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Disminución de la resistencia a los antimicrobianos a

través de nanoliposomas recubiertos de
polielectrolitos cargados con β-Lactam Drug
Resumen: En la actualidad, uno de los mayores retos para la salud a nivel mundial es la
resistencia a los antibióticos, lo que ha llevado a la búsqueda de nuevas alternativas para la
recuperación de la actividad biológica, donde el uso de diferentes tipos de nano-sistemas ha
mostrado un interesante potencial. En este estudio, se evaluó la actividad antibiótica de un
fármaco modelo (ampicilina) encapsulado dentro de los nanoliposomas revestidos en cepas
de Staphylococcus aureus con diferentes grados de resistencia a los antibióticos. Por lo
tanto, los liposomas se elaboraron por el método de inyección de etanol y se recubrieron
con un polímero catiónico (Eudragit E-100) a través del proceso capa por capa. La
caracterización de los liposomas, como el tamaño, la polidispersidad, el potencial zeta y la
eficiencia de la encapsulación se determinaron mediante técnicas de dispersión dinámica de
la luz y ultrafiltración/centrifugación. Aunque la actividad biológica se evaluó utilizando
tres cepas ATCC de S. aureus correspondientes a ATCC 25923 (sensible), ATCC 29213
(resistente) y ATCC 43300 (muy resistente). Los resultados mostraron cambios en el
tamaño (de ~150 a 220 nm), polidispersidad (de 0,20 a 0,45) y potencial zeta (de -37 a +45
mV) para el proceso de recubrimiento. Por el contrario, se ha observado una eficacia de
encapsulación de aproximadamente el 70% y un aumento de la actividad antibiótica de 4 y
18 veces mayor en las cepas resistentes al S. aureus.

Palabras clave: liposomas recubiertos; capa por capa; ampicilina; resistencia a los
antimicrobianos.

1. Introducción

Actualmente, la resistencia a los antimicrobianos ha sido considerada uno de los mayores

desafíos de la medicina según la Organización Mundial de la Salud, ya que este problema
lleva a que la terapia convencional para muchas enfermedades infecciosas se vuelva difícil
de tratar[1]. De acuerdo con el párrafo anterior, varios tipos de investigación se centraron
en (i) la caracterización de diferentes mecanismos moleculares involucrados en la
generación de la resistencia al medicamento[2]; (ii) la búsqueda de nuevas moléculas con
potencial antimicrobiano[3]; y (iii) el uso de la nanotecnología de partículas como una
nueva herramienta para mejorar el rendimiento de los antibióticos, tanto de los nuevos
medicamentos como de los que están prácticamente obsoletos[4,5]. Aunque existe una gran
diversidad de microorganismos asociados a este problema, el Staphylococcus aureus ha
sido destacado como uno de los más relevantes debido a su alta recurrencia, convirtiéndolo
en uno de los principales patógenos con problemas de resistencia a nivel mundial[6]. Este
microorganismo ha generado varios mecanismos específicos de resistencia, donde la
producción de enzimas especializadas (β-lactamases) es uno de los complejos más
utilizados porque ha inactivado muchos antibióticos convencionales β-lactam[7]. Por el
contrario, las nuevas herramientas de la nanotecnología han permitido el desarrollo de
nuevos sistemas para la administración de antibióticos tradicionales con problemas de
resistencia a los medicamentos, donde las nano-emulsiones[8-10], las nanopartículas de
polímeros[11], las nanopartículas de lípidos[12,13], los dendrímeros[14,15] y los liposomas
han sido destacados como los sistemas más utilizados[4,16-18]. Los liposomas han
mostrado resultados muy interesantes debido a sus características de biocompatibilidad,
facilidad de procesamiento y versatilidad para modificar y conferir nuevas
propiedades[19,20]. En este sentido, los liposomas recubiertos de polímeros han sido
denominados de diferentes maneras, como"coloidosomas" o"liposomas furtivos" cuando se
utilizan polímeros iónicos o polímeros derivados del polietileno-glicol, respectivamente, lo
que podría ser una alternativa interesante para superar los problemas de resistencia a los
fármacos[1,21-23]. Además, esta estrategia de liposomas recubiertos de polímeros es útil
para proyectar preparados farmacéuticos para reconstitución, orales y tópicos. Con el
objetivo de contribuir a la búsqueda de soluciones a este complejo problema, hemos estado
trabajando en nuestro laboratorio en el uso de la tecnología de nanopartículas como
estrategia potencial para ayudar a recuperar la actividad biológica de los antibióticos con
problemas de resistencia. Por lo tanto, se han evaluado varios tipos de nanocomplejos de
polímeros en cepas de S. aureus con diferentes grados de resistencia[11,24]. Sin embargo,
en este trabajo se evaluó otra alternativa de nanopartículas correspondientes a
nanoliposomas que fueron modificados superficialmente con un polímero catiónico
derivado de Eudragit E-100.

