INFORME FINAL PRÁCTICA LABORATORIO

CURSO MICROBIOLOGÍA.

Luis Eduardo Barrios Guerra

Karen Fino
Jennifer Briñez
Elián Núñez
Julieth León

Directora Curso:

Andrea Escandón

UNIVERSIDAD ECCI
BOGOTA DC
2019
 1. INTRODUCCIÓN.

El objetivo fundamental de la práctica de laboratorio, es el de dar a conocer y comprender los

procedimientos y técnicas propias para el análisis microbiológico del suelo, a los estudiantes
del curso de microbiología., teniendo como elementos fundamentales el de adquirir
conocimientos y comprensión de las técnicas de recuento microbiano, los métodos y principios
para el manejo de muestras con diluciones, además de la determinación de microorganismos
patógenos del suelo y su importancia.

En el laboratorio se revisaron las temáticas: Análisis microbiológico del suelo, recuentos

microbianos: Recuentos viables (recuento en placa en superficie y Número más probable) y
determinación de microorganismos patógenos del suelo.

Se destaca laboratorio la importancia de la realización de análisis microbiológicos al suelo ya

que nos permiten determinar la carga microbiana de grupos específicos de microorganismos
cultivables con características comunes (recuentos microbianos) así como el aislamiento y
tipificación de sus géneros y especies.

Además de la realización del análisis microbiológico del suelo, es necesario comprender el

metabolismo microbiano y la caracterización de los mismos, ya que de este depende su
correcta identificación y conocimiento de actividad en el suelo, es necesario entonces conocer
sus características morfológicas, fisiológicas, metabólicas, ecológicas y genéticas.

Para llevar a cabo lo propuesto anteriormente, es necesario realizar la identificación los

microorganismos, para lo cual es indispensable, previamente cultivarlo y aislarlo. La presencia
de crecimiento se establece por la aparición de colonias en medio sólido y de turbidez en medio
líquido. Debe tenerse en cuenta la posible identidad del microorganismo por: el origen de la
muestra, características morfotintoriales, patrón de crecimiento en medios diferenciales,
selectivos y para pruebas bioquímicas, y propiedades hemolíticas, metabólicas y fermentadoras
en varios medios,
 2. OBJETIVOS GENERALES

 Conocer y comprender los procedimientos y técnicas propias para el análisis

microbiológico del suelo.

 Conocer y comprender los procedimientos y fundamentación de las pruebas

bioquímicas como herramienta útil en los procesos de tipificación bacteriana.

 Conocer y comprender las características morfológicas y tintoriales de las baterías y su

utilidad en los procesos de tipificación. Adicionalmente conocer la cámara de Neubauer
y su utilidad para la realización de recuentos celulares.

2.1 OBJETIVOS ESPECÍFICOS.

 Conocer y comprender las técnicas de recuento microbiano.

 Comprender los métodos y principios para el manejo de muestras con diluciones.
 Conocer y comprender las técnicas para determinación de microorganismos patógenos
del suelo y su importancia.
 Conocer y comprender algunos procesos metabólicos bacterianos.
 Comprender los métodos y principios para los procesos de aislamiento y tipificación
bacteriana.
 Establecer la clasificación bacteriana de acuerdo a sus características morfológicas.
 Conocer los procesos adecuados y necesarios para el montaje de extendidos
bacterianos, la técnica y fundamentación de la coloración de Gram y su utilidad.
 Conocer las características de la cámara de Neubauer.
 Conocer y comprender los procesos para la realización de los recuentos celulares en la
cámara de NeuBauer

3. MATERIALES Y METODOLOGÍA.

3.1 PRÁCTICAMICROBIOLOGÍADE SUELOS

Materiales practica 3.1

- Erlenmeyer con 99 ml de agua peptonada estéril
- Tubos de ensayo con 9 ml de agua peptonada estéril
- Pipeteadores
- Piperas de 1ml estériles
- Gradillas
- Cajas de petri con agar nutritivo
- Tubos con caldo lactosado bilis verde brillante y tubo de Durham
- Cajas de petri con los medios VRBA, Mackonkey , King B, Agar
cetrimide, YDCA y OF
- Asas de vidrio para expandir la muestra
- Asa bacteriológica
- Balanza
 Metodología practica 3.1
Preparación de la muestra Recuentos microbianos Determinación de patógenos del suelo.
 Pesar 1 gr de suelo y El recuento de bacterias heterótrofas en placa y el recuento de Para el aislamiento y tipificación de patógenos
adicionarlo en condiciones coliformes por NMP se realizarán en forma sincrónica. Para ello: se partirá de las últimas diluciones obtenidas
de asepsia a un Erlenmeyer  Se organizará el material así: se seleccionarán tres tubos de en la preparación de la muestra inicial. Se
con 99 m de agua diluciones sucesivas que serán nuestras muestras de trabajo. utilizarán los siguientes medios: VRBA,
peptonada estéril. Para cada dilución se organizarán 2 cajas de agar nutritivo y tres Mackonkey, King B, Agar cetrimide, YDCA y
 Mezclar y dejar en reposo. tubos de caldo lactosado bilis verde brillante. El material debe OF.
(Dilución 10 -2) En una ser marcado adecuadamente con el número de la dilución y
gradilla organizar una serie grupo correspondiente. Tomar de cada una de las últimas diluciones y
de 12 tubos con agua  Siembra: adicionar 0.1 ml de la dilución seleccionada en el sembrar en una caja de cada uno de los
peptonada estéril y centro de cada una de las 2 cajas correspondientes para esa medios anteriormente anotados.
previamente marcados dilución, con la misma pipeta, adicionar 1 ml de la misma dilución
numerando diluciones a cada uno de los 3 tubos con caldo lactosado bilis verde brillante Incubar durante 24 horas y de acuerdo a la
sucesivas, tomar 1 ml de la correspondientes. Para cada dilución se realizará el mismo lectura realizar nuevas siembras así:
dilución inicial y procedimiento.
adicionarla al tubo  Tomar cada caja de agar nutritivo con el asa de vidrio previa Ante sospecha de presencia de
marcado con la dilución 10- esterilización se realizará la distribución de la muestra enterobacterias en el medio mackonkey
3. asegurando una distribución homogénea por toda la superficie del realizar tipificación con pruebas bioquímicas y
 Después de mezclar y con medio. en caso de crecimiento en el medio YDCA para
distinta pipeta, realizar  Incubar para su lectura en la siguiente práctica de acuerdo al Xanthomonas, realizar repique en medio OF.
sucesivamente y en igual proceso investigativo realizada para dar el resultado como UFC
forma diluciones hasta la de bacterias heterótrofas por gr de suelo.
dilución 10-12. PRUEBA CONFIRMATORIA PARA COLIFORMES TOTALES:
Después de su incubación, aquellos tubos donde se
observe turbidez y producción de gas serán sembrados en medio
EMB para su posterior lectura después de incubar 24 horas a
37°C. El establecer las muestras positivas por cada dilución
permitirá realizar los cálculos estableciendo en la tabla existente
para ello el NMP y realizar los cálculos de acuerdo a la fórmula
investigada para que se reporte finalmente como NMP de
coliformes totales por gr de suelo.
3.2 METABOLISMO MICROBIANO

