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“EVALUACIÓN DE CONDICIONES AMBIENTALES GENERALES DE LAS CASCADAS

DE ATLIHUETZIA, TLAXCALA, MEDIANTE ANÁLISIS MICROBIOLÓGICOS Y
FISICOQUÍMICOS”

Ingeniería en Sistemas Ambientales, Departamento de Microbiología, Laboratorio

de ecología microbiana, Instituto Politécnico Nacional, Escuela Nacional de
Ciencias Biológicas, Ciudad de México, México. Correos electrónicos:

RESUMEN
En el presente trabajo se realizaron análisis microbiológicos para poner de
manifiesto el papel de los microorganismos en diferentes ciclos biogeoquímicos
como el del azufre, carbono y nitrógeno, cuantificación de diversidad microbiana
(coliformes, hongos filamentosos, mesofílicos aerobios, actinomicetos),
determinaciones fisicoquímicas como conductividad, pH, demanda bioquímica de
oxigeno (DBO) y la medición de variables como la temperatura y humedad, así como
una evaluación de toxicidad a partir de un bioensayo con bacillus cereus para
evaluar la condición ambiental en la que se encuentra las Cascadas de Atlihuetzia
en Tlaxcala, comparando los resultados con los parámetros que marcan algunas
Normas Oficiales Mexicanas asociadas a calidad del agua
AGRADECIMIENTOS

El presente estudio de caso llevado a cabo en las cascadas de Atlihuetzia, Tlaxcala

fue desarrollado en un periodo aproximado de 6 meses (un semestre), los
estudiantes de la carrera de Ingeniería en Sistemas Ambientales del grupo 5AM1,
encargados de todo el trabajo implícito en esta publicación, nos complacemos en
agradecer profundamente a las profesoras encargadas de la unidad de aprendizaje
"Microbiología ambiental": Dra. Jane Castillo Vera, M. en C. Gisella Boll Arguello y
M. en C. Claudia Paulina Dotor Vázquez, por su guía y apoyo durante todo el
proceso implicado en las determinaciones hechas, así como las propias
interpretaciones.
Asimismo, agradecemos en demasía el apoyo económico y material con que
contamos por parte de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, permitiendo
poner en práctica los conocimientos adquiridos y continuar ofreciendo "La técnica
al servicio de la patria".

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ELABORÓ
Estación 1

• e. ISA. María Jimena Gómez García

• e. ISA. Marco Antonio Juárez Sánchez
• e. ISA. Valeria Rosales Plata
• e. ISA. Guadalupe Soriano Balbuena
• e. ISA. Jorge Erick Emmanuel Villa Mendoza

Estación 2

• e. ISA. Karla Elizabeth Domínguez González.

• e. ISA. Esly Sofia Martínez Villatoro.
• e. ISA. Edgardo Ocaña Romo.
• e. ISA. Agustín Ojeda Rivera.
• e. ISA. Sandra Abigail Valerio Carera.

Estación 3

• e. ISA. Jorge Luis Corte Pujol

• e. ISA. José Gustavo Gómez García
• e. ISA. Jacqueline Lomelí Medina
• e. ISA. Eduardo Neria Diego
• e. ISA. Iván Rodríguez Farfán
Estación 4

• e. ISA. Vanessa Bonilla Bonilla

• e. ISA. Martha Cristiany Galván Segura
• e. ISA. Mariana González Moreno
• e. ISA. Lorena Robles Melchor
• e. ISA. Dulce Miriam Zavala
Estación 5

• e. ISA Maryjose Gallegos Araujo

• e. ISA Daniela Montserrat González Canchola
• e. ISA Everest Ariv Martínez García
• e. ISA Evelyn Lucero Martínez Labrada
• e. ISA Jorge Tello Alonso

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ÍNDICE

1. Introducción……………………………………………………………………….…... 6
1.1. La problemática del crecimiento poblacional mundi al
1.2. Consecuencias de la contaminación relacionadas con el crecimiento
poblacional
1.3. Importancia de los microorganismos en procesos ambientales
1.4. Aplicación de los microorganismos en la ingeniería ambiental

2. Antecedentes………………………………………………………………………………….. 7
2.1. Sitio de estudio
2.1.1. Ubicación del sitio de estudio
2.1.2. Características del sitio de muestre o
2.2. Problemáticas generales del sitio de estudio
2.2.1. Uso de los recursos hídricos
2.2.2. Estado de contaminación
2.3. Justificación………………………………………………………………………… 8
3. Objetivo General……………………………………………………………………………… 9
3.1. Objetivos particulares
4. Descripción general de los métodos utilizados……………………………………………. 9
5. Resultados …………………………………………………………………………………….13
5.1. Agua…………………………………………………………………………………..13
5.2. Sedimento……………………………………………………………………………17
5.3. Suelo………………………………………………………………………………….1 8
5.4. Aire……………………………………………………………………………………23
6. Discusión……………………………………………………………………………………….26
6.1. Agua…………………………………………………………………………………..2 6
6.1.1. Estación 1
6.1.2. Estación 2
6.1.3. Estación 3
6.1.4. Estación 4
6.1.5. Estación 5
6.2. Sedimento……………………………………………………………………………3 1
6.2.1. Estación 1

4
6.2.2. Estación 2
6.2.3. Estación 3
6.2.4. Estación 4
6.2.5. Estación 5
6.3. Suelo………………………………………………………………………………….3 3
6.3.1. Estación 1
6.3.2. Estación 2
6.3.3. Estación 3
6.3.4. Estación 4
6.3.5. Estación 5
6.4. Aire……………………………………………………………………………………38
6.4.1. Estación 1
6.4.2. Estación 2
6.4.3. Estación 3
6.4.4. Estación 4
6.4.5. Estación 5
7. Conclusiones…………………………………………………………………………. 40
8. Medidas correctivas………………………………………………………………….40
9. Bibliografía…………………………………………………………………………….4 1

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1. INTRODUCCIÓN
1.1. La problemática del crecimiento poblacional mundial

Muchas de las presiones que se ejercen sobre el medio ambiente son proporcionales al
número de personas que dependen de los recursos naturales (PNUMA, 2013) y la población
humana alcanzó los 7 mil millones de personas en 2011 por lo que se espera que llegue a
los 10 mil millones para 2100 (ONU 2011 citado en PNUMA, 2013), de forma que el manejo
sostenible de los recursos naturales es indispensable para el equilibrio de los ecosistemas
y sus relaciones con todos los seres vivos.
En general las decisiones humanas, especialmente acerca del consumo, están
influenciadas por los valores y causan efectos en el ambiente (PNUMA, 2013).
1.2. Consecuencias de la contaminación relacionadas con el crecimiento poblacional

Las actividades antropogénicas emiten una serie de contaminantes a diferentes sistemas

como agua, suelo y aire. Cuando la resiliencia de los sistemas se ve disminuida, ocurre un
diverso número de problemas, los cuales están asociados con la calidad de los cuerpos de
agua (para riego, consumo humano, uso industrial), calidad del aire (cambio climático, altas
concentraciones de CO2 y otros gases de efecto invernadero) y calidad del suelo (cambio
de uso de suelo, infertilidad, erosión). Esto provoca impactos directos e indirectos en la
diversidad biológica, los servicios ecosistémicos y, en general, todas las interacciones entre
los sistemas vivos y los factores abióticos.
1.3. Importancia de los microorganismos en procesos ambientales

La diversidad microbiana tiene un papel importante en el desarrollo de las diferentes formas

de vida presentes en el planeta. Desde actividades específicas como simbiosis con otros
microorganismos o con eucariotas (plantas) para la obtención de nutrientes, la degradación
de materia orgánica, la actividad realizada en los ciclos biogeoquímicos (fijación,
mineralización, reacciones de óxido-reducción), control poblacional de otros organismos y
microorganismos como fuente de enfermedades, o la degradación de contaminantes
generados por diversas actividades realizadas por los humanos, entre otras.
1.4. Aplicación de los microorganismos en la ingeniería ambiental

Como consecuencia de los procesos de contaminación antropogénica la resiliencia de los

sistemas ambientales se ve disminuida por la contaminación de ríos, lagos, mares, etc.
provocando un daño considerable. El uso de microorganismos tiene aplicación a distintos
niveles de gestión y manejo de la contaminación, por ejemplo, como enriquecedores en
suelos de uso agrícola, indicadores de contaminación de diversas fuentes, bioensayos para
la medición de la toxicidad, procesos de biorremediación de agua y suelo, o para la
obtención de un beneficio energético a partir de la degradación de la materia orgánica
(Falcón et al. 2009, citado en Serment, 2017), por ejemplo, el desarrollo de celdas de
energía microbiana (Logan et al. 2006, citado en Serment, 2017), donde se puede
transformar un sustrato biodegradable en electricidad debido a la actividad microbiana.
También, la medición de microorganismos de naturaleza patógena para el ser humano se
vuelve fundamental en la toma de decisiones en materia de salud.

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2. ANTECEDENTES
2.1. Sitio de estudio
2.1.1. Ubicación del sitio de estudio
Las cascadas de Atlihuetzia se localizan en la parte central del estado de Tlaxcala, en el
municipio de Amaxac de Guerrero, a 19° 21´ 31´´ y los 19° 22´ 15´´ de latitud norte y a los
98° 10´ 38´´ y los 98° 11´ 07´´ de longitud oeste. La formación de las cascadas se origina
en la parte del rio que se encuentra aproximadamente a 500 m, detrás del Hotel Misión
Tlaxcala, donde cae a una barranca de aproximadamente 30 m de altura.

Figura 1. Zona de estudio y estaciones de muestreo marcadas con numeración (tomado

de Google Maps)

2.1.2. Características del sitio de muestreo

Fisiografía: Las Cascadas de Atlihuetzia pertenecen a la provincia del Eje Neovolcánico,
subprovincia de Lagos y Volcanes de Anáhuac. El sistema de topoformas predominante en
la zona donde se asientan las cascadas está formado por valles de laderas tendidas.
Clima: Se ubican en la zona con confluencia de dos tipos de climas, el primero corresponde
a un clima C (W 1) (W), el cual es el más seco de los climas templados subhúmedos y tiene
un porcentaje de precipitación invernal menor de 5; el segundo es del tipo C (W 2) (W), y
tiene un porcentaje de precipitación invernal entre 5 y 10. La temperatura anual de la zona
oscila entre los 14 y los 16 °C, y la precipitación anual se encuentra entre los 800 y los 1000
mm3. En esta zona se reportan de 8 a 10 días con granizadas y de 40 a 60 días con heladas.
Suelos: Dominantemente vertisoles pélicos de textura fina, encontrándose en menor
proporción feosem háplicos y fluvisoles éutricos.
Vegetación: Se observa un bosque formado por encinos (Quercus spp.), ailes (Alnus
acuminata), tepozanes (Buddleia cordata), sauces (Salix babilonica), fresnos (Fraxinus

