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Virus de La Poleidrosis Nuclear PDF
Virus de La Poleidrosis Nuclear PDF
9 0 - 9 6 , 2 0 0 1
1 Presentado en el Curso sobre Formulaci—n y Control de Calidad de Productos No-SintŽticos, auspiciado por el Proyecto Fomento de Productos Fitosanitarios No Sin -
tŽticos de CATIE/GTZ.Nicaragua 2001.
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Uiversidad Nacional Aut—noma de Nicaragua.Le—n, Nicaragua. cip@unaleon-edu.ni
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Figura. 1. Cuerpo de inclusión poliedral. Adaptado de Payne y Kelly (1981).
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Cuadro1. Clasificación y características de los virus entomopatógenos.
B.Granulosis (VG)
Gen. Baculovirus
C.Virus Oryctes
Reoviridae Cipovirus ARN (d) Ocurre en L, D, Hymenopteros,
Gen. Virus Poliedrosis Coleopteros
Citoplasmática
Poxviridae Gen. Entomopoxivirus Sub ADN (d) Muchos miembros, poco impacto
gen. A, B, y C en población de insectos. Géneros que
afectan vertebrados (incluye humanos)
Iridoviridae Gen. Irodovirus ADN (d) Géneros que afectan vertebrados
Gen. Chlorividovirus
Parvoviridae Gen. Densovirus ADN (s) Hay parvovirus en ratones, gansos, etc.
Virus Densonucleosus
Picornaviridae Gen enterovirus ARN (s) Presentan semejanzas con los virus de
Aún no clasificados animales y plantas
Rhabdoviridae Vesiculovirus ARN Parecido al virus de la rabia, y al del
Lisavirus mosaico de la papa
Polydnaviridae Ichnovirus ARN (d) Encontrados exclusivamente en
Bracovirus Hymenopteras parasíticas.
Birnaviridae Birnavirus ARN Solo algunos miembros afectan a
invertebrados
Togaviridae Alphavirus ARN
Flaviviridae Flavivirus ARN Virus del dengue (mosquito solo es
usado como hospedante intermedio.
Buyanviridae Buniavirus
Phlebovirus
Nairovirus ARN Varios artrópodos y vertebrados de
sangre caliente
Tetraviridae Nudaurelia beta ARN (s)
Nodaviridae Nodavirus ARN (s) Patógeno en mamíferos
d: doble s: sencillo
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malmente, para controlar las larvas m‡s grandes Debido a que el virus no actœa de inmediato, la
(Moscardi 1989). Algunas investigaciones sugieren decisi—n de aplicar se debe tomar antes de que se al-
que puede actuar como un sinŽrgico (Enwistle y cance el nivel de da–o econ—mico.
Evans 1985).
C—mo determinar la eficacia de la aplicaci—n. Si la
Preparaci—n de la dosis. La UNAN ofrece el VPN en aplicaci—n fue eficaz, dos d’as despuŽs de Žsta, las lar-
formulaci—n l’quida, la cual debe almacenarse a 4¡C. vas mostrar‡n mayor lentitud, y tendr‡n una colora-
Se recomienda preparar el virus antes de su aplicaci—n ci—n p‡lida. Las larvas con las caracter’sticas mencio-
y hacerlo bajo la sombra para evitar su inactivaci—n nadas mostrar‡n una disminuci—n del apetito, hasta
por la acci—n de los rayos ultravioleta (Enwistle y dejar de comer.
Evans 1985).
El virus congelado debe ser mezclado con agua Producci—n de VPN
hasta que se disuelva completamente. El volumen de Para producir VPN se necesita establecer la cr’a de las
agua debe ser suficiente para realizar una buena co- especies hospedantes, porque como se mencion—, son
bertura en el cultivo. Se recomienda seguir las mismas par‡sitos obligados. Estos virus tambiŽn pueden re-
recomendaciones para la aplicaci—n de un insecticida producirse mediante cultivo de cŽlulas, pero el costo
sintŽtico. El equipo debe mantenerse limpio y las bo- de este proceso es mayor (Stockdale y Couch 1981).