2. Materiales y métodos

2.1. Materiales

La ampicilina (Fersinsa Gb) fue suministrada por Tecnoquímicas S.A. (Cali, Colombia), y
se utilizó según se recibió. Lecitina de soja o fosfatidilcolina Epikuron 200TM, Mw = 786
g/mol de Cargill (Wayzata, MN, EUA), dioleo-fosfatidil-etanolamina (DOPE, Mw =
744.03 g/mol) y colesterol (Mw = 386 g/mol) fueron comprados a Avanti Polar Lipids
(Alabaster, AL, EUA). Eudragit® E-100 de Evonik (Darmstadt, Alemania) se utilizó para
el recubrimiento de la superficie de los liposomas. El etanol de grado USP fue comprado a
Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, EUA). (Merck) El agua ultrapura fue suministrada por un
sistema de purificación Elix Essential Millipore®, con un valor medio de conductividad de

~Subtítulos por aRGENTeaM μS

2.2. Preparación de sistemas de liposomas

2.2.1. Optimización del diseño experimental

Se realizó un diseño factorial completo para establecer si algunas variables de proceso

comúnmente utilizadas en el método de inyección de etanol[25], correspondientes a (i)
fuerza iónica, (ii) tiempo de envejecimiento y (iii) tamaño de poro de la membrana, podrían
afectar significativamente las características fisicoquímicas de los liposomas (variables
dependientes), tales como tamaño de partícula, polidispersidad y potencial zeta. El análisis
estadístico se realizó utilizando el software Minitab 17. El número completo de recorridos
(tratamientos) que componen el diseño experimental se resume en la Tabla 1.

Los liposomas se prepararon sobre la base de un proceso secuencial definido en varios

pasos. Paso 1 (preparación de la fase orgánica): Se elaboraron soluciones etanólicas de
lecitina, Epikuron 200TM (1,3 mg/mL), colesterol (0,64 mg/mL) y DOPE (1,23 mg/mL), a
partir de las cuales se tomaron volúmenes de 42,3, 42,4 y 15,3 μL, respectivamente, para
obtener 100 μL de la mezcla lipídica. Paso 2 (mezcla de fase): 100 μL de fase orgánica se
añadieron lentamente a 100 μL de diferentes medios acuosos (agua ultrapura, PBS pH 7,4,
1 mM y PBS pH 7,4, 10 mM), que se agitaron (en vórtex) durante 1 minuto y se
dejaron"envejeciendo" en diferentes momentos (5 y 20 min). Paso 3 (formación de
liposomas): La mezcla resultante entre la fase orgánica y el medio acuoso se diluyó en 300
μL del medio acuoso respectivo. Paso 4 (purificación del liposoma): La mezcla diluida se
centrifugó (9000 g o 10000 rpm) en una microcentrífuga (Hettich RCF 10538) durante 6
min, utilizando tubos de ultrafiltración (Eppendorf) con diferentes tamaños de poro
(MWCO 10 kDa y MWCO 30 kDa). Posteriormente, las fracciones de liposomas
purificados fueron extraídas y resuspendidas en 500 μL de los respectivos medios acuosos.
Cada ensayo se realizó por triplicado.

