INTRODUCCIÓN A LA ESPECTROSCOPÍA DE

ABSORCIÓN
Propiedades de la Luz

 La naturaleza de la luz ha sido estudiada por Newton y Max Planck

 Su naturaleza ha sido interpretada como:
 Compuesta por corpúsculos que viajaban por el espacio en línea
recta (Teoría corpuscular Newton 1670)
 Ondas similares a las del sonido que requerían un medio para
transportarse (Teoría ondulatoria, Young, Fresnel, 1678)
 Ondas electromagnéticas al encontrar sus características similares a
las ondas de radio (Teoría electromagnética, Maxwell, 1860)
 Paquetes de energía llamados “cuantos” llamados fotones (Planck)
 deBroglie (1924) unifica la teoría electromagnética y la teoría
ondulatoria y corpuscular demostrándo la doble naturaleza de la
luz

Radiación Electromagnética
 La luz es una radiación electromagnética visible para
nuestros ojos (400-700nm)
 Existen componentes eléctricos y magnéticos en la onda
dispuestos en ángulo recto entre sí
 Por lo tanto, la radiación electromagnética se puede
considerar como una onda que viaja a la velocidad de la
luz
  La  es la verdadera
característica de una radiación
en particular
 Haz monocromático: haz de
radiación que contiene una
distribución muy pequeña de 
(se aproxima a una  definida)
 Haz policromático: contiene
radiaciones con una amplia
distribución de 

Dos ondas se pueden combinar o interferir constructiva o

destructivamente
 Radiación Electromagnética
 Cuando un fotón pasa por una región particular del espacio, el campo
eléctrico en esa región oscila con la frecuencia .
 La frecuencia, Longitud de onda y la energía del fotón están
relacionadas entre sí

 E= energía del fotón

 h= constante de Planck, 6.62*10-34 J s E= hv = hc

 c=velocidad de la luz en el vacío, 
3.00*108m/s

 = longitud de onda (m o nm)

 = frecuencia (Hz)

Electromagnética (RE)Radiación
 En el vacío las RE viajan en línea recta
 En nuestro medio las RE interaccionan con átomos o moléculas de la
atmósfera generando 3 tipos de interacciones:
 Reflexión
 Absorción
 Refracción
REFLEXIÓN

REFRACCIÓN
 ABSORCIÓN

ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION MOLECULAR UV/

VISIBLE
 Diferentes tipos de Energía
Moléculas: 3 tipos de movimientos  TRASLACIÓN
 ROTACIÓN
Para una molécula aislada  VIBRACIÓN

E =E +E +E +E
T el v r t
E >> E >> E
el v r
Para un átomo: E electrónica

CONCEPTO DE ESPECTRO
 PARA UN ÁTOMO: paso del estado fundamental So al estado excitado S1, la
vuelta al estado basal es la emisión de una raya (Espectro de rayas)
 PARA UNA MOLÉCULA: curva de variación energética en función de las
distancias internucleares (d)

 UV Lejano (50- 200 nm):

 no se usa porque destruye las moléculas
 E es mayor que la E de enlace
 Los disolventes son opacos
 Los espectros: son en estado gaseoso
 O = 180 nm (trabajar al vacío)
2

 UV cercano (200- 400 nm):

 Se observan transiciones electrónicas, E adecuada

 Visible (400- 800 nm):

 E es baja
 No se rompen enlaces químicos
 Paso de un e de un orbital enlazante a uno antienlazante
ESPECIFICIDAD DE LA TRANSICIÓN
ELECTRÓNICA
REGLAS DE MULTIPLICIDAD:
 Número cuántico de spin: +½, -½
 Regla de Hund: moléculas orgánicas los e están apareados
(espines opuestos, antiparalelos), SoS1
 La probabilidad de que existan e con espines paralelos es baja
(triplete)
 Transiciones permitidas: So  S1 o T1  To

TIPOS DE ELECTRONES QUE PARTICIPAN EN LA ABSORCIÓN

1)ELECTRONES ENLAZANTES
 A) moléculas saturadas
 SON ESTABLES
 ALTA ENERGÍA
 E NO PARTICIPAN EN ABSORCIÓN UV /Vis

 MENOS ENERGÉTICOS
 B)moléculas insaturadas
 E NO PARTICIPAN EN ABSORCIÓN UV /Vis
 RESONANCIA

EFECTOS
BATOCRÓMICO: Corrimiento a γ mayores, menor energía
HIPSOCRÓMICO: Corrimiento a γ menor, mayore energía
EJEMPLO:

H2C CH2  = 163nm

H2C CH CH CH2  = 217nm
2)ELECTRONES ANTIENLAZANTES (n)
moléculas orgánicas poseen heteroatomos con más de un par de e libres
(no participan del enlace)
 Grupos químicos
que participan en
la absorción

 Grupos susceptibles a absorber radiación se llaman Cromóforos

(CO, NO, NO2
 Para que una molécula absorba en el UV/Visible: mínimo grupo
cromóforo
 Auxocromos: grupos incapaces de absorber por arriba de 200 nm
pero refuerzan el efecto del grupo cromóforo
 Ejemplo: Halógenos, grupos alquilos, OH, NH2 entre otros

FACTORES QUE MODIFICAN LA ABSORCIÓN

1) PROPIOS DE LA MOLÉCULA

A)Efecto Mesomérico
 Transferencia de carga (resonancia)
 Entre un grupo no saturado y un par de e libres (n)
 Efecto hipsocrómico ( menores= mayor E)

R1 R2 (nm)

Formaldehido H H 305
Acetaldehído CH3 H 290
B)Efecto Inductivo
Acetona CH3 CH 275
3permanente que originan los
 Efecto de polarización
sustituyentes
 Positivo: grupos dadores de e, ej. Grupos alquilos,
corrimiento batocrómico
 Negativo: grupos aceptores de e, ej. X, NR3, NO2, OCH3,
COOH, corrimiento hipsocrómico ( menores= mayor E)
 Efecto inductivo y mesomérico se oponen o refuerzan
C)Efecto Estérico
1.- Impedimento estérico de rotación alrededor de un enlace simple
 Rotación libre alrededor del enlace provoca una resonancia
máxima y una mayor absorción ( =256 nm)
 Rotación impedida por cambio de sustituyentes, aumenta la E de
transición electrónica y disminuye (= 228 nm)
2.- Isomería Cis/ Trans
 Cis hay más tensión
 Efecto hipsocrómico ( menores = mayor E)

2) DEBIDOS AL MEDIO

A)Absorción propia del disolvente

 Los disolventes tienen espectros característicos debido a sus
grupos funcionales orgánicos ( )
B)Interacción dipolo-dipolo
 Interacción entre un disolvente polar y los e ( ) en estado de
excitación (*) y los e (n) al estado fundamental
C)Enlaces por puentes de Hidrógeno

 n *= hipsocrómico ( menores; mayor E)

D)Efecto del pH
 solo actúa sobre moléculas susceptibles de intercambiar protones
(ácidos y bases)

LEY DE LAMBERT-BEER
-dP = kPdx
-d(lnP)= kdx
C
P=Poe-kbc
  
P0 P

Po= radiación monocromática, Potencia radiante

dP= variación de la potencia radiante

dx= distancia infinitesimal
k= constante de proporcionalidad (depende de )

Para radiación monocromática proveniente de una onda plana que pasa

a través de un medio capaz de absorber radiación de concentración
constante, la potencia radiante disminuye logarítmicamente a medida
que la longitud de paso óptico aumenta aritméticamente

P= Potencia radiante transmitida

Po= Potencia radiante
lnPo - lnP = ln(Po/P) = kb
El número de moléculas capaces de absorber radiación y que chocan
con fotones es proporcional a su concentración C

-dP= k P dC = lnPo/P = kC
Si la concentración y el espesor son variables la Ley de Lambert y Beer
combinada queda:

lnPo/P = kbC

Reemplazando queda:

logPo/P = abc
 a= absortividad
A= Absorbancia
T = Transmitancia
c= concentración
A= logPo/P= abc
b= espesor de la celda

T= P/Po

A= log 1/T = -logT = 2-log %T

 Si: c= Molaridad; b=cm; a=Lg-1cm-1 entonces: = absortividad

Molar

  es función de la estructura de la molécula

A= logPo/P= bc
  aumenta se tiene un efecto hipercrómico

  disminuye se tiene un efecto hipocrómico

CONDICIONES DE VALIDEZ DE LA LEY DE LAMBERT-BEER

 Luz monocromática
 Baja concentración de la solución
 Solución transparente
 Moléculas estables en solución o bajo efecto de la irradiación

DESVIACIONES A LA LEY DE LAMBERT-

BEER
  Reales
 Instrumentales
 Químicas

REALES
Cambios en el índice de refracción
a = absortividad a= aver / (2 + 2)2
= coeficiente de refracción

  a 1*10-3M o menores es constante

  varía a concentraciones mayores de 10-3M a también varía

INSTRUMENTALES
 Referidas a: la ley de Lambert-Beer supone radiación
monocromática y es difícil obtenerla
 Filtros de bandas o monocromadores
 Seleccionar: máximo de  de cada curva

QUÍMICAS
 Causadas por desplazamiento en la posición del equilibrio
 químico o físico
 involucra especies que absorben radiación

2- - 2-
2CrO + 2H+ 2 HCrO Cr O +
4 4 2 7
H O
2
Punto isosbéstico

Se da a la  de un espectro de absorción en la que las

absortividades molares de 2 especies interconvertibles capaces
de absorber radiación son iguales

Exactitud Espectrofotométrica

 Exactitud: cercanía de una medida a su valor real

 Precisión: describe la reproducibilidad de los resultados
 Linealidad fotométrica: capacidad de un sistema fotométrico para
dar una relación lineal entre la potencia radiante incidente a su
detector y la lectura

 Exactitud  Linealidad
 Ancho de banda espectral
 Ancho de banda observado

 Incertidumbre en la 
 Radiación parásita

 Dispersión producto del polvo

 manchas en las celdas etc...

