PRÁCTICA N°03

DETECCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE CROMO VI

MÉTODO: ESPECTROFOTÓMETRO

RESUMEN

La presente práctica detectamos el Cromo VI con el método de Espectrofotometría UV, se determinaron

diferentes concentraciones para las fiolas de Cromo VI, se le agregaron 15 ml de nitrato de sodio y 3 ml
de ácido clorhídrico, por último 0.5 ml de difenilcarbazida. Se hizo un análisis con el espectrofotómetro y
los resultados que se obtuvieron nos sirvieron para hacer las gráficas y obtener datos que puedan ser
interpretados para obtener un resultado total, esta práctica nos ayuda para aprender a hacer este tipo de
análisis en laboratorio para la detección de este contaminante. Concluimos que la práctica se llevó acabo
de manera correcta la metodología y nos ayudó a determinar resultados y variables.

Palabras clave: espectrofotómetro, Cromo VI, detección, análisis

ABSTRACT

In the present practice, we detect Chromium VI with the UV Spectrophotometry method, different
concentrations were determined for Chromium VI fiolas, 15 ml of sodium nitrate and 3 ml of hydrochloric
acid were added, finally 0.5 ml of diphenylcarbazide. An analysis was made with the spectrophotometer
and the results obtained were used to make the graphs and obtain data that can be interpreted to obtain
a total result, this practice helps us to learn how to do this type of laboratory analysis for the detection of
This pollutant We conclude that the practice was carried out correctly in the methodology and helped us
determine results and variables.

Keywords: spectrophotometer, Chrome VI, detection, analysis

INTRODUCCIÓN

La espectrofotometría es de gran importancia debido a que es una técnica que nos permite determinar la
concentración de una sustancia en disolución, se basa en la absorción de las radiaciones por parte de las
moléculas y esta cantidad de radiación absorbida, depende directamente de la concentración de la
sustancia, por lo tanto, a mayor concentración del analito mayor absorción de la radiación. (Luna E, 2013)

El cromo hexavalente es considerado un compuesto tóxico que puede ser encontrado algunas veces en el
agua, es una forma cancerígena del metal cromo en estado de oxidación. Su toxicidad puede ser tan grande
que provoca dalos en el hígado, problemas reproductivos y de desarrollo, también cáncer. (Fluence, 2016)

Las mayores actividades humanas que incrementan las concentraciones de Cromo (III) son el acero, las peleterias
y las industrias textiles, pintura electrica y otras aplicaciones industriales del Cromo (VI). (Lenntech, s.f.)

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

 Cuantificar y detectar el Cromo VI con el método de difenilcarbazida.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Determinar la cantidad de Cromo adecuado para la práctica.

 Titular con precisión los reactivos para la correcta elaboración de la práctica.
 Ejecutar la curva de calibración para obtener LOD y LQD.
 Interpretar los resultados para dar un diagnóstico.
MARCO TEÓRICO

El Cromo (VI) es el elemento de cromo en su estado de oxidación +6. El cromo hexavalente puede darse de
forma natural en el medio ambiente como resultado de la erosión de depósitos crómicos naturales o crearse
artificialmente durante procesos industriales. El cromo VI se puede dar de forma natural a consecuencia de la
transformación de Cr(III) en las condiciones adecuadas, por ejemplo, con exposición a luz UV, altas temperaturas,
niveles reducidos de humedad, valores de pH bajos o agentes oxidantes. El cromo, en su estado de oxidación,
puede ser extremadamente estable y persistente en el entorno acuático. (AfirmGroup, 2018)

Actualmente se ha establecido que diversos compuestos de cromo, en forma de óxidos, cromatos y dicromatos,
son contaminantes ambientales presentes en agua, suelos y efluentes de industrias, debido a que dicho metal
es ampliamente utilizado en distintas actividades manufactureras, tales como: cromado electrolítico, fabricación
de explosivos, curtido de pieles, aleación de metales, fabricación de colorantes y pigmentos, etc. El cromo se
encuentra presente en agua y suelo principalmente en dos estados de oxidación: Cr (III) o Cr (VI), aunque
también puede encontrarse como óxido de cromo, sulfato de cromo, trióxido de cromo, ácido crómico y
dicromato (Zouboulis et al., 1995). En presencia de materia orgánica, el Cr (VI) en solución es reducido a Cr (III);
sin embargo, altas concentraciones del ión en estado hexavalente pueden sobrepasar esta capacidad de
reducción, lo que impediría su adecuada eliminación (Cervantes et al., 2001).