quillas funcionando. El Žxito de la aplicaci—n depen-
der‡ de que las gotas de la soluci—n conteniendo el vi- 1. Cr’a de los hospedantes
rus permanezcan sobre la superficie de las hojas, o si La infraestructura necesaria para la cr’a de hospedan-
se aplica en ma’z dentro del cogollo (Poveda y Saravia tes incluye:
1994). Sala de producci—n de larvas. Las larvas del pie de cr’a
En el caso del ma’z, el virus puede tambiŽn ser son mantenidas en cub’culos separados para cada es-
utilizado mezclado con aserr’n o arena, en forma de pecie, mantenidas a una temperatura de 27 + 1oC y
cebo. 14:10 de fotoper’odo.
Sala de oviposici—n. Los adultos, junto con los huevos,
MŽtodo de aplicaci—n. En las evaluaciones del VPN necesitan otra sala, la cual debe tener una
en soya,ma’z y arroz se utiliz— una microulva, Micron temperatura de 27 + 1oC. En este lugar tambiŽn se
Sprayers Ltd.UK.,la cual generaba una gota de apro- realiza la transferencia de las larvas a las copas indivi-
ximadamente 58µ de di‡metro promedio de volumen. duales para mantener el pie de cr’a.
Poveda y Saravia (1994) en evaluaciones de la eficacia Sala de elaboraci—n de dietas. La preparaci—n y este-
de otros tipos de equipo probaron bombas de motor y rilizaci—n de la dieta es realizada en una sala acondi-
de presi—n, y no encontraron diferencias estad’sticas cionada para ello, que puede estar a temperatura am-
significativas, lo cual demuestra que para la aspersi—n biente.
de este virus se puede utilizar cualquier equipo con- Sala de lavado de material. Debe disponerse de un es-
vencional utilizado para productos sintŽticos o biol—- pacio para la limpieza y el lavado del material de reci-
gicos . claje.
Lo m‡s importante es que se garantice una buena
cobertura, porque el virus manifiesta su actividad bio- Cuarentena. Es necesario contar con una sala de cua-
l—gica en espec’menes que ingieren las hojas contami- rentena para tener el material tra’do del campo. Este
nadas. material debe permanecer en ese lugar hasta comple-
tar dos generaciones, con el objetivo de eliminar con-
Recomendaciones para una buena aplicaci—n. Cada taminantes microbianos o parasitoides, antes de ini-
uno de los virus controla solo una especie y no puede ciar la cr’a.
ser usado contra plagas de otros cultivos, o sea son al-
tamente espec’ficos. Se debe aplicar cuando la pobla- Materiales
ci—n de larvas de los primeros instares es mayor que la Entre los materiales m‡s importantes para la cr’a de
de los œltimos instares. los hospedantes est‡n:
Jaulas. Las jaulas utilizadas para los adultos son cil’n-
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dricas, con base de pl‡stico negro. En ellas se introdu- los insectos. Las infestaciones por hongos pueden for-
ce un cilindro de "plexiglass" transparente. Las jaulas mar una capa superficial impenetrable, mientras que
tienen un tama–o de 23 cm de di‡metro y 36 cm de la contaminaci—n por bacterias puede inhibir la ali-
largo y tienen capacidad para 50 parejas de mariposas. mentaci—n,posiblemente por la producci—n de sustan-
No obstante, Rizo et al. (1994) afirman que el dise–o cias repelentes.
de las jaulas puede variar, dependiendo de las necesi-
dades de producci—n. Higiene para eliminar y controlar la contaminaci—n
Vasos y otros materiales. Se utilizan vasos de diferen- El control de la contaminaci—n es una actividad que
tes tama–os. Para larvas se recomiendan los de 5 ml y debe ser parte de la rutina diaria del personal que
para la eclosi—n de huevos de 400 ml. Para pupas se conduce el insectario. Para la esterilizaci—n de insec-
utilizan cajas de pl‡stico de 28 x 26 x 10 cm. Adem‡s tos y superficies del laboratorio, se utilizan a menudo
se requieren pinzas para la manipulaci—n de larvas. formalina e hipoclorito de sodio.
