UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS

ESCUELA DE CIENCIAS QUÍMICAS
QUÍMICA ANALÍTICA II
Profesor Luisa Fernanda Gutierrez

LABORATORIO No. 2. CALIBRACIÓN DE MÉTODOS INSTRUMENTALES.

1. OBJETIVO

Adquirir destrezas en la elaboración de las diferentes gráficas de calibración en el análisis

instrumental.

2. CONCEPTOS GENERALES

Según la ISO (International Standard Office), la calibración se define como el conjunto de

operaciones que permiten establecer, en determinadas condiciones experimentales, la relación
existente entre los valores indicados por un instrumento o un método analítico, con los valores
obtenidos en la medida de un valor conocido. Los tres métodos de comparación con patrones
empleados más frecuentemente son los que utilizan curvas de calibración, el método de adición de
estándar y el método del patrón interno.

2.1 CURVA DE CALIBRACIÓN

En este método se preparan una serie de disoluciones patrón de forma que cubran un intervalo de
concentraciones adecuado y que tengan una composición en matriz parecida a la de la muestra.
También se prepara un blanco, el cual tiene igual composición que los demás estándares, pero sin
el analito. Su señal debería ser cero, pero a veces por efecto del ruido del instrumento no es así.
Se representan las respuestas en una gráfica frente a las concentraciones de los estándares que
las han proporcionado (ver figura 1). Generalmente, hay una relación lineal entre la señal analítica
(y) y la concentración (x) y por ello los datos se ajustan a una recta por el método de mínimos
cuadrados, según la ecuación: y=ax+b, siendo “y” la señal instrumental, “a” la pendiente, “b” la
ordenada en el origen y “x” las concentraciones de los estándares. Una vez obtenida la gráfica, se
interpola la señal de la muestra y se obtiene la concentración de analito en la muestra.

Figura 1
En la práctica, es muy frecuente que la gráfica de calibración sea lineal a bajas concentraciones del
analito y se vuelve curva a altas concentraciones. En este caso, se suele prescindir de los puntos
que se apartan de la linealidad, para lo cual existen métodos estadísticos adecuados [1].

2.2 ADICIÓN DE ESTÁNDARES

Se utiliza cuando es imposible suprimir interferencias físicas o químicas en la matriz de la muestra.

Se toman alícuotas iguales de la muestra problema y se le añade a cada una por separado,
cantidades crecientes del patrón, excepto a una de ellas y se realiza la medida. De esta manera, la
escala de concentración “x” se define como las concentraciones de analito adicionadas a las
alícuotas de la muestra problema. Por tanto, la concentración de la muestra problema, está dada
por el punto en el cual la línea extrapolada corta al eje de concentración (ver figura 2). La recta de
regresión se establece de la misma forma que el método de la curva de calibración. En este
método, tanto el analito como el patrón son los mismos.

En el intervalo de respuesta lineal, la señal S es proporcional a la concentración de analito.

S  a  (c S + c X )  a  c S + a  c X (1)

Donde:

a: Es una constante de proporcionalidad

cX: Concentración del analito en la muestra problema

cS: Concentración del analito añadida (solución patrón)

La ecuación de la recta de calibrado a la cual se desea aproximar a (1), tiene la forma:

y  a  x + b (2)

Donde “a” representa la pendiente y “b” el intercepto de la recta de calibrado. Igualando las
ecuaciones (1) y (2), se llega a que: y = S, x = c S, b = a×cX. De donde cX se puede obtener de esta
última ecuación como cX = b/a. Alternativamente, por extrapolación de la recta de calibrado se
puede llegar al mismo resultado.

Figura 2
Este método también se puede realizar con un solo punto, sabiendo que la intensidad es
proporcional a la concentración. Por ejemplo, una muestra de concentración inicial desconocida del
analito ([Xi]) proporciona una señal SX. Si a esta disolución se le añade una disolución del patrón de
concentración conocida [Pi] y se le mide la señal S X+P, la concentración original del analito y del
estándar cambian en la muestra problema. Llamaremos ([X F]) la concentración final del analito y
[PF] la concentración final del estándar después de la disolución. Tenga presente que las especies
químicas X y P son las mismas. Por tanto,

SX

 Xi 
SX + P ( X F  +  PF  )
(1)

Donde ([XF] = (ViX/Vf)× [Xi] y [PF] = (ViP/Vf)× [Pi]. ViX y ViP, representan los volúmenes iniciales de la
muestra problema y de la disolución patrón, respectivamente. V F representa el volumen final (V F =
ViX + ViP). De esta manera, se puede hallar [Xi] de la ecuación (1).

