Asignatura: Microbiología General Nota:

Número de práctica: 08
Fecha de realización: 04 de julio del 2019Fecha de 11 de julio del 2019
entrega:
Integrantes/Grupo N°: 1A Arciniega Edison | Balarezo Fabiana

TEMA: METABOLISMO MICROBIANO II Y MECANISMOS DE PATOGENICIDAD MICROBIANA.

COCOS GRAM POSITIVOS DEL GÉNERO STAPHYLOCOCUS
OBJETIVOS:

 Comprender el fundamento de las pruebas bioquímicas utilizadas para la identificación de bacterias

Gram positivas del género Staphylococus.
 Identificar la cepa asignada por su género y especie mediante pruebas bioquímicas y características de
crecimiento en medios sólidos.
 realizar pruebas para determinar la producción de enzimas vinculadas con la patogenicidad de
microorganismos del género Staphylococus.

MARCO TEÓRICO:
El género Staphylococcus está formado por cocos Gram positivos, se caracterizan por ser bacterias no móviles,
no esporuladas, no poseen cápsula, son anaerobias facultativas. La mayoría de los estafilococos producen
catalasa, característica que se utiliza para diferenciar el género Staphylococcus de los géneros Streptococcus y
Enterococcus, otra forma de detección es la coagulasa la cual permite diferenciar S. aureus coagulasa positivo de
las demás especies de estafilococos coagulasa negativos, dicha cepa crece bien en medios de cultivos no
selectivos, como el agar sangre, agar chocolate, agar cerebro corazón infusión y medios líquidos para
hemocultivo donde se recupera fácilmente. El medio recomendable y usado por la mayoría de los laboratorios es
el agar sal manitol o medio de Chapman por su elevado contenido de sal que inhibe el crecimiento de la mayoría
de las bacterias Gram negativas. Otros medios utilizados para el aislamiento son el agar sangre suplementado con
colistina y el ácido nalidíxico y agar feniletanol que también inhibe el crecimiento de las bacterias Gram
negativas. (Cervantes-García, 2014)

RESULTADOS:
Tabla N° 1. Resultados de pruebas bioquímicas y en cultivo

Muestra 1 Muestra 2
Nombre de la bacteria (género y S. saprophyticus / S. epidermidis Staphylococcus aureus
especie)
Morfología y coloración Gram Cocos / Gram positivos Cocos / Gram positivos
Color del medio manitol antes y después Rosado / Amarillo Rosado / Amarillo
de sembrar
Forma, tamaño y color de las colonias Transparente Blanquecina tenue
de manitol
¿Este medio es selectivo, diferencial o Es un medio selectivo debido a su alta concentración salina que actúa como un medio
ambos? óptimo para la formación de estafilococos y diferencial por la capacidad de los
EXPLIQUE SU RESPUESTA microorganismos de fermentar o no manitol. (Laboratorios Britania, 2011)
Prueba Resultado
CATALASA (+) (+)
COAGULASA (-) (+)
Producción de hemolisinas en agar Se evidencian colonias blanquecinas Se evidencian colonias con halo de
sangre (describir las características de normales por lo que corresponde a una inhibición por lo que corresponde a una
las colonias y el tipo de hemólisis) Gamma hemólisis Beta hemólisis
DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

