PRÁCTICA N°06

I. TÍTULO : DETECCIÓN DE MANCHAS DE SANGRE MEDIANTE LAS

PRUEBAS DE ORIENTACIÓN

II. INTRODUCCIÓN

La sangre es uno de los fluidos biológicos más frecuentes e importantes como

evidencia física en investigaciones de hechos violentos. Hallar manchas de

sangre en una escena de crimen aporta información muy valiosa que puede ser

decisiva en la resolución de un crimen. (Zweidinger,1973, Shiro, 2002 y

Neufeld, 1965)

Hoy en día la Prueba de Luminol es una de las técnicas bioquímicas forenses

más utilizadas en la investigación forense para detectar trazas de sangre en una

escena del crimen. La Quimioluminiscencia de color azul del Luminol es

catalizada por la Hemoglobina de la sangre. El reactivo Luminol (5-amino-2,3-

dihydro-1,4-phthalazinedione) reacciona con la Hemoglobina de la sangre. Esta

reacción es ampliamente utilizada en la investigación por la Comunidad

Científica Forense como una prueba orientativa para la búsqueda de manchas de

sangre. La emisión de luz es casi instantánea, cuando el Luminol es rociado

sobre la sangre. El Luminol puede ser utilizado para detectar la presencia de

sangre en cantidades tan bajas o diluidas como 1:106. Inclusive las manchas de

sangre de una antigüedad mayor a seis años, pueden ser localizadas en

superficies lavadas, en ambientes amplios y sobre diferentes soportes. (QUISPE

SERGIO, 2014)

En la práctica también se realizó investigación de la enzima catalasa. En 1863,

SCHÖNBEIN, propuso una técnica para identificación de manchas de sangre

 que se basaba en la existencia de catalasas en la muestra. El método es el

siguiente:

REACCION DEL AGUA OXIGENADA: Al añadir agua oxigenada a una

muestra que contenga catalasas, se produce un aumento de la temperatura de la

solución y la formación de burbujas.

III. OBJETIVOS

 Determinar la localización e identificación presuntiva de manchas no

visibles de sangre mediante la prueba de luminol.

 Determinar si la mancha que estudiamos es de sangre , mediante pruebas

de orientación (prueba de luminol y agua oxigenada)

 Observar cómo reacciona el luminol a las muestras que han sido

expuestas a diferentes tiempos.

IV. MATERIALES

 Pañuelo blanco con sangre seca de humano (2 semanas).

 Pañuelo blanco con muestra de sangre de humano lavada (2 semanas).

 Pañuelo blanco con sangre de humano (1 día).

 Pañuelo blanco con muestra de sangre de humano lavada.

 Pañuelo blanco con sangre seca de animal.

 Pañuelo blanco con sangre de grado.

 Pañuelo blanco con tinta de lapicero .

 Pañuelo blanco con tinta de plumón.

 Pañuelo blanco con cera.

 Hisopo

 Agua oxigenada
  Luminol

V. PROCEDIMIENTOS

INVESTIGACIÓN DE LA ENZIMA CATALASA

Para esta prueba se utilizó los pañuelos blancos manchados con diferentes

muestras (sangre humana , sangre de animal , sangre de grado , tinta de lapicero

, tinta de plumón , cera) y con un hisopo con agua oxigenada se hará reaccionar.

PRUEBA DE LUMINOL

Para la prueba de luminol se trabajó en un cuarto oscuro . Se trabajó con los

pañuelos blancos de la siguiente manera:

- Pañuelo blanco manchado con sangre de humano (SECO)

- Pañuelo blanco manchado con sangre de humano y luego lavado (SECO)

- Pañuelo blanco manchado con tinta roja (lapicero y plumón) (SECO)

- Pañuelo blanco manchado con sangre de animal.(SECO)

- Pañuelo blanco manchado con sangre de grado(SECO)

VI. CONCLUSIONES

- El uso de luminol como reactivo de búsqueda tanto en la escena del crimen

como en el laboratorio es muy útil por su capacidad de localizar manchas no

visibles de sangre, dando positivo a muestras sometidas a lavado , mediante

la observación de la reacción de Quimioluminiscencia del lumniol con la

hemoglobina de la sangre.

- Al agregar agua oxigenada a las muestras de sangre de animal y de humano ,

observamos la formación de burbujas como consecuencia del oxígeno que se

desprende de la reacción , dando un resultado positivo , pero esta prueba es

 muy poco específica porque además de la sangre hay otras sustancias que

son capaces de dar un resultado positivo.

- Al observar la reacción del luminol en las muestras de sangre nos

percatamos que es más efectivo con sangre antigua que con sangre fresca ,

así teniendo como resultado que en la muestra de sangre de 2 semanas hubo

mayor luminiscencia que en el resto de las muestras de sangre.

- En las muestras de sangre de grado, tinta de lapicero , tinta de plumón y cera

los resultados fueron negativos , concluyendo que la prueba de luminol tanto

como el agua oxigenada no reaccionan con estas sustancias .

VII. RECOMENDACIONES

Se recomienda que para realizar la práctica de luminol siempre debe ser en un

ambiente oscuro , para poder observar la luminiscencia blanco-azulada .

VIII. REFERENCIAS

CASTELLO PONCE, A.; ALVAREZ SEGUI, M.; MIQUEL FEUCHT, M. y VERDU

PASCUAL, F.A.. Revelado de manchas latentes: efectividad del luminol y evaluación
de su efecto sobre el estudio del DNA. Cuad. med. forense [online]. 2002, n.28
[citado 2019-12-02], pp.33-36. Disponible en:
<http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1135-
76062002000200004&lng=es&nrm=iso>. ISSN 1988-611X.

FELISSA, S. A. (2013). DEGRADACION DE LA MANCHA HEMATICA POR

ACCION DEL CALOR.

QUISPE, SERGIO y FLORES, ANDRÉS. Detección de manchas de sangre mediante

la Prueba de Luminol en la investigación forense. Rev.Cs.Farm. y Bioq. [online]. 2014,
vol.2, n.1 [citado 2019-12-02], pp. 83-91 . Disponible en:
<http://www.revistasbolivianas.org.bo/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2310-
02652014000100010&lng=es&nrm=iso>. ISSN 2310-0265.
IX. ANEXOS

Figura N° 01
Izquierda: muestra de sangre humano con data de 1 día vista a luz natural . Derecha: observación en
ambiente oscuro la reacción de quimioluminiscencia luego de aplicar el luminol.

Figura N° 02
Izquierda: muestra de sangre humano con data de 2 semanas vista a luz natural . Centro : observación
de la formación de burbujas después de agregar agua oxigenada . Derecha: observación en ambiente
oscuro la reacción de quimioluminiscencia luego de aplicar el luminol.
 Figura N°03
Izquierda: muestra de sangre humano con data de 2 semanas vista a luz natural . Derecha:
observación en ambiente oscuro la reacción de quimioluminiscencia luego de aplicar el
luminol.

Figura N°04
Izquierda: muestra de sangre animal. Derecha: observación de la formación de burbujas
después de agregar agua oxigenada
 Figura N°05
Izquierda: muestra de sangre humano sometida a lavado con detergente , observación a luz
natural . Derecha: observación en ambiente oscuro la reacción de quimioluminiscencia
luego de aplicar el luminol.

Figura N°06 : Muestra de sangre de

grado
Figura N°07: Muestra de tinta de plumón

Figura N°08 :Muestra de tinta de plumón

Figura N°09 : Muestra de cera.