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uhdei), sabinos (Juniperus deppeana) y pirules (Schinus molle). Las zonas adyacentes a
los pequeños manchones de vegetación natural se encuentran ocupados por áreas
dedicadas a la agricultura o cubiertas por vegetación secundaria.
2.2. Problemáticas generales del sitio de estudio
2.2.1. Uso de recursos hídricos
En Tlaxcala, de acuerdo con PADHPOT, 2010, el estado se encuentra entre tres regiones
hidrológicas: Pánuco al noroeste, la región Balsas al centro y la región Tuxpan-Nautla al
noroeste. Los volúmenes concesionados se encuentran distribuidos de la siguiente manera:
agricultura 149.6 hm3, abastecimiento público 76.2 hm3, industria autoabastecida 19.2hm3.
2.2.2. Estado de contaminación
Gran parte de la superficie estatal se encuentra afectada por procesos erosivos con
diversos grados de afectación. Seis de los siete ríos del estado presentan altos índices de
contaminación causados por elevadas descargas de desechos sólidos y líquidos
degradados de usos domésticos, agrícolas e industriales. El principal río contaminado es el
Zahuapan, que recibe alrededor de 32.5 millones de metros cúbicos anuales de aguas
negras (PADHPOT, 2010).
Según la PROFEPA son vertidas en el Atoyac-Zahuapan 62.8 toneladas al día de sólidos
suspendidos totales, 0.14 toneladas de metales pesados (plomo, cromo, cadmio, cobre,
mercurio, níquel y zinc) y 0.09 toneladas de compuestos orgánicos tóxicos (Morales, 2016).
La contaminación del agua y suelos afecta en gran medida a la biodiversidad, en particular
en Tlaxcala. Para el 2015 la PROFEPA había multado y clausurado 9 empresas por
contaminación al río Atoyac-Zahuapan (Morales, 2016).
De acuerdo con Rodríguez et al. (2011), el cauce del río Zahuapan, en su trayectoria,
atraviesa parques industriales y empresas dedicadas a los giros textil, químico,
construcción, electromecánica automotriz y petroquímica. También, es receptor de
colectores industriales y municipales.
2.3. Justificación
Los efectos sobre los servicios ecosistémicos a causa de la contaminación son diversos, y
la consecuencia de cada uno de ellos dependerá de la fuente de contaminación, la
capacidad del ambiente de degradarlo y los organismos o sistemas diana a las que pueda
afectar.
El presente trabajo tiene por objetivo evaluar las condiciones ambientales en que se
encuentran las cascadas de Atlihuetzia mediante análisis microbiológicos como la
cuantificación de microorganismos coliformes, procesos microbianos relacionados con el
ciclo del nitrógeno, carbono y azufre, así como la diversidad microbiana presente en el suelo
de la zona y la movilidad de estos en aire. También, realizar mediciones de parámetros
fisicoquímicos como demanda bioquímica de oxígeno (DBO), oxígeno disuelto y un
bioensayo de toxicidad aguda a partir de muestras de agua de la zona de estudio. Esto con
el fin de correlacionar los resultados obtenidos con las fuentes de contaminación,
determinar el impacto que tienen sobre la diversidad microbiana y los procesos que pueden
llevar a cabo en este ecosistema y de esta forma poder dar recomendaciones o, si es

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necesario, establecer medidas correctivas para las problemáticas encontradas a partir de
las determinaciones realizadas.
3. OBJETIVO GENERAL
Desarrollar un trabajo de evaluación ecológica en una zona contaminada, realizando
procedimientos de muestreo, medición, transporte, conservación y análisis de tipo
microbiológico y fisicoquímico de muestras que permitan elaborar un informe final, con
sugerencias para la recuperación del sistema.
3.1. OBJETIVOS PARTICULARES

• Conocer las características para el establecimiento de sitios de muestreo, de

acuerdo con los organismos que se desean analizar
• Desarrollar técnicas que permitan el manejo y transportación adecuados de las
muestras al laboratorio para su posterior análisis
• Realizar in situ aquellos estudios y análisis de muestras que se alteren seriamente
con la transportación
• Estudiar las variables microbianas, a lo largo de un trayecto establecido, en
muestras de suelo de la zona de raíces, agua, sedimento y aire
• Determinar algunas de las características físicas y químicas del agua y del suelo
que influyan sobre el número y composición de la comunidad microbiana

4. DESCRIPCIÓN GENERAL DE LOS MÉTODOS UTILIZADOS

 Muestra de agua
Introducir al cuerpo de agua un recipiente estéril aproximadamente de 500 mL, y llenar
hasta tres cuartas partes de su capacidad.
• Determinación de temperatura
In situ, introducir el bulbo del termómetro 5 cm directamente por debajo de la superficie del
cuerpo de agua, y mantener el termómetro en el agua hasta alcanzar una temperatura
constante. Registrar la temperatura.
• Determinación de oxígeno disuelto
In situ, llenar perfectamente un frasco de DBO de 300 mL directamente del cuerpo de agua
hasta el borde de la misma, con la precaución de que no quede presente ninguna burbuja
de aire. Posteriormente colocar el tapón esmerilado y aplicar la técnica de Winkler (método
de determinación del O2 producido por actividad respiratoria), anotando los resultados para
hacer los cálculos correspondientes del oxígeno disuelto.
*Técnica de Winkler: Añadir sulfato de manganeso y yoduro de potasio a la muestra de
agua, con la finalidad de reducir rápidamente el oxígeno disuelto contenido en la muestra y
precipitarlo como óxido de manganeso. Tapar el frasco y mezclar, dejar sedimentar. Añadir
ácido sulfúrico concentrado, tapar cuidadosamente y mezclar hasta que se disuelva el
precipitado, con la finalidad de acidificar el medio para que el manganeso oxidado sea
transformado a manganeso divalente y el yodo sea liberado, para posteriormente ser
titulado con tiosulfato de sodio, puesto que la cantidad de yodo liberado es equivalente a la
cantidad original de oxígeno disuelto. Adicionar indicador de almidón y continuar la

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titulación. Anotar el volumen de gasto total de tiosulfato de sodio, con lo que se pueden
realizar los cálculos de mg/L de Oxígeno.
• Determinación de la demanda bioquímica de oxígeno
Dependiendo del origen de la muestra, se requiere realizar una dilución de la misma si
contiene gran cantidad de materia orgánica. In situ, medir 100 mL de la muestra de agua y
realizar la dilución con agua a baja temperatura (5° máximo) en una botella de PET de 1.5
L, tapar y agitar durante 1 minuto con objetivo de oxigenarla. Llenar con la solución obtenida
después de la agitación dos frascos para DBO, cuidando que no quede ninguna burbuja de
aire. Realizar la determinación de oxígeno disuelto por la Técnica de Winkler a uno de estos
frascos (Lectura inicial). Al frasco para DBO restante se incuba durante 5 días a 20ºC en
ausencia de luz. Al término de este tiempo se determina el Oxígeno Disuelto en esta
segunda botella por la Técnica de Winkler (Lectura final). Calcular la Demanda Bioquímica
de Oxigeno con la fórmula correspondiente.
• Determinación de microorganismos coliformes
Utilizar la muestra de agua proveniente del sitio de muestreo recolectada en el frasco estéril.
Para la prueba presuntiva: inocular distintos volúmenes de muestra (10 mL, 1 mL, 0.1 mL)
en series de tubos con caldo lactosado y campana de Durham a 37ºC 24 a 48 horas.
Posteriormente observar los tubos y registrar como positivos aquellos donde haya
producción de gas acompañada de turbidez del medio de cultivo.
Para la prueba confirmativa: A partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva, inocular
un tubo de medio Caldo Verde Brillante Bilis Lactosa a 37ºC durante 48 horas para
confirmar presencia de microorganismos coliformes totales. A partir de los tubos positivo de
la prueba presuntiva, inocular un tubo con medio Caldo Verde Brillante Bilis Lactosa a
44.5ºC durante 48 horas para confirmar presencia de microorganismos coliformes fecales.
A partir de los tubos positivo de la prueba presuntiva, inocular un tubo con medio Caldo
Triptona a 44.5ºC durante 24 horas, y posteriormente adicionar dos gotas del reactivo de
Kovacs para confirmar presencia de Escherichia coli.
Para la prueba completa: de los tubos de Caldo Verde Brillante Bilis Lactosa que hayan
dado positivo en la prueba confirmativa, resembrar por estría cruzada una placa de agar
Eosina Azul de Metileno (EMB) a 37ºC durante 48 horas para evidenciar la presencia de
Escherichia coli.
• Determinación de la toxicidad de muestras
Preparar por triplicado 3 series de tubos de la siguiente forma:
Serie A: Testigo de reactivos. - 3.75 mL de medio de crecimiento, 250µL de DMS y 1 mL de
TTC.
Serie B: Testigo de células. - 2.75 mL de medio de crecimiento, 250µL de DMS, 1 mL de
cultivo celular de Bacillus cereus y 1 mL de TTC.
Serie C: Muestra problema. - 2.70 mL de medio de crecimiento, 250µL de DMS, 1 mL de
cultivo celular de Bacillus cereus, 1 mL de TTC y 50µL de la muestra problema.

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Incubar la serie de tubos a 37ºC durante 1 hora, posteriormente adicionar a cada uno de
los tubos 5 mL de alcohol etílico y 1 mL de ftalato-HCl. Agitar y centrifugar a 1000 rpm
durante 5 minutos. Los sobrenadantes se leen a 480 nm, calibrando el espectrofotómetro
con un blanco de agua destilada. Y obtener el porcentaje de inhibición con las fórmulas.

 Muestra de sedimento
Utilizando el muestreador de sedimentos, introducir el recipiente lo más profundo dentro del
sedimento, extraer y permitir que el exceso de agua se drene. Depositar la muestra en una
bolsa de polietileno negra. Colectar la cantidad de sedimento necesaria como para
completar aproximadamente 500g.
• Determinación de bacterias Oxidadoras de azufre
Pesar 10 g de la muestra de sedimento y colocarlo en una botella de dilución que contenga
90 mL de solución salina estéril, posteriormente realizar diluciones hasta 10-5 e inocular 1
mL de cada una de las diluciones a cada uno de tres tubos conteniendo medio para
oxidadores de azufre. Dejar un testigo sin inocular. Agregar a cada tubo, en condiciones de
esterilidad, 50 mg de flor de azufre.

 Muestra de suelo
Delimitar un área de muestreo de aproximadamente 20 cm2. Eliminar cualquier vestigio de
basura y con la pala colectar una muestra de 500 g de suelo en una bolsa de polietileno
negro.
• Determinación de pH
Pesar 5 g de suelo seco y añadir 5 mL de una solución de CaCl2 0.01M. Agitar y
posteriormente introducir el electrodo del potenciómetro ya calibrado y registrar el valor de
pH hasta que la lectura se estabilice.
• Determinación de temperatura
In situ, introducir el termómetro 15 cm por debajo de la superficie del suelo, y mantener el
termómetro en el suelo hasta alcanzar una temperatura constante. Registrar la temperatura.
• Determinación de Humedad
Pesar una caja de petri de vidrio puesta a peso constate previamente. Colocar 10 g de la
muestra se suelo húmedo en la misma. Secar el sistema en un horno a 60ºC hasta peso
constate. Una vez alcanzado el peso constante, pasar el sistema a un desecador y dejar
enfriar. Pesar nuevamente el sistema y calcular el % de Humedad con las fórmulas
correspondientes.
• Determinación de diversidad microbiana
Para la cuantificación de Bacterias Mesofílicas Aerobias: Utilizando por duplicado placas
con agar peptona caseína almidón extracto de levadura (CPS-EL) para las diluciones 10-4,
10-5 y 10-6, inoculando 0.1 mL a cada una respectivamente. Realizar la técnica de dispersión
en superficie con una varilla acodada. Incubar todas las placas 28ºC durante 24 horas.
Contar las colonias y calcular las UFC base húmeda y UFC base seca por gramo de suelo.
Para la cuantificación de Actinomicetos: Utilizando por duplicado placas con Agar Almidón
Peptona (AAP) para las diluciones 10-3, 10-4 y 10-5, inoculando 0.1 mL a cada una

