Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Métodos de Análisis

Práctica: Análisis Espectrofotométrico de un Sistema Múltiple

Alumna: Barbosa Teniente María de Jesús

Grupo: 5QV2 Sección: 4

Profesor: Víctor Manuel Macías Tenorio

Fecha de Entrega: 20 de Septiembre de 2019.

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Introducción
El análisis de varias especies absorbentes presentes en una muestra se puede realizar sin
separar necesariamente los analitos, ya que cada analito presenta espectros de absorción
diferentes. En el análisis simultáneo se aplica el principio de aditividad de las absorbancias:

A total = A1 + A2
A = ambc
Si consideramos dos longitudes de onda:

Aλ 1 = amAλ1 b CA +amBλ1 b CB
Aλ 2 = amAλ2 b CA +amBλ2 b CB
La absortividad molar a cada longitud de onda se obtiene a partir de las curvas de calibración
como valor de pendientes preparadas con patrones de cada componente o de las curvas
espectrales y Ca y Cb resultan las incógnitas. Para manejar un sistema múltiple hay que
considerar que los componentes no deben presentar interacciones químicas entre sí ni con el
solvente comportándose cada mezcla o analito como independiente, además para poder escoger
longitudes de onda donde se considera que una absorba más a una longitud, menos en la otra y
viceversa para que pueda cumplirse la ley de la aditividad.

Fundamento
La Ley de la Aditividad afirma que la absorbancia de un sistema múltiple es una propiedad aditiva
y supone que no hay interacción química entre los cromóforos. Se aplica cuando se requiere
realizar un análisis de mezclas, donde es requisito indispensable que las longitudes de onda
máxima de los componentes no sean demasiado cercanas entre sí.

Objetivos
 Determinar el cumplimiento de la Ley de Aditividad de un sistema múltiple.
 Identificar las constantes fotométricas para realizar el cálculo de la concentración de los
componentes del sistema múltiple utilizado.

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 Resultados
 Determinación de las longitudes de onda de trabajo (λ1 y λ₂).

Tabla 1. Valores de absorbancia

obtenidas de K2Cr2O7 y KMnO4.

Longitud A B
de onda K2Cr2O7 KMnO4
(nm)
340 3 0.462 3.5

350 3 0.429 3
360 3 0.363
2.5
Absorbancia

370 2.407 0.262

380 2
1.938 0.176
390 1.344 0.109 1.5
400 0.864 0.067 1
410 0.623 0.046
0.5
420 0.589 0.043
430 0.616 0.049 0
300 350 400 450 500 550 600 650
440 0.634 0.064
λ (nm)
450 0.612 0.093
K2Cr2O7 KMnO7
460 0.559 0.13
470 0.475 0.201 Figura 1. Espectros de absorción obtenidos para K2Cr2O7 0.0016 M
480 0.376 0.276 y KMnO7 0.0004 M.
490 0.277 0.397
500 0.194 0.508
510 0.125 0.629
Tabla 2. Valores máximos de longitud de
520 0.073 0.734
onda para K2Cr2O7 y KMnO4.
530 0.041 0.777
540 0.02 0.729 Compuesto ʎmáx
550 0.009 0.723 K2Cr2O7 370
560 0.005 0.448 KMnO4 500
570 0.002 0.241
580 0.002 0.125
590 0.001 0.095
600 0 0.083

3
 Obtención de las absortividades molares de cada componente a las dos longitudes de
onda seleccionadas (λ1 y λ₂).

Tabla 3. Valores de absorbancia para K2Cr2O7 y KMnO4 a 370 nm y 500 nm.

Compuesto Dilución Concentración A370 A500
molar
1:7 0.00022 0.402 0.023
1:6 0.00026 0.461 0.024
1:5 0.00032 0.579 0.039
K2Cr2O7
1:4 0.00040 0.62 0.041
1:3 0.00053 0.844 0.059
1:2 0.00080 1.325 0.096
1:7 0.000057 0.014 0.056
1:6 0.000066 0.028 0.068
1:5 0.00008 0.038 0.091
KMnO4
1:4 0.0001 0.052 0.105
1:3 0.00013 0.076 0.153
1:2 0.0002 0.115 0.233

1.4
y = 1586x + 0.0315
1.2 R² = 0.9904

1
Absorbancia

0.8

0.6

0.4
y = 127.47x - 0.0071
0.2
R² = 0.9865
0
0 0.0001 0.0002 0.0003 0.0004 0.0005 0.0006 0.0007 0.0008 0.0009
Concentración [M]

A370 A500 Linear (A370) Linear (A500)

Figura 2. Curva de calibración para K2CrO7 a 370 nm y 500 nm.

4
 0.25
y = 1232.9x - 0.0133
R² = 0.9971
0.2

Absorbancia
0.15
y = 684.55x - 0.0189
R² = 0.9892
0.1

0.05

0
0 0.00005 0.0001 0.00015 0.0002 0.00025
Concentración [M]
A370 A500 Linear (A370) Linear (A500)

Figura 3. Curva de calibración para KMnO4 a 370 nm y 500 nm.