Otros materiales usados son tela de tul, papel filtro y Rutinariamente se deben lavar los pisos, paredes,
papel normal. recodos y techos con las sustancias se–aladas anterior-
mente, o bien es recomendable utilizar una luz UV
Proceso general de crianza bactericida (257 nm de radiaci—n),la cual debe ser ac-
Los adultos de los noctuidos son colocados en el inte- tivada solamente en ausencia del personal.
rior de las jaulas para el acoplamiento y oviposici—n. Se debe tener mucho cuidado con los materiales
Las hembras ovipositan sobre un papel colocado en el que son utilizados, tales como pinzas, pinceles y agujas
interior de las jaulas. El papel con los huevos es reti- de disecci—n, las cuales deben ser lavadas y esteriliza-
rado y sustituido diariamente. Los huevos son des- das, o bien desinfectadas con alcohol cada vez que se
prendidos del papel,esterilizados, lavados y luego me- van a utilizar y deben mantenerse en una soluci—n de
diante un pincel son colocados en discos de papel fil- cloro al 5%.
tro o en el papel que, se use en la jaula, ligeramente Los vasos utilizados pueden ser reciclados, pero
humedecido. Cuando Žstos se secan, se transfieren a despuŽs del lavado con agua y jab—n se recomienda
la parte interior de la tapa del vaso pl‡stico, el cual dejarlos 24 h en una soluci—n de cloro al 5%. Des-
contiene dieta artificial para las larvas, donde se desa- puŽs Žstos deben enjuagarse con agua para quitar el
rrollan hasta el tercer instar (Rizo et al. 1994). excedente de cloro y cada vez que se utilizan deben de
El 5% de esta producci—n se transfiere a vasos in- desinfectarse con alcohol.Rizo et al. (1994) recomien-
dividuales para mantener el pie de cr’a de cada una de dan que si se presentan problemas de contaminaci—n
las especies. El pie de cr’a es revisado tres veces por es recomendable colocar los vasos en una c‡mara de
semana para sacar las pupas, las cuales son colocadas luz ultravioleta por 20 min.
en cajas pl‡sticas, donde permanecen hasta la emer- Para eliminar la contaminaci—n general y transo-
gencia del adulto. Los adultos nuevos se trasladan ca- varial en los insectos, se puede esterilizar con seguri-
da d’a a las jaulas de oviposici—n para repetir el ciclo dad la superficie de algunos estadios, como se descri-
nuevamente. bi— anteriormente para los huevos y pupas. Para el ca-
so de infecciones internas se hace uso de productos
Sanidad general y condiciones de cr’a que se incluyen en la dieta.
En un laboratorio de cr’a de insectos es necesario
mantener condiciones de sanidad estrictas para con- 2.Producci—n de VPN
trolar la contaminaci—n del alimento con microorga- Infraestructura
nismos, as’ como enfermedades en los insectos, lo cual Para la producci—n del VPN se requiere la siguiente
puede impedir la producci—n. infraestructura:
La principal fuente de contaminaci—n son los in- Sala de inoculaci—n. En esta sala se preparan los reci-
sectos mismos, los alimentos seleccionados o ingre- pientes utilizados con la dieta, para posteriormente
dientes de ellos (por ejemplo el germen de trigo viejo aplicar la soluci—n viral. TambiŽn se colocan las larvas
puede estar contaminado con bacterias), el edificio y del instar adecuado para que ingieran el alimento al
el equipo empleado. cual se agreg— el virus.
Rizo et al. (1994) se–alan que la contaminaci—n de Sala de incubaci—n y cosecha. En esta ‡rea se colocan
los alimentos puede causar problemas de calidad de todos los recipientes que contienen larvas con alimen-
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to combinado con VPN. TambiŽn se procede a la co- Este control involucra dos etapas, la primera en la
secha del virus entre 3 y 5 d’as despuŽs de la inocula- producci—n de los hospedantes del virus y la segunda
ci—n. durante el proceso de multiplicaci—n del virus en sus
Sala de almacenamiento. Esta sala contiene principal- hospedantes.