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respectivamente. Realizar la técnica de dispersión en superficie con una varilla acodada.
Incubar todas las placas a 28ºC durante 7 días. Contar las colonias de actinomicetos y
calcular las UFC base húmeda y UFC base seca por gramo de suelo.
Para la cuantificación de hongos filamentosos: Utilizando por duplicado placas con Agar
Rosa de Bengala (ARB) para las diluciones 10-3, 10-4 y 10-5, inoculando 0.1 mL a cada una
respectivamente. Realizar la técnica de dispersión en superficie con una varilla acodada.
Incubar todas las placas a 28ºC durante 7 días. Contar las colonias de hongos filamentosos
y calcular las UFC base húmeda y UFC base seca por gramo de suelo.
• Aislamiento de microorganismos amilolíticos y celulolíticos
Pesar 10 g de suelo y colocarlos en un frasco que contenga 90 mL de agua destilada estéril,
a partir de aquí realizar diluciones decimales hasta 10-6. Tomar 0.1 mL de las ultimas 3
diluciones y colocarlos en el centro de cajas que contengan gelosa almidón. Adicionalmente
tomar 0.1 mL de las ultimas 3 diluciones y colocarlos en el centro de cajas que contengan
agar rojo congo celulosa. Distribuir el inoculo por medio de una varilla acodada. Incubar a
28ºC durante 72 horas. Contar las colonias que aparecen con un halo amarillo o un halo
café, respectivamente.
• Procesos microbianos del ciclo del nitrógeno
Para nitrificación: Sembrar distintas alícuotas en series de 3 tubos de medio para nitrificante
fase I. Incluir un testigo sin inocular. Incubar a 28ºC durante 14 días. Posteriormente
adicionar a cada tubo reactivo de Griess A y B. Identificar un color rosa que indica la
presencia de nitritos. Adicionar granalla de Zinc a los tubos negativos. Calcular el NMP de
microorganismos nitritantes.
Para proteólisis: pesar 10g de suelo y realizar diluciones decimales hasta 10-4. Tomar
alícuotas de 0.1 mL de las primeras 3 diluciones y colocarlas en cajas de agar leche. Incubar
a 28ºC durante 48 horas. En las cajas con agar leche, contar aquellas que tienen un halo
transparente.
Para amonificación: Inocular cada tubo que contenga medio de Stuart con 1mL de distintas
diluciones e incubar a 28ºC durante 7 días, incluyendo un tubo no inoculado como testigo.
Evaluar el proceso de amonificación observando un color anaranjado. Utilizar las tablas del
NMP para calcular el número de organismos presentes en el suelo.
Para desnitrificación: Inocular una serie de tubos que contengan medio para
desnitrificadores con una alícuota de 1 mL de distintas diluciones e incubar a 28ºC durante
7 días. Registrar como positivos aquellos tubos que tengan gas dentro de la campana de
Durham.

 Muestra de aire
• Cuenta de bacterias mesofílicas aerobias, Cuenta de hongos filamentosos y
Determinación de organismos coliformes
Colocar a 0 m (sobre el suelo) un juego de dos placas de los siguientes medios de cultivo:
CPS-EL, ARB y EMB, destaparlas y alejarse de ellas. Dejarlas así durante 5 minutos.
Transcurrido el tiempo, acercarse y taparlas.

12
Colocar a 1.5 m de altura un juego de dos placas de los siguientes medios de cultivo: CPS-
EL, ARB y EMB, destaparlas. Dejarlas así durante 5 minutos. Transcurrido el tiempo
taparlas.
Marcar todas las cajas y colocarlas en las condiciones de incubación establecidas para
cada medio de cultivo. Y una vez transcurrido el tiempo de incubación, calcular las UFC de
cada grupo de microorganismos.
• Temperatura
Determinación in situ se debe realizar en la sombra, cuidando alejarse lo más posible de
donde se encuentra el bulbo del termómetro. En los sitios de muestreo, suspender el
termómetro durante 5 minutos, transcurrido el tiempo, registrar la lectura de la temperatura.
• Dirección y velocidad del viento
La medición de la velocidad y dirección del viento para cada sitio de muestreo se realizará
observando el entorno de cada sitio y evaluando la magnitud y la dirección del viento
utilizando la escala de Beaufort y orientando la dirección del flujo de aire con el empleo de
una brújula.
5. RESULTADOS
5.1 AGUA
Tabla 5.1.1. Demanda Bioquímica de Oxígeno en diferentes muestras de agua
tomadas de diferentes estaciones ubicadas en el sitio de muestreo Cascadas de
Atlihuetzia, Tlaxcala.

Li Lf
Vm Vd Vt Dilución P DBO5
Estación Equipo (mg/L (mg/L
(ml) (ml) (ml) (%) (Vm/Vt) (mg/L)
O2) O2)
1 9.3 7.9 50 950 1000 5 0.05 28
1
6 10.2 7.5 50 950 1000 5 0.05 54
2 10 5.5 100 900 1000 10 0.1 45
2
7 8.8 5.7 100 900 1000 10 0.1 31
3 9.6 6.2 100 900 1000 10 0.1 34
3
8 8.5 5.8 100 900 1000 10 0.1 27
4 12 6 100 900 1000 10 0.1 60
4
9 10 5.7 100 900 1000 10 0.1 43
5 8.5 5.6 100 900 1000 10 0.1 29
5
10 11 6.5 100 900 1000 10 0.1 45

13
Tabla 5.1.2. Parámetros fisicoquímicos en las diferentes estaciones de muestreo en
el sitio Cascadas Atlihuetzia, Tlaxcala.

Saturación
Temperatura O.D. (mg/L)
Estación Equipo pH de Oxígeno
(°C)
(%)
1 17 7.24 2.4 25
1
6 17 7.37 2.4 25
2 19 8.08 7.1 75
2
7 19 7.39 6 65
3 17 8.3 7.1 72
3
8 17 8.11 7.8 79
4 18 7.4 7.6 79
4
9 18 8.23 8.2 87
5 17 8.25 8.5 86
5
10 17 7.60 6.8 70

Figura 5.1.1. Niveles de OD de diferentes muestras de agua provenientes del sitio de

muestreo: Cascadas de Atlihuetzia, Tlaxcala.

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Grafico 5.1.2. Niveles de DBO5 de diferentes muestras de agua por estación
provenientes del sitio de muestreo Cascadas de Atlihuetzia, Tlaxcala.

Tabla 5.1.3. Resultados de La Prueba Confirmativa para la Cuantificación de

Microorganismos Coliformes Totales.

NMP microorganismos
Número coliformes totales/100mL
Estación Equipo característico (“>” mayor que la cantidad
indicada)
1 3-3-3 >1.1x103
1
6 3-3-3 >1.1x103
2 3-3-3 >1.1x103
2
7 3-3-3 >1.1x103
3 3-3-2 1.1x103
3
8 3-3-3 >1.1x103
4 3-3-3 >1.1x103
4
9 3-3-3 >1.1x103
5 3-3-3 >1.1x103
5
10 3-3-3 >1.1x103

15
 Tabla 5.1.4. Resultados de la Prueba Confirmativa para la Cuantificación de
Microorganismos Coliformes Fecales.

Estación Equipo Número NMP microorganismos

característico coliformes totales/100mL(“>”
mayor que la cantidad
indicada)
1 1 3-3-3 >1.1x103
6 3-3-3 >1.1x103
2 2 3-3-3 >1.1x103
7 3-3-3 >1.1x103
3 3 3-3-2 1.1x103
8 3-3-3 >1.1x103
4 4 3-3-3 >1.1x103
9 3-3-3 >1.1x103
5 5 3-3-3 >1.1x103
10 3-3-3 >1.1x103

Tabla 5.1.5. Resultados de la Prueba Confirmativa para la Cuantificación de la

bacteria Escherichia coli Presuntiva (Determinación del número más probable).

Estación Equipo Número NMP microorganismos coliformes

característico totales/100mL (“>” mayor que la
cantidad indicada)
1 1 3-3-3 >1.1x103
6 3-3-3 >1.1x103
2 2 3-3-3 >1.1x103
7 3-3-3 >1.1x103
3 3 3-3-3 >1.1x103
8 3-3-3 >1.1x103
4 4 3-3-3 >1.1x103
9 3-3-3 >1.1x103
5 5 2-2-3 4.2x101
10 3-3-3 >1.1x103

16
Tabla 5.1.6. Resultados de la Prueba Completa para la Cuantificación de Escherichia
coli

Estación Equipo Número NMP microorganismos coliformes

característico totales/100mL (“>” mayor que la
cantidad indicada)
1 3-2-3 2.9x102
1
6 3-2-0 9.3x101
2 3-3-3 >1.1x103
2
7 3-3-3 >1.1x103
3 2-3-1 3.6x101
3
8 3-3-3 >1.1x103
4 3-3-3 >1.1x103
4
9 0-3-0 9.4
5 3-3-2 1.1x103
5
10 3-3-1 4.6x102

5.2 SEDIMENTO
Tabla 5.2.1. Número más probable de bacterias oxidadoras de azufre.

Bacterias Oxidadoras del No.

azufre NMP NMP/g
Estación Equipo Característico
Diluciones
10-3
1 10-4 10-5 1-0-0 3.6 3.6x102
1 10-2 10-3 10-4
6 3-3-2 1 100 1.1x104
10-3 10-4 10-5
2 0-0-0 < 3.0 <3x102
2 10-3 10-4 10-5
7 1-2-1 15 1.5x103
10-3 10-4 10-5
3 3-2-0 93 9.3x103
3 10-3 10-4 10-5
8 2-1-3 34 3.4x103
10-3 10-4 10-5
4 3-2-1 150 1.5x104
4 10-3 10-4 10-5
9 3-2-1 150 1.5x104
10-3 10-4
5 10-2 0-0-0 <3.0 <3x101
5 10-3 10-4 10-5
10 2-2-0 21 2.1x103

17
5.3 SUELO
Tabla 5.3.1. Cálculo del porcentaje de humedad en las diferentes muestras de suelo,
registro de pH y temperatura por estación y equipo.
Estación Equipo Peso Peso final Humedad Temp (°C) pH
inicial del del (%)
sistema sistema
(g) (g)
1 1 100.6 98.3 23 18 7.53
2 2 105.33 102.65 27 19 7.43
3 3 77.8 75.55 22.5 19 7.75
4 4 93.2 90.5 27 18 7.57
5 5 93.5 92.3 12 19 8.75
1 6 97.5 93.6 39 18 7.81
2 7 83 78.7 43 19 6.63
3 8 97.96 96.8 11.6 19 6.84
4 9 85.2 82.5 27 16 6.95
5 10 112.3 111.6 7 19 7.63

Tabla 5.3.2. Cuantificación de Bacterias Mesofílicas Aerobias (BMA)

Equipo Número de colonias Dilución UFC/g BH*
1 109 10-4 1.1 x 107
2 56 10-4 5.6x106
3 107.5 10-4 1.07x107
4 69 10-3 6.9x105
5 80 10-4 8x106
6 36 10-4 3.6x106
7 50 10-5 5x107
8 105 10-4 1x107
9 40 10-4 4x106
10 29.5 10-4 2.95x106
*Base húmeda

Tabla 5.3.3. Cuantificación de Actinomicetos

Equipo Número de colonias Dilución UFC/g BH*
1 1.5 10-4 1.5 x 105
2 5.5 10-4 5.5x105
3 1 10-4 1x105
4 1.5 10-3 1.5x105
5 3 10-5 6x106
6 1 10-4 1x105
7 0.5 10-5 5x105
8 0.5 10-4 5x104
9 1.5 10-4 3x105
10 3.5 10-5 3.5x106
*Base húmeda

18
 Tabla 5.3.4. Cuantificación de Hongos Filamentosos

Equipo Número de Dilución UFC/g BH*

colonias
1 1 10-4 1 x 105
2 1 10-5 1x106
3 - - -
4 0.5 10-3 5x103
5 9 10-5 9x106
6 1 10-4 1x105
7 0.5 10-5 5x104
8 -** -** -**
9 8 10-4 8x105
10 -** - -
*Base húmeda, ** el valor es cero.

Tabla 5.3.5. UFC/g en Base seca de tres microorganismos

Hongos
Equipo BMA* Actinomicetos
Filamentosos
1 1.43x107 1.3x105 1.94x105
2 7.8x 106 1.4x 106 7.5x105
3 1.38x107 - 1.29x105
4 9.45x103 6.85x102 2.06x103
5 9.09x106 1.02x107 6.82x106
6 5.90x106 1.64x105 1.64x105
7 8.77x107 8.77x104 8.77x105
8 1.13x107 - 5.66x104
9 5.48x106 1.1x106 4.11x105
10 2.06x107 0 3.76x106
*Bacterias Mesofílicas Aerobias

19
 Tabla 5.3.6. Número de Microorganismos Participantes de los Procesos del Ciclo
del Nitrógeno en la Zona de Muestreo (UFC/g o NMP/g de Suelo en Base Seca).