Materiales practica 3.2

- Asa bacteriológica
- Medios de cultivo: EMB, Makconkey, SS, TSI, LIA, Simons citrato,
SIM, úrea, MRVP.
- Cepas para cultivo en Agar nutritivo.
- Incubadora

Metodología practica 3.2

 Realice una descripción de los medios de cultivo antes de ser
inoculados.
 Marque los medios de cultivo con el número de cepa y número de su
grupo.
 Realice mediante el método de siembra en rejilla la siembra de los
medios EMB, Mackonkey y SS previa esterilización y enfriamiento del
asa bacteriológica antes y después de cada siembra.
 Siembre el medio de urea y MRVP (líquidos).
 Para los tubos en agar inclinado (LIA, Simons citrato y TSI), siembre
con asa horizontal, inoculando en profundidad y luego con estría en
superficie.
 Recuerde esterilizar el asa antes y después de cada siembra.
 Siembre el medio de sim (semisólido), por punción hasta el fondo
del tubo.
 Lleve a incubación a 37°C por 24 horas para su lectura.

3.3 MORFOLOGÍABACTERIANA

Materiales practica 3.3

Asa bacteriológica
Láminas portaobjeto
Soluciones para la coloración de Gram (violeta de Gram, lugol, alcohol
acetona, fuscina de Gram)
Cultivos bacterianos
Tubos de ensayo
Solución salina
Pipeteadores
Pipetas
Microscopios
Cámaras de Neubauer
Gradillas

Características morfológicas de las bacterias
Para el desarrollo de la práctica cada grupo tendrá en su
sitio de trabajo los siguientes elementos: asa
bacteriológica, láminas portaobjetos, solución salina,
mechero, 2 cultivos para estudio uno en medio sólido y uno
en medio líquido.
 Marcar las láminas con el número de la muestra que
se utilizará en cada una
 Previa esterilización del asa bacteriológica y después
de su enfriamiento se tomará una muestra del cultivo
líquido. Esta se extenderá en el portaobjetos del
centro a la periferia en forma ovalada y uniforme.
 Esterilizar el asa después del procedimiento.
 Adicionar una gota pequeña de solución salina en el
centro del portaobjeto.
 Tomar con el asa estéril, una pequeña muestra de
colonia bacteriana y extender del centro a la periferia
en forma uniforme.
 Con los frotis secos, fijar mediante calor con ayuda del
mechero.
 Realizar la coloración de Gram para los dos
extendidos.
 Observar al microscopio mediante objetivo de
inmersión.
 Determinar las características morfotintoriales de
cada una de las cepas estudiadas
Metodología practica 3.3
Determinación de patógenos del suelo.
Realice a partir del cultivo a estudio, diluciones seriadas hasta obtener una dilución 10- 6
Se realizarán los recuentos primero utilizando los cuadrantes externos del retículo y finalmente
el cuadrante central para conocer cómo se utiliza cada uno en los procedimientos y como se
realizan los cálculos para ello.
 Montaje de la cámara: tome la cámara y fije sobre ella la laminilla. Observe las dos
cuadrículas de la cámara ubicadas entre los surcos en forma de H.
 Con pipeta Pasteur tome una muestra de la dilución a examinar y coloque el líquido al borde
de la laminilla. La muestra se extenderá entre la cámara y la laminilla por capilaridad.
Proceda igualmente para montar la muestra en el lado contrario de la cámara.
 Observe microscópicamente en pequeño aumento ubicando la cuadrícula, realice un
recorrido sobre la misma identificando los diferentes cuadrantes para realizar el recuento y
cambie a objetivo de 40x.
 Ubíquese en uno de los cuadrantes esquineros con área de 1mm 2 y dividido en 16 cuadros.
Realice el recuento de los 16 cuadros en forma organizada y haga lo mismo con los otros tres
cuadrantes de las esquinas.
 Calcule el número de elementos formes de la dilución y de la muestra original.
 De su informe en mm 3 y por ml. Explique los cálculos realizados.
 Cálculos: No de células en mm3 
= sumatoria de células en los cuatro cuadrantes/4 X FD X 10
 Recuento en el cuadrante central: se utiliza para células de inferior tamaño como bacterias,
sin embargo, facilita el recuento de elementos de un poco más de tamaño en forma rápida.
 Recorra el campo microscópico y ubique el cuadrante central revisando su distribución,
número de cuadros y subdivisiones.
 El cuadrante central (1 mm 2) está dividido en 25 cuadros cada uno de 0.2mm 2 y subdividido
en 16 cuadros.
 Realice el recuento en cinco de los 25 cuadros así: los cuatro esquineros y el del centro.
 De su informe en mm 3 y por ml. Explique los cálculos realizados.
 Cálculos:No de células/mm 3
= sumatoria de células en los 5 cuadros X 5 X FD X 10
 3.4 MORFOFISIOLOGÍA HONGOS Y PARÁSITOS
Materiales practica 3.4
 Cultivos de trabajo
 Cortes histológicos
 Pipetas de Pasteur
 Láminas portaobjeto
 Láminas cubreobjeto
 Lugol parasitológico
 Azul de lactofenol
 Microscopios
Metodología practica 3.4
Para el desarrollo de esta práctica se contará en
el sitio de trabajo de: mechero, láminas, laminillas,
cultivo de levaduras, microcultivo, cultivo de
mohos en PDA.
OBSERVACIÓN DE LEVADURAS: sobre la
lámina coloque una gota de azul de lactofenol y
transfiera una pequeña cantidad de cultivo de
levadura con ayuda del asa bacteriológica.
Coloque la laminilla y observe al microscopio.
Describa las estructuras.
OBSERVACIÓN DE MOHOS: sobre una lámina
portaobjeto coloque una gota de azul de lactofenol
y con ayuda del asa micológica transfiera una
pequeña porción de la colonia a examinar. Sobre
el preparado coloque la laminilla y observe al
microscopio. Reconozca las estructuras
morfológicas (micelio, hifa, estructuras de
reproducción etc). Mencione y describa las
estructuras observadas y su importancia en el
proceso de diagnóstico para su identificación.
OBSERVACIÓN DE MOHOS EN
MICROCULTIVO: saque de la caja de petri en la
cual se encuentra el cultivo el preparado. Coloque
la lámina sobre la platina del microscopio y
enfoque observando el centro y las zonas
periféricas (borde del agar), identifique las
diferentes estructuras micóticas y descríbalas.
Mencione las características observadas útiles en
el proceso de clasificación.
Para el desarrollo de la práctica se contará con:
microscopio, gradilla y muestras de análisis,
cortes histológicos.
OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE LOS
CONCENTRADOS: sobre una lámina portaobjetos
adicione una gota de la muestra a examinar y
coloque el cubreobjetos sobre ella. Realice un
segundo preparado en igual forma, pero
adicionando una pequeña gota de lugol
parasitológico.
 Observe al microscopio el preparado primero
en 10X y luego en 40X. De acuerdo a lo
investigado determine la presencia de huevos
de helmintos o formas de protozoarios.
Respáldese con el atlas de parasitología y el
docente.
 Realice la descripción de las formas
encontradas y caracterícela de acuerdo a sus
estructuras específicas.
OBSERVACIÓN MICROSCOPICA DE CORTES
HISTOLÓGICOS: bajo la guía del docente se
realizará el estudio y revisión de cortes
histológicos y preparados coloreados con
diferentes formas parasitarias.
 Realice la descripción de cada uno de los
preparados revisados y las características de
los parásitos relacionados.
 4. RESULTADOS