Las pruebas bioquímicas empleadas para la identificación de bacterias Gram positivas se fundamentan en una
enzima catalasa de las bacterias que descompone el peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno bajo la
fórmula 2𝐻2 𝑂2 → 2𝐻2 𝑂 + 𝑂2 , de esta manera, los microorganismos que liberen oxígeno en forma de burbujas
corresponderán a catalasa positiva. En la práctica se observa este fenómeno para las muestras 1 y 2, el mismo que
permite diferenciar Staphylococcus spp. (positivo) de Streptococcus spp. y Enterococcus spp. (negativo) debido
a que estos últimos no presentan la enzima. (Bou, Fernández-Olmos, García, Sáez-Nieto, & Valdezate, 2011);
La prueba coagulasa se basa en una endocoagulasa o coagulasa ligada o "clumping factor" que está unida a la
pared celular, su función es actuar directamente sobre el fibrinógeno provocando la formación de coágulos o
grumos cuando se mezcla una suspensión bacteriana con plasma citratado, la capacidad que posee el
microorganismo de coagular el plasma gracias a la enzima coagulasa permite la diferenciación entre S. aureus
(positivo) de otras especies como S. saprophyticus y S. epidermidis (negativo). (Mandell & Bennett, 2012). En el
estudio realizado se evidencia la presencia de un coagulo en la muestra 2, mientras que la muestra 1 no lo presenta,
indicador que permitió una identificación más acertada; El género Staphylococcus es el responsable de un gran
número de factores virulentos que afectan al huésped, causándole enfermedades, por lo que el cultivo Agar sangre
es un medio que permite determinar el tipo de hemólisis realizada por su bacteria y por ende dar una idea de qué
clase de Staphylococcus se está tratando, esto debido a la presencia de hemolisinas presentes en estas bacterias
que conducen a la lisis de eritrocitos y toxicidad en otras líneas celulares. Las toxinas α, β y γ hemolíticas están
involucradas en la invasión celular del huésped y en la penetración de sus tejidos. En la práctica se observa que
la muestra 2 presenta una β hemólisis por la ruptura eritrocitica, mientras que la muestra 1 corresponde a una γ
hemólisis, es decir que no hay ruptura de eritrocitos. (Sánchez & Angarita, 2018) mencionan en su estudio sobre
hemólisis en cepas de Staphylococcus spp., que una β hemólisis correspondería a S. aureus y una γ hemólisis
corresponde a S. epidermis, lo cual corrobora las especies identificadas en el presente informe. El medio manitol
sirve como un método de diferenciación bacteriano que identifica a los microorganismos positivos a la coagulasa,
(Becton Dickinson, 2013) su cambio de color se debe a la fermentación de manitol indicada por rojo fenol, por lo
tanto, los estafilococos positivos a la coagulasa producen un medio y colonias de color amarillo, tal como se
evidenció en los resultados de la práctica y este tipo de bacterias son las que reaccionarán con el medio.

CONCLUSIONES:
Se identificó el género Staphylococcus spp, mediante la prueba de catalasa positiva a través de la producción de
gas en forma de burbujas, y la especie Staphylococcus aerous por la prueba de coagulasa positiva formación de
un coagulo blanquecino, para el medio de agar sal manitol o medio de Chapman la especie S. aureus.,fermenta el
manitol y genera un cambio de color en el medio que vira de rojo pálido a amarillo mientras que para los
Staphylococcus coagulasa negativos como S. saprophyticus, S. epidermidis que no fermentan el manitol y crecen
en el medio formando colonias pequeñas de color que varía de blanco a rosado, para el agar sangre suplementado
con colistina y el ácido nalidíxico y agar feniletanol caracterizado por colonias de color gris que también inhibe
el crecimiento de las bacterias Gram negativas.

Se concluye que las enzimas vinculadas para la patogenicidad de bacterias del género Staphylococcus se utiliza
la catalasa enzima que poseen citocromos que provocan el desprendimiento de burbujas procedentes del oxígeno
e indica que la prueba es positiva, para la detección de la coagulasa enzima extracelular endocoagulasa que
coagula el plasma de las demás especies de estafilococos coagulasa negativos.

Tinción Gram Catalasa Coagulasa Agar sangre Manitol

BIBLIOGRAFÍA:
Cervantes-García, E. (2014). Características generales del Staphylococcus. Obtenido de
https://www.medigraphic.com/pdfs/patol/pt-2014/pt141e.pdf

Becton Dickinson. (2013). BD Mannitol Salt Agar. (April), 1–3. Retrieved from
https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8771
Bou, G., Fernández-Olmos, A., García, C., Sáez-Nieto, J. A., & Valdezate, S. (2011). Métodos de identificación
bacteriana en el laboratorio de microbiología. In Enfermedades Infecciosas y Microbiologia Clinica (Vol.
29). https://doi.org/10.1016/j.eimc.2011.03.012
Laboratorios Britania, S. A. (2011). Manitol Salado Agar. Laboratorios Britania, 1–2. Retrieved from
http://www.britanialab.com/productos/B02118 REV 01-MANITOL SALADO AGAR.pdf
Mandell, G., & Bennett, J. (2012). Etiopatogenia microbiológica 16. “Enfermedades Infecciosas Principios y
Práctica,” 255–272. Retrieved from http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/Staphylococcus.pdf
Sánchez, Y., & Angarita, M. (2018). Determinación de hemólisis en cepas de Staphylococcus spp . causantes
de mastitis bovina. 5(1), 15–30. Retrieved from file:///C:/Users/PC 1/Downloads/266-Texto del artículo-
846-3-10-20190422.pdf