Los compuestos de cromo hexavalente son un grupo de sustancias químicas que tiene propiedades
beneficiosas, como resistencia a la corrosión, durabilidad y dureza. Estos compuestos se han usado en amplia
medida como anticorrosivos y para fabricación de pigmentos, acabado de metales y cromados, producción de
acero inoxidable, curtido de cueros y conservantes para madera. También se han usado en procesos de teñido
en la industria textil, tintas de impresión, lodos de perforación, fuegos artificiales, tratamiento de aguas y síntesis
de sustancias químicas. (INC, 2015)

Ilustración N°01: Peróxido de Cromo VI

La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la detección específica de
moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza
(contaminantes, biomoléculas, etc) y estado de agregación (sólido, líquido, gas). Los fundamentos físico-
químicos de la espectrofotometría son relativamente sencillos.

Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna. Esto permite que
se inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el de la fotosíntesis en plantas y bacterias. La Mecánica
Cuántica nos dice que la luz está compuesta de fotones cada uno de los cuáles tiene una energía:

Efotón = h⋅ν = h⋅c/λ

Donde c es la velocidad de la luz, ν es su frecuencia, λ su longitud de onda y h= 6.6 10 -34 J⋅s es la constante
de Planck. Cuando decimos que una sustancia química absorbe luz de longitud de onda λ, esto significa que las
moléculas de esa sustancia absorben fotones de esa longitud de onda.

En esta práctica estudiaremos la absorción de luz en el ultravioleta cercano (λ≈325-420 nm) y en el visible (λ≈420-
900 nm). Cuando una molécula absorbe un fotón en este intervalo espectral, se excita pasando un electrón de
un orbital del estado fundamental a un orbital excitado de energía superior. De esta manera la molécula
almacena la energía del fotón:

A + h⋅ν → A *

E(A * ) = E(A) + Efotón

Como la energía se conserva, la diferencia de energía entre el estado fundamental de la molécula (A) y su estado
excitado (A * ) debe ser exactamente igual a la energía del fotón. Es decir, una molécula sólo puede absorber
fotones cuya energía h⋅ν sea igual a la energía de un estado molecular excitado. Cada molécula tiene una serie
de estados excitados discretos (o bandas) que dependen de su estructura electrónica y que la distinguen del
resto de moléculas. Como consecuencia, el espectro de absorción, es decir, la luz absorbida en función de la
longitud de onda, constituye una verdadera seña de identidad de cada sustancia o molécula.

La espectrometría ultravioleta-visible o espectrofotometría UV-Vis implica la espectroscopia de fotones en la

región de radiación ultravioleta-visible. Utiliza la luz en los rangos visible y adyacentes (el ultravioleta (UV)
cercano y el infrarrojo (IR) cercano.

En esta región del espectro electromagnético, las moléculas se someten a transiciones electrónicas.

Esta técnica es complementaria de la espectrometría de fluorescencia, que trata con transiciones desde el estado
excitado al estado basal, mientras que la espectrometría de absorción mide transiciones desde el estado basal
al estado excitado.

El espectrofotómetro instrumento que tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática (de un
largo de onda particular) a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra.

Funciones

1- Nos da información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra. Esto podemos lograrlo midiendo la
absorbancia (Abs) a distintos largos de onda (l) y graficar estos valores en función del largo de onda, formando
un espectrograma. Como cada sustancia tiene unas propiedades espectrales únicas, distintas sustancias
producen distintos espectrogramas. Esto se debe a que cada sustancia tiene un arreglo de átomos
tridimensional particular que hace que cada sustancia tenga características únicas. Al ser expuestos a la luz del
especrofotómetro, algunos electrones de los átomos que forman las moléculas absorben energía entrando a un
estado alterado. Al recuperar su estado original, la energía absorbida es emitida en forma de fotones. Esa
emisión de fotones es distinta para cada sustancia, generando un patron particular, que varía con el largo de
onda usado. Dependiendo del largo de onda, será la cantidad de energía absorbida por una sustancia, lo que
logra generar un espectro particular al graficar Abs vsl.