4.1 Práctica microbiología de suelos Fundamento

Caldo lactosado Verde bilis brillante

En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo
bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de
bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepción de coliformes, y la lactosa es el hidrato
de carbono fermentable. Es una propiedad del grupo coliforme, la fermentación de la lactosa con
producción de ácido y gas.

Técnica Numero más probable NMP [1]

El método del Número más probable (NMP) (Most probable number - MPN - en inglés), también
conocido como el método de los ceros de Poisson, es una forma de obtener datos cuantitativos
en concentraciones de elementos discretos a partir de datos de incidencia positiva/negativa. Es
una estrategia eficiente para estimar densidades de población que se emplea cuando una
evaluación cuantitativa de elementos individuales no es factible.

El método se basa en determinar la presencia o ausencia (positivo o negativo) de atributos

específicos de microorganismos en copias obtenidas por diluciones consecutivas a partir de
muestras de suelo u otros ambientes. Se basa en el principio de que una única célula viva puede
desarrollarse y producir un cultivo turbio. El método requiere la realización de una serie de
diluciones en serie de la muestra de cultivo, en un medio líquido adecuado para el crecimiento
de dicho organismo de un volumen diez veces mayor. Luego, se incuban las muestras de esos
tubos y, pasado un tiempo, se examinan los tubos. Aquellos tubos que recibieron una o más
células microbianas procedentes de la muestra, se pondrán turbios, mientras que los tubos que
no recibieron ninguna célula permanecerán transparentes.

Tabla de NMP 95% por gramo de muestra

Para el ejercicio académico se trabajó con muestras de suelo del laboratorio de microbiología
JCM la muestra de suelo 1 fue inoculada con entero bacterias para que diesen positivas las
pruebas y pudiésemos comparar resultados.

Se inoculo 1 mL de las concentraciones 10 -5 - 10 -6 - 10 -7 y se hicieron 3 repeticiones de cada

concentración para hallar el NMP. Se llevaron a incubación por 24 horas y se evaluaron las
siguientes características:

- Cambio en la coloración inicial (verde traslucido brillante a turbio) y presencia de burbuja

de más de ¼ del tubo de durham si tiene las dos características se toma como positiva
la prueba y se le asigna el número 1.
- Si es turbio, pero no hay burbuja es negativa la prueba se le asigna 0.
- Si tiene burbuja, pero esta brillante es negativa la prueba se le asigna 0.

Para el presente informe se presentan los datos de los grupos 1, 2 y 3 en la siguiente tabla.

Tabla de resultados grupo 1,2 y 3

GRUPO 10-5 10-6 10-7

Dilución NMP

10 -5 3

10 -6 3

10 -7 3
 2

Dilución NMP
10 -5 0
10 -6 0

10 -7 0

Dilución NMP
10 -5 0
10 -6 0
10 -7 0

Discusión de los resultados recuentos microbianos.

De acuerdo a la tabla anterior se puede observar que el grupo 1 tiene resultados positivos para
la presencia de coliformes ya que el caldo lactosado verde bilis brillante reacciona con el grupo
coliforme con la fermentación de la lactosa (turbidez) con producción de ácido y gas (Burbuja).

Analizando la tabla de NMP se busca el número 3-3-3 dado que es positivo en las tres diluciones
y aparece que es > 1100 lo cual es positivo para la presencia de coliformes dado que la muestra
estaba inculada con cepas de E. coli

Lo ideal es esperar 24 horas y hacer siembra en medios selectivos para identificar características
del grupo de estudio. Para esta práctica se trabajó con una bacteria específica para poder
visualizar resultados. Por lo tanto, no se desarrolló la práctica de determinación de patógenos
del suelo dado que no se aislaron bacterias de las muestras de suelo analizadas si no de
bacterias ya aisladas para lo cual se hará el análisis en la práctica de metabolismo bacteriano.

