División de Ciencias Naturales y
Exactas
Laboratorio de genética
Dra. Gloria Angélica Gónzalez Hernández
Práctica:
DROSOPHILA MELANOGASTER:
MUTACIONES MONOGENICAS Y CRUZAS
MONOHIBRIDAS.
Karla Yesenia Rojas Hernández
Luis Gerardo Alvarado Padrón
Alejando Zarate Ortega
Octubre del 2019
OBJETIVO
Determinar las características morfológicas y sexuales externas de
Drosophila melanogaster para identificar presencia de mutaciones en las
muestras de insectos a analizar.
PROTOCOLO
PARTE I
1. Primeramente, durante una semana se colocó un frasco que contenía un
trozo de plátano como trampa para atrapar moscas de la fruta (Drosophila
melanogaster). Al observar aproximadamente 5-7 moscas dentro de la
trampa, ésta se tapó con una servilleta y se mantuvo el frasco en un lugar
tibio.
2. Posteriormente, la trampa fue llevada al laboratorio para realizar el cambio
de moscas a un frasco con medio de cultivo óptimo para la reproducción de
Drosophila melanogaster.
3. Pasada la semana se trajeron las moscas en el frasco con medio de cultivo
y se sedaron con un poco de éter con algodón volteando el frasco al revés
para evitar que cayeran al medio.
4. Después, una vez sedadas se extrajeron del frasco, se colocaron en otro
recipiente y se observaron en el estereoscopio separando machos y
hembras segun sus características distintivas.
5. Por último, se desecharon las moscas y el medio de cultivo en “la morgue
de moscas”.
PARTE II: CRUZAS MONOHIBRIDAS
1. Se nos proporcionaron varios tubos específicos con moscas Drosophila
melanogaster siendo tubos con los parentales (P), con la CRUZA de los
parentales, la primera generación filial (F1) y la segunda generación filial
(F2), en los cuales se encontraban especímenes con mutaciones.
2. De igual forma se sedaron las moscas con un algodón con éter y se
procedió a identificar, observar y anotar las características provenientes de
cada tubo utilizando el estereoscopio, enfocándonos en la búsqueda de la
característica alternativa o mutación en cada caso, observando para ello
color y forma de ojos, cuerpo y la forma de las alas.
3. Se observó cada espécimen de cada tubo tomando fotos y anotaciones
para después desechar las moscas.
RESULTADOS
Tabla de conteo de hembras y machos de Drosophila melanogaster
Machos Hembras
53 42
Macho
Hembra
Tabla de mutaciones de Drosophila melanogaster
Número del Fenotipo de hembras y machos Genotipo Gametos que
mutante Hembras Machos producen
1 Ojos blancos Ojos blancos Gen w w
Cromosoma 2
Lugar 57.5
2 Albinas Albinas Gen sb sb
Cromosoma 1
43.0
3 Cuerpo gordo Cuerpo gordo Gen gt gt
Cromosoma 1
Lugar 0.9
4 Alas cortas Alas cortas Gen ap Ap
Cromosoma 2
Lugar 55.2
5 Ojos escarlata Ojos escarlata Gen v V
Cromosoma 1
Lugar 33
6 Cuerpo café Cuerpo café Gen e E
oscuro oscuro Cromosoma 3
Lugar 70.7
7 Sin pigmentación Sin pigmentación Gen y y
Cromosoma 1
Lugar 0
Figura 1. Mutación I Figura 2. Mutación II Figura 3. Mutación III
Figura 4. Mutación IV Figura 5. Mutación V Figura 6. Mutación VI
Figura 7. Mutación VII
Tabla de cruza monohibrida de Drosophila Melanogaster
Cruza parentales Macho Hembra
Genotipo SeSe sese
Fenotipo Ojos rojos Ojos sepia
Gametos P Se se
F1 Macho Hembra
Genotipo Sese Sese
Fenotipo Ojos rojos Ojos rojos
F1xF1 Sese x Sese
Gametos Se Se
F2 Macho Hembra
Genotipo SeSe, Sese, sese SeSe, Sese, sese
Fenotipo Ojos rojos 75% Ojos rojos 75%
Ojos negros 25% Ojos negros 25%
Figura 8. Cruza monohibrida. Hembra con
Figura 9. F1 hembras y machos con ojos
ojos color sepia y macho ojos normales normales
Tabla 1. Cuadro de Punnet de la cruza Se Sese Sese
monohibrida Se se
se se Se SeSe Sese
Tabla 2. Cuadro
Se Sese Sese se Sese sese de Punnet de la
F1
OBSERVACIONES Y DISCUSIÓN
Se analizaron 7 tipos de medios para el crecimiento de dos tipos de cepas (Y1 y
Y7) de levadura, de los cuales se puede observar (Tabla 1) que en el medio YPD
hubo un crecimiento positivo (Imagen 1) de ambas sepas, mientras que en el
Medio Mínimo (MM) (Imagen 2) fue donde no hubo crecimiento alguno; aunque se
puede observar
APLICACIÓN EN EL ÁREA DE QFB
“Drosophila melanogaster, un modelo animal emergente en el estudio de
enfermedades cardíacas humanas”.