Tabla 1.

2.2.2. Preparación de liposomas cargados con ampicilina

En este caso, los liposomas se prepararon de una manera similar a la descrita en la sección
anterior. Sin embargo, se hicieron algunas variaciones. En el paso 2, la adición de la fase
orgánica (mezcla de lípidos) se añadió a 100 μL de solución de ampicilina con una
concentración de 6 mg/mL, utilizando PBS (pH 7,4, 10 mM) como medio. El tiempo de
envejecimiento fue de sólo 5 minutos, y el tamaño de poro de la membrana utilizada en el
paso 4 fue de 30 kDa de MWCO.

2.2.3. Modificación de la superficie del liposoma

En primer lugar, las soluciones acuosas de Eudragit® E-100 se prepararon a diferentes

concentraciones de 0,3%, 0,5% y 0,7% (% p/v), ajustando el pH del medio a 4,0 con 0,1 M
HCl. Posteriormente, se añadieron 1 mL de las respectivas soluciones poliméricas de
Eudragit E-100 a 1 mL de dispersión liposomal cargada con ampicilina (previamente
preparada) a una velocidad de 50 μL/min. Posteriormente, la mezcla se dejó bajo agitación
magnética constante a 300 rpm durante 8 h en un recipiente cerrado. Finalmente, se
centrifugó a 10.000 rpm durante 2 minutos, utilizando tubos de ultrafiltración (Eppendorf)
con una capacidad de corte de 30 kDa.

2.3. Caracterización de sistemas de liposomas

2.3.1. Mediciones del potencial zeta y del tamaño

El tamaño de las partículas y el potencial zeta se determinaron utilizando un Zetasizer nano
ZSP (Malvern Instrument UK) con un láser rojo (633 nm) He/Ne. El tamaño de partícula se
midió mediante dispersión dinámica de luz con un ángulo de dispersión de 173◦ en 25 ◦C,
utilizando una celda de flujo de cuarzo (ZEN0023), mientras que el potencial zeta se midió
mediante una celda capilar plegada desechable (DTS1070). El instrumento indica el tamaño
de partícula como el diámetro medio de la partícula (z-promedio) y el PDI que van de 0
(monodispersos) a 1 (distribución muy amplia). Todas las mediciones se realizaron por
triplicado, después de una dilución apropiada (5:5000, v/v) de la suspensión liposomal en
agua ultrapura y se informaron como la media y la desviación estándar de las mediciones
realizadas en dispersiones liposomales recién preparadas.

2.3.2. Eficiencia de encapsulación

En este caso, la cantidad de ampicilina que no se retuvo en el paso 4 del proceso de

preparación de liposomas (ampicilina no encapsulada), que se contrastó con una curva de
calibración (R2 = 0,9995), se determinó previamente mediante espectroscopia UV a 256
nm y 25 ◦C (Shimadzu, Kyoto, Japón). Por lo tanto, la eficiencia de encapsulación se
calculó, sobre la base de la ecuación (1).

[Droga]encapsulada [Droga]no encapsulada +[Droga]encapsulada

EE = × 100, (1)/

donde el[Fármaco] total corresponde a la cantidad total de ampicilina antes de la etapa de

ultrafiltración, mientras que el[Fármaco] encapsulado =[Fármaco] total -[Fármaco] no
encapsulado.

2.4. Estabilidad de los liposomas

La estabilidad de los liposomas recubiertos y no recubiertos se realizó utilizando una

cámara de estabilidad a 40 ± 1 ◦C, donde el cambio en el tamaño liposomal se evaluó
durante 7 días por triplicado.