4.2 Metabolismo microbiano – Determinación de patógenos del suelo.

Esta práctica consiste en aislar microrganismos de las diluciones y someterlas a pruebas

bioquímicas para lo cual se evalúa cómo se comporta determinada bacteria en un sustrato para
esta prueba nuestro grupo trabajo con la bacteria Salmonella enteritidis la cual es un importante
patógeno de las aves de corral y ha sido aislada en pollos parrilleros, aves reproductoras y
parvadas de ponedoras comerciales. La identificación bacteriológica de aves positivas es difícil
debido a la excreción intermitente del organismo. La presencia de anticuerpos no siempre
significa infección, pero es indicativa de exposición previa. Otros
grupos trabajaron con Escherichia coli la cual es una enterobacteria que se encuentra
generalmente en los intestinos animales, y por ende en las aguas negras, pero se lo puede
encontrar en todos lados, dado que es un organismo ubicuo. Por lo tanto, es indicador de
contaminación por heces. Tambien se trabajó con Enterobacter aerogenes bacilo Gram-
negativo, anaeróbico facultativo, no esporulante oxidasa negativo, catalasa positiva, citrato
positivo, indol negativo. E. aerogenes es una bacteria patógena causante de infecciones
oportunistas y nosocomiales.

A continuación, solo se hara la descripción de los resultados obtenidos con Salmonella

enteritidis.

Medio SIM
Es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de indol y de sulfuro
de hidrógeno en un mismo tubo. Es útil para diferenciar miembros de la familia
Enterobacteriaceae.
Siembra
A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio sólido, sembrar por punción profunda con aguja
de inoculación recta (no usar ansa con anillo). Se debe inocular el centro del tubo, y la punción
debe abarcar 2 tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie. Es
importante que la siembra se realice en línea recta.
Incubación
Durante 24 horas, a 35-37 °C, en aerobiosis.
Luego de la incubación, agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovac´s o de Erlich.
Resultados
 Cepas móviles: producen turbidez del medio, que se extiende mas allá de la línea de
siembra.
 Cepas inmóviles: el crecimiento se observa solamente en la línea de siembra.
 Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la línea de siembra o en todo el
medio.
 Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color.
 Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de
Kovac´s o de Erlich.
 Cepas indol negativas: sin cambio de color.
SIM MUESTRA
GRUPO RESULTADO RESULTADO
S I M INICIAL

1 E. coli - + +

2 Salmonella
+ - +
enteritidis

3 E. coli - - -

4 Enterobacter
- - +
aerogenesis

SIM Sulfuro – indol – movilidad

Para la bacteria Salmonella enteritidis se observa que es SH2 positiva por el
ennegrecimiento en todo el medio. Es indol negativa La prueba del indol es una prueba
bioquímica realizada en especies bacterianas para determinar la habilidad del organismo de
romper el indol del aminoácido triptófano. Esta división molecular es lograda por una serie
de enzimas intracelulares diferentes, un sistema que en conjunto se le llama con frecuencia
triptofanasa. La movilidad es positiva porque está relacionada con la prueba SH2.
Características de Enterobacteriaceae

En la definición clásica de una Enterobacteriaceae se usan siete criterios básicos, adicional a la

aparición de nuevos métodos taxonómicos para incluir a ciertos géneros que no cumplen con
todos los siguientes criterios, pero que forman parte de esta familia:

1. Son bacterias gram negativas, la mayoría bacilos, otros cocobacilos y otros

pleomórficos.
2. No son exigentes, son de fácil cultivo.
3. Son oxidasa negativa (excepto Plesiomonas, que es oxidasa positiva), es decir,
carecen de la enzima citocromo oxidasa.
4. Son capaces de reducir nitrato en nitrito.
5. Son anaeróbicos facultativos.
6. Son fermentadores de carbohidratos en condiciones anaeróbicas con o sin la producción
de gas (en especial glucosa y lactosa), y oxidadores de una amplia gama de substratos
en condiciones aeróbicas.
7. Muchos géneros tienen un flagelo que sirve para desplazarse, aunque algunos géneros
no son móviles.

Adicional a ello, las enterobacterias no forman esporas, algunas producen toxinas y

pueden ser encapsuladas y son organismos catalasa positivos. Son quimioheterótrofos,
y necesitan para su crecimiento compuestos simples de carbono y nitrógeno,
generalmente sólo con D-glucosa, aunque algunas requieren aminoácidos y vitaminas.
La temperatura óptima de crecimiento es de entre 22 °C y 37 °C.

Medio LIA - Lisina Hierro Agar.

Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp.,
basado en la decarboxilación / desaminación de la lisina y en la producción de ácido
sulfhídrico.
Siembra
Por punción profunda con aguja de inoculación.
Incubación
En aerobiosis, durante 24 horas a 35-37 °C.
Resultados
1- Decarboxilación de la lisina:

-Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.

-Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.

2-Desaminación de la lisina:

Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del género Proteus, Providencia y alguna
cepa de Morganella spp.

3-Producción de ácido sulfhídrico:

-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el límite del pico y fondo)
 Microorganismos Color en el pico de f lauta Color en la base del tubo Ennegrecimie nto del medio
P roteus mirabilis A T C C 4 3 0 7 1 Rojo A marillo N egativo
Salmonella typhimurium ATCC 14028 P úrpura P úrpura P os itivo
Salmonella enteritidis A T C C 1 3 0 7 6 P úrpura P úrpura P os itivo
P rovidenc ia s pp. Rojo A marillo N egativo
C itrobac ter freundii P úrpura A marillo P os itivo
M organella s pp.* Rojo A marillo N egativo
E dwars iella s pp. P úrpura P úrpura P os itivo
Klebs iella pneumoniae ATCC 7 00 6 0 3 P úrpura P úrpura N egativo
E s c heric hia c oli A T C C 2 5 9 2 2 P úrpura P úrpura N egativo

*Algunas especies de Morganella spp., pueden desaminar la lisina.

MUESTRA
GRUPO LIA RESULTADO
INICIAL
1 E.coli -

2 Salmonella enteritidis -

3 E. coli -

4 Enterobacter
-
aerogenesis
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el
desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato
utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de
hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la producción de ácido
sulfhídrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH
igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8.

Por decarboxilación de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y

esto produce el viraje del indicador al color violeta. La decarboxilación de la lisina, tiene lugar
en medio ácido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada. Los
microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son fermentadores de la
glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de
incubación se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo
amarillo.

La producción de sulfuro de hidrógeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido

a la formación de sulfuro de hierro.