 Desviación positiva a la ley de Lambert-Beer si la radiación

parásita es absorbida
 Desviación negativa a la ley de Lambert-Beer si la radiación
parásita no es absorbida

A aparente= log(Po +Ps)/ (P+ Ps)

Precisión Fotométrica
  Determinada por el ruido instrumental

 Análisis cuantitativo: rango de T, que provoca la mínima

incertidumbre en C
 Incertidumbre de los instrumentos (0.001-02)

 Valor real de T se obtiene midiendo la transmitancia de una

solución en pequeñas cantidades 30 veces (incluya todo el proc.) y
se calcula la desviación estándar

Metodología Cuantitativa

 Realizar el espectro de Absorción

 Seleccionar la  máxima

 Realizar la curva de calibración a  máxima

 Determinar 
 Determinar la concentración de la especie en estudio

Determinaciones espectrofotométricas
simultáneas

Superposición de espectros de 2 cromóforos

C1 (1)1 + C2 (2)1 = A1

C1 (1)2 + C2 (2)2 = A2

 1.- Espectros de ambos componentes puros

2.- Elegir 2 

3.-Hacer curvas de calibración a 2 

4.- Obtener 
5.- Determinar la concentración de las especies

INSTRUMENTO
Muestra

Fuente de radiación Control de  Disolvente Transductor

 Colorímetro Dispositivo
 Fotómetro
 Espectrofotómetro de lectura

COLORÍMETRO: ojo humano es el detector y el cerebro como transductor

utilización de patrones
FOTÓMETRO: método rápido, simple y bajo costo.
ESPECTROFOTÓMETRO: más sofisticado

FUENTE DE RADIACIÓN

Función (fotómetro y espectrofotómetro)

  Proporcionar suficiente E radiante
 Rango de  de trabajo
 Mantener una intensidad constante
 intervalo de tiempo (durante las mediciones)

Estabilidad de las fuentes

Se logra utilizando transformadores de Voltaje y reguladores de potencial

MATERIAL
  > 320 nm
 Lámpara con filamento incandescente de alambre (tungsteno) en un
vidrio sellado al vacío con gas inerte
 Lámpara de Tungsteno y halógeno
 Especial, contienen Yodo además de los gases normales de
rellenos y recubiertos con cuarzo

  < 320 nm
 Lámpara de vapor de Deuterio a de descarga de Hidrógeno
 Hidrógeno o Deuterio aumentan la luminosidad 3 a 5 veces
 Se encuentran cubiertas de sílice fundida o cuarzo con borosilicato
opaco para los rayos UV

ABERTURAS

 Fija o de ancho variable 2nm

 DISPOSITIVO DE SELECCIÓN DE λ
Objetivo: reducir el margen de  utilizado
 cumple la ley de Lambert- Beer
 mayor selectividad
 mayor sensibilidad
Filtros: fotómetro
Monocromador: espectrofotómetro (prisma y red)

FILTROS (FOTÓMETRO)

 Reducen el margen de la radiación

 Proporcionan alto rendimiento de la radiación (50-80% de eficiencia) Absorben
en un amplio rango del espectro y transmiten en un rango estrecho
 Absorción: se fabrican de vidrio, materiales plásticos, gelatina y líquidos
 Corte y corte agudo: usados como filtros de bloqueo para suprimir algunos
ordenes espectrales indeseables
 Interferencia: filtro que deja pasar una banda de  alrededor de un valor
nominal. Banda ancha

MONOCROMADOR
(ESPECTROFOTÓMETRO)
 Mecanismos perfeccionados que permiten cambiar continuamente la  (barrido)
 Función:
 Dispositivo que dispersa la radiación (lentes, espejos y ventanas)
 Proporcionar un haz de energía radiante con una  y anchura de banda dada
 Ajuste del rendimiento de E
 Requisitos básicos:
 Simplicidad en el diseño
 resolución
 gama espectral
 pureza de radiación de salida y dispersada
 MONOCROMADO

R
1.-Rendija de entrada que proporciona una imagen óptica estrecha de la fuente de
radiación
 2.-Un lente colimador que hace paralela la radiación precedente de la rendija de
entrada gelatina y líquidos
 3.- Una red o prisma para dispersar la radiación incidente

 4.-Otro lente colimador para reformar las imágenes de la rendija de entrada sobre la
de salida
 5.- Una rendija de salida para aislar la banda espectral deseada bloqueando toda la
radiación dispersada excepto la del intervalo deseado

TIPOS DE
MONOCROMADORES
 Prisma: utiliza prismas o lentes para trasmitir la luz hacia la rendija de salida
 red: se logra la dispersión de radiaciones del UV, Visible e IR mediante el paso del
haz a través de una red de transmisión o por reflexión sobre una red de reflexión
(vidrio u otro material trasparente, con numerosas de estrías paralelas)

CELDAS Y DISPOSITIVOS DE
MUESTREO
 Celdas o cubetas:
 UV= cuarzo
 Visible= vidrio, plástico de bajo costo
 Deben ser rectangulares no cilíndricas
 Manejarlas de a pares
 Limpieza
DETECTORES
 Transductor que convierte la RE en un flujo de e y posteriormente en una corriente o
voltaje en el circuito de lectura
 Fotómetro:
 celdas fotovoltaicas y fototubos, dispositivos fotoeléctricos que convierten la RE
en eléctrica
 Tarea: ¿qué son y en que consisten las celdas voltaicas y Fototubos?

La celda galvánica o celda voltaica, es una celda electroquímica que

obtiene la energía eléctrica a partir de reacciones redox espontáneas
que tienen lugar dentro de la misma.
Ocurren a través de un dispositivo en el que la transferencia de
electrones, (de la semireacción de oxidación a la semireacción de
reducción), se produce a través de un circuito externo en vez de ocurrir
directamente entre los reactivos; de esta manera el flujo de electrones
(corriente eléctrica) puede ser utilizado

Los fototubos son un tipo de transductores sensibles a la luz, la cual se

transforma en corriente eléctrica. Están formados por un tubo que se
encuentra al vacío o relleno con algún gas inerte (argón o similar).
Actualmente han sido sustituidos en gran medida por los fotoresistores y
los fotodiodos.

 Espectrofotómetro:
 UV/Vis: fototubos o fotomultiplicadores
 IR: cuidar el control de temperatura (termopares)
 Tarea: ¿qué son y en que consisten los fototubos y fotomultiplicadores?

Un fototubo consta de un cátodo semicilíndrico y un ánodo de filamento,

sellados dentro de tubo transparente cerrado donde se ha hecho vacío.
Sobre la superficie cóncava del cátodo descansa una capa de material
fotoemisivo, por ejemplo un metal alcalino o un oxido de metal alcalino,
que tiende a emitir electrones cuando se irradia. Cuando se aplica un
potencial a través de los electrodos, los fotoelectrones emitidos se
dirigen al filamento del ánodo, produciendo una corriente que fácilmente
se amplifica y aparece en pantalla o se registra.

El tubo fotomultiplicador es semejante a la construcción al fototubo que

acabamos de describir, pero es MUCHO MÁS SENSIBLE. Su superficie
catódica es similar en composición a la de un fototubo, y emite
electrones cuando se expone a la radiación. Los electrones emitidos se
aceleran hacia un DINODO se mantiene a un potencial 90V mas positivo
que el cátodo.
Se llama fotomultiplicador a un tipo de detector óptico de vacío que
aprovecha el efecto de emisión secundaria de electrones para responder
a niveles muy bajos de iluminación, manteniendo un nivel de ruido
aceptable.

DISEÑOS DE ESPECTROFOTOMETROS
HAZ SIMPLE

HAZ DOBLE
BARRAS DE FOTODIODOS LINEALES (BDL)

Tarea: Señalar las ventajas que tiene este diseño respecto de los
otros diseños mostrados

APLICACIONES DE LA ESPECTROFOTOMETRÍA
UV/Vis

 Análisis de multicomponentes
 Espectrofotometría en derivadas
 Aplicaciones al análisis de medicamentos
Estimación de la cantidad de Cistina que se forma en las cápsulas de cisteína al ser
disuelto en agua (estudio de la degradación)

ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN Y EMISIÓN ATÓMICA

• Amplia aplicabilidad
Análisis Cualitativo
Análisis Cuantitativo
• Se basa en: absorción, emisión o fluorescencia por átomos o iones elementales
• Dos regiones en el espectro
UV/Visible
Rayos X (e más cerca del núcleo)

VENTAJAS DEL
MÉTODO
• Alta especificidad
• amplia aplicabilidad
• excelente sensibilidad (ppm o ppb)
• rapidez (<1min)
• Comodidad
• uno de los más selectivos
• Aplicado a más de 70 elementos

ESPECTRO ATÓMICO

• Exige la conversión de los elementos de una muestra de partículas

monoatómicas en fase gaseosa (átomos o iones)
• Excitación de los e de valencia (zona UV/Vis)
• Espectro atómico en el rango UV/Vis
• Se obtiene separando el elemento del resto de la molécula
• Atomización

ATOMIZACIÓN
• Proceso en el cual la muestra se convierte en vapor atómico (partículas
gaseosas elementales)
• Pocas líneas discretas a  características de cada elemento
• En estado gaseoso no hay moléculas o iones complejos, por lo tanto:
no espectro de bandas (no rotación ni vibración)
sólo traslación

ATOMIZACIÓN DE LA MUESTRA

• Dos tipos:
Continuos
Discretos
• Continuos
Muestra entra a una velocidad constante
Señal espectral constante (Llama, ICP, DCP)
• Discretos
 ANCHURAS DE LAS LÍNEAS ESPECTRALES
• Líneas estrechas son muy convenientes: reducen posibles interferencias
• Importancia en el diseño de instrumentos
• Fenómenos que ensanchan las líneas espectrales
Efecto de incertidumbre
Efecto Doppler
Efectos de presión debidos a las colisiones entre átomos del mismo tipo y con átomos
extraños
Efecto del campo magnético y eléctrico

• Efecto de Incertidumbre

“Líneas espectrales tienen anchura finita por que los tiempos de vida
de uno o de ambos estados de transición son también finitos lo que
conlleva incertidumbres en los tiempos de transición y un
ensanchamiento de la línea como una consecuencia del principio de
incertidumbre”

• Efecto Doppler

“La  de la radiación emitida o absorbida por un átomo, que se mueve

rápidamente, disminuye si el movimiento es hacia un detector y aumenta
si el átomo se aleja del mismo”.