Estación Equipo PROCESO

Proteólisis Nitrificación
Amonificación Desnitrificación
(UFC/g) Nitritación Nitratación
(NMP/g)B.S (NMP/g) B.S
B.S (NMP/g)B.S. (NMP/g)B.S
1 3.24x105 1.42x103 3x10 2.46x101 3.9x10
1 5 2 3
6 5.7x10 2.62x10 1.8x10 3.1x101 1.49x103
5 3 3
2 6.16x10 3.97x10 6.3x10 3.39 9.86x102
2 6 3 1
7 2.63x10 1.3x10 7.5x10 5.26 1.07x103
3 3.22x104 92.90 1.41x103 1.1x10 3.87
3
8 3.39x104 2.6x102 4.8x10 3.39 8.14x102
5
4 5.5x10 1.3x103 4.1 4.1 4.9x102
4 6 2 2
9 4.1x10 3.15x10 1.27x10 4.10 1.24x103
5 4.5x104 9x101 1.02x102 3.40 1.2x103
5
10 1.61x104 3.11x102 4.6x10 3.22 3.87x102

Figura 5.3.1. Número de microorganismos participantes en el proceso de Proteólisis

obtenidos en las estaciones de muestreo, reportados en log(UFC/g) en base seca.

20
 Figura 5.3.2. Número de microorganismos participantes en el proceso de
Amonificación obtenidos en las estaciones de muestreo, reportados en log(NMP/g)
en base seca.

Figura 5.3.3. Número de microorganismos participantes en el proceso de

Desnitrificación obtenidos en las estaciones de muestreo, reportados en log(NMP/g)
en base seca.

21
 Figura5.3.4. Número de microorganismos participantes en el proceso de
Nitrificación obtenidos en las estaciones de muestreo, reportados en log(UFC/g) en
base seca.

Figura 5.3.1. Observación de microorganismos fijadores de nitrógeno al

microscopio.

22
 Tabla 5.3.7. Cuantificación de las unidades formadoras de colonias para los
microorganismos degradadores de polímeros de Carbono: degradadores de
almidón (amilolíticos) y celulosa (celulolíticos) para diferentes muestras de suelo.

Microorganismos degradadores de:

Estación Equipo Celulosa (Celulolíticos) Almidón (Amilolíticos)
Colonias Dilución UFC/g Colonias Dilución UFC/g
1 1 11 10-4 1.43x106 3.5 10-5 4.54x106
2 2 14 10-5 9.6x106 7 10-5 4.80x106
3 3 9 10-4 1.16x106 4 10-4 5.16x105
4 4 27 10-4 3.7x106 4 10-4 5.50x105
5 5 13.5 10-3 1.35x105 24 10-4 2.40x106
1 6 15.5 10-4 2.54x106 6.5 10-4 1.07x106
2 7 10 10-4 1.00x106 5 10-5 5.00x106
3 8 5.5 10-5 5.55x106 8 10-4 9.00x105
4 9 21.5 10-3 2.94x105 5.5 10-5 7.53x106
5 10 4 10-4 4.30x105 5 10-4 5.37x105

5.4 AIRE
Tabla 5.4.1 Mediciones de Variables físicas del aire.
Temperatura Velocidad de Dirección del
Estación Equipo
(°C) viento (m/s) viento
1 21 5.5-7.9 S-N
1
6 21 5.5-7.9 S-N
2 19 5 N-S
2
7 19 5 N-S
3 19 1.6-3.3 E-SO
3
8 19 5.5-7.9 E-SO
4 18 1.6-3.3 NE-SO
4
9 18 1.6-3.3 NE-SO
5 19 1.6-3.3 N-S
5
10 19 1.6-3.3 N-S

Tabla 5.4.2 Unidades formadoras de colonias (UFC)/ 5 min, reportados por equipo y
estación.

Bacterias mesofílicas Microorganismos

Hongos filamentosos
Estación Equipo aerobias coliformes
0.0 m 1.5 m 0.0 m 1.5 m 0.0 m 1.5 m
1 62.5 4 9.5 0.5 37 3.5
1
6 18.5 8 0.5 0 30.5 12
2 10 2 1.5 13 8.5 5.5
2
7 2 4.5 1 0.5 4 3
3 123.3 575 25 20 22.5 14.16
3
8 150.8 337.5 0.83 5 5.8 20.83
4 30 6.5 7 8 20 12
4
9 19.5 6 4 1 17.5 10.5
5 11 4.5 1 1 16.5 20
5
10 37.5 5.5 6 1 14.5 12.5

23
 Tabla 5.4.3. Unidades formadoras de colonias (UFC) de diferentes poblaciones
microbianas en el aire tomadas de diferentes estaciones en el sitio de muestreo
Cascadas de Atlihuetzia, Tlaxcala, durante un tiempo de 1 hora y en 1 m2.

Bacterias
Microorganismos Hongos
Mesofílicas
Coliformes Filamentosos
Estación Equipo Aerobias
(EMB) (ARB)
(CPS-EL)
0.0 m 1.5 m 0.0 m 1.5 m 0.0 m 1.5 m
5
1 1.2x10 8.3x103 1.9x104 1.0x103 7.6x104 7.2x103
1 4
6 3.8x10 1.6x104 1.0x103 0.0 6.3x104 2.5x104
4
2 2.1x10 4.1x103 3.1x103 2.7x104 1.8x104 1.1x104
2
7 4.1x103 9.3x103 2.1x103 1.0x103 8.2x103 6.2x103
5
3 2.5x10 1.2x106 5.2x104 4.1x104 4.6x104 2.9x104
3 5
8 3.1x10 6.9x105 1.7x103 1.0x104 1.2x104 4.3x104
4 6.2x104 1.3x104 1.4x104 1.7x104 5.2x104 2.5x104
4 4
9 4.0x10 1.2x104 8.2x103 2.1x103 3.6x104 2.2x104
4
5 2.3x10 9.3x103 2.1x103 2.1x103 3.4x104 4.1x104
5
10 7.7x104 1.1x104 1.2x104 2.1x103 3.0x104 2.6x104

Figura 5.4.1. Bacterias mesofílicas aerobias a 0.0 y 1.5 metros de distancia con
respecto al suelo por estación de muestreo.

24
 Figura 5.4.2. Microorganismos coliformes a 0.0 y 1.5 metros de distancia con
respecto al suelo por estación de muestreo.

Figura 5.4.3. Hongos filamentosos a 0.0 y 1.5 metros de distancia entre el suelo y la
toma de muestra por estación de muestreo.

25
6. Discusión
6.1 Agua
6.1.1 Estación 1
El flujo de agua dentro de la estación puede considerarse como subcrítico o tranquilo donde
la velocidad relativa es baja y la profundidad relativamente grande, además prevalece la
energía potencial tal como sucede en llanuras (UNEFA, 2013).
La DBO es una prueba estandarizada que se utiliza para medir los requerimientos de
oxígeno de microorganismos presentes en el agua, esta prueba delimita la cantidad de O 2

que consumen para poder degradar la materia orgánica presente en un lapso de tiempo.
Para poder determinarla inicialmente se estimó el Oxígeno Disuelto (O.D), dando como
resultado 2.4 mg/L. De esta manera se procedió a determinar la Demanda Bioquímica de
Oxígeno obteniendo valores de 28 mg/L y 54 mg/L. Observamos que estos valores varían
considerablemente (prácticamente el doble), entre los factores a considerar esta la
diferencia de tiempos en que se tomaron (15 minutos), además que posiblemente las
descargas de materia orgánica de las poblaciones aledañas no son constantes o la propia
toma de muestras de agua fue determinante, pues si bien pertenecen a la misma estación,
no fueron exactamente los mismos puntos; sobre el mismo tópico, los valores obtenidos
para DBO sugieren resultados distintos: un estado contaminado donde la DBO es < 30
5 5

mg/L y otro donde el valor es aceptable; además dan un indicio de una cantidad de materia
orgánica considerable en el medio, pues entre mayor materia orgánica exista, se requerirá
mayor oxígeno para degradarla.
Se observó que había canales de agua residuales de tipo doméstica conectados a la
corriente del río, esperando obtener resultados positivos en la cuantificación de
microorganismos coliformes. Se encontraron todos los resultados positivos para la prueba
presuntiva de coliformes totales y fecales, hallándose además una cantidad elevada de
Escherichia coli existente. La presencia de microorganismos coliformes en el agua indica
una contaminación fecal, lo que puede representar un riesgo a la salud.
De acuerdo a los Criterios Ecológicos de Calidad del Agua CE-CCA-001/89, los valores
encontrados para Coliformes Fecales en las muestras de agua de las cascadas son muy
superiores a los establecidos en el acuerdo, 1000 NMP/100 ml como valor máximo para
calidad de agua como fuente de agua potable, recreativo con contacto primario y riego
agrícola, por lo que está agua no debería de usarse para ninguno de estas actividades.
Los bioensayos de toxicidad aguda son empleados para revelar la toxicidad relativa de un
cuerpo de agua (Leticia O., 2009), en este caso las muestras de agua recolectadas en las
Cascadas de Atlihuetzia.
Mediante el microtest realizado (bioensayo de toxicidad) con el microorganismo de prueba
Bacillus cereus, donde se determinó la inhibición y/o estimulación de la enzima
deshidrogenasa, hallamos que, para esta primera estación de muestreo los resultados
arrojan inhibición en la actividad metabólica y estimulación en la misma que puede
interpretarse debida a causas benéficas, esto es posible ya que aunque las muestras
pertenecen a la misma estación, no fueron tomadas exactamente del mismo lugar,
pudiendo variar los componentes del agua recolectada. La muestra tomada por el equipo 1
posee un % de inhibición de –39.29%, dicho valor refiere estimulación en la actividad

26
enzimática y basados en su magnitud que infiere causas benéficas, se puede suponer que
la muestra presentaba carga orgánica susceptible de ser biodegradada por B. cereus; así
mismo, para él % de inhibición determinado por el equipo 6 (33.83%), dicho valor refiere
toxicidad en los compuestos presentes en la muestra de agua, de esta manera podemos
considerar que la muestra posiblemente contenía compuestos netamente inhibidores de la
actividad deshidrogenasa, tales como metales pesados.
El Dimetil sulfóxido (DMSO) es empleado para aumentar la permeabilidad de la membrana,
dada su capacidad de penetrar los tejidos vivientes sin ocasionar daños significativos que
se relaciona con su estructura relativamente compacta y naturaleza polar así como también
a su capacidad de aceptar enlaces de hidrógeno (Dora A., 2004), de tal manera que al
agregar Cloruro de trifenil tetrazolio (TTC) éste puede atravesar fácilmente dicha membrana
y, dado que es un indicador redox, nos ayuda a diferenciar tejidos o células
metabólicamente activas de aquellos que no lo están, por ejemplo indicando la presencia
de respiración celular.
6.1.2 Estación 2
El agua tenía baja temperatura y turbidez causado por los desniveles que provocan las
rocas de gran tamaño. Por ello, un factor importante fue la temperatura ya que en un cuerpo
de agua fría se unirán más sus moléculas, reteniendo mayor cantidad de oxígeno. La
muestra de agua fue tomada en medio de dos rocas donde había Hirudíneas
aproximadamente de cinco milímetros, esto indica la presencia de Oxígeno Disuelto en
nuestra muestra de agua porque hay organismos aerobios que habitan en la estación dos.
Los resultados de OD se encuentran dentro de los parámetros permitidos, pues para aguas
que contienen peces de agua fría. se recomienda que la concentración disuelta de oxígeno
no se encuentre menor al intervalo de 6 a 8 mg/L (Water Boards). Sin embargo, los datos
muestran que el agua pronto podría ya no ser apta para el desarrollo de ciertos organismos
si se disminuye más la cantidad de Oxígeno Disuelto. En cantidades menores al parámetro
se presentaría muerte de adultos y jóvenes, reducción en el crecimiento, huevecillos y
larvas malogrados, entre otros.
Según una tabla presentada por Water Boards donde indica la concentración de oxígeno
disuelto a un grado de saturación del 100% para la temperatura anotada, a la temperatura
del agua (19ºC), se debió de obtener un valor de OD alrededor de 9.3, sin embargo, el
nuestro es mucho menor. Eso indica que se han tenido cambios en el agua que han
afectado directamente ese parámetro pues con esa cantidad de OD obtenido el agua
tendría que estar mucho más caliente, y no lo está.
En la parte de Demanda Bioquímica de Oxígeno, en aguas no contaminadas poseen una
baja concentración de materia orgánica disuelta por lo tanto en nuestras muestras de agua
el DBO fue de 31 y 45 mg/L existiendo un exceso de materia orgánica que da apariencia a
un color turbio grisáceo y cuya degradación es efectuada por microorganismos que agotan
el oxígeno presente en el cuerpo de agua.
De acuerdo a los valores de los Criterios Ecológicos de la Calidad del Agua de 1989, nos
dicen que el valor máximo de coliformes fecales es de 1000 NMP/100mL, por lo que nuestra
muestra obtenida en Tlaxcala rebasa este parámetro siendo mayor de 1100 NMP
microorganismos coliformes.