2.5. Prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos

Se realizaron pruebas de susceptibilidad microbiana basadas en el Instituto de Normas

Clínicas y de Laboratorio: Directrices CLSI[26]. Se inocularon bacterias en el caldo
Mueller Hinton y se incubaron durante la noche en 37 ◦C Posteriormente, el cultivo se
diluyó en caldo Mueller Hinton hasta que se alcanzó un OD625 de 0.1 (aproximadamente 1
× 108 CFU/mL). El cultivo se diluyó de nuevo por un factor de 1:100. Posteriormente, se
incubaron 50 μL de cultivo durante 18-20 h en placas de 96 pocillos en 37 ◦C con 50 μL de
antibiótico para alcanzar un inóculo final de aproximadamente 5 × 105 UFC/mL.
Ampicilina (Amp), ampicilina cargada en liposomas no recubiertos (NCL) y ampicilina
cargada en liposomas recubiertos (CL), se aplicaron a 12 concentraciones diferentes en
serie de 0.09 a 201.7 μg/mL. Después de la incubación, la concentración inhibitoria mínima
(CMI) se determinó mediante análisis visual.
3. Resultados y Discusión

3.1. Optimización del proceso de preparación de liposomas

Las variables del proceso (fuerza iónica del medio acuoso, tamaño de los poros de la
membrana y tiempo de envejecimiento) afectan significativamente a las variables de
respuesta (tamaño, índice de polidispersidad[PDI] y potencial zeta) e interactúan entre sí.
En general, los modelos ajustados presentaron un buen coeficiente de correlación, lo que
nos permite establecer con confianza las mejores condiciones para la elaboración de
liposomas. Los resultados del análisis estadístico del modelo factorial se muestran en la
Figura 1.

La figura 1A muestra que el tiempo de envejecimiento es la condición del proceso de

elaboración que más afecta al tamaño del liposoma, donde se observó un cambio de ~20
nm. Otros factores, como el tamaño de los poros de la membrana y la fuerza iónica del
medio acuoso, no parecen afectar significativamente el tamaño liposomal. Este resultado es
consistente porque se ha encontrado que los liposomas de baja concentración de
fosfolípidos (nM orden), el proceso de estabilización vesicular depende de dos períodos de
relajación de tiempo. Los monómeros de lípidos que se mueven fácilmente de los
agregados se forman en un corto período, y la curvatura de la bicapa lipídica del liposoma
se genera y estabiliza en un período más lento[27]. Por lo tanto, podría esperarse que la
aglomeración de los fosfolípidos sea mayor en la interfase para tiempos de envejecimiento
más largos; por lo tanto, se formarán vesículas con un tamaño mayor.

Por el contrario, el PDI siempre tiene valores bajos (<0,3) y no fue afectado
significativamente ni por el tiempo de envejecimiento ni por la fuerza iónica (Figura 1B).
En el caso del potencial zeta, se encontró que este parámetro se veía considerablemente
afectado por las variables de proceso utilizadas en la elaboración de liposomas (Figura 1C).
Con respecto a la fuerza iónica del medio acuoso, se observó un cambio en el valor del
potencial zeta de ~-47 a ~-35 mV, lo que podría explicarse por el efecto de compresión de
la doble capa eléctrica, dado por la pérdida de la capa difusa en el sistema[28,29]. Por el
contrario, la disminución en el tamaño de los poros de la membrana lleva a un cambio en el
potencial zeta de ~-48 a ~-36 mV. Este cambio podría explicarse por las variaciones
reológicas generadas durante el proceso de centrifugación/filtración, donde un poro más
pequeño provoca mayores efectos de cizallamiento que pueden afectar a la doble capa
eléctrica a través de la desorción iónica de la superficie liposomal. Finalmente, se
seleccionaron las condiciones de proceso correspondientes a una resistencia iónica de 10
mM para el tampón PBS pH 7,4, un tamaño de poro de la membrana de 30 kDa y un
tiempo de envejecimiento de 5 min, y los liposomas se obtuvieron con un tamaño adecuado
(~140 nm), una baja polidispersidad (<0,3) y un alto valor de potencial zeta negativo,
necesario para el proceso de recubrimiento capa por capa de los productos farmacéuticos
2018, 11, x PARA REVISIÓN DEL PEER 5 de 12, utilizando el polímero catiónico (Eud).