Drosophila melanogaster ha estado siendo utilizado como “modelo” para el estudio
de diversas enfermedades tales como cáncer, enfermedades cardiovasculares
etc., ya que su genoma posee una gran conservación de genes en relación a
mamíferos, es decir poseen similitudes genéticas (analogía) con respecto a seres
humano. Como ejemplo la fisiología cardiaca en estas moscas y humanos es muy
parecida, las proteínas que intervienen en el acoplamiento excitocontráctil (AEC)
cardíaco están codificadas por genes muy similares entre el humano y la mosca.
El AEC es un proceso que induce un aumento del calcio citosólico intracelular
(Ca2+) necesario para la contracción cardíaca. Al aumento y disminución del Ca 2+
se le llama transitorio de Ca 2+ y las alteraciones del AEC en humanos pueden
conducir, a una sobrecarga de Ca2+ que contribuye al daño asociado a procesos
de isquemia/repercusión y a la producción de arritmias.
El objetivo es analizar los mecanismos moleculares y genéticos que regulan la
función cardíaca del corazón de la mosca adulta (envejecimiento modifica el
transitorio de Ca2+) que ocurre de manera análoga a los humanos, para analizar el
efecto de la desregulación de genes cardíacos y no cardíacos sobre la función del
corazón, aplicar estrategias farmacológicas, para bloquear o exacerbar funciones
de proteínas que manejan el Ca 2+ en el tejido cardíaco y estudiar los mecanismos
moleculares y genéticos de los efectos dañinos de las adicciones.
El procedimiento resumido seria el siguiente: LLEVAR A CABO LA CRUZA:
1. Se colocan los grupos de moscas en medios de cultivos con mezcla de
harina de maíz, glucosa, agar y extracto de levadura para su crecimiento y
reproducción.
2. Se realiza una cruza entre un grupo Canton-S y otro de moscas
transgénicas que expresan un sistema reportero genéticamente modificado,
llamado GCaMP3 que puede parar los aumentos de Ca 2+, la F1 portara una
1
copia del sistema reportero que codifica para una proteína fluorescente
verde, expresada únicamente en el corazón.
OBTENCION DEL PREPARADO Y ANALISAR FUNCION CARDIACA:
1. Realizar disecciones usando estereoscopio y anestesiando moscas con
CO2 y sumergirlas en Hemolinfa artificial oxigenada y eliminar cabeza, tórax
y órganos abdominales dejando al corazón expuesto.
2. Se registró la señal fluorescente de los transitorios de Ca 2+ en una cámara
cónica, utilizando un microscopio confocal Carl Zeiss 410.
3. Se midió la amplitud de los transitorios (expresada en unidades arbitrarias)
según la fórmula (F-F0 )/F0 , donde la F es la fluorescencia máxima del
transitorio y la F0 la fluorescencia mínima, la frecuencia cardíaca expresada
en latidos por minuto (lpm) y la constante de relajación (tau), expresada en
segundos.
4. Se calculó el índice de arritmias como el cociente entre la desviación
estándar y el promedio del período cardíaco, donde este último es el
intervalo entre los picos máximos de dos transitorios consecutivos.
5. Se agregó una dosis de cafeína de 10 mM.
TRATAMIENTO ESTADÍSTICO:
1. Las comparaciones entre moscas de 3, 7 y 40 días se realizaron mediante
ANOVA de una vía con corrección de Bonferroni y las comparaciones sin
cafeína y con cafeína se realizaron con la prueba de t de Student
considerando diferencias significativas según p ≤ 0,05.
Según los resultados: las estriaciones, propias del ordenamiento de las fibras
contráctiles, son similares a lo observado en el músculo cardíaco del mamífero, lo
cual indica similitud entre los tejidos cardiacos de la mosca y mamífero. Tambien
se confirmó que a medida que las moscas envejecían afectaban el transitorio de
Ca2+ reduciendo la frecuencia cardiaca.
Imagen #... Se observan registros típicos de frecuencia cardíaca espontánea en
moscas de 3, 7 y 40 días de edad.
CUESTIONARIO
2
1. ¿Encontraste moscas con fenotipos distintos a los que se reportan
como silvestres?
No se encontraron fenotipos distintos de los silvestres
2. ¿Por qué́ crees que obtienes esos resultados?
Debido a que durante la reproducción solo se encuentran los genotipos
silvestres y además hay poca probabilidad de que existan mutantes dentro
de la naturaleza debido a que es muy poco probable que exista una mosca
que posea un genotipo doble homocigoto recesivo el cual pudiera contener
alguna anomalía.
Otra razón pudiera ser que los especímenes no se encontraban en un
ambiente que pudiera influir en su fenotipo e incluso en su genotipo ya que
las mutaciones también se pueden dar por factores externos como lo es la
radiación.
3. ¿Bajo qué́ condiciones crees que encontrarías resultados distintos?
En un ambiente controlado donde se pudiera encontrar alguna mosca
mutante controlando su reproducción y crecimiento así lograríamos
encontrar moscas con fenotipos distintos a los silvestres o como se
mencionó anteriormente en un ambiente que pudiera modificar su genotipo
por factores externos.