Máximo
Detect
or de
efecto
fotone
Doppler
s
 • Efecto de Presión:

presión o colisión de las especies, que emiten o absorben, con otros

átomos o iones presentes en el medio calorífico

EFECTOS DE LA
TEMPERATURA
• En los espectros atómicos
Relación entre el número de partículas atómicas excitadas y no excitadas
Distribución de Boltzmann
Tarea: busque la ecuación y en que consiste la ecuación de Boltzmann
Métodos analíticos basados en la emisión requieren un riguroso control de
Temperatura
Métodos de absorción y fluorescencia (se basa en la medida de átomos no
excitados)
Importante en la atomización

ESPECTROS MOLECULARES PRODUCIDOS EN LA

ATOMIZACIÓN
• Cuando se usa Hidrógeno o hidrocarburos como combustible se encuentra:
bandas de emisión y absorción molecular de especies como OH, radicales CN y
moléculas de C
• Metales alcalinos y tierras raras forman
óxidos o hidróxidos volátiles que absorben y emiten en un intervalo espectral amplio
• Ejemplo:
Ba tiene como interferente CaOH que puede ser eliminado aumentando la
Temperatura
Na se solapan con los componentes provenientes de la descomposición de una mezcla
etanol/agua

• Eliminación de estas interferencias

Adecuada elección de la 
Corrección de la señal de fondo
cambio en las condiciones de la atomización
 ATOMIZACIÓN CON LLAMA

• Etapa más crítica en la espectroscopía de llama

• Límita la precisión de estos métodos
• Importante comprender y conocer las características de las llamas y las variables que las
afectan

TIPOS DE LLAMAS

Combustible Oxidante T (ºC) Velocidad de Combustión (cms-1)

Gas natural Aire 1700-1900 39-43

Gas natural Oxígeno 2700-2800 370-390

Hidrógeno Aire 2000-2100 300-440

Hidrógeno Oxígeno 2550-2700 900-1400

Acetileno Aire 2100-2400 158-266

Acetileno Oxígeno 3050-3150 1100-2480

Acetileno Oxido nitroso 2600-2800 285

ESTRUCTURA DE LA LLAMA
Zona de reacción secundaria
donde los productos de la región
Zona rica en átomos libres y interior se convierten en óxidos
se utiliza en Espectroscopía moleculares estables
de llama

Luminiscencia azul (C2, CH

y otros radicales) no se usa
en Espectroscopía de llama
 ATOMIZADORES DE LLAMA

• Se emplean para las medidas de emisión, absorción y fluorescencia

• Consiste en un nebulizador neumático, que transforma la disolución de la
muestra en una niebla, o aerosol, que se introduce en un quemador

Los quemadores con flujo laminar proporcionan una llama relativamente estable y con una trayectoria larga. Esto
aumenta la sensibilidad y la reproducibilidad
 REGULADORES DE COMBUSTIBLE Y OXIDANTE

• Sirven para regular el caudal

• Caudales de oxidante y de combustible son variables importantes en E.de llama
• Se mezclan en proporciones estequiométricas
• En la formación de óxidos estables es preferido una llama enriquecido en combustible
• El rotámetro es uno de los sistemas más utilizados
Tubo cónico, graduado y transparente montado verticalmente con su extremo más
estrecho hacia abajo. El flujo de gas levanta un flotador liviano, cónico o esférico cuya
posición vertical está determinada por el caudal del gas.

CARACTERÍSTICAS DEL FUNCIONAMIENTO DE LOS ATOMIZADORES DE

LLAMA
• En términos de reproducibilidad, resulta ser superior a todos los demás
• En términos de eficacia en la introducción de la muestra (sensibilidad) no es bueno:
1.-una gran porción de la muestra se pierde por drenaje
2.-el tiempo de residencia de los átomos individuales en el camino óptico en la llama es
breve (~10-4s)

ATOMIZADORES ELECTROTÉRMICOS

• Mayor sensibilidad:
toda la muestra se atomiza en un período muy breve
tiempo promedio de residencia de los átomos en el camino óptico es de un segundo o más
• Se utilizan para medidas de absorción atómica y fluorescencia, pero no para emisión
• Se evaporan primero pocos L de muestra a baja Tº y luego se calcinan a una Tº más
alta en un tubo o cubeta de grafito calentado eléctricamente. La corriente se incrementa
lo que eleva la Tº a unos 2000-3000ºC. La atomización se produce en pocos ms a
segundos
 DISEÑOS DE ATOMIZADORES
ELECTROTÉRMICOS

ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA

• Método más utilizado

Simplicidad
Efectividad
Bajo costo relativo
• Específicos
Líneas de absorción son estrechas
Las energías de transición electrónicas son únicas para cada elemento
 • Limitaciones
Limitada anchura de líneas como consecuencia baja sensibilidad
• Solución
Utilización de fuentes de radiación con anchuras de banda aún más estrechas
que los picos de absorción
Ej. Línea de absorción del Sodio 589,6 nm se escoge la radiación
correspondiente a un pico de emisión del Sodio a esta misma  ( lámpara
específica de vapor de Na

FUENTES DE RADIACIÓN PARA EAA

• Las condiciones de operación de una fuente
Ensanchamiento Doppler< que el ensanchamiento del pico de absorción
Tº de la fuente se mantiene < a la Tº de la llama
• Ver figura
Desventaja: necesidad de una fuente de lámpara distinta para cada
elemento (o grupos de elementos) que se analiza.

LÁMPARAS DE CÁTODO HUECO

 EL CÁTODO ESTÁ CONSTRUIDO CON:
-metal cuyo se desea obtener
-soporte para una capa de dicho metal

FUNCIONAMIENTO:
-se aplica un potencial 300V entre los electrodos
-se produce ionización del gas
-genera una corriente 5 a 20 mA
-Los iones o electrones migran hacia los electrodos
-si el potencial es alto los cationes gaseosos adquieren >E. Cinética y
arrancan átomos metálicos de la superficie del cátodo y producir una
nube atómica, CHISPORROTEO.

VENTAJAS:
Eficacia, depende de
 su geometría

Configuración cilíndrica del cátodo tiende a concentrar la radiación en

una región limitada del tubo

 potencial aplicado

Potenciales elevados y altas corrientes originan intensidades de

radiación mayores

LIMITACIONES:
 Aumenta el ensanchamiento Doppler de las líneas de emisión
 Altas corrientes provocan un aumento de átomos no excitados en
la nube (éstos son capaces de absorber radiación emitida por los
átomos excitados)

LÁMPARAS DE DESCARGA SIN ELECTRODOS:

• Para espectros atómicos de líneas

• Producen intensidades radiantes 1 o 2 órdenes de magnitud > cátodo
hueco
• Tubo de cuarzo sellado
Contiene el metal
Ar como gas inerte
No tiene electrodos
 INSTRUMENTOS PARA EAA

• Se debe considerar:
Anchura de banda estrecha, para eliminar interferencias y aumentar la sensibilidad
filtros de interferencia
Monocromador UV/Vis ( 1A)
Detectores: fotomultiplicador
Sistema de lectura: computadores con buen software
• Espectrofotometros de un solo haz
• Espectrofotometros de doble haz
• Diferencias en costo y complejidad
INTERFERENCIAS

• Interferencias espectrales
“absorción o emisión de una especie que interfiere se solapa o aparece muy
próxima a la absorción o emisión del analito, de modo que su resolución por el
monocromador resulta imposible”
Productos de combustión (combustible y oxidante)
Matriz
Formación de óxidos refractarios (Ti, Zr y W)

TAREA: Buscar los métodos para la corrección de las interferencias de

la matriz
La determinación de metales pesados en suelos y sedimentos puede presentar
dificultad, debido a la alta complejidad que puede tener la matriz. La presencia de
materia orgánica, la cual tiende a interferir en las medidas instrumentales, así
como la tipología del terreno hacen necesaria la utilización de técnicas de
extracción las cuales consumen solventes y tiempo, además de aumentar el
número de pasos antes de la medición, lo cual deja el análisis expuesto a la
posibilidad de aumentar el error y, por tanto, obtener valores de baja
confiabilidad. Es en este esquema, en el que el uso de métodos tales como la
fluorescencia inducida por rayos X (FRX), presenta un avance considerable. La
escasa o nula preparación de la muestra y la rapidez del análisis complementado
con la aparición de equipos de FRX portátiles (pFRX) que permiten el mismo tipo
de medición, en terreno, ha posicionado a este método como poderoso en la
Química Analítica, tanto en el ámbito comercial como medioambiental. Sin
embargo esta técnica, presenta una gran complicación ya que su uso es
principalmente semicuantitativo, con una alta presencia de interferencias que
ponen en duda su utilización como una metodología determinante, dentro del
amplio espectro de métodos utilizables. Es en este aspecto que la utilización de
correcciones teóricas de efecto matriz y el uso de coeficientes de influencia, tiene
un gran impacto sobre su utilización. La corrección por parámetros fundamentales
(FP), normalización Compton y métodos de compensación, son los más utilizados
para obtener análisis cuantitativos y confiables, no obstante, estas correcciones
teóricas, salvo la utilización de métodos de compensación, dependen netamente
del fabricante del equipo, variando de un proveedor a otro y siendo muchas veces
parámetros inamovibles de los cuales se entrega poca información. Considerando
como hipótesis de estudio, que las correcciones teóricas de efecto matriz de
fábrica que traen los equipos, pueden presentar divergencias que afectan las
mediciones. ,Se realizó la comparación de un equipo de pFRX Bruker, modelo S1
TURBOSD con otro equipo de pFRX Olympus, modelo Innov-X X-5000, ambos con
sus correcciones de efecto matriz de fábrica, para 7 elementos en un amplio
rango de concentraciones, la búsqueda de interferencias y sus posibles razones y
correcciones por compensación para ambos equipos, de manera de observar si
mediante este tipo de corrección se puede lograr una mejor calidad de las
mediciones

INTERFERENCIAS QUÍMICAS
1.- Formación de compuestos poco volátiles

 aniones que reaccionan con el analito ej. Ca en presencia de

fosfatos o sulfatos.
 Cationes ej Al interfiere la lectura de Mg (formación de un óxido
termoestable)
 Se elimina
 aumentando la Temperatura
 adicionando agentes liberadores
2.- Equilibrios de disociación

 Los óxidos e hidróxidos de metales son estables

 Na en presencia de HCl (NaCl)

MO M + O
M(OH) M + 2OH
2
3.- Ionización en llamas

 Aumenta cuando se usa oxigeno u óxido nitroso

 Aumenta el número de e libres
 Se agrega otro componente ejemplo supresor

TÉCNICAS ANALÍTICAS DE EAA

• Preparación de muestra
• Patrones de calibración
• Solventes orgánicos (complejos)
• Curvas de calibración
• Método de adición de estándar