FIGURA 1.
3.2. Modificación de la superficie del liposoma

Primero, el cambio en el tamaño de las partículas y el potencial zeta de los liposomas no

recubiertos (sin ampicilina) se determinaron contra el pH (figura 2A). Asimismo, se evaluó
el efecto de la concentración polimérica de Eudraigt E-100 sobre el potencial zeta y la
viscosidad (figura 2B) para establecer las mejores condiciones antes de cargar el fármaco y
modificar la superficie liposomal. En segundo lugar, se determinó el cambio en el tamaño
de las partículas, el PDI y el potencial zeta de los sistemas liposomales cargados con
ampicilina antes y después del proceso de recubrimiento. Los resultados se muestran en la
figura 3.

La Figura 2A muestra que los liposomas no recubiertos en solución acuosa cambian tanto el
tamaño de las partículas como el potencial zeta con respecto al pH del medio. Con respecto
al tamaño liposomal, el tamaño de las partículas tiende a permanecer constante a 125 nm a
valores de pH entre 4,0 y 5,5, mientras que se produce una transición aparente a un pH
superior a 5,5, en la que el tamaño liposomal aumenta a 160 nm hasta pH 7,4. El potencial
zeta aumentó con el aumento del pH del medio, pasando de 18 mV (pH 4,0) a 40 mV (pH
7,4). Estos resultados son consistentes, considerando que a pH 7.4, la fosfatidilcolina tiene
una fracción de grupos de carboxilatos, que comienzan a neutralizarse con la disminución
del pH, afectando la doble capa eléctrica en la superficie liposomal. Por lo tanto, la pérdida
de carga superficial conduce a una disminución de la repulsión electrostática en los
cabezales de lecitina, formando una superficie más compacta y más pequeña. Por el
contrario, la Figura 2B muestra que el potencial zeta del polímero Eudragit E-100 en
solución acuosa acidulada (pH 4-5) es positivo e indiferente a la concentración polimérica
(50 mV). Este resultado es consistente porque este polímero procedente del metacrilato de
amino-alquilo puede ser ionizado en el medio ácido, convirtiéndose en una interfaz
polielectrolítica cargada positivamente[32]. Por el contrario, el efecto sobre la viscosidad
de las soluciones poliméricas Eudragit E-100 mostró un marcado aumento por encima de
una concentración del 1,2% p/v. En base a estos resultados, las mejores condiciones de
concentración polimérica para realizar el recubrimiento liposomal están entre 0,1% y 0,7%
p/v. Por lo tanto, las concentraciones correspondientes a 0.3, 0.5 y 0.7% p/v fueron
seleccionadas para la etapa de modificación de la superficie del liposoma.

La figura 3A muestra el cambio en el potencial zeta de los liposomas con respecto al