27
Sin embargo, refiriéndonos a la prueba de Escherichia coli conforme a nuestros resultados
observamos un aumento en la estación dos comparado con la mayoría de estaciones,
suponiendo que la causa es una descarga de desechos fecales provenientes de las casas
o industrias que se localizan alrededor de esta estación.
En la prueba de toxicidad en la muestra de agua, para la estación dos se obtuvieron valores
diferentes entre los equipos. En la una primera muestra se obtuvo un resultado de
estimulación benéfica, pues el valor es de –36%, por lo que la estimulación está dentro de
un rango aceptable, pero para la segunda muestra de se obtuvo que es altamente tóxico,
pero en cantidades excesivas, por lo que se sugiere que existe algún error en la medición,
o bien, resultaría necesario evaluar esta prueba con un número mayor de muestras, en
diferentes puntos de muestreo.
6.1.3 Estación 3
En la estación 3 se obtuvieron valores de oxígeno disuelto de 7.1 mg/L para el equipo 3 y
7.8 mg/L para el 8, a 17°C. Estos valores fueron mucho mayores que en las estaciones
anteriores, debido a que, el agua se oxigenaba con la caída de las cascadas, además de
que la temperatura de la misma era relativamente baja, comparada con las otras
estaciones, y la relación que guardan el oxígeno disuelto y la temperatura es inversamente
proporcional, es decir, a menor temperatura mayor oxígeno disuelto.
En este caso, se obtuvieron los valores de 34 y 27 mg/L. La SEMARNAT considera 30
mg /L, como el límite máximo permisible para la protección de la vida acuática en ríos, por
lo tanto, el valor promedio de los dos equipos rebasa este límite, lo que nos pudiera indicar
que existe un exceso de materia orgánica presente en el cuerpo de agua, desequilibrando
el ecosistema acuático,
La cuantificación de microorganismos coliformes presentes en un cuerpo de agua se vuelve
de vital importancia para determinar la calidad de la misma, para la estación 3, después de
realizar la prueba presuntiva, confirmativa y completa, se obtuvo un NMP de >1100 para
coliformes totales y fecales; lo cual indica que el agua tiene una cantidad de bacterias
coliformes elevada y según la NMX-AA-042-SCFI-2015 no es apta para consumo humano.
6.1.4 Estación 4
El OD representa la cantidad de oxígeno presente en el agua, depende de factores como
la temperatura, la salinidad y la presión, la actividad fotosintética de las comunidades
autótrofas, la respiración de las comunidades y la descomposición de la materia orgánica.
En la estación 4, al momento de tomar las muestras, se midió la baja temperatura del agua
de 18 °C, se observó una ligera turbidez. En el caso de la determinación de Oxígeno
Disuelto, después de tomar la muestra se realizó la técnica de Winkler obteniendo un
resultado de 7.6 mg/L con una saturación del 79 % en el equipo 4 y el equipo 9 obtuvo 8.4
mg/L con una saturación del 85 %.
Fue posible observar en el agua la presencia de contaminación por surfactantes ya que
había espuma, también se observó la presencia de rocas, además el agua corría de forma
constante.

28
En el caso de la Demanda Bioquímica de Oxígeno, que se realizó en dos tiempos para
poder comprobar el oxígeno encontrado en la muestra de agua, se obtuvo el valor más alto
de Oxígeno Disuelto comparado con el de todas las estaciones en la primera medición, con
un resultado de 12 mg/L pero al realizar la segunda medición, después de 5 días de
incubación, se observó que el oxígeno disminuyó a la mitad: 6.0 mg/L. Igualmente, en el
equipo 9 se observa la disminución del oxígeno casi a la mitad, el día 1 se obtuvo 10 mg/L
y el día 5 de 5.7 mg/L, por lo que se tiene una alta presencia de materia orgánica.
Realizando los cálculos correspondientes se obtuvo una Demanda Bioquímica de Oxígeno
de 60 mg/L para el equipo 4 y de 43 mg/L para el equipo 9. Estos valores nos indican que
la calidad del agua es muy baja, entra en la clasificación de agua contaminada en un rango
de 30 a 120 mg/L, considerando los estándares de SEMARNAT, por lo que es posible
indicar que el cuerpo de agua se encuentra contaminado y, por lo tanto, no es apta para
consumo humano.
Para poder determinar la toxicidad de las muestras de agua de la cascada de Atlihuetzia,
Tlaxcala, se realizó un bioensayo con la bacteria Bacillus cereus, con base en la respuesta
de inhibición de la enzima deshidrogenasa. La bacteria Bacillus cereus es resistente, con
presencia amplia en el ambiente, la cual presenta una temperatura óptima de 30 a 40 ºC.
Al realizar el bioensayo con muestras de agua provenientes del sitio de muestreo se
encontraron valores muy diferentes entre los equipos que conforman la estación aunque
observando que el equipo 9 obtuvo un valor negativo podría deberse a un estímulo positivo
hacia la bacteria, considerándose que existió carga orgánica presente en el cuerpo de agua
que fue aprovechada por la bacteria, según la escala, el equipo 4 obtuvo una análisis del
cuerpo de agua como “moderadamente tóxico” mientras que el equipo 9 obtuvo una
“estimulación”. Al analizar los resultados se debe tomar en cuenta que las muestras no
fueron tomadas en el mismo momento y, por lo tanto, las muestras podrían contener
diferentes “mezclas” por lo que no sé esperaba que los resultados fueran los mismos, pero
es importante considerar que si el cuerpo según los resultados del equipo 4 contienen una
toxicidad moderada es algo en lo que se debe hacer énfasis por todos los seres vivos que
habitan ahí, y que utilizan el acuífero para sus funciones vitales.
Con respecto a microorganismos coliformes encontrados en el cuerpo de agua: en base a
la norma mencionada y a los procedimientos indicados se obtuvo un valor de Número Más
Probable (NMP) de coliformes totales y fecales mayor a 1100 en cada 100 ml de agua en
la estación 4, en ambos equipos (4 y 9), esto indica que el cuerpo de agua ya no posee
ninguna utilidad para actividades antropogénicas y no puede ser utilizada para ningún fin
sin ser previamente tratada.
Estos valores tan críticos se deben como ya se mencionó, a que se vierte aguas residuales
de alguna población aledaña. Sin duda alguna si continúan estos valores en el cuerpo de
agua, este cuerpo de agua alcanzará en algún momento la eutrofización y por ende la
pérdida del ecosistema nativo del lugar.
En el caso de la bacteria Escherichia coli se obtuvo un NMP/100ml mayor a 1100 en el
equipo 4, esto indica que la muestra de agua de la cascada Atlihuetzia contiene materia
fecal y por ende una muy baja calidad, por lo tanto el agua no puede ser utilizada
para consumo humano o cualquier actividad antropogénica. El equipo 9 obtuvo de
NMP/100ml un valor de 9.4, dado que los valores son muy diferentes hay factores

29
importantes a considerar como el flujo descontinuo del agua o el momento en que se tomó
la muestra, se debería realizar la prueba una vez más para confirmar la veracidad de ambos
valores.
6.1.5 Estación 5
De acuerdo con los datos obtenidos, está dentro de las mayores concentraciones de
Oxígeno Disuelto a comparación de las demás estaciones siendo 29 y 45 mg/L de Oxigeno,
esto se debe a que en dicha estación existía una menor temperatura, es decir, al
encontrarse una disminución en la temperatura, la concentración de Oxígeno Disuelto
ascendió. Otro aspecto por evaluar y que va ligado con el factor del Oxígeno Disuelto es la
Saturación de Oxígeno, debido a la ubicación de la cascada y el cambio de corriente
causado por ésta, cusa un efecto de aireación por efecto de la cascada, es decir, la
saturación de oxígeno aumento a partir de la caída de la cascada.
Lo que se observó de manera uniforme en todas las estaciones del cuerpo de agua
ubicando a la 5 en un punto medio. La DBO obtenida en todas las estaciones fue de valores
mayores a 10 mg/L, lo que bibliográficamente significa un alto índice de materia orgánica y
que organolépticamente se puede apreciar una ligera turbidez, malos olores y presencia de
surfactantes en dicho cuerpo agua (espumas).
En materia de coliformes y sus determinaciones para diferenciar entre coliformes totales
(que incluyen los de animales y suelo) y coliformes fecales (que incluyen únicamente los
humanos) e incluso llegan a estar presentes de forma natural.
En el caso de la estación 5 se obtuvieron en la prueba confirmativa un valor de NMP/100
ml de agua de >1100 tanto para coliformes totales como coliformes fecales. La estación 5
teniendo solo una variación Esto significa que la carga microbiana de coliformes es alta por
lo menos en el momento en que se tomó la muestra
Para el caso de la prueba Completa para la Cuantificación de Escherichia coli los valores
en las estaciones disminuyeron considerablemente, esto significa que no solo existía
Escherichia coli, si no que en ese cuerpo de agua existen otras diversas comunidades de
enterobacterias facultativas.
Aun cuando existen organismos anaeróbicos y facultativos, la mayoría depende
grandemente del Oxígeno disuelto para realizar procesos propios de metabolización, lo cual
lleva a que también exista relación con la temperatura, Oxígeno disuelto y la Demanda
Bioquímica de Oxígeno. Ubicando a la estación 5 en un grado de degradación no alto o que
por lo menos va empezando, por lo cual fauna acuática no es visible, pero si la carga
microbiana.
En cuanto a la toxicidad presente en la estación 5 siendo como referencia el
microorganismo Bacillus Cereus el cual se vio afectado por uno o un compuesto de
sustancias toxicas la cual lo coloca en un estado de moderadamente toxico, sin embargo,
no es posible identificar el toxico que lo altera, sin embargo esto es señal de decadencia
del cuerpo de agua.

