidad del medio, lo cual crea una resistencia
importante para la transferencia de oxígeno. Por lo tanto puede ocurrir que por encima de
un cierto valor de X el suministro de oxígeno pueda ser insuficiente para mantener un q p
máximo por un determinado tiempo. Para superar estos problemas se puede incrementar la
potencia de agitación, el caudal de aire, la presión dentro del reactor, cambiar las
condiciones de cultivo o incluso trabajar con cepas modificadas.

que no aumenten la viscosidad. Todo esto indica la necesidad de un adecuado manejo del
proceso y del diseño del reactor. En un cultivo "batch"la velocidad específica de producción
de penicilina alcanza valores altos al final del crecimiento exponencial, cayendo
posteriormente.
Si la producción se opera en sistema "batch" alimentado el objetivo es obtener tanta
biomasa como sea posible (término X de la ecuación 1) la cual debería producir penicilina a
una alta velocidad específica (q p en ecuación 1) por el mayor tiempo posible

Durante la fermentación se debe controlar si el suministro de oxígeno es el requerido para

mantener el valor deseado de q p . Otro parámetro importante es la temperatura, y en este
caso el diseño y operación del reactor es importante por el calor generado por el
crecimiento y la agitación. Los agitadores utilizados son en general de tipo turbina. La
potencia introducida al cultivo es del orden de 1 - 4 W 1 -1 . Durante el proceso se controla
la temperatura, caudal de aire, velocidad de agitación, pH y velocidad de agregado de
nutrientes. La duración de la etapa de producción en el caso de operarse un sistema "batch"
alimentado es del orden de las 200 h. Actualmente la extracción con solventes es la base
para la separación y purificación de la penicilina. El primer paso consiste en separar el
micelio del medio de cultivo empleando un filtro rotatorio a vacío tipo cilíndrico. El filtrado
rico en penicilina es luego enfriado en un intercambiador de calor a 0 - 4 °C con el objeto de
disminuir la degradación enzimática y química durante las etapas de extracción posteriores.
Las penicilinas G y V son ácidos fuertes (pKa entre 2.5 - 3.1). Las formas ácidas son solubles
en muchos solventes orgánicos y se pueden extraer con un alto rendimiento en acetato de
amilo o de butilo a pH 2.5 - 3.0. La extracción se puede realizar en operaciones continuas, a
contracorriente en extractores centrífugos en etapas múltiples, a temperaturas de 0 - 3 °C.
Otra posibilidad es el empleo de mezcladores estáticos o decantadores, los cuales tienen en
menor costo de inverSión