Tabla 4. Valores de am para K2Cr2O7

y KMnO4 a A370 y A500 (λ1 y λ2). La absortividad molar es obtenida a partir de la
Sustancia ecuación de la recta al ingresar los datos de la
K2Cr2O7 KMnO4 tabla 3 al programa Excel, donde:
Asbsortividad
am a λ₁ 1586 684.55 y 𝐴
am a λ₂ 127.47 1232.9 𝑏= = 𝑎= ,
x 𝑐
𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑜 𝑡𝑎𝑛𝑡𝑜 𝑏=𝑎
 Comprobación de la Ley de la Aditividad en un Sistema Múltiple.

Tabla 5. Valores de Cm y absorbancia en las Tabla 6. Valores observados y calculados de absorbancia

mezclas de K2Cr2O7 y KMnO4. de las mezclas de K2Cr2O7 y KMnO4 a (λ1 y λ2).
Mezcla Cm Cm A observada Mezcla A observada A calculada
N° K2Cr2O7 KMnO 4 λ₁ λ₂ N° λ₁ λ₂ λ₁ λ₂
1 0.0008 0.00004 1.446 0.143 1 1.446 0.143 1.296 0.151
2 0.0004 0.0001 0.748 0.161 2 0.748 0.161 0.703 0.174
3 0.00016 0.0002 0.416 0.27 3 0.416 0.27 0.391 0.267

Cálculos:
L 𝑚𝑜𝑙 𝐿 𝑚𝑜𝑙
Mezcla 1: 𝐴λ₁ = [(1586 mol cm) (0.0008 ) (1 𝑐𝑚)] + [(684.55 ) (0.00004 ) (1 𝑐𝑚)] = 1.296
𝐿 𝑚𝑜𝑙 𝑐𝑚 𝐿

L 𝑚𝑜𝑙 𝐿 𝑚𝑜𝑙
𝐴λ₂ = [(127.47 ) (0.0008 ) (1 𝑐𝑚)] + [(1232.9 ) (0.00004 ) (1 𝑐𝑚)] = 0.151
mol cm 𝐿 𝑚𝑜𝑙 𝑐𝑚 𝐿

5
 L 𝑚𝑜𝑙 𝐿 𝑚𝑜𝑙
Mezcla 2: 𝐴λ1 = [(1586 mol cm) (0.0004 𝐿
) (1 𝑐𝑚)] + [(684.55
𝑚𝑜𝑙 𝑐𝑚
) (0.0001
𝐿
) (1 𝑐𝑚)] = 0.703

L 𝑚𝑜𝑙 𝐿 𝑚𝑜𝑙
𝐴λ₂ = [(127.47 ) (0.0004 ) (1 𝑐𝑚)] + [(1232.9 ) (0.0001 ) (1 𝑐𝑚)] = 0.174
mol cm 𝐿 𝑚𝑜𝑙 𝑐𝑚 𝐿

L 𝑚𝑜𝑙 𝐿 𝑚𝑜𝑙
Mezcla 3: 𝐴λ₁ = [(1586 mol cm) (0.00016 ) (1 𝑐𝑚)] + [(684.55 ) (0.0002 ) (1 𝑐𝑚)] = 0.391
𝐿 𝑚𝑜𝑙 𝑐𝑚 𝐿

L 𝑚𝑜𝑙 𝐿 𝑚𝑜𝑙
𝐴λ₂ = [(127.47 ) (0.00016 ) (1 𝑐𝑚)] + [(1232.9 ) (0.0002 ) (1 𝑐𝑚)] = 0267
mol cm 𝐿 𝑚𝑜𝑙 𝑐𝑚 𝐿

1.400 0.300
y = 0.8897x + 0.0273
1.200 y = 0.8747x + 0.0356
Absorbancia observada

0.250

Asorbancia observada
R² = 0.9967
R² = 0.9994
1.000
0.200
0.800
0.150
0.600
0.100
0.400
0.200 0.050

0.000 0.000
0 0.5 1 1.5 2 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3
Absorbancia calculada Absorbancia calculada

Figura 4. Relación Absorbanciacal vs Figura 5. Relación Absorbanciacal vs

Absorbanciaobs para λ1. Absorbanciaobs para λ2.

Tabla 7. Valores de r y r2 a λ1 y λ2.

λ1 λ2
r 0.9996 0.9983
r2 0.9994 0.9967

* Los valores de r2 fueron obtenidos a partir de la ecuación de la recta al ingresar los

datos de la tabla 6 al programa Excel, mismos que son apreciados en la figura 4 y 5.

 Determinación de la concentración de K2Cr2O7 y KMnO4 en la solución problema.