30
6.2 Sedimento
6.2.1 Estación 1
Las muestras obtenidas se sometieron a pruebas de oxidación de azufre, donde se
evidenció la presencia de bacterias con dicha capacidad, dichas pruebas resultaron
positivas para la estación 1, de la cual se obtuvieron valores entre 360 y 1.1x10 NMP/g.
3

Es comprobado así la presencia de microorganismos que llevan a cabo la transformación

de H S a Sulfatos. Este suceso se puede asociar también a una presencia adecuada de
2

oxígeno o al menos la cantidad suficiente que permite el desarrollo de bacterias oxidadoras

del azufre como Beggiatoa, así como una acumulación intracelular de azufre elemental por
especies como Thiobacillus, ya que este proceso del ciclo del azufre se lleva a cabo en
condiciones óxicas y en menor proporción mediante bacterias verdes y rojas del azufre en
condiciones anóxicas.
Asimismo, se realizó un estudio de los efectos ambientales en la distribución de
microorganismos mediante la utilización de Las Columnas de Winogradsky. En las que se
observó un decremento de diversidad biológica general en la columna con detergente
donde dominaron algas verdes y Amoeba testada, una diversidad rica en hongos y
protozoarios de forma bacilar para la columna con sacarosa, mayor presencia de
protozoarios en la columna oscura, algas flageladas y filamentosas y predominancia de
algas doradas, Amoeba Testada y protozoarios en la columna iluminada.
Los resultados obtenidos denotan un ecosistema dinámico que conserva la capacidad de
autorregularse, pero impactado, por lo que los microorganismos presentes se encuentran
adaptados a los niveles de contaminación que afectan el sistema.
Los alrededores de la estación contemplaban predios de uso agrícola, la vegetación era
abundante y considerablemente crecida. El cuerpo de agua poseía una coloración café/
negra, sin embargo, no desprendía malos olores, el sedimento acuático poseía
características lodosas, con una coloración muy oscura y olor desagradable.
6.2.2 Estación 2
En las muestras de sedimento no se pudo observar una gran cantidad de bacterias del
azufre, uno de los factores fueron los medios de cultivo pues a pesar de que el tratamiento
se realizó adecuadamente, otro factor que pudo influir son las características del sedimento
ya que su consistencia era muy arenosa, de un color grisáceo, las bacterias estaban
presentes pero en poca cantidad ya que en las columnas de winogradsky se pudo observar
la presencia de un precipitado negro debido a la reducción de azufre, que es una forma en
las que se puede confirmar su presencia; la cantidad es mínima pues este precipitado tardó
en aparecer. En la estación en general no se observó una gran cantidad de estas bacterias.
6.2.3 Estación 3
En ambos equipos se observó la formación de un precipitado negro en el sedimento de la
columna 1 (luz), lo que indica el crecimiento de las bacterias reductoras del azufre que son
fotolitótrofas. Éstas pueden utilizar los subproductos de la fermentación para su respiración
anaerobia, usando sulfato, u otras formas parcialmente oxidadas de azufre como el
tiosulfato, generando grandes cantidades de H S en el proceso. Este H S reaccionará con
2 2

cualquier hierro presente en el sedimento, produciendo sulfuro ferroso, que es color negro.

31
Es por esto que los sedimentos acuáticos son frecuentemente negros. En el portaobjetos
se observaron protozoarios, algas, y Euglenas (que son protistas), debido a la materia
orgánica que había en el sedimento, les permitió crecer en ese microambiente.
Por otro lado, se obtuvo un bajo número de bacterias oxidadoras de azufre (posiblemente
debido al desequilibrio ecológico causado por las grandes cantidades de materia orgánica
presente) lo que significa que muy poca cantidad del azufre elemental está siendo oxidada
a sulfatos (forma en que el azufre puede ser aprovechado por otros organismos), lo que
implica una acumulación de azufre elemental, además de una acumulación de H S, 2

provocando una acidificación del medio y por consiguiente contaminación ambiental

6.2.4 Estación 4
El sedimento muestreado se encontraba muy arenoso, contenía muchas piedras pequeñas,
lo que afectaba la evaluación porque la cantidad de sedimento disminuía
considerablemente, además existía muy poca cantidad en el sitio ya que solo fue posible
obtenerlo de la orilla del río donde existían rocas grandes. Es posible observar que la
estación 4 (equipos 4 y 9) obtuvo el mayor Número Más Probable por gramo de bacterias
oxidadoras de azufre con un resultado de 1.5x104/g, lo que indica que existe una gran
cantidad de sustrato inorgánico que las bacterias oxidadoras del azufre pueden utilizar para
oxidar hasta sulfatos. Esto permite que el ciclo del azufre se realice y es posible, a partir de
otros estudios, determinar si el sedimento analizado es fértil o está contaminado de acuerdo
con la cantidad de sulfatos disponibles.
Nota: No se obtuvieron los resultados esperados para bacterias mineralizadoras anaerobias
del azufre ni de bacterias reductoras de sulfato, los tubos con medio te cultivo se
contaminaron, por lo tanto, los resultados se reportan como nulos.
6.2.5 Estación 5
El sedimento obtenido poseía una consistencia arcillosa, así como un tono oscuro, el cual
se traduce en una alta presencia de materia orgánica, así como de minerales de igual
manera la zona donde se tomó el sedimento era una división ya en dos canales donde el
sedimento fue donde la corriente ya se dirigía a uno en específico, sin embargo, ambas
deberían tener composición similar, con la única variación con la fuerza de la corriente
causando que mueva el sedimento.
Las muestras de la estación cinco, siendo el dato más alto de 2100 NMP/g lo cual
demuestra que son relativamente bajas lo cual puede deberse a la continua corriente del
rio la cual remueva dichos organismos a zonas adelantes del rio, o que estas se hayan
asentado por mejores condiciones en sedimentos previos, lo cual será verificable por las
condiciones del agua que presenten la estaciones así como la disponibilidad de electrones
que permitan este proceso, sin embargo parte de su actividad fue demostrada por las
pruebas realizadas con las columnas de Winograsky a la cual solo se le agrego sulfato de
calcio donde se logró observar que los procesos de reducción de azufre causando la
precipitación de un sedimento color negro encargadas por las bacterias sulfo-reductoras,
dicha columna tuvo incidencia lumínica lo que favorece el crecimiento de microorganismos
quimioorganoheterotrofos y quimiolitoautotrofos.

32
6.3 Suelo
6.3.1 Estación 1
Se realizó la cuantificación y aislamiento de diversas colonias de microorganismos,
encontrando la presencia de Bacterias mesofílicas aerobias, Hongos filamentosos y
Actinomicetos. Esto se relaciona con la cantidad de agua presente en las muestras (%
humedad), parámetro que varía entre las muestras de la estación entre 23% y 39%, pues
la disponibilidad de agua es un factor determinante de las poblaciones microbianas, sin
embargo, el pH también juega un papel muy importante pues participa en la disponibilidad
o fijación de minerales nutritivos en el suelo.
La presencia de actinomicetos en las placas de ambas muestras nos sirve como indicador
de capacidad de descomposición de residuos animales y vegetales, donde se libera
amoníaco y ácidos orgánicos, además de ser de gran importancia para la formación de
humus y la alimentación de las plantas.
Se observa presencia de actividad microbiana para la degradación de proteínas en
aminoácidos. De este se facilita la toma de N para amonificación transformando el N
orgánico a ión amonio NH , proceso que se pone de manifiesto en la cuantificación de
4+

NMP/g (B.H.) para las muestras (1.42x10 y 2.62x10 respectivamente). Se demuestra la

3 2

presencia de microorganismos nitrificadores (nitritadores y nitratadores), aunque en muy

pequeñas cantidades (23 y 19 NMP/g en B.H). La cantidad de materia orgánica merma el
crecimiento de entidades aeróbicas y por ende de los procesos realizados por las mismas,
fenómeno observado en la fijación (por microorganismos anaeróbicos) de nitritos que
impide su oxidación hasta nitratos.
De igual forma, podemos apreciar la presencia de microorganismos amilolíticos y
celulolíticos en ambas muestras (4.54x10 y 2.54x10 UFC/g (B.S.)) para amilolíticos y
6 6

1.43X10 y 1.07 X10 UFC/g (B.S.) para celulolíticos. Se observa una presencia mayor de
6 6

microorganismos Amilolíticos respecto a Celulolíticos, lo cual puede estar relacionado con

una gran cantidad de Almidón presente en el sitio de muestreo, que sirve como material de
reserva para las plantas que puedan cultivarse en el mismo.
Finalmente, se comprobó la existencia de microorganismos degradadores del plaguicida
Diazinon a una concentración de 10 mg/ml, siendo la degradación más satisfactoria durante
el primer día y de microorganismos degradadores de un surfactante combinado con el
plaguicida a una concentración de 2 mg/ml, siendo la degradación más satisfactoria durante
el tercer día. Comparando ambas pruebas, los microorganismos presentes en la zona
degradan con mayor facilidad el plaguicida cuando este se administra solo que cuando se
administra un surfactante.
6.3.2 Estación 2
El porcentaje de humedad es más alto en el equipo 7 con un 43% y casi a la mitad del
equipo 2 (27%), esta diferencia puede atribuirse a que las muestras se tomaron una en la
sombra y la otra en donde estaban incidiendo directamente los rayos del sol. En ambos
equipos el pH es mayor a 6.6, asumiendo esto corroboramos que los hongos filamentosos
no tendrán un mayor crecimiento debido a que ellos prefieren un pH más ácido.

33
Se encontró diversidad en el crecimiento microbiano, gracias que los factores
determinantes del crecimiento de las poblaciones microbianas en el suelo fueron los
óptimos; por lo menos en lo físico, como temperatura (19°C), pH, disponibilidad de agua,
humedad, etc. Los microorganismos del suelo no se han abordado desde el punto de su
requerimiento nutricional, por ello ha resultado eficiente determinar los aspectos físicos ya
mencionados.
En el ciclo del Nitrógeno, el muestreo del suelo del equipo dos, su recolección fue cercano
a las raíces de árboles y de plantas éstas tenían nódulos por ende sabemos que hay fijación
de nitrógeno atmosférico y asimilación por lo que muchos microorganismos los incorporan
a los aminoácidos y a otros compuestos bioquímicos que contienen nitrógeno de la planta
o incluso de ellos mismo esto ocurrirá en ausencia de oxígeno. El equipo 2 presentó mayor
cantidad del proceso de amonificación comparado con todos los equipos, debido a la
existencia de muchos hongos y bacterias que participan en la descomposición de
compuestos nitrogenados orgánicos. En proteólisis también influye el desarrollo de la
amonificación.
En el proceso de oxidación de amonio o amoniaco (nitrificación), se obtuvo que la nitritación
es mayor que la nitratación porque no hay el oxígeno necesario para que se lleve a cabo el
proceso o no están presentes los microorganismos que lo llevan a cabo, por lo que, en
ausencia de oxígeno se favorece el proceso de desnitrificación, hecho que puede
comprobarse en todas las estaciones.
Según el Centro de Información y Comunicación Ambiental de Norte América (CICEANA)
la nitrificación, es más rápida cuando la temperatura está arriba de los 10° C y el pH está
entre los 5.5-6.5; asimismo, este proceso se ve completado entre dos a cuatro semanas, lo
cual nuestro suelo cumple con la característica de la temperatura, pero el pH fue de 7.43 lo
que pudo afectar a que ya no se diera el proceso de nitritatación. La desnitrificación se ve
afectada por diversos factores como la disponibilidad de nitratos, el porciento de humedad,
la temperatura y el pH, algunas de estas condiciones fueron óptimas para que se llevará
este proceso ya que a pesar de que no se identificaron nitratos hubo presencia de nitritos
y en gran cantidad disponibles para reducirse, por otro lado el porciento de humedad no era
tan alto lo cual puede justificar que no se tenga la misma cantidad de microorganismos en
nitrificación y desnitrificación, debido a la temperatura también se favoreció este proceso y
ya que se tenía un pH ligeramente alcalino que también lo favorece.
6.3.3 Estación 3
Para el caso de la determinación de la proteólisis, amonificación, desnitrificación y
nitrificación se encontró que en la estación 3, en comparación de las demás estaciones,
tiene una menor cantidad de microorganismos prácticamente en todos los procesos.
En el caso de la proteólisis se debe en gran medida a la cantidad de materia orgánica que
se encuentran en dichas estaciones. Las estaciones 1 y 2 se encuentran más cercanas al
efluente que contiene materia orgánica, estos compuestos favorecen el crecimiento de
bacterias con capacidad de romper los enlaces peptídicos que conforman a las proteínas y
en el caso de la estación 4 existe una entrada de aguas residuales que, de igual manera,
dicha materia orgánica favorece el crecimiento de estas bacterias. La amonificación
también se favorece por la materia orgánica y en este caso la urea proveniente de las aguas
residuales, por lo tanto, se obtuvo una mayor actividad en las estaciones 1, 2, y 4. Por otra