ESPECTROSCOPIA DE EMISIÓN DE LLAMA

• Se aplica a: Na, K, Li y Ca en todo tipo de muestras especialmente
en tejidos y fluidos biológicos
• factores de su elección
conveniencia
rapidez
relativa falta de interferencias

INSTRUMENTACIÓN
• Equipos similares a EAA
• La llama actúa como fuente de radiación
• Espectrofotómetros de UV/VIS para análisis no de rutina (con
corrección de fondo)
 • Fotómetro para análisis de rutina de alcalino y alcalino térreos
se usa llama a baja temperatura
Espectros simples
filtros de interferencias

INTERFERENCIAS
• 1.- Interferencias de líneas espectrales
La selectividad depende del monocromador
• 2.- Interferencia de Banda
líneas de emisión superpuestas sobre bandas de óxido del
combustible y oxidante
• 3 Interferencias Químicas
Se evitan: T, uso de agentes protectores, liberadores o supresores de
ionización
Autoabsorción:producto de diferencias de T en la llama

COMPARACIÓN

EAA EEA

• Necesitan lámpara • Llama es la fuente

• El operador no necesita • El operador necesita cierta
experiencia previa habilidad
• Corrección de fondo más • Corrección de fondo menos
complicada complicada
• Precisión y exactitud • Precisión y exactitud buena
buena • Interferencias
• Interferencias
ESPECTROSCOPÍA INFRARROJO (IR)
INFRARROJO
 La región IR del espectro incluye 3 regiones:
 IR- cercano: 12800- 4000 cm-1
 IR- medio: 4000- 200 cm-1
 IR- lejano: 200- 10 cm-1
 Rango más usado: 4000-670 (400) cm-1
La mayor parte de la luz infrarroja que viene del Universo es absorbida
por el vapor de agua y el dióxido de carbono que hay en la atmósfera.
Sólo un rango muy estrecho de longitudes de onda puede llegar (al
menos parcialmente) a los telescopios infrarrojos terrestres.
TRANSICIONES ENERGÉTICAS
•Radiación de alta energía produce: Transición electrónica
•Radiación de baja energía produce
 Transición vibracional
 Transición rotacional
•Radiación IR es de baja E y se limita a especies moleculares

DESCRIPCIÓN DE UN SISTEMA MOLECULAR POLIATÓMICO

• La energía potencial de la vibración cambia periódicamente
cuando fluctúa la distancia entre las masas

TIPOS DE VIBRACIONES MOLECULARES

• Estiramiento:
 Un cambio continuo en la distancia inter-atómica en el
enlace entre los dos átomos
• Deformación:
 Es el cambio en el ángulo entre los dos enlaces
 Hay 4 tipos de deformación: tijeras, oscilación, torsión y
sacudida fuera del plano

TIPOS DE VIBRACIONES
REQUISITOS PARA LA ABSORCIÓN DE RADIACIÓN IR
• Cuando una molécula es irradiada con REM (IR), el enlace que
vibra absorberá energía si la frecuencia de la luz es igual a su
frecuencia vibracional.
• Para que una molécula absorba radiación IR, debe experimentar
un cambio neto en el momento dipolar como consecuencia de los
movimientos vibracionales o rotacionales.
FRECUENCIA VIBRACIONAL
• Frecuencia vibracional de un sistema diatómico.
• Expresión de la radiación en Nº de onda (N)

1 k 1 k (m1  m2 )
m  
2  2 m1m2

1 k
N k= Constante de fuerza del enlace químico

2c  µ= masa reducida

c= velocidad de la luz

EJEMPLOS
• HCl = la distribución de carga no simétrica tiene momento dipolar
distinto de cero= molécula polar
 REPRESENTACIÓN GRÁFICA DEL ESPECTRO DE IR
• A diferencia del UV/Vis se observan gran cantidad de máximos y
mínimos
• Eje Y= Transmitancia (%) o Absorbancia
• Eje X= nº de onda en cm-1
• Existe una relación lineal entre las distintas magnitudes usadas
• Frecuencia radiación absorbida= frecuencia de la vibración
molecular responsable del proceso de absorción.

¿COMO INTERPRETAR UN ESPECTRO IR?

• Posición general de los números de onda de las señales (peaks)
• Forma de las señales (peaks)
• Intensidad de las señales (peaks)
EXAMEN DE UN ESPECTRO IR
• En un espectro IR se distinguen 2 regiones importantes:
• 1.- Región de la Huella Digital
 Es la compleja región del espectro IR bajo los 1500 cm-1, en
esta región, pequeños cambios en la estructura molecular
producen cambios en el espectro IR
• 2.- Región de los grupos funcionales
 Las bandas de absorción características de los grupos
funcionales cambian muy poco de un compuesto a otro
(sobre 1500 cm-1)

INSTRUMENTACIÓN
Espectro de infrarrojo

FUENTE SISTEMA DISPERSIVO DETECTOR REGISTRADOR

Emisora de Separa la
 Registra la
señal
previamente
amplificada.
Espectro IR

FUENTES
• Consisten en:
• sólido inerte que se calienta eléctricamente
• Tº entre 1500-2000 K
• radiación IR continua (cuerpo negro)
• Máxima intensidad radiante: 5000 y 5900 cm-1

•  > la intensidad decrece hasta el 1% del máximo a 670 cm-

1

TIPOS DE FUENTES DE RADIACIÓN IR

• Emisor de Nerst
• Fuente Globar
• Fuente de alambre incandescente
• Arco de mercurio
• Lámpara de filamento de Tungsteno
• Fuente láser de dióxido de carbono
CARACTERÍSTICAS DE LAS FUENTES DE RADIACIÓN IR

Fuente de Material Material de Rango de Radiancia

Radiación Emisor de Ventana o Longitud de Espectral
Radiación Cubierta onda Aprox.

(Wcm-2nm-1s-1)

Nerst Barra de Ninguno 0,4 – 20 µm 10-4

Zirconio, Itrio, o
Torio calentado
a 1000-1200 ºK

Globar Barra de Ninguno 1,0 – 40 µm 10-4

carburo de Si a
1300- 1500 ºK

Tungsteno Filamento de Vidrio 320 – 2500 nm 10-2

Tungsteno a
2000 – 3000 ºK
MATERIAL PARA VENTANAS EN EL IR
• Consideraciones para elegir un material adecuado para la ventana
 Rango de transmisión en nº de onda.
 Propiedades químicas de las muestras y los cristales.
 Propiedades físicas del material de la ventana
 Costo del material de la ventana
 Índice de refracción

TIPO DE MATERIAL PARA VENTANAS EN EL IR

• Cloruro de sodio
• Cloruro de plata
• Bromuro de estroncio
• Irtran 2 (Sulfuro de zinc)
• Seleniuro de zinc
• Germanio
DETECTORES
• Transductor o detector sensible en el IR
 Detectores térmicos
 Termopares (alambres de bismuto)
 Bolómetros (termómetro de resistencia, láminas de Pt,
Ni)
 Detectores piroeléctricos (materiales dieléctricos, sulfato de
triglicina)
 Detectores fotoconductores (láminas de materiales
semiconductores)

INSTRUMENTOS DE INFRARROJO
• 1.- Espectrofotómetros dispersivos de red
 Análisis cualitativo
 • 2.- Instrumento multiplex, Tansformada de Fourier
 Análisis cuali y cuantitativo
• 3.- Fotómetros no dispersivos
 Cuantificación de especies orgánicas en la atmósfera
• 4.- Fotómetros de Reflectancia
 Sólidos (Industria y agricultura)
1.-INSTRUMENTOS DISPERSIVOS
• Doble haz con registrador.
• usan redes de reflexión para la dispersión de la radiación.
• Usa red de difracción para selección del número de onda
• incorporan un cortador de la frecuencia (discriminar el origen de la
señal).
• similares a los espectrofotómetros de UV/Vis, difieren en la
ubicación de la muestra y la referencia (entre la fuente y el
monocromador).
LIMITACIONES
• Sistema atenuador del haz
 Respuesta del atenuador se retrasa respecto a los cambios
de transmitancia
 sistema registrador ( fuera de escala)
 Dificultad de establecer la posición nula (%T0), casi no llega
radiación al detector
 respuesta poco definida del detector
 señales redondeadas
2.-INSTRUMENTO MULTIPLEX, TRANSFORMADA DE FOURIER
• 2 tipos
• Codificado
 se divide la fuente en dos haces utiliza la TF para el
tratamiento de datos
• Transformada de Hadamard
  usa una plantilla móvil en el monocromador para codificar
los datos espectrales
CARACTERISTICAS DE FT-IR
• Usa un interferómetro para reemplazar el dispositivo dispersivo y
genera un haz de interferencia que se expone a la muestra.
• Además:
 Rapidez
 alta resolución
 sensibilidad
 precisión

 exactitud de 
 Tamaño del equipo apropiado
 fiables y de fácil mantenimiento
COMPONENTES DE LOS ISTRUMENTOS FT-IR
• Interferómetro de Michelson:
 La radiación en lugar de pasar por un monocromador pasa
por un interferómetro, la respuesta es muy rápida y genera
interferogramas (ver figura)
• Mecanismo de tracción
 Obtención de interferogramas satisfactorios
 Requisitos:
 Velocidad del espejo móvil sea constante (0.01-10
m/s)
 la posición del espejo móvil sea conocida
 constante la verticalidad del espejo a la trayectoria
del haz de 10 o más cm

INTERDERÓMETRO DE MICHELSON
REQUISITOS
• Para que el sistema opere satisfactoriamente:
 sistema permita muestrear el interferograma a intervalos de
desfase definidos
 determinar exactamente el punto de desfase cero para
realizar el promedio de las señales
SOLUCIÓN:
• utilización de tres interferómetros:
• Sistema IR
• sistema de referencia de franjas láser
• sistema de luz blanca

DIVISORES DE HAZ
 • Materiales transparente (50% de la radiación se refleja y el 50% se
transmite
• IR lejano: delgada película de Mylar que se coloca entre 2 placas
de un sólido de bajo Indice de refracción
• IR medio: películas delgadas de Ge y Si depositados sobre
bromuro y Ioduro de Ce, NaCl o KBr
• IR cercano: Fe2O3 que se deposita sobre CaF2