2.4 ESTÁNDAR INTERNO

En este método una cantidad fija de una sustancia pura (estándar interno) se añade tanto a las
disoluciones muestra problema como a las disoluciones de patrones. El estándar interno debe ser
una sustancia de naturaleza similar a la del analito, con una señal fácilmente medible y que no
interfiera con la respuesta del analito. Se determinan luego las respuestas del analito y del
estándar interno, y se calcula el cociente de las dos respuestas. De esta manera, sí se varía algún
parámetro que afecte a las respuestas medidas, dichas respuestas (del analito y estándar interno)
se deben afectar por igual. Por tanto, el cociente de respuestas (del analito y del estándar interno)
depende solamente de la concentración de analito. Una representación de la relación o cociente de
respuestas analito/estándar interno, como función de la concentración del analito, proporciona una
gráfica de calibración (ver figura 3). Este método se usa frecuentemente en cromatografía de gases
y absorción atómica.
 Figura 3

3. Materiales y equipos

 Nitrato de cobalto (II) hexahidratado (Co(NO 3)2•6H2O)

 Agua destilada

 1 Balón volumétrico de 50 ml

 1 Bureta de 25 ml

 5 Balones volumétricos de 25 ml

 1 Gradilla con 6 tubos de ensayo

 1 Espectrofotómetro UV/Vis

4. Procedimiento

4.1 Curva de calibración

 Preparar 50 ml de solución de Co(NO3)2•6H2O 0,4 N.

 Usando la bureta de 25 ml, transferir exactamente 2,5, 5,0, 7,5 y 10,0 ml de la solución
anterior a cuatro matraces volumétricos de 25 ml y aforar con agua destilada. Calcular la
concentración correspondiente a cada dilución.

 Determinar el espectro de absorción (utilizando el espectrofotómetro UV-Vis) de una de las

anteriores disoluciones y agua destilada como blanco. Medir la absorbancia entre 300 y
 700 nm. Identificar la longitud de onda a la cual se presenta el máximo de absorción de la
disolución de cobalto.

 Medir la absorbancia de todas las disoluciones y el agua destilada (blanco) a la máxima

longitud de onda determinada en el punto anterior. Registrar los datos obtenidos como
absorbancia vs concentración.

 Medir la absorbancia de la disolución problema, a la máxima longitud de onda a la cual se

presenta el máximo de absorción de de la solución de cobalto.

4.2 Adicción de estándares

 Agregue a 4 tubos de ensayo, limpios y secos, 2 ml de la solución problema.

 Adicionar al segundo, tercero y cuarto tubo de ensayo, 1 ml, 2 ml y 3 ml de Co(NO 3)2•6H2O

0,4 N, respectivamente. Aforar todos los tubos hasta 5 ml con agua destilada. Agite el
contenido de cada uno de los tubos. Estimar la nueva concentración del estándar en cada
uno de los tubos de ensayo.

 Medir la absorbancia de todas las disoluciones anteriores y el agua destilada a la máxima

longitud de onda. Registrar los datos obtenidos como absorbancia vs concentración
adicionada.

4.3 Adicción de estándar (un solo punto)

 Adicionar a 2 ml de la muestra problema, 2 ml de Co(NO 3)2•6H2O 0,4 N y aforar hasta 5 ml

con agua destilada. Estimar la concentración del analito y del estándar en esta disolución.

 Medir la absorbancia de la disolución anterior y de la muestra problema a la máxima

longitud de onda a la cual se presenta el máximo de absorción de cobalto.

5. Cuestionario

1. Registre en la siguiente tabla, la concentración (mg de Co/l) de la muestra problema

determinada por cada uno de los métodos empleados.
 Tabla 1.

MÉTODO Curva de Adición de Adición de estándar (un

calibración estándares solo punto)

CONCENTRACIÓN

(mg/l) de Co

2. Explique los resultados obtenidos en la tabla 2. Cuál de estos métodos, fue el mejor? Por
qué?.

3. Demuestre a partir de la ecuación (1), que la concentración de la muestra problema, está

dada por la siguiente expresión:

P   V  SX
X   i ip

(VF  SX + P - ViX  SX )
i

Referencias

1. J. C. Miller y J. N. Miller. "Estadística para Química Analítica". Ed. Addison–Wesley

Iberoamericana (1993).

2. Daniel C. Harris, Análisis Químico Cuantitativo 2ª ed., Ed. Reverte. Capítulo 4.