proceso de recubrimiento de ~-40 mV (liposomas no recubiertos) a ~+50 mV (liposomas
recubiertos). Tal cambio es un indicador de que la modificación de la superficie ocurrió a
través del proceso de deposición del polímero capa por capa[33]. El cambio en el tamaño
de ~150 nm (liposomas no recubiertos) a un tamaño superior a ~200 nm (liposomas
recubiertos) también sugirió la aparición de dicha modificación de la superficie (Figura
3B), en la que el aumento en el potencial del polímero aumentó con el aumento en el pH
del medio, pasando de ~-18 mV (pH 4.0) a una concentración de ~-40 mV en Eudragit E-
100, lo que condujo a un ligero aumento en el tamaño de los liposomas. Con respecto al
PDI (Figura 3C), (pH 7.4). Estos resultados son consistentes, considerando que a pH 7.4, la
fosfatidilcolina tiene un cambio de 0.2 (liposomas no recubiertos) a valores entre 0.4 y 0.5
(liposomas recubiertos) fue una fracción de los grupos de carboxilatos, los cuales
comienzan a neutralizarse con la disminución del pH, afectando a los observados,
sugiriendo una modificación en las poblaciones de tamaño, la cual pasa de una doble capa
eléctrica monodispersal en la superficie liposomal[30,31]. Por lo tanto, la pérdida de carga
superficial conduce a (~150 nm) a un sistema polidispersante (~200-250 nm) con tamaños
ligeramente diferentes. Este resultado podría ser una disminución de la repulsión
electrostática en los cabezales de lecitina, formando un polímero más compacto y de menor
tamaño explicado por la deposición aleatoria del polímero catiónico en la superficie
liposomal, donde emerge. En contraste, la Figura 2B muestra que el potencial zeta del
polímero Eudragit E-100 en diferentes cantidades de cadenas de polímeros acidulados se
adhieren con diferentes tipos de conformaciones, obteniendo una solución acuosa (pH ~ 4-
5) positiva e indiferente a la concentración polimérica (~+50 mV). Estos liposomas
recubiertos con cadenas de polímeros extendidas o en espiral, como se muestra en la Figura
3E. Finalmente, el resultado liposomal es consistente porque este polímero derivado del
metacrilato de amino-alquilo puede ser ionizado en el proceso de recubrimiento no afectó
significativamente la eficiencia de encapsulación de la ampicilina, que permaneció como el
medio ácido, convirtiéndose en una interfase de carga positiva de polielectrolito[32]. Por el
contrario, el efecto es de aproximadamente 70% tanto en los liposomas no recubiertos
como en los recubiertos (Figura 3D).

FIGURA 3

3.3. Estabilidad del liposoma

Los resultados del estudio de estabilidad mostraron que los liposomas recubiertos con el
polímero Eudragit E-100 eran más estables que los liposomas no recubiertos (Figura 4).
Este resultado podría explicarse considerando el efecto de estabilización electrostática[29],
que aumenta con la adsorción del polímero en la superficie del liposoma. En cuanto a la
cantidad de polímero utilizado para recubrir el liposoma, las concentraciones de 0,3% p/v y
0,5% p/v mostraron una mayor estabilidad, mientras que la concentración de 0,7% p/v
mostró un marcado aumento en el tamaño liposomal debido a un efecto competitivo
generado entre la adsorción polimérica en la superficie del liposoma y la agregación entre
las mismas cadenas de polímeros. Por esta razón, se eligieron liposomas recubiertos con
Eudragit E-100 al 0,5% para la evaluación biológica.

Figura 4

3.4. Prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos

La figura 5 muestra las concentraciones inhibitorias mínimas (CMI) de ampicilina (Amp),

ampicilina y Eudragit E-100 (polímero de capa) (Amp-Eudragit E-100), ampicilina cargada
en liposomas no recubiertos (Amp-NCL) y ampicilina cargada en liposomas recubiertos
(Amp-CL) en cepas de S. aureus con diferentes grados de resistencia a los antimicrobianos.
Además, se incluye el MIC del polímero de recubrimiento (Eudragit-E-100) y los
liposomas vacíos como controles de prueba negativos. En el caso de la ampicilina no
encapsulada, se encontraron diferentes valores de CMI correspondientes a 0,19, 6,3 y 25,2
µg/mL para las cepas de S. aureus ATCC25923, ATCC29213 y ATCC43300,
respectivamente. Estos valores fueron consistentes considerando que la cepa de S. aureus
ATCC25923 es sensible, mientras que las cepas ATCC29213 y ATCC43300 tienen
diferentes grados de resistencia a los antimicrobianos basados en el Clinical and Laboratory
Standards Institute: Directrices CLSI[26].