FUENTES Y DETECTORES PARA FT-IR

• Generalmente de un sólo haz
• Fuentes (globar etc…..)
• Detectores: los térmicos no se adaptan bien debido a su lenta
velocidad de respuesta
• piroelectricos y fotoconductores se utilizan ampliamente

VENTAJAS DE FT-IR
• Mejor relación señal/ruido
• alta resolución (<0.1 cm-1)
• elevada exactitud
• reproducibilidad en la determinación de frecuencias
• no tienen problemas de radiación parásita
 IR DISPERSIVO vs FT-IR

IR DISPERSIVO
 Muchas partes móviles
 Le afecta la radiación parásita
 Resolución y razón S/N bajas
 Long. de onda simple cada vez
 Difícil de combinar con otros
instrumentos, tales como GC.
FT-IR
 Sistema óptico más simple
 Radiación parásita despreciable
 Resolución y S/N excelentes
 Todas las Lon. De onda de una vez
 Puede ser conectado a otro
instrumento dispersivo

3.-INSTRUMENTOS NO DISPERSIVOS
 Fotómetros de filtro

 Análisis cuantitativo
 fáciles de mantener
 menos complicados
 más resistentes
 más baratos

 Fotómetro de IR portátil

 Pesa alrededor de 8 Kg
 análisis cuantitativo de distintas sustancias orgánicas en la
atmósfera
 fuente= varilla de cerámica rodeada de alambre de nicromo
 Transductor= detector piroeléctrico
 varios filtros de interferencia (3000-750cm-1)
 monóxido de carbono, HCN, hidrocarburos clorados
 CELDA DE CAMINO LARGO

- se usa para medir muestras gaseosas (ppm)

-camino óptico 1cm

INSTRUMENTOS AUTOMATIZADOS PARA EL ANÁLISIS

CUANTITATIVO

 Sistema controlado por un computador

 Selector de  automático (4000-690 cm-1) con exactitud de 0.4

cm-1

 Fuentes y detector semejantes a los ya descritos

 Cortador de haz
ESPECTROSCOPIA INFRARROJA DE REFLEXIÓN
INTERNA
 Permite la obtención de espectros de muestras complicadas:
 sólidos de limitada solubilidad
 fibras
 pastas
 adhesivos
 Polvos
 Polímeros

 Fundamento:
 “Cuando un haz de radiación pasa de un medio más denso a
uno menos denso, se produce una reflexión”
 La fracción del haz incidente que se refleja es mayor a
medida que aumenta el ángulo de incidencia
 La profundidad de penetración depende de:

 , índice de refracción de los dos materiales y del

ángulo del haz

 Fundamento:
 La radiación que penetra se llama onda evanescente
 Si el medio menos denso absorbe la radiación evanescente
se produce una atenuación del haz a  de las bandas de
absorción: Reflectancia total atenuada (ATR).
CARACTERÍSTICAS DEL ACCESORIO ATR
(REFLECTANCIA TOTAL ATENUADA) TIPO HORIZONTAL

 No necesita pretratamiento de muestra

 Análisis no destructivo

 Se puede obtener información sobre la superficie de la muestra

(en espesores de µm de la capa superficial)

 Estudio del espesor de la película

 Corrección ATR

MEDICIÓN DEL ESPECTRO

 El Espectro ATR se obtiene midiendo en una zona

extremadamente delgada, de algunos µm de la superficie en el
límite donde el prisma contacta las muestras.

 Entre el prisma y la muestra se produce la reflexión interna total

 Para la medición de muestras de índices de refracción elevados

debe usarse prismas que tengan altos índices de refracción.
ATR
-diamante de 1mm de diámetro como prisma ATR
-Se usa para medir: films, tejidos, plásticos y cauchos, muestras en
polvo y líquidas
-Se puede medir muestras con tamaño de partícula hasta 0.5mm

MEDICIÓN DE REFLECTANCIA DIFUSA (DRS)

 El método DRS es aplicable a casi toda la muestra que pueda ser

pulverizada. También permite el uso de sustancias para dilución
que no son aplicables al método de la pastilla de KBr
  La preparación de muestra es fácil

REFLECTANCIA DIFUSA

APLICACIONES

 Identificación de sustancias orgánicas sintéticas

 En el área farmacéutica hospitalaria: cuali o cuantitativo

 identificación de materias primas
 % de pureza
 medicamentos, excipientes, aromas
  Almidones, harinas, celulosas
 Cálculos urinarios y biliares medicamentosos o no
 recubrimiento interior de tubos para pomada
 plásticos
 jeringas

El satélite astronómico infrarrojo (IRAS)– detectó cerca de 350.000

fuentes infrarrojas, con lo que el número de fuentes astronómicas
catalogadas aumentó en un 70%.
Mapa de fuentes puntuales de todo el cielo obtenido por IRAS
El plano de nuestra galaxia se extiende horizontalmente en el centro de
la imagen.
 RESONANCIA MAGNÉTICA
NUCLEAR
RMN
(RMN)
 RMN fue desarrollada hace más de 50 años

 Aplicación en la elucidación de estructuras orgánicas e

inorgánicas.

 Determinación cuantitativa.

TEORÍA
 Medida de absorción de radiación EM en la región de las
radiofrecuencias entre 4-600MHz.

 En el proceso de absorción están implicados los núcleos,

sometidos a un campo magnético intenso.

 Para que un núcleo alcance una señal RMN debe tener un número
cuántico de spin nuclear (I) distinto de cero.

Tabla Nº1: núcleos de mayor interés para los químicos

ISOTOPOS SPIN ABUNDANCIA

(%)

13
C 1/2 1.1
19
F 1/2 100
31
P 1/2 100
1
H 1/2 99.98

Los núcleos se comportan como dipolos magnéticos (tienen carga)

Un dipolo puede ser considerado como una pequeña barra magnética,
que posee un momento angular y que al ser colocada en un campo
magnético aplicado (Ho) adquiere movimientos de precesión en la
dirección del Ho.

hI

2

1.- El núcleo con  es sometido a un campo magnético externo, fuerte y

uniforme (Ho) orientado en el eje z
2.- Magnetización neta de los núcleos (eje z) : mayor nº de núcleos
orientados a favor del Ho que contarios a él
3.- No hay orientación preferida a lo largo del plano xy
4.- Provocar magnetización en el plano xy
5.- Aplicación de campo magnético oscilante H1
6.- H1 ejercerá un torque sobre el núcleo e inclinará la precesión lejos del
Detector

eje z
y’
Magnetización
Final
z’

1.- Si la matriz rota a la misma frecuencia de Larmor, entonces el

momento magnético es estacionario
Magnetización

2.- El dipolo magnético está cuantizado

Inicial

x’
3.- serie discreta de orientaciones cada una correspondiente a un nivel
de E nuclear
1.- Si la matriz rota a la misma frecuencia de Larmor, entonces el
momento magnético es estacionario
2.- El dipolo magnético está cuantizado
3.- serie discreta de orientaciones cada una correspondiente a un nivel
de E nuclear
I = -1/2

Campo Aplicado
1/2
I=

Figura Nº3: niveles de E de

E=h

los núcleos de spin ½ a un

Ho
H
o
Energía

Energía adquirida por el núcleo como resultado de la interacción del

campo y del 
E = -μHo
Diferencia de Energía entre los estados adyacentes para un núcleo de
spin ½:

∆E = γ h Ho
2∏
En RMN, el campo magnético oscilante H 1 (aplicado en el plano xy)
induce la transición entre estados y la diferencia de E está dada por:

∆E = hv
La ecuación fundamental para RMN que correlaciona la frecuencia
electromagnética con la fuerza del campo magnético aplicado es:

V = γ Ho
2∏
 = frecuencia de Larmor en Hz

La absorción o emisión neta depende de la diferencia entre el número

de núcleos de nivel de E más alto (N) y más bajo (N )

N  E  h
 e kT
 e 2kT
N

N/ N (razón de población) es 1,000035 a 220MHz para 1H en un

equilibrio térmico a Tº ambiente (pequeño exceso de núcleos en el
estado de energía más bajo que pueden ser excitados y dar señales de
RMN)

 La baja sensibilidad de RMN es consecuencia directa de esta

distribución de núcleos.

 Obliga a la utilización de campos magnéticos más fuertes

APANTALLAMIENTO DE LOS NÚCLEOS DE HIDRÓGENO

INFLUENCIA DEL CAMPO MAGNÉTICO

RMN CON TRANSFORMADA DE FOURIER

 El campo de radiofrecuencia es aplicado en pulsos cortos

 Duración  20s

 Ancho de banda (frecuencia) debe ser amplio para excitar y lograr

todas las resonancias

 Se crea situación de no-equilibrio

 Los núcleos se relajan para re-establecer el equilibrio

TIEMPOS DE RELAJACIÓN
  T1 spin- red (tiempo de relajación longitudinal

 T2 spin-spin (tiempo de relajación trasnversal)

EN LA PRÁCTICA, LA OBSERVACIÓN DE UNA SEÑAL DE RMN INVOLUCRA

3 CONDICIONES EXPERIMENTALES:

 1.- Aplicación de un campo magnético Ho a la muestra para crear

un equilibrio de magnetización distinto de cero

 2.- Excitación del sistema de espines nucleares por un campo de

radiofrecuencia oscilante H1 perpendicular a Ho

 3.- Detección de los componentes en el plano xy

El núcleo libremente
precisando en el plano xy
genera decaimiento de la
señal de inducción nuclear
(Decaimiento libre de
inducción FID)

Aplicación de la Transformada de Fourier

 PARÁMETROS DE LOS ESPECTROS DE RMN

PARÁMETROS

 Desplazamiento químico (), posición sobre una escala de E,

medida en Hz (ppm)

= frecuencia de resonancia  ref

observada en la muestra
  (   o ) *10
6
ref= frecuencia de resonancia de
referencia

o= frecuencia de operación del

espectrómetro

PARÁMETROS
Estructura de multiplete caracterizada por una constante de
acoplamiento spin-spin (J)
Una velocidad de relajación 1/T2 relacionado con el ancho de la línea de
resonancia a la mitad de la altura

1   1
T2 2
 velocidad de relajación 1/T1 que caracteriza la velocidad a la cual la
magnetización resultante del sistema de spin retorna al equilibrio
 El área de resonancia refleja la concentración y es una función del
número de núcleos que dan una señal de RMN