34
parte, los aerosoles que caían en el suelo de la estación 3 pudieran contener algún tipo de
detergente que inhibiera o inclusive matase a los microorganismos del suelo, observando
así una menor cantidad de estos.
Centrándose en la desnitrificación, va a depender más que nada de la profundidad a la cual
se tomó la muestra de suelo ya que debido a que este proceso requiere de un ambiente
anoxigénico si se tomaron las muestras de la parte superior, en contacto directo con la
atmósfera este tipo de microorganismos muy probablemente vea disminuida su población.
En el caso de la estación 3 las muestras de suelo se tomaron tanto profunda como
superficialmente, y los resultados son los esperados. La muestra de suelo profunda tiene
menor cantidad de desnitrificadores, por el contrario, la muestra superficial contiene una
mayor cantidad de estos.
Pasando a los microorganismos amilolíticos y celulolíticos observamos que la tendencia
observada en la estación 3 es una mayor cantidad de microorganismos celulolíticos y esto
es perfectamente aceptable debido a que en el lugar donde se tomó la muestra había
crecimiento de árboles, que de alguna forma son la fuente de celulosa que requieren los
microorganismos celulolíticos para poder llevar a cabo su metabolismo.
En la determinación del % de humedad, el suelo de la estación 3 presentó un valor
relativamente bajo en comparación de otras estaciones. Dicha estación resultó ser una de
las que obtuvieron menor cantidad de microorganismos en general, esto debido a la
disponibilidad de agua, que es uno de los factores de los que depende el crecimiento de
una población.
En la determinación de pH se presentaron valores ligeramente alcalinos o casi neutros
estos valores son los esperados ya que se tratan de suelos vertisoles pélicos cuyo pH
favorece el crecimiento de actinomicetos y bacterias. Estos últimos son fundamentales en
el ciclo de nitrógeno.
Además de la disponibilidad de materia orgánica, podemos atribuir la variación de la
cantidad de microorganismos a los factores que componen el suelo en cada estación como
lo es la humedad, pH y temperatura.
6.3.4 Estación 4
Según la bibliografía, existe una densidad poblacional de actinomicetos de 105 a 108, por lo
que existe un crecimiento adecuado o estable de actinomicetos en la estación 4, obteniendo
un promedio de 1.5x105 en los equipos que conforman la estación. Esto se atribuye a que
crecen en un rango de pH de 6-7 y para su crecimiento necesitan materia orgánica en
descomposición, tal como: residuos procedentes de otros organismos, hojas, cadáveres,
excremento, etc. Cabe destacar que la temperatura de la estación 4, 18°C, es relativamente
baja para el crecimiento de actinomicetos ya que estos prefieren temperaturas de entre 28
y 37°C, por lo que se realiza la hipótesis de que, en caso de existir una mayor temperatura
en el sitio de muestreo, sería posible obtener un número superior de UFC que el encontrado.
El crecimiento de Bacterias Mesofílicas Aerobias en la estación 4, se consideraría bajo si
se toma en cuenta la temperatura del sitio de muestreo y la temperatura en la que las
bacterias tienen su rango de crecimiento óptimo, para el primer caso, la temperatura del
sitio fue de 18°C y para el segundo, el crecimiento óptimo de estas bacterias se encuentra
entre los 25 y 40 °C, por lo que esto influye en el crecimiento de los microorganismos. Es

35
importante destacar que, a pesar de que el sitio de muestreo es el mismo, con sólo caminar
unos pasos y/o cambiar de estación, los factores que afectan a los microorganismos
influyen de una forma considerable en su crecimiento.
Con respecto a los hongos filamentosos, se obtuvo un promedio de estación de 6.5x105 en
base húmeda para la estación 4, cabe recordar que se desarrollan en ambientes con un
contenido de humedad alto y se alimentan de materia orgánica, en el sitio de muestreo se
obtuvo un porcentaje de humedad del 27% y debido a que es una zona arbórea, existe un
gran contenido de materia orgánica debido a las hojas de los árboles, lo que hace posible
su crecimiento como se muestra en los resultados.
En cuanto a los procesos del Ciclo del Nitrógeno que realizan los microorganismos en el
suelo, se obtuvo un alto indicador de la degradación de proteínas a sus monómeros, en
especial, la hidrólisis de caseína que indica que las muestras de suelo de la estación 4,
contenía microorganismos capaces de realizar el proceso de proteólisis, y por lo tanto son
microorganismos que participan activamente, en esta etapa en el ciclo de nitrógeno.
En cuanto al proceso de amonificación, se obtuvo un promedio de la estación de 8.1x102,
indicando una baja presencia de microorganismos, lo que demuestra que se lleva a cabo la
mineralización del nitrógeno, pero en bajas cantidades debido a la baja cantidad de
microorganismos presentes en el suelo.
Para la etapa de nitrificación, que se divide en dos fases, nitritación y nitratación, es posible
definir que se llevó a cabo el proceso de nitritación, lo que indica que existen
microorganismos capaces de realizar el proceso, pero en ambos equipos de la estación 4
no se llevó a cabo el proceso de nitratación, lo que demuestra que en la muestra de suelo
existía una baja o nula cantidad de microorganismos capaces de realizar este proceso y
puede deberse a que existe una elevada cantidad de materia orgánica, que es rica en
proteínas y que los microorganismos de la proteólisis, al aumentar su población, redujeran
la cantidad de oxígeno disponible para los demás microorganismos.
En el proceso de desnitrificación, los resultados indica una baja cantidad de
microorganismos encargados de este proceso, pero que, si se realiza, y por tanto que, las
condiciones en las cuales se encontraban los microorganismos no eran óptimas para el
desarrollo de estos.
Para los microorganismos que interfieren en el Ciclo del Carbono, los resultados indican
que abundan una gran cantidad de microorganismos celulolíticos capaces de degradar
celulosa, al igual que los microorganismos amilolíticos que son aquellos capaces de
hidrolizar el almidón, un polisacárido de reserva alimenticia predominante en las plantas,
esto puede ser debido a que existen elevadas concentraciones de nitrógeno inorgánico
(pese a que en el ciclo del nitrógeno existió baja actividad en la mineralización) o a las
condiciones físicas de la estación, como la temperatura el oxígeno y el pH.
La muestra se tomó muy cerca de la superficie del suelo, por lo que se encontraba en
condiciones aerobias. Existió un pH cercano a 7, por lo que se podría decir neutro, a lo cual
se desarrollan medianamente. La temperatura fue un poco baja, pero las bacterias
mesofílicas aerobias, pueden crecer muy bien en el sitio de muestreo.

36
6.3.5 Estación 5
En la estación cinco predominan suelos vertisoles pélicos de textura fina el cual se
caracteriza por ser un suelo negro de arcillas expansivas, lo que provoca que en
temporadas de sequía se formen grietas por la expansión y contracción de las partículas
que componen este suelo; esto hace que predomine en este sitio un suelo con horizonte A,
es decir con gran contenido en materia orgánica o humus que se encuentra íntimamente
mezclada con la fracción mineral del suelo.
El suelo en la estación cinco es un suelo básico ya que tiene un intervalo de pH de 7.30 a
8.75. Para observar cómo afectan todos estos factores en la diversidad microbiana, se
determinó la cantidad de actinomicetos en la muestra de suelo lo cual nos da un valor de
3.60x106 UFC/g(BS) de actinomicetos determinado por el equipo 10 y de valor 6.82x106
UFC/g(BS) determinado por el equipo 5 en esta estación de muestreo. Estos valores indican
que existe una gran cantidad de actinomicetos en esta estación, ya que el crecimiento de
actinomicetos se ve favorecido por un intervalo de pH de 5 a 7, también se ven favorecidos
por le presencia de materia orgánica en descomposición, esta materia orgánica se
encuentra disponible en esta estación por los restos de árboles y hojarasca proveniente de
los árboles que rodean el lugar; esta materia orgánica es usada por los actinomicetos como
fuente de carbono , ya que estos tiene la capacidad de degradar azúcares simples,
proteínas, ácidos orgánicos hasta substratos muy complejos compuestos por
hemicelulosas, ligninas, quitinas y parafinas. Por esto son importantes en el proceso de
transformación hasta la obtención del humus en el suelo. Además, son considerados como
los mejores agregadores del suelo, pues son muy eficientes produciendo sustancias
húmicas.
Los actinomicetos también ven favorecido su crecimiento en suelos con baja humedad
como es el caso en esta estación el porcentaje de humedad en el suelo es bajo de 7% a
12%. Los actinomicetos son aerobios estrictos, por lo que el porcentaje de humedad bajo
favorece el ambiente óxico lo cual permite un crecimiento de actinomicetos. Pueden
producir esporas y estas hacen que sean resistentes a condiciones difíciles de temperatura,
acidez y humedad, encontrándolos como organismos viables en el suelo.
Para el caso de los hongos filamentosos se reportaron bajos valores de microrganismos en
el equipo 5 1.02x107 y el equipo 10 en sus resultados presentados no presentaron
crecimiento de hongos filamentosos en las placas de agar rosa de bengala; el mínimo
crecimiento presentado es debido a que el pH óptimo para el crecimiento de los hongos
filamentosos es por debajo de 5, un pH muy acido, y el suelo en la estación 5 es pH básico.
Los hongos filamentosos se ven beneficiados con una humedad relativamente baja, sin
embargo, en este caso el pH fue un factor predomínate para limitar el crecimiento de los
hongos filamentosos.
Las bacterias mesofílicas aerobias son un grupo de bacterias que crecen en condiciones
oxicas, el valor bajo de humedad favorece el ambiente óxico en la estación 5, también tiene
un una temperatura optima de crecimiento que va de 20 a 37 °C, en la estación 5 se observó
una temperatura de 19°C a la sombra lo cual nos indica que este grupo de bacterias se vio
favorecido por las condiciones presentadas en la estación, dando como resultado para el
equipo 5, 9.09x106 y por el equipo 10, 3.17x106 UFC/g(BS). Las bacterias mesofílicas
aerobias son utilizadas como indicador de contaminación o presencia de organismo