mente los congeladores necesarios para mantener el
virus a -4 ¡C. Control de calidad en las cr’as de insectos
Sala de formulaci—n. En ella se lleva a cabo la formu- Existen diversas formas de evaluar la calidad de los
laci—n del VPN, descrita a continuaci—n: insectos producidos en el laboratorio. Los aspectos
m‡s importantes para evaluar la calidad son: adapta-
MŽtodo de producci—n bilidad,movilidad,acoplamiento, reproducci—n y colo-
La metodolog’a de producci—n que se utiliza actual- nizaci—n (Boller y Chambers 1977, citado por Parra
mente en el laboratorio de la UNAM, est‡ basado en 1986). La importancia de Žstos es relativa y depende
los resultados de evaluaciones sobre concentraci—n de del objetivo de la cr’a; por ejemplo, cuando la cr’a se
virus y sobre el instar larval m‡s adecuado para obte- tiene para la producci—n de virus el componente m‡s
ner una larva equivalente con una producci—n de seis importante es la reproducci—n.
unidades virales (109 cuerpos poliedrales de inclusi—n Sin embargo, para la cr’a, los aspectos de calidad
(CIP) /LE). se deben evaluar en las generaciones sucesivas y los
Se coloca la dieta semil’quida sobre el recipiente par‡metros son: caracter’sticas biol—gicas como la ca-
utilizado para la producci—n, donde permanece hasta pacidad de oviposici—n,eclosi—n,peso de pupas y por-
su solidificaci—n; cuando est‡ completamente fr’a se centaje de deformaci—n de pupas y adultos. Es reco-
procede a inocular con una soluci—n viral,luego se co- mendable mantener altas poblaciones (m‡s de 100 in-
locan las larvas. De tres a seis d’as despuŽs se procede dividuos) en el laboratorio, as’ como realizar cruces
a examinar las larvas que mueren por efecto del virus con material genŽtico nuevo para evitar la endogamia
y se almacenan en recipientes de pl‡stico, los cuales se (Joslyn 1984).
le coloca la informaci—n necesaria (nombre del virus,
nœmero de LE, fecha de inoculaci—n y de cosecha). Determinaci—n de la calidad del insecticida
Cada larva equivalente producida en el laborato- viral
rio debe contener una concentraci—n adecuada de CIP Este proceso incluye varias etapas. La primera es con-
por ml de soluci—n viral. tar con un patr—n de referencia almacenada en condi-
ciones —ptimas. El segundo es determinar el nœmero
Formulaci—n de cuerpos poliedrales de inclusi—n (CIP) de la formu-
Actualmente, el VPN es utilizado de forma cruda. Pa- laci—n, a travŽs de bioensayos. Como œltimo paso se
ra obtener una soluci—n viral las larvas equivalentes compara este con el patr—n de referencia y, si es nece-
son maceradas en agua y filtradas con una tela de mu- sario, se hacen las correcciones requeridas (Sosa-G—-
selina, para evitar que las c‡psulas cef‡licas obstaculi- mez y Moscardi 1996). Este proceso debe realizarse
para cada lote de producci—n, el cual est‡ determina-
cen las boquillas de las bombas de aplicaci—n. La so-
do por la capacidad de producci—n de la empresa.
luci—n filtrada est‡ lista para mezclar en un volumen
de agua suficiente para asperjar en el cultivo. Actual-
Literatura citada
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Payne, CC; Kelly, DC. 1981 Identification of insect and mite
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plant diseases. London, Academic Press.p. 61-91.
Este sitio incluye informaci—n sobre insecticidas, fungicidas, herbicidas, acaricidas y rodenti-
cidas, producidos a partir de microorganismos o de extractos de plantas, disponibles en Cos-
ta Rica, Honduras y Nicaragua. TambiŽn se puede obtener informaci—n sobre las empresas
que producen y comercializan estos productos en los tres pa’ses citados.Adem‡s se ofrece in-
formaci—n sobre los cursos de capacitaci—n que ofrece el Proyecto.
Pr—ximamente estar‡ disponible una base de datos sobre legislaci—n referente al uso de este
tipo de productos asi como de cultivos y plagas para los cuales estos cultivos han demostra-
do su eficacia.
http://www.catie.ac.cr
http://www.biopesticidas.org
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