Las cepas de los géneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la
lisina, esto produce un ácido alfa-ceto-carbónico, el cual, con la sal de hierro y bajo la
influencia del oxígeno forma un color rojizo en la superficie del medio.
Teroricamente la prueba para Salmonella enteritidis debe tomar tonalidades descritas en la
tabla pero en laboratorio la prueba es negativa quizá por la temperatura o porque no se
cumplieron las 24 horas completas.

CIT Simmons Citrato Agar

Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la capacidad de usar
citrato como única fuente de carbono y energía.
Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie un inóculo ligero, usando
una ansa sin arrastrar el agar.
 Incubación
A 35-37 ºC, durante 24-48 horas, en aerobiosis.
Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4 días de incubación.
Resultados
-Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
-Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no
hay cambio de color.

En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de

sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo
bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático.
El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH,
que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los
microorganismos capaces de utilizar citrato como única fuente de carbono, usan sales de
amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente producción de alcalinidad.

El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a

través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente,
oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos
orgánicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos
alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producción
de citrato permeasa.

SIMMONS MUESTRA INICIAL RESULTADO

GRUPO CITRATO
CIT

1 E. coli -

2 Salmonella enteritidis +

3 E. coli -

4 Enterobacter aerogenesis +

Salmonella enteritidis es positiva para esta prueba dado que se observó crecimiento y color
azul en el pico, alcalinidad.

TSI Agar-hierro-triple azúcar

Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la
fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico.
Siembra
A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la
superficie del medio.
Incubación
A 35-37°C durante 24 horas, en aerobiosis.
Resultados
1- Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta
la glucosa.
2- Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa,
lactosa y/o sacarosa.
3- Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de
azúcares.
4- La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo
produce gas.
5- El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados

para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono
fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido
sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+, los cuales se combinan con
el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador
de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador
rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduc e a
sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico
sulfuro de hierro de color negro.
TSI MUESTRA INICIAL RESULTADO
GRUPO
G L S GAS H2S

1 E. coli + + + - -

2 Salmonella
+ + - + +
enteritidis

3 E. coli - - - - -

4 Enterobacter
+ + + + -
aerogenesis

G: glucosa; L: lactosa; S: sacarosa

Es positivo para glucosa y lactosa porque hay cambios en la base y el medio del agar y
negativo para sacarosa porque el pico de flauta quedo del color inicial. Se observa una
burbuja de aire en la base lo cual es positivo para gas y el color negro es positivo para la
producción de H2S

Agar OF
Medio de cultivo utilizado en las pruebas bioquímicas de identificación bacteriana en base al
metabolismo oxidativo-fermentativo de las bacterias Gram negativas, a la movilidad y
producción de gas.
Siembra
Inocular, por cada hidrato de carbono que se use y para cada microorganismo en estudio, 2
tubos conteniendo el medio O.F. y el mismo hidrato de carbono. Rotular un tubo con la
inscripción: “Abierto” y otro tubo con la inscripción: “Cerrado” (sellado).

A partir de un cultivo puro de 18-24 horas del microorganismo en estudio, preparar un inóculo
poco denso y sembrar utilizando aguja de inoculación. Picar hasta aproximadamente
0.6 mm del fondo.

Agregar al tubo “cerrado” (sellado) 1 o 2 ml de vaselina o parafina fundida estéril, para excluir
el oxígeno.
Luego, tapar ambos tubos con las tapas apropiadas.
Incubación
Durante 48 horas, a 35-37 ºC, en aerobiosis.
Algunos microorganismos requieren hasta 4 días, y otros hasta 14 días de incubación.
Resultados
El uso del hidrato de carbono, ya sea por fermentación u oxidación, produce acidez en el medio,
con el consecuente viraje del color verde al amarillo.

a. Microorganismos oxidativos del hidrato de carbono en estudio: producen una reacción

ácida solo en el tubo “abierto”. Presentan poco o nulo desarrollo y ausencia de
producción de ácido en el tubo “cerrado”.

b. Microorganismos fermentadores del hidrato de carbono en estudio: producen una

reacción ácida en ambos tipos de tubos.

c. Microorganismos que no utilizan el hidrato de carbono en estudio: no producen cambios

ninguno de los 2 tubos, los cuales permanecen verdes.

Se debe informar: producción de ácido (A), ácido con gas (AG), alcalino (K) o sin cambio (-).
También, puede informarse si el organismo es móvil, cuando crece lejos de la línea de
inoculación.

MUESTRA RESULTADO
GRUPO OF
INICIAL

1. E-coli +

2. Salmonella enteritidis +

3. E. coli -

4. Enterobacter aerogenesis +

El medio basal O.F., fue desarrollado por Hugh y Leifson, para evidenciar la importancia del
significado taxonómico del metabolismo oxidativo-fermentativo de los h i d r a t o s de carbono
por las bacterias Gram negativas.

Cuando un microorganismo es inoculado en 2 tubos del medio O.F. conteniendo el mismo

hidrato de carbono, y uno de los 2 tubos es sellado con vaselina o parafina antes de la incubación,
se puede diferenciar bien el metabolismo oxidativo o fermentativo, así como la no utilización de
un hidrato de carbono por la bacteria en estudio.

En el medio de cultivo, el agregado de una alta concentración de un determinado hidrato de

carbono, hace que los microorganismos utilicen para su desarrollo dicha sustancia, evitando
que bacterias aeróbicas utilicen la tripteína presente con la consecuente producción de
reacción alcalina, la que se neutraliza por la ligera acidez producida por un microoganismo
oxidativo.

El fosfato dipotásico agrega capacidad reguladora, el cloruro de sodio mantiene el balance

osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH que vira al color amarillo en medio ácido.
El contenido de agar, da la propiedad de ser un medio semisólido, y permite determinar la
movilidad y la distribución de los productos ácidos en el medio de cultivo. La glucosa es el hidrato
de carbono más frecuente que se agrega al medio basal O.F., pero también pueden agregarse
otros azúcares, como ser, lactosa, sacarosa, maltosa, manitol o xilosa, entre otros.

Por oxidación o fermentación de un determinado hidrato de carbono, se acidifica el medio y el

indicador de pH vira del color verde al amarillo.

Agar SS Salmonella Shigella Agar.