Tabla 8. Concentración de K2Cr2O7 y KMnO4
en la solución problema.
370 nm 500 nm
Aλ1 Aλ2
1.392 0.329
Cm de 7.9x10-5 M Cm de 1.85x10-3 M
K2Cr2O7 KMnO4

6
Cálculos:

AT(λ1) = amA(λ1) b CmA + amB (λ1) b CmB

AT(λ2) = amA(λ2 )b CmA + amB (λ2) b CmB

1.392 = 1586 CmK2Cr2O7 + 684.55 CmKMnO4 (1232.9)

0.329 = 127.47 CmK2Cr2O7 + 1232.9 CmKMnO4 (-684.55)
1716.2 = 1955379.4 CmK2Cr2O7 + 843981.7 CmKMnO4
-225.2 = -84259.6 CmK2Cr2O7 – 843981.7 CmKMnO4

1491 = 1871119.8 CmK2Cr2O7

1491
Cm K2Cr2O7 =1871119.8 = 0.000079 = 7.9x10-5 M

1.392−1589(0.00007.9)
CmKMnO4 = 684.55
= 0.00185 = 1.85x10-3 M

Discusión
De acuerdo a los resultados obtenidos en la práctica, es posible determinar que sí se cumple la
Ley de la Aditividad, sin embargo, para llegar a este resultado, fue necesario realizar un conjunto
de procedimientos que nos permitieran conocer la absortividad de cada uno de los compuestos
en el sistema múltiple.
Para determinar las longitudes de onda de trabajo, fue necesario realizar el espectro de absorción
para las dos sustancias empleadas (K2Cr2O7 y KMnO4). En la Figura 1 puede observarse que
los espectros de estos compuestos tienen picos de absorción máxima a diferentes longitudes de
onda, esta cualidad es útil para identificación, sin embargo, para determinar concentraciones en
un sistema múltiple, es necesario acordar puntos donde ambos compuestos tengan una
absorbancia considerable. En la Tabla 1 puede observarse que, cuando el K2Cr2O7 presenta
una absorbancia máxima, el KMnO4, sin embargo, a 370 nm y 500 nm (Tabla 2) ambas
sustancias tienen una absorción aceptable, la cual fue elegida para los experimentos posteriores.
Para obtener las absortividades molares fue necesario realizar curvas de calibración a cada una
de las longitudes seleccionadas (λ₁ = 370 nm y λ₂ = 500 nm). De acuerdo a la Ley de Lambert,
Bouguer y Beer, la cual establece que hay una relación lineal entre la absorción de luz a
través de una sustancia y la concentración de la misma, se extrapolaron los valores
dados en esta ecuación a la ecuación de la Ley General de la Fotometría, donde la
absortividad molar será igual al valor obtenido en la ordenada al origen y la concentración
será la misma que la pendiente. Los valores de absortividad molar obtenidos se observan
en la Tabla 4.
Para comprobar la Ley de la Aditividad en un sistema múltiple o mezcla se procedió a
determinar la absorbancia total de las mezclas a analizar. A partir de esto y con las
concentraciones de K2Cr2O7 y KMnO4 empleadas en estos sistemas, se calculó la absorbancia
teórica o calculada. En la tabla 6 se realizó una comparación entre ambos valores. Para tener un
mayor análisis, se graficó absorbancia observada contra absorbancia calculada para obtener el
valor de R2 y R, con esto se puede afirmar que los puntos sí siguen una tendencia lineal muy

7
cercana a 1. De igual forma, en las figuras 4 y 5 se puede observar que las ordenadas a origen,
de cada ecuación, son cercanas a 0 y las pendientes se aproximan a 1, de esta forma se
comprueba que sí se está cumpliendo la Ley de la Aditividad.
Una vez comprobada la Ley de la Aditividad en el sistema múltiple, se determinó la concentración
molar de la solución problema, a través de la sustitución de datos en la ecuación de la Ley
General de la Fotometría y por medio de un método de suma y resta.
Pregunta: ¿Por qué se eligen estas longitudes de onda y no otras?
Porque en el espectro de absorción, el K2Cr2O7 a 370 nm presenta una absorbancia alta, mientras
que el KMnO4 tiene una absorbancia baja, pero detectable, ya que, si se elige un valor cercano
a cero y, tomando en cuenta que se va a trabajar con diluciones, las absorbancias de éstas no
serían detectables. A 500 nm ocurre lo contrario, la absorbancia del KMnO4 es alta y la del
K2Cr2O7 baja. Se debe considerar también que, en un sistema múltiple, las longitudes de onda
de ambos componentes deben estar alejadas.

Conclusiones
 Los valores máximos de longitud de onda para K2Cr2O7 y KMnO4 son 370 nm y 500 nm.
 El sistema múltiple analizado sí cumple con la Ley de la Aditividad.
 Las concentraciones de K2Cr2O7 y KMnO4 en la muestra problema son 7.9x10-5 M y
1.85x10-3 M, respectivamente.
 Para que se cumpla la ley de la aditividad en una mezcla es necesario
 conocer los espectros de absorción de cada componente o cromóforo de la mezcla.

Bibliografía
1. Pérez, F. A. Espectrofotometría y Equilibrio Químico. [Internet] [Archivo PDF]. Consultado
el 19 de Septiembre de 2019. Disponible en: http://files.qa1-q-iq-y2-q-fesc-
jfpa.webnode.es/200000558-f11b2f2186/FollEspectro_TQA2(Q).pdf
2. Skoog, D. A., James, H. y Nieman, T. A. (2001). Principios de análisis Instrumental, 5ª ed.
Editorial McGraw-Hill. Interamericana: Madrid, España, pp. 1027-1028.