1. 2- Nos dice cuanta cantidad de la sustancia que nos interesa está presente en la muestra. La
concentración es proporcional a la absorbancia, según la Ley Beer-Lambert: a mayor cantidad de
moléculas presentes en la muestra, mayor será la cantidad de energía absorbida por sus electrones.

 Abs = K C L
 Abs: absorbancia
 K: coeficientes de extinción molar
 C: concentración
 L: distancia que viaja la luz a través de la muestra. (normalmente es de 1 cm)

La cubeta promedio, que guarda la muestra, tiene dimensiones internas de un centímetro (L). La ecuación
describe una línea recta, donde el origen es cero. Si L es constante (1.0 cm) y se conoce el valor de K,
podemos calcular C en base a Abs:

 Abs / K L = C

El espectrofotómetro mide la absorbancia de una muestra en los espectros de luz ultravioleta y visible (200 a
850 nm). El largo de onda es determinado por un prisma que descompone el rayo de luz de acuerdo al largo
de onda escogido. Luego la luz pasa por una hendidura que determina la intensidad del haz. Este haz
atraviesa la muestra y llega a un tubo fotográfico, donde es medido. La cantidad de luz que atraviesa la
muestra es el porcentaje (%) de trasmitancia. Podemos usar esta unidad o cambiarla a absorbancia usando la
siguiente ecuación.

 %T = - Log Abs.

El espectrofotómetro nos puede dar ambos valores a la misma vez, ahorrando la necesidad de hacer los
cálculos. (Trasmitancia= cantidad de luz que atraviesa la mezcla). Una característica del instrumento es la
necesidad de "blanquear" el aparato antes de cada lectura. Esto se hace colocando una cubeta con una
solución control que tenga todos los componentes de la reacción menos la sustancia que va a ser medida en
el instrumento y ajustando la lectura a cero absorbancia. El propósito de esto es eliminar el registro de
absorbancia (background) que puedan presentar los demás componentes de la reacción a ese largo de onda
particular. Todas las moléculas presentan absorbancia porque todas interfieren con el paso de la luz. Sólo que
la absorbancia será óptima a un largo de onda de luz específico para cada tipo de sustancia.

Ilustración N°02: Espectrofotómetro

MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIALES

Difenilcarbazida (C13H14N4O), Solución de Cromo VI, Solución estándar de Cromo VI, Nitrato de sodio,
Ácido clorhídrico, agua destilada, fiola, pipeta, balanza analítica, espectrofotómetro.

METODOS

Primero la solución estándar del Cromo la llevamos a solución stock pasando de 500 ppm a 10 ppm, según
los cálculos se le hecha 2 ml de Cromo VI y el resto con agua destilada.

Cuando tenemos la solución lista, se divide diferentes cantidades en seis fiolas: 0.75 ml, 1 ml, 1.25 ml, 1.5
ml, 2 ml y 2.25 ml respectivamente.

A cada fiola se le agrega 15 ml de Nitrato de Sodio 0.1M, seguido de 3 ml de Ácido Clorhídrico a 0.5N,
finalmente se le agrega 2 ml de difenilcarbazida por lo que titulará a un color rosado a diferentes
intensidades.

RESULTADOS

RESULTADOS

Tabla 1 Datos recolectados

N° Cr VI ABS 1 ABS 2 ABS 3 ABS4 ABS5 Promedio DS

(mg/l) Absorbancia
1 0.3 0.266 0.38 0.325 0.355 0.227 0.3106 0.06319256
2 0.4 0.392 0.498 0.475 0.361 0.302 0.4056 0.08102654
3 0.5 0.478 0.618 0.496 0.392 0.432 0.4832 0.08558738
4 0.6 0.486 0.726 0.718 0.478 0.468 0.5752 0.13419091
5 0.8 0.727 0.917 0.757 0.656 0.672 0.7458 0.10404182
6 0.9 0.8 0.571 0.8 0.734 0.7 0.721 0.09432921

En la Tabla 1, podemos visualizar los datos obtenidos de absorbancias y la desviación entre estos datos.
Realizamos 5 veces con las mismas concentraciones de cromo, para tener una desviación estándar más exacta.
Como resultado obtuvimos que el valor más alto de absorbancia (0.917 ) se obtuvo en el 2do ensayo en la 5
prueba con una concentración de cromo de 0.8 mg/l.