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de
Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su
presencia.
Siembra
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de
Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su
presencia.
Incubación
Durante24-48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis.
Resultados
Microorganismos Colonias
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Transparentes, centro negro
Shigella flexneri Incoloras
Shigella sonnei Incoloras
Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes, centro negro
Escherichia coli ATCC 25922 Rosadas a rojas
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas cremosas y mucosas
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento
GRUPO SS MUESTRA INICIAL RESULTADO
1 E. coli +
2 Salmonella enteritidis -
No foto No foto
3 E. coli -
4 Enterobacter aerogenesis -
La prueba dio negativa para Salmonella enteritidis aunque teóricamente se reporta como
positiva quizá porque no se llevó a cabo la incubación en aerobiosis.

Prueba de UREA.
Medio utilizado para la identificación de microorganismos, en base a la actividad ureásica.
Es particularmente útil para diferenciar Proteus spp. de otros miembros de la familia
Enterobacteriaceae.
Siembra
Sembrar un inóculo denso a partir de un cultivo puro de 24 horas.
Incubación
A 35-37 ºC, en aerobiosis. Observar las reacciones a las 8, 12,24 y 48 horas de incubación.
Para aquellos microorganismos que hidrolizan lentamente la urea, incubar hasta 72 horas.
Resultados

Microorganismo Actividad ureásica Color del medio

Proteus mirabilis ATCC 43071 Positiva Rojo-rosado
Escherichia coli ATCC 25922 Negativa Amarillo
S. flexneri ATCC 12022 Negativa Amarillo
S. typhimurium ATCC 14028 Negativa Amarillo
MUESTRA RESULTADO
GRUPO UREA
INICIAL

1 E. coli -

2 Salmonella
-
enteritidis

3 E. coli -

4 Enterobacter
-
aerogenesis
La prueba dio negativa para urea al parecer porque las bacterias de estudio son
descomponedoras de urea, pero lentas ya que teóricamente se recomienda visualizar a las
72 horas y solo se revisó a las 24 horas. Aunque comparado con la muestra inicial se
observan cambios en la coloración como turbiedad y otras que se tornan rosadas.

MR-VP Medio
Medio utilizado para la realización del ensayo de Rojo de Metilo y Voges Proskauer.
Es particularmente útil para la clasificación de enterobacterias.
Siembra
Por inoculación directa, a partir del cultivo en estudio.
Incubación
En aerobiosis, a 35-37°C por 3 días.
Resultados

a-Prueba del rojo de metilo:

Añadir unas gotas de una solución de rojo de metilo al 0.04%, observar el color del medio.

b-Prueba del Voges Proskauer:

Añadir 0,6 ml de alfa naftol al 5% en alcohol etílico absoluto y 0.2 ml de hidróxido de potasio al
40% a 2.5 ml de cultivo. Agitar vigorosamente el tubo, y dejar a temperatura ambiente durante
10-15 minutos. Observar el color de la superficie del medio.

1-Prueba del rojo de metilo:

Positivo: color rojo.
Negativo: color amarillo.
2-Prueba de Voges Proskauer:
Positivo: desarrollo de un color rojo en pocos minutos después de una completa agitación
d e l tubo.
Negativo: ausencia de color rojo.

Microorganismo Crecimient o RM VP
E . c oli A TCC 2 5922 Bueno + -
K. pneumoniae A TCC 7 00603 Bueno - +
P . mirabilis ATCC 4 3071 Bueno + -
S. typhimurium A TCC 1 4028 Bueno + -
C itrobacter freundii Bueno + -
E nterobacter aerogenes Bueno - +

GRUPO MRVP MUESTRA INICIAL RESULTADO

1 E-coli -

2 Salmonella enteritidis +

3 E. coli +

4 Enterobacter aerogenesis -

En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable.
La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a través de distintas vías
metabólicas. Según la vía utilizada, se originarán productos finales ácidos (ácido láctico, ácido
acético, ácido fórmico), o productos finales neutros (acetil metil carbinol).
Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podría ser reconocida por la adición de un
indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de productos ácidos, y por la adición de
alfa naftol e hidróxido de potasio para evidenciar la presencia de productos finales neutros.
Voges y Proskauer, describieron una coloración rojiza que aparecía después de adicionar
hidróxido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en medio con glucosa. Esta
coloración se debe a la oxidación del acetilmetil carbinol a diacetilo el cual reacciona con la
peptona del medio para dar un color rojo.

Esta prueba no se pudo caracterizar porque no reacciono con las pruebas de rojo de metilo

Prueba Agar cetrimide

Medio utilizado para el aislamiento selectivo de Pseudomonas aeruginosa y de otras especies
del género. Su fórmula cumple con los requerimientos de la Armonización de Farmacopeas
Europea, japonesa y de los Estados Unidos de Norteamérica (EP, JP y USP
respectivamente).
Siembra
En superficie, por inoculación directa de la muestra estriando o a partir de un caldo de
enriquecimiento
Incubación
En aerobiosis, a 35-37 °C durante 24-48 horas.
Resultados
Observar el crecimiento microbiano, las características de las colonias y la producción de
pigmentos. La presencia de un color verde-azulado corresponde a producción de piocianina,
mientras que un color verde corresponde a la producción de pioverdina y un color rosa claro,
rojizo o marrón oscuro corresponde a la producción de piorrubina. Examinar las placas bajo luz
ultravioneta, ya que la producción de fluoresceína se observa de color amarillo verdoso
brillante que difunde en el agar a partir del crecimiento microbiano.
GRUPO AC MUESTRA INICIAL RESULTADO

10 -5 -

10 -5 -

10 -5 -

10 -5 -

Para esta prueba se sembró de la dilución 10-5 del suelo y dio negativo por lo cual se
describe la ausencia de Pseudomonas aeruginosa.

Pseudomonas agar F. King B

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento, la detección y la diferenciación de especies de
Pseudomonas spp. en base a la producción de fluoresceína. Conocido también como medio
King B.
Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, del cual se sospeche la presencia de
Pseudomonas spp., tomar una colonia y estriar la superficie del medio.
Incubación
Durante 18-24 horas a 35-37 ºC, en aerobiosis. Si no se observa crecimiento, reincubar a
25-30 ºC, o dejar a 22 ºC y observar diariamente hasta 7 días.
Resultados
Examinar las colonias bajo luz ultravioleta, a 260nm.
Se considera un resultado positivo la observación de fluoresceína, que es un pigmento de
color amarillo, amarillo-verdoso fluorescente que rodea la colonia o que se extiende por todo
el medio de cultivo debido a fenómenos de difusión.
KING- RESULTADO GRUPO 3 RESULTADO GRUPO 2
GRUPO
B

1 E.coli -

2 Salmonella
+
enteritidis

3 E. coli +

4
Enterobacter -
aerogenesis
En el medio de cultivo, la tripteína y la peptona de carne aportan los nutrientes necesarios para
el desarrollo bacteriano, la glicerina favorece la producción de pigmentos, la concentración de
fosfatos estimula la producción de fluoresceína e inhibe la producción de
piocianina y piorrubina.