INSTRUMENTACIÓN
ESPECTRÓMETROS DE NMR

 Dos tipos:
 Líneas anchas
 Alta resolución

 Líneas anchas:
 tienen imanes con poca fuerza (décimas de Tesla)
 son más simples
 más baratos

 Alta resolución
 imanes con fuerzas que oscilan entre 1.4 y 14T
 frecuencias de protón de 60 a 600MHz

NMR CON TF
 El campo magnético los proporcionan solenoides superconductores

 Mayor sensibilidad

 aplicaciones de rutina al núcleo 13C, 1H a novel de microgramos y

F, P y Simás baratos

 Son mucho más caros

COMPONENTES DE LOS ESPECTRÓMETROS

CON TF
 Componente central: imán de gran estabilidad

 porta muestra rodeado de una bobina transmisora/receptora

 Pulsos de excitación se producen mediante un oscilador continuo

de cristal con una frecuencia de salida c

IMANES
 Componente fundamental

 La sensibilidad y resolución depende de los imanes, aumentan al

aumentar el campo

 El campo debe ser reproducible y homogéneo

 Componente más caro del equipo

 Existen tres tipos de imanes:

 imanes permanentes
 electroimanes convencionales
 solenoides superconductores

CONTROL DEL CAMPO MAGNÉTICO

 Compensar efectos de las fluctuaciones del campo

 Se usa sistema de control campo/frecuencia

  Se irradia continuamente un núcleo de referencia
 Se sigue su respuesta a una frecuencia que es su máximo de
resonancia a la intensidad de campo aplicada del imán
 Los cambios en la intensidad de la señal de absorción de
referencia controlan el circuito de retroalimentación
 Para un núcleo dado la relación entre la fuerza del campo y
las frecuencias de resonancia es una constante
independientemente del núcleo implicado
 Deuterio

COMPENSACIÓN
 Las bobinas de compensación

 son pares de helicoides de alambre

 pasan corrientes controladas cuidadosamente produciéndose

pequeños campos magnéticos

 se compensa la heterogeneidad del campo magnético principal

ROTACIÓN DE LA MUESTRA
 Para evitar la heterogeneidad del campo

 La rotación se consigue mediante una pequeña turbina de plástico

 Una corriente de aire mueve la turbina a 20-50 rpm

SONDA DE LA MUESTRA
 Mantiene la muestra en posición fija dentro del campo magnético

 Turbina de aire para rotar la muestra

 Contiene la o las bobinas que permiten la excitación y la detección

de la señal de RMN
  Contiene otras dos bobinas transmisoras (sistema de control y
experimentos de desacoplamiento)

 Pueden trabajar a T variable

 Tubos o cubetas para NMR son de 5 o 10mm de diámetro externo

volumen variable

BOBINAS DE TRANSMISIÓN/RECEPCIÓN
 Generador de impulsos:

 Cuando se trabaja en continuo los generadores de RF producen

radiación de una sola frecuencia

 Cuando se trabaja con TF la muestra se debe irradiar con

intervalos de frecuencias altos para excitar la mayor cantidad de
núcleos con diferentes frecuencias de resonancias

 Esta formado por 3 partes:

 oscilador de cristal continuo

 compuerta que debe iniciar y finalizar el impulso a un tiempo

adecuado

 amplificador de potencia (50 o 100 W)

DETECTOR
 Recibir y transformar la señal

 Detectores con un solo canal

 Detectores en cuadratura

APLICACIONES
 RMN-protón

 RMN- Carbono-13
  RMN- Fósforo-31

 RMN- Flúor- 19

 RMN Transformada de Fourier bidimensional

 Imagen por Resonancia Magnética

 RMN en estado sólido (MAS; ángulo mágico)

ESPECTROMETRÍA DE MASAS
• Herramienta analítica al alcance del científico
• Se puede obtener información de:
Composición cuali y cuantitativa de analitos orgánicos e inorgánicos
en muestras complejas
Obtener estructuras de una amplia variedad de especies moleculares
complejas
Las relaciones isotópicas de los átomos en las muestras
Estructura y composición de superficies sólidas

• Obtención de pesos atómicos y moleculares

Expresados en unidades de masa atómica (uma o amu)
escala relativa al isótopo del 126C al cual se le asigna una masa de
12 uma
uma o dalton se define como 1/12 de la masa de un átomo neutro de
126C
En MS las masas exactas se expresan con 3 o 4 decimales (precisión)
 Masa nominal: implica una precisión de un número entero en una
medida de masa
 Peso atómico o peso atómico promedio (A) de un elemento en la
naturaleza viene dada por la ecuación

A  A1 p1  A2 p2  ....  An pn
- A1 …An son las masas atómicas en dalton de los n isótopos de
un elemento y p1…pn son las abundancias de estos isótopos en
la naturaleza
  Peso molecular promedio: suma de los pesos atómicos promedio

 Relación masa/carga de un ión atómico o molecular

-Se obtiene dividiendo la masa atómica o molecular de un ión m por el

número de cargas z que tiene el ión
-12C1H+4, m/z=16.035/1
-La mayoría de los iones en MS tienen carga=1, se reduce el término a
masa

 Los espectros de masas se obtienen por conversión de los

componentes de una muestra en iones gaseosos que se mueven
rápidamente y se separan en función de su relación masa-carga

MUESTRA

Sistema de entrada Fuente de iones Analizador de masas Detector

Procesador de la
Sistema de vacío
señal

Dispositivo de lectura
 Introducir pequeña cantidad de muestra (mol) y sus
Sistema de entrada
componentes se convierten en iones gaseosos

Convierte los componentes de una muestra en iones por

bombardeo con electrones, iones moléculas o fotones. También
Fuente de iones
´la ionización se obtiene por energía eléctrica o térmica

Basado en las relaciones carga/masa de los iones del analito

Analizador de masas

Detector para iones que convierte el haz de iones en una

Detector
señal eléctrica que puede ser procesada, almacenada en la
memoria o registrada

Necesario un sistema de vacío para mantener bajas

Sistema de vacío
presiones, en todos los componentes del equipo excepto en
los dos últimos

Sistema de entrada

SISTEMAS DISCRETOS DE ENTRADAS

-Sistema discreto: es clásico y más simple
-La muestra se volatiliza externamente
-Se introduce en la zona de baja presión
Aplicable a muestras gaseosas y líquidas (puntos de ebullición hasta
500ºC
El sistema de entrada es normalmente de vidrio para evitar pérdidas de
analitos polares por adsorción
ENTRADA POR SONDA DIRECTA
-Líquidos y sólidos no volátiles se introducen en la zona de ionización
mediante un soporte de muestra o sonda
-La muestra se pone en la superficie de un vidrio o en un tubo capilar de
Al, o un alambre fino
El requisito principal de la muestra es que alcance una presión parcial de
al menos 10-8 torr antes que empiece a descomponerse

CROMATOGRÁFICOS
-Los MS están a menudo acoplados con sistemas cromatográficos de
gases o líquidos de alta resolución que permiten la separación y
determinación de los componentes de mezclas complejas
-El acoplamiento requiere sistemas más especializados

Detector

Multiplicador de electrones de dínodos

- Diseñado para la detección de iones positivos (parecido al
fotomultiplicador de UV-Vis)
-El cátodo y los sucesivos dínodos tienen superficies de Cu/Be de las que
se emiten ráfagas de electrones al ser alcanzadas por iones o electrones
de elevada energía

Multiplicador de electrones de dínodos continuos

-Fabricado de vidrio dopado con plomo
-Se aplica un potencial de 1,8 a 2kV a lo largo del detector

Multiplicador de electrones
 Robustos
 Seguros
 Capaces de suministrar ganancias de corrientes elevadas y tiempos
de respuesta de nanosegundos

Tarea: buscar en que consiste el detector llamado Copa de Faraday

En este detector la señal se mide de forma analógica, y está formado
por un electrodo en forma de copa en dónde colisionan los iones. Una
vez que éstos se detectan, se neutralizan por transferencia electrónica.
Posee baja sensibilidad, considerable sencillez, y gran linealidad en la
respuesta. Su uso principal es en la medida de gases

Analizador de masas

• Un analizador debería ser capaz de:

distinguir entre diferencias muy pequeñas de masa
 permitir el paso del suficiente número de iones para dar lugar a
corrientes de iones fácilmente medible
• Resolución de los espectrómetros de masas
La capacidad de distinguir entre masas se expresa en términos de su
resolución R:

R=m/∆ m

m= es la diferencia entre dos picos adyacentes que están resueltos

m= es la masa nominal del primer pico

Analizador de sector magnético

-Usan un imán permanente o un electroimán y lograr que el haz de iones de la
fuente se mueva en una trayectoria circular de 180, 90 o 60 º

Espectrómetro de doble enfoque

• Surgen por la necesidad de:
medir masas atómicas y moleculares con precisión de ppm
para corregir las distribuciones direccionales
corregir las distribuciones de E de los iones que dejan las fuentes
provenientes de la (distribución de Boltzmann)
• Doble enfoque implica que se minimizan ambas distribuciones
simultáneamente
• Se consigue combinando adecuadamente los campos magnéticos
y electrostáticos

Diseño de Nier-Johnson
• -El haz de iones pasa por un analizador electrostático (ESA).
• -Limitar la E cinética
• -Enfoque direccional en los sectores magnéticos tiene lugar en
plano d
• - Enfoque de E tiene lugar en plano e
• -Resolución del orden= 105
 • Un instrumento típico tiene un sector electrostático de 15cm y un
deflector magnético de 10cm y 90º

Filtros de masas de cuadrupolo

• Espectrómetros de masas de cuadrupolo son:

compactos
menos caros
más robustos que el de sector magnético
Ventajas: tiempo de barrido bajos (<100ms)
más utilizados
• Variando las señales eléctricas de un cuadrupolo es posible variar
el intervalo de valores de m/z transmitidos, haciendo posible un
barrido espectral

Espectrómetro de masas cuadrupolo

-Conjunto de 4 barras cilíndricas de metal (6mm de diámetro y 15 cm de
L) que sirven de electrodos del filtro de masas
-Los iones de la fuente son acelerados por un potencial de 5-15V
-Las barras opuestas se conectan eléctricamente a la corriente continua
-Los electrodos se depositan sobre cuarzo