4. ¿Qué proporciones genotípicas y fenotípicas se obtendrían de la cruza
de organismos de la F1 X el progenitor con el carácter dominante?
F1 \ Progenitor e+ e+
dominante
e+ e+e+ e +e +
e e+e e +e
- Progenitor con
carácter dominante: e+e
-F1 heterocigoto e+e
e+: cuerpo silvestre y e: cuerpo ébano
En proporciones genotípicas tendríamos ½ de homocigoto dominante AA y ½ de
heterocigoto Aa.
3
5. ¿Qué proporciones genotípicas y fenotípicas se obtendrían de la cruza
de organismos de la F1 X el progenitor con el carácter recesivo?
-Progenitor con carácter dominante: aa
-F1 heterocigoto e+e
e+: cuerpo silvestre y e: cuerpo ébano
En cuanto a las proporciones genotípicas se tienen ½ de heterocigoto e+e y
½ de ee homocigoto dominante.
F1 \ e e
Progenitor
recesivo
e+ e+e e +e
e ee ee
6. ¿Qué resultado se obtendrías en la F1 y la F2 de la siguiente cruza:
hembras con ojos de color sepia (s) por machos con ojos rojos (S)?
F1: F2:
Ojos rojos F1
Ojos sepia S S F1 S s
En la
s Ss Ss F1 S SS Ss
todos
s Ss Ss son s Ss ss
heterocigotos con ojos color rojo. Es decir
su genotipo todos son Ss, pero su fenotipo todos son ojos color rojo.
En la F2 se obtendrá un homocigoto dominante (con ojos rojos), dos heterocigotos
(con ojos rojos) ¾ y uno recesivo (con ojos sepia) ¼. En una proporción fenotípica
de 3:1.
En cuanto a genotipos seria ¼ SS, ½ Ss y ¼ ss
7. ¿Qué resultado se obtendrías en la F1 y la F2 de la siguiente cruza:
machos con ojos de color sepia (s) por hembras con ojos rojos (S)?
4
Los resultados serían lo mismo que en el problema anterior pues solo
cambiarían los progenitores en el caso anterior macho es SS y hembra ss,
en este caso macho es ss y hembra SS, sin embargo las generaciones
filiales 1 y 2 tendrían los mismos resultados ya que este gen de sepia es
autosómico es decir independiente del sexo afectando con igual
probabilidad a las hijas e hijos ya sea que la mutación sea por parte del
padre o sea por parte de la madre al final tendrán las mismas
probabilidades.
8. ¿Qué resultado se obtendrías en la F1 y la F2 de la siguiente cruza:
machos con ojos rojos y grandes (bar) por hembras con ojos rojos en
barra (Bar)?
F1: F2:
H:Ojos bar F1
M:Ojos Grandes XSB XSB F1 XSB Y
XSb XSB XSb XSBXSb XSB XSB XSB XSBY
Y XSBY XSBY XSb XSBXSb XSbY
En la F1 tenemos según proporciones fenotípicas tenemos todas las hembras con
ojos barra e igual todos los machos barra, en general toda la progenie tendrá ojos
barra. Según genotipos tendremos ½ XSB XSb y ½ XSBY.
En la F2 según proporciones fenotípicas tenemos todas las hembras con ojos
barra y ½ machos barra y ½ machos ojos grandes, en general tendríamos
contando tanto hembras como machos ¾ ojos bar y ¼ ojos grandes. En cuanto a
genotipos ¼ XSB XSB, ¼ XSBXSb, ¼ XSBY, ¼ XSbY.
5
9. Enuncia la Primera Ley de Mendel e indica cuál o cuáles de las cruzas
anteriores la ejemplifica.
Esta ley defiende que al cruzar una raza pura de una especie (AA) con otro
individuo de raza pura de la misma especie (aa), la descendencia de la
primera generación filial será fenotípicamente y genotípicamente igual entre
sí (Aa) y fenotípicamente igual a uno de los miembros de la generación
parental, en concreto, al portador del alelo dominante (A). Y se puede
observar en la cruza F1 de la pregunta 3 y 4.
Bibliografía:
http://www.biologia.arizona.edu/mendel/sets/mono/13t.html
https://es.slideshare.net/jorgearizpe/13-cruzas-monohibridas
http://wpd.ugr.es/~fperfect/PDFs/2011-ManualdeProblemas-Genetica.pdf
http://prepa.chapingo.mx/pdf/genetica.pdf
http://ciber-genetica.blogspot.com/2016/02/mutantes-de-drosophila-
melanogaster.html
https://www.slideshare.net/CiberGenetica/drosophila-cruza-mendeliana
http://www.scielo.org.mx/pdf/tip/v19n2/1405-888X-tip-19-02-00116.pdf
https://flybase.org/reports/FBgn0000527#pathways_sub
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/42522
https://slideplayer.com/slide/10097582/
http://evolutionibus.eresmas.net/drosophila.html
https://www.sac.org.ar/wp-content/uploads/2016/12/v84n5a3-es-1.pdf