La prueba con menor absorbancia fue la primera, que corresponde a una concentración de 0.3 mg/L. La relación
de la concentración de Cr VI, es proporcional a las absorbancias; a mayor concentración, mayor será el valor de
absorbancia.

Las desviaciones estándar nos indican qué tan dispersos están los datos con respecto a la media. Mientras mayor
sea la desviación estándar, mayor será la dispersión de los datos. Por esta razón vemos que la prueba con mayor
desviación entre los datos es la 4 ya que hay mayor variación entre las pruebas tomadas para el análisis de la
respectiva concentración, en comparación a la primera prueba que presenta la menor dispersión.

CURVA DE CALIBRACION

Las curvas de calibración se han usado en química analítica para determinar la concentración de un
compuesto; se tiene como referente un patrón primario para la preparación de diluciones de concentración
conocida, las cuales emitirán una absorbancia que da como consecuencia una gráfica matemáticamente lineal,
la cual permitirá por interpolación para cuantificar muestras de concentración desconocidas. Esta relación se
apoya a través de la ley de Beer-Lambert (Rubinson, 2000)

Tabla 2 PROMEDIO ABSORBANCIA RESPECTO A LA CONCENTRACION DE CROMO

Promedio Absorbancia
0.9
0.8
R² = 0.9611
0.7458
0.721
0.7
0.6
0.5752
Promedio Absorbancia
0.5 0.4832
0.4 0.4056
Linear (Promedio
0.3 0.3106 Absorbancia)
0.2
0.1
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1

En esta grafica se verifica que la absorbancia es proporcional a la concentración, el comportamiento es creciente.

excepto en el ensayo 5 que registro un punto más alto que el 6to ensayo.

Obteniendo una ecuación de la recta: y = 0.7337x + 0.1123

En esta grafica se verifica que la absorbancia es proporcional a la concentración, el comportamiento es creciente.

El coeficiente de correlación es de 0.9611 siendo 96% su valor.

Donde X es la concentración de cromo hexavalente en ppm, y Y es la absorbancia obtenida por mediciones

espectrofotométricas. Con la curva de calibración correcta, se prosigue con el análisis de estabilidad y con la
validación del método espectrofotométrico que se está llevando a cabo (Dean & Beverly, 1958)
Tabla 3 DESVIACION ESTANDAR RESPECTO A LA CONCENTRACION DE CROMO IV

Desviacion estandar
0.16
0.134190909
0.14
0.12 0.104041819
0.094329211
0.1 0.085587382
0.081026539
DS

0.08 0.063192563
R² = 0.2795
0.06
0.04
0.02
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
CROMO IV(MG/L)

ECUACION DE LA RECTA: y = 0.055x + 0.0616

R² = 0.2795

En esta grafica podemos ver la desviación estándar entre los datos de las 2 pruebas para las 6 concentraciones.
Se aprecia a simple vista que hay variaciones significativas y el coeficiente de correlación fue de 0.2795siendo
28%.

Límite de detección instrumental (LDI) y límite de cuantificación instrumental (LQD)

LOD=0.1653 (ECUACION 1)

LQO=0.4052 (ECUACION 2)
De los resultados alcanzados, se puede decir que el método puede detectar mediciones de absorbancia desde
0.1653 ppm; este valor corresponde al LOD, lo cual es inferior a la mínima concentración con la que se trabajó
el método correspondiente a 0.3 ppm. Por debajo de concentraciones de 0.1653 ppm el equipo no puede detectar
el valor, por lo tanto, se requiere de otro instrumento de medición.

El resultado de LQD confirma que el método cuantifica confiablemente la concentración de Cr (VI) en solución
desde 0.4052 ppm, lo cual es adecuado, ya que está dentro del rango lineal, dentro del cual se puede aplicar el
método y en el cual se está estudiando la estabilidad y la formación del complejo de cromo hexavalente y
difenilcarbazida (Rodríguez ,2002)

En cuanto a las limitaciones del procedimiento, la bibliografía indica que:

 El Fe puede inferir si su concentración excede 1 mg/l.