Analizadores de tiempo de vuelo

(TOF)
 • “Los iones positivos se producen periódicamente por bombardeo
de la muestra con impulsos de electrones de iones secundarios o
de fotones generados por láser”
• Impulsos de frecuencias de 10-50kHz

• Tiempo de vida de 0.25s

• Los iones producidos son acelerados por un impulso de campo
eléctrico de 103-104 V que tiene la misma frecuencia, pero
retrasada, que el impulso de ionización
• -El detector es un multiplicador de electrones
• -Tiempos de vuelo típicos del orden de microsegundos
• -Simples, robustos, fácil acceso a la fuente de iones, ilimitado
intervalo de masas

Instrumentos de transformada de
Fourier (FT)
• Proporcionan relaciones señal/ruido superiores
• velocidades mayores
• sensibilidad y resolución elevadas
• La parte esencial del instrumento es una trampa de iones en la
cual los iones circulan en órbitas bien definidas en largos períodos
• Se construyen aprovechando el fenómeno de resonancia de ion
ciclotrón
Tarea: buscar en que consiste el fenómeno de resonancia de ion
ciclotrón
 La espectrometría de masas de resonancia ciclotrónica de ión de
transformada de Fourier es un tipo de analizador de masas (o
espectrómetro de masas ) para determinar la relación masa-carga
(m/z) de iones basada en la frecuencia ciclotrónica de los iones en
un campo magnético fijo.1 Los iones están atrapados en una
trampa de Penning (un campo magnético con placas de
atrapamiento eléctrico), donde se excitan (en sus frecuencias de
ciclotrón resonante) a un radio de ciclotrón más grande mediante
un campo eléctrico oscilante ortogonal al campo magnético.
Después de eliminar el campo de excitación, los iones giran a su
frecuencia de ciclotrón en fase (como un "paquete" de iones).
Estos iones inducen una carga (detectada como una imagen
actual) en un par de electrodos a medida que los paquetes de
iones pasan cerca de ellos. La señal resultante se denomina caída
de inducción libre (FID), transitoria o interferograma que consiste
en una superposición de ondas sinusoidales. La señal útil se extrae
de estos datos realizando una transformada de Fourier para
obtener un espectro de masas.

CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE
ALTA RESOLUCIÓN (HPLC)
Cromatografía Líquida (LC)
• Existen 4 tipos básicos de Cromatografía en los que la fase móvil
es un líquido
• Cromatografía de
reparto (especies poco polares pero no iónicas)
adsorción o líquido-sólido (separar especie no polares, isómeros
estructurales)
iónica (especies iónicas de baja masa molecular)
exclusión por tamaño o en geles (solutos con masas moleculares
superior a 10000
Antecedentes
• Inicialmente LC se realizaba en:
Columnas de vidrio
Diámetro: 1-5 cm
Longitud: 50-500 cm
Tamaño de partícula: 150-200 µm
Caudales bajos
Altos tiempos de separación (horas)
• Finalmente para lograr una buena separación:
Disminuir el tamaño de partícula de los rellenos
Tamaño de partícula: 3-10 µm
Lo anterior implica una tecnología más sofisticada
• Para distinguir estos procedimientos respectos de los métodos
básicos surge la denominación: Cromatografía de líquidos de alta
resolución (HPLC)
Eficiencia de la columna en LC
Efectos sobre el ensanchamiento de la banda

 Efectos del tamaño de partícula del relleno

– CM (ec. van Deemter) es función del dp del relleno
– Eficiencia mejor a menor tamaño de la partícula
– Se demostró experimentalmente que reducir de 45 a 6µm
disminuye 10 veces o más la altura del plato teórico

 Efectos del tamaño de muestra en la eficiencia de la columna

– Cantidad de muestra (µg de muestra / g de relleno)

 Ensanchamiento de banda extracolumna en LC

Se produce cuando se transporta el soluto entre los tubos que
conecta las distintas partes del sistema
Se produce por la diferencia de velocidad de flujo entre las capas de
líquido en las paredes del tubo y las del centro.
El soluto se mueve más rápido en el centro que en la periferia
 Contribución a la altura total del plato de los efectos extracolumna
Hex viene dada por:
 Cuando se tienen columnas de diámetro pequeño el Hex puede ser
muy importante
 En este caso se debe reducir el radio de los tubos del sistema
externo de columna

µ= velocidad de flujo lineal ( cm/s); r: radio del tubo (cm)

2 DM= coeficiente de difusión del soluto en la fase móvil
Hex =  r µ / 24 DM
2
(cm /s)

Instrumentación

• “ para alcanzar un caudal de eluyente razonable con rellenos de

tamaño de partícula entre 3 y 10 µm, se requieren presiones de
algunos cientos de kilos por cm2, por lo tanto el equipo se vuelve
más sofisticado y caro”
Recipientes para fase móvil y sistemas para el tratamiento de
los disolventes
• Necesita mínimo 2 recipientes con 500mL de la fase móvil
respectiva
• Material= vidrio o acero inoxidable
• Sistema para eliminar gases disueltos (O2 y N2)
Desgasificador: consta de sistema de bombeo por vacío, sistema de
destilación, dispositivos para calentar y agitar los disolventes
O algún sistema de difusión que permiten sacar los gases del sistema
con ayuda de un gas inerte
• Sistema con dispositivos para la filtración del polvo o partículas
sólidas de los disolventes
• Alternativa:
• Filtrar los disolventes antes de ponerlos en el recipiente
Filtrar al vacío usando un filtro con tamaño de poro muy pequeño y
eleimina los gases y partículas en suspensión del disolvente
Observaciones
• Elución isocrática
separación en la que se utiliza un disolvente de composición
constante
• Elución en gradiente
Se utilizan 2 o más disolventes con polaridad diferente, normalmente
aumenta la eficiencia de la separación
Sistema de bombeo
• Requisitos:
La generación de presiones por encima de 6000 psi (lbs/in2)
Flujo libre de pulsaciones
Intervalo de caudales de 0.1-10 mL/min
Control y reproducibilidad del caudal mejor de 0.5% relativo
Componentes resistentes a la corrosión (acero inoxidable o teflón)
 • Ojo las altas P que generan los sistemas de bombeo en HPLC no
constituyen un riesgo de explosión, debido a que los líquidos no
son muy compresibles

• Se utilizan 3 tipos de bombas:

Bombas recíprocas
Bombas de jeringa o de desplazamiento
Bombas neumáticas o de P constante

Bombas recíprocas
-Desventaja
Se produce un flujo con pulsaciones, se deben amortiguar dado que se
manifiesta como ruido en la línea base del cromatograma
-Ventaja
Pequeño volumen interno (35-400µL)
Altas P de salida (>10000 psi)
Fácil adaptación a la elución con gradiente
Caudales constantes
Se usan en el 90% de HPLC

Bombas de jeringa o de desplazamiento

• “Consisten en cámaras grandes como una jeringa, con émbolo que
se activa por un mecanismo de tornillo accionado mediante un
motor”
• Ventaja
El flujo tiende a ser independiente de la viscosidad y de la
contrapresión
El flujo resulta libre de pulsaciones
• Desventaja
Capacidad de disolvente limitada (250 mL)
 Incomodidad para el cambio de disolventes

Bombas neumáticas o de P constante

• “La fase móvil está en un contenedor colocado en un recipiente
que puede presurizarse mediante gas comprimido”
• Ventaja
Son baratas
No provocan pulsaciones
• Desventaja
Limitada capacidad y P de salida
El caudal depende de la viscosidad del disolvente y de la
contrapresión de la columna
No son utilizables en la elución con gradiente
Limitadas a P menores de 2000 psi

Sistema de inyección de muestra

• Factor limitante en la precisión de las medidas de LC es la
reproducibilidad con la que se puede introducir la muestra en la
columna
• Exceso de muestra, sobrecarga la columna y se obtiene señales
anchas
• Se trabaja con volúmenes pequeños (< a 500 µL)
• Se debe introducir la muestra sin despresurizar el sistema
• El método más usado en LC utiliza bucles de muestra
Bucle de muestra
-Dispositivos integrados en el cromatógrafo
-Hay intercambiables para la elección de tamaños de muestra de 5-500
µL, P de 7000 psi, buena precisión
-Hay válvulas de inyección de micromuestras, 0.5 a 5 µL

Columnas para LC
 • Se construyen de acero inoxidable o vidrio de paredes resistentes,
existe mucha oferta en el mercado y difieren en tamaño y relleno
• Columnas analíticas
Longitud: 10 a 30 cm
Son rectas y se pueden alargar
Diámetro interno: 4 a 10 mm
Tamaño de partícula: 3, 5 y 10 µm

• Columna más usada: 25 cm de longitud, 4,6mm de  y

empaquetamiento de 5 µm. Poseen desde 40000 a 60000
platos/metro
• Columnas de resolución más rápidas
Longitud: 3 a 7,5 cm
Diámetro interno: 1 a 4,6 mm
Tamaño de partícula: 3 a 5 µm
Platos/metro: 100000
Rapidez y mínimo consumo de disolvente
8 componentes en 15 s

Precolumnas
• La composición del relleno de la precolumna debe ser semejante a
la de la columna en uso
• Tamaño de partícula es mayor para evitar la caída de P
• Sirve para:
Aumentar la vida de la columna
En CL-L: saturar la fase móvil con la fase estacionaria

Termostato
• No siempre se necesita
 • Controlar la T una décimas de grado permite obtener bueno
cromatogramas
• La mayoría de los equipos tiene hornos para las columnas
• Las columnas también se pueden colocar en camisas con agua
que provenga de un baño a T constante

Tipos de rellenos de columna

• Pelicular
Bolas de vidrio o polímero
No porosas
Esféricas
Diámetro: 30-40 µm
En la superficie de estas bolas se deposita una capa delgada y porosa
de sílice, alúmina o de una resina de intercambio iónico
Se usan comúnmente en precolumnas
• Partícula Porosa
Micropartículas porosas
Diámetro: 3-10 µm
Partículas son de sílice, alúmina o resina de intercambio iónico
Material más común Sílice, estas micropartículas se recubren con
peliculas orgánicas, que se unen química o físicamente a la superficie
Se usan comúnmente en columnas analíticas

Detectores
• No hay detectores recomendables ni confiables como en GC
• Detector ideal:
Todas las características de un detector ideal GC
Excepción de que no se necesita que sea sensible en un intervalo
grande de temperatura
 Debe tener un volumen interno mínimo a fin de reducir el
ensanchamiento de banda