37
patógeno. La presencia de un número elevado de bacterias aerobias mesófilas que crecen
bien a temperatura 20 a 37°C, significa que pueden haberse dado condiciones favorables
a la multiplicación de los microorganismos patógenos de origen humano o animal. Pero no
todas las bacterias mesofílicas aerobias son perjudiciales para el suelo, existen otros
géneros bacterianos más importantes agrícolamente por la transformación de los
compuestos orgánicos e inorgánicos y que favorecen la nutrición de las plantas están:
Bacillus, Pseudomonas, Azotobacter, Azospirillum, Beijerinckia, Nitrosomonas, Nitrobacter,
Clostridium, Thiobacillus, Lactobacilos, y Rhyzobium.
6.4 Aire
6.4.1 Estación 1
El estudio de poblaciones microbianas en el aire en la estación 1 alojó cantidades
importantes de UFC/m (en órdenes de 10 ) para Bacterias mesofílicas aerobias, Hongos
2 4

filamentosos y Microorganismos fecales, siendo estos últimos los que se encontraban en

menor medida. La presencia de estos microorganismos indican una alta cantidad de materia
orgánica en el suelo y agua de esta estación, además de un aprovechamiento de la
velocidad del viento (5.5-7.9 m/s) considerado como brisa moderada capaz de mover
pequeñas ramas y cuya dirección era de sur a norte, utilizando el aire como medio de
transporte, sin embargo, no permanecen en él debido a una deficiencia de nutrientes, es
por eso que se observa una cantidad de microorganismos mayor a 0 m que a 1.5 m. Los
resultados obtenidos de las UFC de microorganismos coliformes nos indican que existe
contaminación por materia fecal, el río está siendo contaminado por la descarga de aguas
residuales urbanas en algún punto anterior a la estación 1, lo cual perjudica la calidad
incluso del aire.
6.4.2 Estación 2
Notamos que en cero metros obtuvimos 2 y 10 UFC/ 5 minutos de Bacterias Mesofílicas
Aerobias esta diferencia se debe a que un equipo lo colocó en otra parte del río donde la
corriente de aire era de menor velocidad. Eso a su vez cambia cuando la altura es de 1.5m,
los valores son de 2 y 4.5 UFC/ 5 minutos lo cual es posible debido a que una muestra fue
tomada exponiéndose al Sol mientras que las otras se encontraban en la sombra. La
temperatura afectó para que estas bacterias pudieran crecer.
Con los microorganismos coliformes se puede apreciar que en la altura de 1.5 metros hay
mayor cantidad que en la de cero metros por lo que se deduce que la presencia de éstos
es ocasionada por la corriente de viento esto se debe que alrededor de la exposición de las
placas se encontraban alrededor de árboles con una altura aproximadamente de tres
metros.
Los hongos filamentosos en las rocas (cero metros) se encontraron en mayor proporción
debido a la humedad que había.
6.4.3 Estación 3
Para la estación tres, debido a la enorme cantidad de aerosoles consecuentes de la caída
de la cascada utilizados como medio de transporte por los microorganismos, se encontraron
grandes cantidades de estos en todas las placas a 0.0 m como en las de 1.5 m. Este
comportamiento variado entre el crecimiento de microorganismos coliformes y hongos

38
filamentosos puede ser explicado por el sentido y velocidad del viento, la zona específica
donde se colocó la placa y, en el caso de las estaciones con caídas de agua, de los
aerosoles.
Esto es alarmante ya que esta zona es utilizada por muchos lugareños como lugar
recreativo, y específicamente esta estación debido a que tiene un mayor atractivo visual.
Estas personas consumen alimentos exponiéndolos previamente a estos aerosoles, y como
se pudo observar en los cultivos, la cantidad de bacterias y hongos que contienen es
elevada. Esto resulta peligroso para la salud de la comunidad, más específicamente para
niños, ancianos o personas vulnerables.
6.4.4 Estación 4
De acuerdo a las condiciones de la estación 4, temperatura de 18°C, pH entre 6 y 8 de
ambos equipos, y dirección (1.6-3.3 m/s) y velocidad del viento (NE-SO), que son factores
indispensables para conocer el comportamiento de los microorganismos, se encontró una
cantidad de UFC considerada ya que el registro de una baja temperatura acompañada por
la presencia de humedad y áreas arbóreas, así como de la actividad baja del viento en la
estación, causan que la mayoría de los microorganismos tengan una baja dispersión en el
ambiente. Se obtuvo una baja cantidad de hongos filamentosos a nivel de suelo,
comparándolos con las bacterias mesofílicas aerobias y los microorganismos coliformes,
esto debido a la baja temperatura a la que se encontraba el sitio, ya que los hongos
filamentosos se desarrollan a temperaturas mayores a 25°C. También se sabe que, a mayor
altura, existe una menor presencia de microorganismos.
6.4.5 Estación 5
Evaluando estos datos y viendo por el otro lado los resultados de la estación 5, se nota una
gran diferencia; podemos decir que es el efecto de los aerosoles y de igual manera la
presencia de árboles y elevaciones en el área de muestreo de la estación, estos
proporcionan un “refugio” el cual es un obstáculo que se le presenta al viento por lo cual
podemos deducir que no se presentó una cantidad similar al de la estación 3. La velocidad
del viento también es un factor a resaltar ya que la obstrucción por parte de los árboles, el
ascenso o el descenso de la zona ofrece un valor diferente mostrando en la estación 1 una
variación entre 1.6 y 7.9 m/s, mientras que en la estación 5 se mantuvo contante con una
velocidad de 1.6 a 3.3 m/s con una dirección de norte a sur
La estación 5 se mantiene entre estas dos estaciones teniendo una temperatura de 19°C,
podemos comprar fácilmente con la estación 4 ya que no se encontraba tan lejos y posee
un grado menos que la 5. La temperatura del aire no es estable y está muy influenciada por
los cambios que se producen entre el día y la noche, ya que el Sol calienta las masas de
aire al irradiar energía hacia la Tierra y ésta devolverla en forma de radiación infrarroja que
calienta el aire. Por la noche, al no recibir la energía solar, el aire se enfría teniendo su
punto mínimo de temperatura poco antes del amanecer. Las diferencias de presión en la
atmósfera pueden dar lugar a movimientos de masas de aire, puesto que el aire se mueve
de las regiones de presiones más altas a las de presiones más bajas, hasta que la presión
se iguala. De nuevo un parámetro que muestra su influencia es la presencia de vegetación,
en especial árboles ya que estos proporcionan un ambiente fresco debido a la cantidad de
luz que dejan pasar, la estación 4 estaba rodeada de ellos presentando una zona de sombra
en la cual era poca la luz solar que dejaban pasar, a diferencia de ello la estación 5 se

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encontraba en un pequeño claro donde se podía fácilmente observar el curso del río y la
división que posee éste.
7. CONCLUSIONES

• Se considera el estado de las cascadas de Atlihuetzia como contaminado

• La contaminación incluye materia orgánica en exceso, residuos fecales y diversos
compuestos no especificados con efecto tóxico en la comunidad microbiana
• La diversidad microbiana hallada denota un desequilibrio en los procesos
biogeoquímicos a lo largo de los sitios de muestreo

8. MEDIDAS CORRECTIVAS

• Realizar series de análisis en diferentes periodos del siguiente año, recopilar

información y hacer un perfil detallado de cada uno de los estratos del lugar.
Después, recurrir a alguna de las técnicas de biorremediación existentes con el fin
de restaurar el lugar
• Construcción de una Planta de Tratamiento de Agua Residual que procese todo el
afluente antes de ser vertido al rio
• Revisión de la legalidad de las descargas, conforme a las normas establecidas
• Acercar a la población la información que permita crear conciencia sobre el
ambiente, a través de campañas con información atinada y de fácil comprensión

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9. BIBLIOGRAFÍA

• GIMENO, A. (2017). Principales factores condicionantes para el desarrollo de los

hongos y la producción de micotoxinas (2-5). [en línea ] Engormix. Disponible en:
https://www.engormix.com/micotoxinas/articulos/principales-factores-
condicionantes-desarrollo-t26065.htm [Revisado el 3 Sep. 2017].
• Gliessman Stephen R. Agroecología, Procesos Ecológicos en Agricultura
Sostenible. Las Plantas y los Factores Ambientales (2002). Página 64. Litocat,
Turrialba, Costa Rica.
• Glynn Henry J., Heinke W. Ingeniería Ambiental. Segunda edición (1999). Capítulo
8: Microbiología y epidemiología., páginas 275-276. Pearson Educación. México.
• Degradación de Plaguicidas, Sixto Malato Rodríguez, Julián Blanco Gálvez, Claudio
A. Estrada Gasca y Erick R. Bandala. Cap. 12, pág 269-271. Enlace web:
http://www.msal.gob.ar/agroquimicos/pdf/Degradacion-de-plaguicidas-CNEA.pdf

• Mineralización de Plaguicidas, Manual de Desarrollo de Prácticas: Microbiología

Ambiental. Pract.14, pág. 77-78
• BIODEGRADACIÓN BACTERIANA DE PLAGUICIDAS PERMETRINA Y
CIPERMETRINA EN CULTIVO LOTE. José C. Mendoza. [en línea], consultado el
13 de noviembre del 2017 de:
http://www.exeedu.com/publishing.cl/av_cienc_ing/2011/Vol2/Nro3/5-ACI1070-11-
full.pdf

• CONTRIBUCIÓN AL ESTUDIO DE LA DEMANDA BIOQUÍMICA DE OXÍGENO

(DBO) TESIS, ING. MARIA MAGDALENA DEL ANGEL SANCHEZ. MONTERREY,
N.L. JUNIO-1994. Enlace electrónico:
http://eprints.uanl.mx/7204/1/1020091184.PDF
• Métodos normalizados para el análisis de aguas potables y Residuales. APHA,
AWWA, WPCF. 17 Edición. Ed. Díaz de Santos S.A 1992
• Norma Mexicana NMX-AA-012-SCFI-2011.Análisis de aguas. Determinación de
oxígeno Disuelto
• Los principales factores ambientales y de suelos que influyen sobre la productividad
y el manejo. FAO. UV. [en línea], consultado el 06 de octubre del 2017 de:
https://www.uv.mx/personal/tcarmona/files/2010/08/FAO-2000.pdf>

• “Los actinomicetos en la fertilidad y producción agrícola” Juan Manuel Sánchez-

Yáñez, Javier Villegas Moreno y Liliana Marquez B. Laboratorio de Microbiología
Ambiental, Instituto de Investigaciones Químico Biológicas. México
• Los actinomicetos como fuente de productos de interés biotecnológico.
BIOTECNOLOGÍA, [en línea], consultado el 05 de octubre del 2017 de:
https://biotecnologia.fundaciontelefonica.com/2010/06/18/los-actinomicetos-como-
fuente-de-productos-de-interes-biotecnologico>
• Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B y Velázquez O. Técnicas para
el Análisis Microbiológico. Segunda edición. Facultad de Química, Universidad
Nacional Autónoma, México. 2009 [Consultado 23 de agosto de 2013]. Disponible
en:
http://depa.pquim.unam.mx/amyd/archivero/TecnicBasicas-Cuenta-
mohoslevaduras_6530.pdf

41
• Mora AD. Evolución de las guías microbiológicas de la OMS para evaluar la calidad
del agua para consumo humano 1984-2004. Laboratorio Nacional de Aguas.
Instituto Costarricense de Acueductos y Alcantarillados, Costa Rica: 2005.

• Rodriguez, P, Servicio Ambiental de la Presa Valsequillo para las cuencas de los

Ríos Atoyac-Sahuapan y Alseseca, Puebla, Tlaxcala, México, Recuperado de:
http://www.inecc.gob.mx/descargas/cuencas/2011_cnch2_mon_prodriguez.pdf

• Programa de apoyo al desarrollo hidráulico de los estados de Puebla, Oaxaca y

Tlaxcala (PADHPOT), 2010, Recuperado de:
http://www.agua.unam.mx/padhpot/noticias/2016/tlaxcala/not_tlaxcala_abril14.html

• Morales, Pedro, En Tlaxcala sigue el daño por la contaminación del agua, 2016,
Recuperado de:
http://www.agua.unam.mx/padhpot/noticias/2016/tlaxcala/not_tlaxcala_abril14.html

• Microbiología, Recuperado de:

https://www.azc.uam.mx/cbi/quimica/microbiologia/micro.html

• Serment, Jorge; Lara, Erik; Becerril, Karina; Suárez, Sergio; Ramírez, Ninfa,
Detección y aislamiento de microorganismos exoelectrógenos a partir de lodos del
rio Lerma, Estado de México, México, 2017, Recuperado de:
http://www.revistascca.unam.mx/rica/index.php/rica/article/view/RICA.2017.33.04.0
6/46715

• Water Boards. Recuperado el 21 de Noviembre del 2017 de

https://www.waterboards.ca.gov/water_issues/programs/swamp/docs/cwt/guidance
/3110sp.pdf.

• NMX-AA-042-SCFI-2015 ANÁLISIS DE AGUA - ENUMERACIÓN DE

ORGANISMOS COLIFORMES TOTALES, ORGANISMOS COLIFORMES
FECALES (TERMOTOLERANTES) Y Escherichia coli – MÉTODO DEL NÚMERO
MÁS PROBABLE EN TUBOS MÚLTIPLES.
https://www.gob.mx/cms/uploads/attachment/file/166147/nmx-aa-042-scfi-2015.pdf

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