YDCA
indican los componentes del medio: Yeast (levadura), ‘calcium carbonate’ (carbonato de
calcio), dextrosa y agar.
Resultados
GRUPO VDCA MUESTRA INICIAL RESULTADO

1 E-coli -

2 Salmonella
-
enteritidis

3 E. coli -

4 Enterobacter
-
aerogenesis

Negativo no se encontró en las bases de datos consultadas especificaciones de este medio

de cultivo.

Agar EMB
Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos
Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el
desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.
Siembra
En superficie, por estriado a partir de un inóculo poco denso, para obtener colonias aisladas.
En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.
Incubación
De 24 a 48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis.
Resultados
Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un
mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos
Gram negativos. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa,
y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno;
éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de
Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un característico brillo metálico. Las cepas que
utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no
lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida spp. como colonias
rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C.
albicans. Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes,
mientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul
lavanda; esto puede ocurrir, aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa
al 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. En este medio
se obtiene además, un buen desarrollo
de especies de Salmonella y Shigella.
GRUPO EMB MUESTRA INICIAL RESULTADO

1 E-coli -

2 Salmonella
-
enteritidis

3 E. coli -

4 Enterobacter
-
aerogenesis

Agar ENDO
Desarrollado para el recuento de coliformes totales en agua, bebidas y otras muestras por
medio de la técnica de filtración por membrana.
Siembra
Filtrar la muestra a analizar. El volumen que se filtra depende de la probable contaminación de
la muestra.
- Embeber la almohadilla con el caldo m-Endo hasta la saturación (la cantidad de medio de
cultivo depende del grado de absorción de la misma).
- Apoyar la membrana filtrante sobre la almohadilla embebida con el medio de cultivo.
Incubación
Incubar las placas a 35-37 °C por 24 horas. Ocasionalmente, los microorganismos no coliformes
pueden producir brillo metálico. Para confirmar las colonias sospechosas, transferirlas a tubos
con caldo verde brillante y bilis al 2%, con campanitas de Durham. Incubar los tubos por 24-48
horas a 35-37 °C. Los coliformes habrán producido gas por fermentación de la lactosa, al cabo
de ese período.
Resultados
El recuento debe realizarse en aquellas placas que contengan entre 20 y 80 colonias y no más
de 200, ya que se trata de un medio selectivo.
La concentración microbiana debe expresarse como el número de microorganismos
presentes en 100 ml de muestra.
ENDO ENDO BACTERIA
ENDO ENDO 10-5
Grupo Bacteria CONOCIDA
10 E-5
Conocida
1 E-coli
+ -

2 Salmonella
enteritidis - -

3 E. coli
- -
 4
Enterobacter - -
aerogenesis

4.3 Morfología Bacteriana Resultados

MICROORGANISMO IMAGEN DESCRIPCION

Bacteria que pertenece al
género Enterobacter, de la
familia de las
Enterobacteriaceae. Es un
bacilo Gram-negativo,
anaeróbico facultativo, no
esporulante oxidasa negativo,
Enterobacter catalasa positivo, citrato
aerogenesis positivo, indol negativo.

Basilos gram +, Cocos gram -

Muestra de suelo

Resultados Cámara De Neubauer

Instrumento utilizado en medicina y biología para realizar el recuento de esporas y células en un

medio líquido, cámara de recuento está adaptada al microscopio de campo claro o al de
contraste de fases. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente deprimidas en
cuyo fondo se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula de dimensiones
conocidas. Se cubre la cámara con un cubreobjetos que se adhiere por simple tensión superficial
(en especial una vez que se haya añadido la muestra líquida).

Luego se introduce, por capilaridad entre la cámara y el cubre, el líquido con las células a
contar, generalmente tras una dilución previa; puesto que la cámara tiene dos zonas esto
permite hacer dos recuentos simultáneamente. Se observa la retícula al microscopio con el
aumento adecuado y se cuentan las células.
A partir del número de células contadas, conociendo el volumen de líquido que admite el
campo de la retícula, se calcula la concentración de células en la muestra líquida aplicada.1

El cálculo de la concentración de células se puede expresar así:

Partículas / μl = (partículas contadas) / [ (superficie contada (mm²) ∙profundidad de

la cámara(mm)] ∙ dilución

Retículo Neubauer.jpg
En la retícula central, la cámara de Neubauer tiene un cuadrado primario que contiene nueve
cuadrados secundarios, cada uno de ellos dividido a su vez en 16 cuadrados terciarios. El
cuadrado secundario central contiene no 16, sino 25 cuadrados, cada uno de ellos dividido a
su vez en 16 cuadrados cuaternarios. En los bordes de este cuadrado central se cuentan los
hematíes, utilizando sólo los cuadrados de los bordes del terciario central y uno de los
centrales. En los secundarios de los
bordes superiores e inferiores de la cámara se hace
el recuento leucocitario. Grupo 2
Cuadrícula 1
Grupo 1 35 39 35 53
Cuadrícula 1 40 29 41 41
26 2 6 5 37 42 28 31
5 10 7 9 33 25 40 31
-- - - - Ʃ
9 15 18 52 Total 580
Ʃ 40 27 31 66
Cuadrícula 2
Total 164
39 29 42 38
Cuadrícula 2
4 - - 9 33 32 33 44
- - - - 28 25 31 30
- - - - 27 41 42 28
9 15 18 52 Ʃ
Ʃ 16 18 28 6 Total 537
Total 81 Cuadrícula 3
Cuadrícula 3 25 37 35 33
1 15 4 3 32 27 25 25
1 - 9 - 30 30 38 29
1 1 11 9 34 32 30 30
- 5 4 1
Ʃ
Ʃ 3 21 28 4
Total 492
Total 56
Cuadrícula 4
Cuadrícula 4
18 13 10 16 35 36 37 29
6 10 7 4 34 81 29 30
5 9 26 10 29 30 35 31
2 2 4 3 32 34 28 -
Ʃ 31 34 47 34 Ʃ
Total 141 Total 513