Tipos de detectores
• Basados en una propiedad de la disolución
Responden a una propiedad de la fase móvil
Indice de refracción
Constante dieléctrica
densidad
• Basados en una propiedad del soluto
Absorbancia UV
Fluorescencia
Intensidad de difusión

Detectores de absorbancia
• Para minimizar el HEX
• Volúmenes de cubetas: 1-10 µL
• Longitud de la cubeta: 2-10 mL
• P= 600 psi
• Generalmente son de doble haz
1 haz pasa por la cubeta de flujo
1 haz pasa a través de un filtro que reduce su intensidad

Detectores de absorbancia

UV con filtros
-Simples : fotómetros de filtros
-fuente: lámpara de mercurio

-= 254 nm
-otras fuentes: deuterio o filamento de Tungsteno con filtros de
interferencia

UV con monocromador
-Sirven para hacer un barrido en el rango UV-Vis

-El sistema permite seleccionar una  para cada señal en el

cromatograma

Infrarrojo
-2 tipos: tradicional y TF
-Cubetas semejantes a UV
-Ventanas son de NaCl o CaF2
-Longitud de cubeta: 0.2-1.0 mm
-Volúmenes: 1.5 - 10µL
-Limitación: Baja transparencia de los disolventes ( agua y alcoholes
impiden el uso del detector)

Detectores de fluorescencia
-Se detecta por un detector fotoeléctrico perpendicular respecto al haz
de excitación
-Fuente de exc.: Mercurio
-Filtros: 1 o más para aislar la radiación fluorescente
-Alta sensibilidad
-Util para: análisis de material farmaceutico, productos nturales,
muestras clínicas y productos del petróleo

Detector de índice de refracción

• Tarea: Lea en consiste este detector
• Ventajas:
 Responde a casi todos los solutos
Universales
Fiables
No dependen del caudal
• Desventajas:
Muy sensibles a los cambios de Tº
No se pueden usar en elución en gradiente
No son tan sensibles como otros detectores

DETECTORES EMPLEADOS EN HPCL

Los detectores empleados en HPLC se han diseñado, adaptado y
perfeccionado con el fin de incorporar celdas de flujo que permitan
medir las bajas concentraciones de analito que hay en el líquido. Los
distintos detectores se clasifican según se encarguen de medir una
propiedad del soluto o de la disolución
DETECTOR DE ABSORCIÓN UV-VISIBLE
El flujo de líquido que sale de la columna pasa a través de una pequeña
celda, de pequeño volumen (entre 1 a 10 μL), para minimizar el
ensanchamiento de banda. La medida de la absorbancia del líquido que
la atraviesa en función del tiempo constituye el cromatograma. Su límite
de detección oscila entre 0’1 y 1 ng y puede emplearse en
cromatografía de elución en gradiente.

 Fotómetro de filtro: es el detector de absorción UV más sencillo.

Emplea una lámpara de mercurio como fuente y una serie de
filtros para aislar la intensa línea a 254 nm, con la que se mide la
absorbancia (variando los filtros se pueden seleccionar otras
líneas).
  Espectrómetro de barrido: permite realizar el análisis
seleccionando una o varias longitudes de onda en la región de
interés.
 Espectrómetro de arreglos de diodos: debido a su rapidez, son
capaces de registrar la totalidad del espectro proporcionando un
cromatograma tridimensional que muestra la absorbancia en
función de la longitud de onda cada pequeños intervalos de
tiempo.
DETECTOR DE ABSORCIÓN INFRARROJA
Las celdas empleadas en estos detectores son similares a las empleadas
en los detectores de absorción UV-vis, excepto por las ventanas ópticas,
que en este caso son de cloruro de sodio o de fluoruro de calcio.

Se emplea en aquellos analitos que absorben radiación infrarroja (IR,

cuya longitud de onda supera los 700 nm), por lo que se debe prestar
atención al disolvente utilizado, ya que muchos de ellos también
absorben estas radiaciones.
Los detectores más sofisticados se basan en instrumentos de
transformada de Fourier (FTIR). El límite de detección es de 1.000 ng y
también pueden emplearse en cromatografía de elución en gradiente.
DETECTOR DE FLUORESCENCIA
Se basan en la capacidad de algunos solutos capaces de emitir
fluorescencia, o de aquellos que no lo son pero pueden hacerlo tras un
tratamiento adecuado (derivatización).
Los más sencillos emplean una fuente de excitación de mercurio y uno o
más filtros para aislar la radiación fluorescente. Los instrumentos más
sofisticados consisten en una fuente de radiación de xenón y emplean
un monocromador de red para aislar la radiación fluorescente.
Son muy sensibles, siendo su límite de detección de 0’001-0’01 ng y
también se pueden utilizar en elución con gradiente.

DETECTOR DE ÍNDICE DE REFRACCIÓN

En este caso miden una propiedad de la disolución, como es la variación
en su índice de refracción como consecuencia de la presencia de un
soluto.
Este tipo de detectores constan de una cubeta con dos compartimentos
separados por una placa de vidrio, por uno de los cuales solamente pasa
fase móvil, como referencia, y por el otro pasa el eluato que abandona la
columna y que contiene la muestra. Sobre la cubeta se irradia un haz de
luz que se desvía cuando la muestra aparece en el líquido eluido de la
columna.
Son detectores universales y no dependen del caudal de fase móvil. Sin
embargo, no pueden emplearse en elución con gradiente, sus medidas
se ven afectadas por los cambios de temperatura y no son tan sensibles.
Su límite de detección se sitúa entre 100 y 1.000 ng.

DETECTOR DE DISPERSIÓN DE LUZ

La dispersión se produce por la interacción de la radiación
electromagnética con la materia. El eluato que abandona la columna se
nebuliza mediante un flujo de nitrógeno o de aire y se vaporiza la fase
móvil, quedando únicamente unas finas gotitas de soluto sin evaporar.
La nube de partículas de analito pasa a través de un haz de láser y la
dispersión producida es detectada por un fotodiodo de silicio.
Este detector responde a todos los solutos menos volátiles que la fase
móvil y su límite de detección se encuentra entre 0’1 y 1 ng
DETECTOR ELECTROQUÍMICO
Este tipo de detectores responden a analitos susceptibles de reducirse u
oxidarse, como fenoles, aminas aromáticas, peróxidos, cetonas,
aldehídos, compuestos halogenados, nitroderivados…
Un ejemplo de detector electroquímico es el detector amperométrico,
basado en la oxidación o reducción del eluato en un electrodo de trabajo
En este electrodo se mantiene el potencial a un valor seleccionado,
respecto a un electrodo de referencia (Ag/AgCl) y se mide la corriente
que pasa entre el electrodo de trabajo y un electrodo auxiliar, de acero
inoxidable, en función del tiempo. Para solutos oxidables, son comunes
los electrodos de cobre o de carbón vitrificado. Para solutos reducibles,
un buen electrodo de trabajo es el de gotas de mercurio.
La corriente es proporcional a la concentración del soluto en un intervalo
de seis órdenes de magnitud. Con este detector se debe trabajar en
rigurosa ausencia de oxígeno y con disoluciones acuosas, o de
disolventes polares, que contengan electrolitos. Presentan una gran
sensibilidad, con un límite de detección entre 0’01 y 1 ng. Sin embargo,
no pueden ser empleados en elución con gradiente, y dependen de la
temperatura y del caudal.
DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD
Estos detectores se basan en los cambios de conductividad de la fase
móvil en presencia de moléculas de analito. Están formados por una
celda asilada que contiene dos electrodos sobre los que se aplica una
diferencia de potencial, de manera que se mide la resistencia que ofrece
la mezcla eluida, la cual está relacionada con su concentración.
Este detector es útil para la determinación de analitos iónicos. Su límite
de detección se encuentra entre 0’5 y 1 ng. es sensible a los cambios de
temperatura y no puede emplearse en elución en gradiente.
DETECTOR ACOPLADO A ESPECTRÓMETRO DE MASAS
El principal problema que surge al acoplar un espectrómetro de masas al
cromatógrafo HPLC es la enorme cantidad de disolvente que acompaña
al analito, para lo cual se han desarrollado diversas interfases:

 Termovaporizador (termospray): con esta interfase se vaporiza el

eluato y se forma un aerosol, formado por moléculas de disolvente
y de analito. Mediante un mecanismo de ionización química, se
ioniza el analito y los iones son conducidos hacia el espectrómetro
y el disolvente es expulsado mediante una bomba. Los analitos
deben ser termoestables y polares.
 Interfase de ionización química a presión atmosférica (APCI):
utiliza calefacción y nitrógeno para convertir el eluato en aerosol,
del que se evapora el disolvente. Mediante una descarga eléctrica
el analito se convierte en iones que son conducidos hacia el
espectrómetro de masas.
 Interfase de ionización por electronebulización (electrospray): el
eluato pasa a través de un capilar metálico, en cuya salida se
aplica un fuerte campo eléctrico a la vez que una corriente coaxial
de nitrógeno gaseoso, con lo que se crea un fino aerosol de
partículas cargadas

Detector por espectrometría de Masas

• Dificultad: HPLC usa grandes volúmenes de disolvente y MS requiere
trabajar al vacío
• Interfase:
1.- Sistema de introducción directa del líquido
El efluente de la columna se divide y una pequeña fracción pasa al
masas
2.- El efluente de la columna se:
Deposita sobre una cinta o alambre
Se mueve continuamente
Transporta analito y disolvente hacia una cámara calorífica para
eliminar solvente
El analito pasa a la zona de ionización
– 3.- Termovaporizador
Tarea: buscar en que consiste y para que tipo de muestras se utiliza
• Desventajas:
MS/HPLC no esta muy desarrollado como para GC/MS

Ventajas de la HPLC
• Su popularidad se debe a:
Sensibilidad
Fácil adaptación a las determinaciones cuantitativas exactas
Idoneidad en la separación de especies no volátiles o termolábiles
Gran aplicabilidad a sustancias de interés en : la industria, ciencia
entre otros.

Campo de aplicación de la HPLC

• Sustancias que contienen:
Aminoácidos
Proteínas
Ácidos nucleicos
Hidrocarburos
Hidratos de carbono
Drogas
Terpenoides
Plaguicidas
Antibióticos esteroides
Etc…