 En presencia de PbII se forma Cromato de Plomo, insoluble, que Blanco Estándar Muestra Agua desm.
2
  La presencia de AsII, FeII, SbII,SbII Sulfitos, Sulfuros y otras sustancias reductoras, reducen el CrVI a
CrII que no se detecta mediante esta técnica directa. (OMS, 1999)

DISCUSIONES

Para determinar el volumen correcto de la solución stock utilizamos una ecuación que la de conservación
de materia. Este trabajo en el laboratorio fue una simulación del trabajo en campo que nosotros haríamos
donde las concentraciones variables de Cromo simulaban puntos donde se ha dado esta contaminación,
como todo muestreo se hacen varias repeticiones por lo que los datos que tomamos se llevaron a una
tabla y gráfica para notar las variaciones y que tan alejadas están unas de otras.

Al tener varias repeticiones y al ser llevadas a cabo por diferentes personas hay error por lo que fue

encontrado de manera cualitativa, por lo que hay variaciones en algunos puntos de manera exagerada,

teóricamente deberíamos de tener una regresión lineal de 0.99 pero se obtuvo 0.96 Y 0.27 comprobando

que la conformidad de los datos es baja, así mismo se obtuvieron los datos de los parámetros LOD y LQD

por lo que teóricamente los datos deben ser menores a 1 y se obtuvieron LOD=0.1653, LQD=0.4052

CONCLUSIONES

Concluimos que se logró detectar la cantidad de Cromo VI adecuado, así también se llegó a la conclusión
que la variación de volumen del Cromo fue detectado al momento de agregar el difenilcarbazida ya que la
intensidad del color fue aumentando.

Los resultados cuantitativos que obtuvimos logramos plasmarlos en una gráfica identificando las varianzas
y el posible margen de error de cada repetición, a su vez se pudo lograr una interpretación de los datos
obtenidos, comprobando que concluimos con nuestros objetivos podríamos aplicar este tipo de proceso
en laboratorio para la aplicación enfocado a nuestra labor como Ing Ambientales.

Así mismo asumir que los datos que se obtuvieron tuvieron un margen de error considerable debido a
muchos factores, la manipulación de varias personas acumula el error por lo que se va notando en los
datos, a su vez podría ser que los reactivos no estén a la concentración que se estipula y presenten algún
tipo de error, así como también la mala manipulación del espectrofotómetro.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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FLUENCE NEWS TEAM. (2016). ¿Qué es el Cromo Hexavalente?. 18/09/2019, de Fluence Sitio web:
https://www.fluencecorp.com/es/que-es-el-cromo-hexavalente/

Luna E. (2013). IMPORTANCIA DE LA ESPECTROFOTOMETRIA. 18/09/2019, de ClubEnsayos Sitio web:

https://www.clubensayos.com/Tecnolog%C3%ADa/IMPORTANCIA-DE-LA-
ESPECTROFOTOMETRIA/928751.html

GobiernoUSA. (2015). Compuestos de cromo hexavalente. 18/09/2019, de Instituto Nacional de Cáncer Sitio
web: https://www.cancer.gov/espanol/cancer/causas-prevencion/riesgo/sustancias/cromo

OEHHA. (2016). Efectos del Cromo Hexavalente Sobre la Salud. 18/09/2019, de CaIEPA Sitio web:
https://oehha.ca.gov/media/downloads/faqs/sphexchromiumairfact111616.pdf

Molina N, Aguilar P, Cordovez C. (2010). Plomo, cromo III y cromo VI y sus efectos sobre la salud humana.
18/09/2019, de Ciencia & Tecnología para la Salud Visual y Ocular Sitio web:
file:///C:/Users/usuario/Downloads/Dialnet-PlomoCromoIIIYCromoVIYSusEfectosSobreLaSaludHumana-
5599145.pdf

ANEXOS

Ilustración N°03: Material para preparar la solución stock

 Ilustración N°04: Instalación del equipo para añadir reactivos.

Ilustración N°05: Fiolas con reactivos.

Ilustración N°06: Fiolas finales para ingresar al espectrofotómetro.

Ilustración N°07: Espectrofotómetro.

Ecuación 1 HALLAR LQO

Ecuación 2 HALLAR LOD