En el caso de la cepa ATCC25923-sensible, la ampicilina podría inhibir la síntesis de

peptidoglicanos en la pared celular bacteriana debido a la interacción específica con la
proteína fijadora de penicilina (PBP, específicamente PBP1 y PBP3) que afecta el
crecimiento bacteriano[34].

En contraste, la cepa ATCC29213 mostró un efecto de resistencia contra la ampicilina

porque dicha cepa está produciendo enzimas de la lactasa β-lactamase. Aunque la cepa
ATCC43300 mostró el mayor grado de resistencia contra la ampicilina debido a la
producción de enzimas β-lactamase, también tiene un gen específico (mecA), que codifica
una proteína análoga PBP2a que tiene una menor afinidad con el fármaco β-lactam,
afectando su mecanismo de acción farmacológica[35,36].

Con respecto al Amp-NCL, la actividad antimicrobiana aumentó ligeramente en las tres

cepas de S. aureus. Este resultado puede explicarse considerando que los sistemas
liposomales pueden transportar el antibiótico al microorganismo, previniendo la
degradación causada por las enzimas β-lactamase, donde el liposoma se adhiere a la
superficie del microorganismo y es posteriormente incorporado al microorganismo por un
mecanismo de endocitosis[37].

En contraste, la ampicilina cargada en los liposomas recubiertos con Eudragit E-100 (Amp-
CL) mostró un marcado aumento en la actividad antimicrobiana, donde el MIC se redujo de
0,19 a 0,09 µg/mL en la cepa ATCC25923, de 6,3 a 1,53 µg/mL en la cepa ATCC29213 y
de 25,2 a 1,41 µg/mL en la ATCC43300. El último resultado es muy interesante porque la
MIC < 2 µg/mL se clasifica como una cepa sensible a la penicilina[26]. Por lo tanto, el
aumento de 18 veces la actividad antibacteriana en la cepa ATCC43300 de S. aureus es un
resultado significativo y prometedor, ya que demuestra que el uso de sistemas
nanotecnológicos puede ayudar a recuperar la actividad farmacológica con problemas de
resistencia a los antimicrobianos. Es importante señalar que tanto los liposomas solos como
el material polimérico Eudragit E-100 no mostraron una marcada actividad antimicrobiana,
sólo en los valores máximos evaluados (512 µg/mL). Este resultado sugiere que los
materiales utilizados como vehículos de ampicilina son inocuos. Todos estos resultados
muestran que los sistemas de nanopartículas son de hecho una alternativa promisoria en el
tratamiento de enfermedades infecciosas con problemas de resistencia, ya que estos nano-
sistemas permiten la recuperación de la actividad antimicrobiana con estrategias sencillas
de formulación.

4. 4. Conclusiones

El método de preparación utilizado nos permitió obtener liposomas con tamaños

nanométricos de aproximadamente 150 nm, que comenzaron a agregarse desde el primer
día de preparación. Por el contrario, el recubrimiento polimérico con Eudragit E-100
provocó un aumento de aproximadamente 50 nm de tamaño y una inversión del potencial
liposomal zeta, pasando de una superficie negativa a una positiva. Asimismo, dicha
modificación superficial en los liposomas mostró una mejora en la estabilidad, siendo
mejor en concentraciones de recubrimientos poliméricos de 0.3% p/v y 0.5% p/v. El
recubrimiento polimérico tampoco afectó la eficiencia de encapsulación de la ampicilina,
que fue de aproximadamente el 70%. En cuanto al efecto antibacteriano, se ha observado
un notable aumento del recubrimiento liposomal, especialmente en cepas resistentes de S.
aureus, lo que constituye un resultado muy importante y prometedor que demuestra que el
uso de sistemas de nanopartículas puede ser una alternativa interesante para combatir los
problemas actuales de resistencia a los antimicrobianos.