Ʃ= 164+81+56+141= 442 Ʃ= 580+537+492+513= 2.122

Promedio= 110,5 Promedio= 530.5
UFC/gr= 110,5*6*10= 6.630 UFC/gr= 530.5*6*10= 31.830
 4.4 Resultados de observación de hongos

Todos los hongos son organismos eucariotes y poseen al menos núcleo y membrana nuclear,
retículo endoplásmico, mitocondrias y aparato secretor. Los hongos crecen en dos formas
básicos: levaduras y mohos. Los mohos son hongos filamentosos multicelulares cuya forma y
estructura tenida en cuenta a partir de sus características macro y microscópicas permiten su
clasificación. Macroscopicamente se tendrán en cuenta las características de las colonias en
los medios de cultivo. Microscópicamente lo será la existencia y características de sus
estructuras.

MICROORGANISM IMAGEN DESCRIPCION

O
Al tomar muestras de hongos
filamentosos para observarlos
al microscopio,
frecuentemente se
fragmenta el micelio. Sobre
todo en el estudio de los
Hongo sp1 dermatofitos, este
inconveniente se obvia
obteniendo un microcultivo.

El hongo crece sobre un

cubreobjetos que luego se
coloca sobre un
portaobjetos al que añadimos
un
transparentador con
colorante ( Lactofenol). De
este modo se observan las
hifas intactas facilitando su
correcta identificación.
Hongo sp2
Hongo sp3 Los conidióforos generan
esporas solitarias o en
cadena. A veces están
agrupados en un haz
(coremio) o sobre un
conjunto de hifas
entrelazadas (acérvula,
esporodoquio) o dentro de un
conidioma (picnidio).

Hongo sp4 HIFA es la unidad

vegetativa en la estructura de
los hongos.

Su forma es filamentosa y de
tipo tubular con paredes
celulares, pudiendo
presentar tabiques (hifas
septadas) o no (hifas
aseptadas) y que contienen
en su interior citoplasma que
viene a ser una sustancia
similar a la clara de huevo
junto con pequeñas
estructuras con morfologías
y funciones determinadas
denominadas
organoides.

CONCLUSIONES

Esta práctica permite un acercamiento a las técnicas bioquímicas para la identificación de

microorganismos de diferentes grupos, aunque en la actualidad pruebas de ADN ribosomal
permiten acercarse más a la identificación taxonómica de los microorganismos de interés.

Las pruebas bioquímicas sirven para hacer identificación de familias sin embargo la identificación
hasta especie es muy compleja.

La tinción de gram permite conocer características de la pared celular de los individuos de

estudio y clasificar en grandes grupos de acuerdo a la taxonomía de bergeys.

La actividad permite el acercamiento del estudiante de formación virtual al manejo de

herramientas tecnológicas para conocer los métodos y técnicas empleados en la actualidad.

La cámara de neubauer se usa para hallar densidad poblacional, pero deben hacerse varias
repeticiones para sacar promedios ya que se observaron diferencias significativas en el ejercicio
que se hizo.
El video sobre la vida en el suelo es un objeto de aprendizaje que permite acercarnos al
universo microbiano y la relevancia para todos los ciclos biogeoquímicos.

El uso de organosclorados tiene efecto sobre la diversidad microbiana como estudiantes de la

especialización debemos enfocarnos en las buenas practicas sobre el uso del suelo ya que es
un sistema dinámico.

Se ha podido apreciar la importancia de la actividad de los microorganismos en los diferentes

aspectos que denotan la fertilidad de un suelo y la sostenibilidad de ecosistemas y agro
ecosistemas. El manejo de diversas prácticas culturales (establecimiento de leguminosas en
rotación de cultivos, abonos verdes, aplicación de materia orgánica) permite que los sistemas
agrícolas requieran menos aplicaciones externas de energía; con ello se favorece la
conservación del recurso suelo en una condición por demás favorable. Por otra parte, estas
prácticas permiten que la actividad microbiana sea favorecida y que se tenga mayor diversidad
de microorganismos, de tal forma que se establezcan diversas relaciones tróficas que
contribuyan a la sanidad y fertilidad de los suelos manipulados en esta forma.

El conocimiento de la actividad fisiológica de los microorganismos del suelo ha permitido

seleccionar aquellos con potencial de uso en la agricultura. De esta manera, el hombre ha
utilizado bacterias y hongos que propician mejor crecimiento y desarrollo de las plantas en los
agro ecosistemas donde se aplican. Con ello, y de acuerdo con un adecuado manejo de los
sistemas, es posible incrementar la actividad microbiana del suelo, propiciando así el
fortalecimiento de la sostenibilidad de los ecosistemas y agro ecosistemas. Sin embargo, el uso
de ciertos microorganismos debe contemplar algunos aspectos que permitan definir su potencial
benéfico e incluso la factibilidad de utilizarlos, ya que algunos de ellos no son susceptibles de ser
aplicados directamente en cultivos básicos (frijol o maíz), como es el caso de los hongos
micorrízicos arbusculares, por ejemplo.

BIBLIOGRAFÍA.

AHMED E. Microbiología de los alimentos. Manual de laboratorio. Editorial Acribia, España. 2006.

BARTHA R, ATLAS R. Ecología microbiana y microbiología ambiental. Cuarta edición. Prentice

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Cerrato, R. F., & Alarcón, A. (2002). La microbiología del suelo en la agricultura sostenible.
Universidad Autónoma del Estado de México, Programa Editorial Universitario.

KONEMAN Diagnóstico microbiológico. Sexta edición. Editorial Panamericana. 2008.

MARK C. Microbiología del suelo. Un enfoque exploratorio. Editorial Cengage learning, Argentina.
2000.

PARKER J, MARTINKO J, MADIGAN M. Brock biología de los microorganismos. Décima

edición. Prentice Hall. 2003.

WILLEY J, SHERWOOD L, WOOLVERTON CH. Microbiología de Prescott, Harley y Klein.

Séptima edición. Editorial Macgraw Hill, Madrid España. 2009.