Informe laboratorio Práctica

Bioquímica

ACTIVIDAD CATALITICA Y CONCENTRACION DE LA CATALASA

Dairo Fabian Rey Pardo1, Marlly Solanlly Tangarife Ovalle²
Programa de ingeniería agronómica
Facultad de ciencias agropecuarias y recursos naturales
Universidad de los Llanos
Vereda Barcelona, km 12 vía a Puerto López, Villavicencio 500017, Meta, Colombia.
1
marlly.tangarife@unillanos.edu.co , 2 dairo.rey@unillanos.edu.co

Resumen- durante esta práctica de laboratorio se determine la

actividad enzimática de la catalasa sobre el peróxido de hidrogeno,
teniendo el tiempo al titular y de la reacción, el efecto de la
concentración de la enzima (sangre humana). La determinación de la
actividad enzimática se realizó luego de agregarle H2SO4 a la
muestra, titulando H2O2 remanente en cada tubo preparado, usando
KMnO4 como agente titulante. Se utilizaron 4 tubos de ensayo en la
primera y el segunda también, 5 siendo rotulados estos desde la A
hasta la E; en la primera parte de la práctica se prepararon 4 tubos,
a cada uno de los cuales se le añadieron diferentes cantidades de
buffer de fosfato, de H2O2, de H2SO4 y de enzima, y se agitaron
todos durante la misma cantidad de tiempo (1 minuto), esto es para
la determinación del efecto de la concentración de enzima sobre la
actividad catalítica de esta; en la segunda parte, se prepararon 5
tubos a los cuales se les añadió los mismo reactivos en una mínima
de diferencia en cantidad de cada uno.
Abstract- During this laboratory practice the enzymatic activity of
catalase on hydrogen peroxide is determined, with the time to the
holder and the reaction having the effect of the concentration of the
enzyme (human blood). The enzymatic activity was determined after
adding H2SO4 to the sample, titrating H2O2 remaining in each
prepared tube, using KMnO4 as the titrant. 4 test tubes were used in
the first and the second also, 5 being labeled from A to E; In the first
part of the practice, 4 tubes were prepared, each of which were added
different amounts of phosphate buffer, H2O2, H2SO4 and enzyme,
and all were stirred for the same amount of time (1 minute ), this is for
the determination of the effect of the enzyme concentration on its
catalytic activity; in the second part, 5 tubes were prepared to which
they are the same reagents in a minimum of difference in quantity of
each one.
Palabras claves: catalasa, enzima, titulación, actividad catalítica,
concentración.
Key Word: catalase, enzyme, titration, catalytic activity,
concentration
INTRODUCCION
La catalasa es una enzima
perteneciente a la categoría de las
oxidorreductasas que cataliza la
descomposición del peróxido de
hidrógeno (H2O2) en oxígeno y
agua. Esta enzima utiliza como
cofactor al grupo hemo y al
manganeso.
El peróxido de hidrógeno es un
residuo del metabolismo celular de
muchos organismos vivos y tiene,
entre otras, una función protectora
contra microorganismos patógenos,
principalmente anaerobios, pero
dada su toxicidad debe
transformarse rápidamente en
compuestos menos peligrosos. Esta
función la efectúa esta enzima que
cataliza su descomposición en agua
y oxígeno. Además, la catalasa se
usa en la industria textil para la
eliminación del peróxido de
hidrógeno, así como en menor
medida se emplea en la limpieza de
lentes de contacto que se han
esterilizado en una solución de
peróxido de hidrógeno.
La ausencia congénita de catalasa
es causante de una acatalasemia (o
acatalasia), la enfermedad de
Takahara que se manifiesta por la
ausencia de actividad de la catalasa
en los glóbulos rojos y con severas
infecciones gangrenosas de la boca,
pudiendo producir la pérdida de los
dientes y graves destrucciones de
los maxilares y regiones blandas que
los cubre. Enfermedad congénita del
Japón (2 de 100.000 habitantes
sufren de este trastorno).
METODOLOGIA
Para iniciar la práctica y para evitar
errores, se lavaron muy bien los
materiales entregados en el
laboratorio. Se rotularon los beaker
con cada reactivo, los tubos de
ensayo con las letras de la A a la E.
posteriormente, se procedió a
extraer cada cantidad de reactivo
indicado y se depositaron en cada
tubo.
Para la realización de la práctica, se
necesitó de un extracto de catalasa,
que se obtuvo a partir de una
muestra de sangre; en un beaker
con 20 ml de agua destilada se
agregaron 2 gotas de sangre fresca,
obtenidas mediante la punción de
un dedo.
Con los reactivos, se procedió a
hacer el montaje de titulación,
tomando el KMnO4 como agente
titulante dentro de la bureta. Para la
titulación se utilizaron dos cuadros,
uno en el que se determina la
actividad enzimática de acuerdo a la
concentración de la catalasa y el
otro de acuerdo al tiempo de
reacción.
A cada tubo se le adicionaron buffer
de fosfato, peróxido de hidrogeno y
la muestra en enzima, se procedió a
agitar constantemente durante 1
minuto. Durante esta, el color del
compuesto contenido en el
Erlenmeyer debía pasar de
transparente a un rosa pálido, en
ese momento se suspendía la
tutilacion y se anotaba el volumen
de KMnO4 gastado.
RESULTADOS
En la segunda parte se llevó a cabo
el mismo procedimiento anterior,
solo que esta vez las cantidades de
cada reactivo fueron las mismas
para todos los tubos, lo que vario
fue el tiempo.

TABLA No.1 actividad enzimática, concentración de la catalasa

Tabla No. 2
DISCUSION
El H2O2 (peróxido de hidrogeno) es
toxico para la mayoría de
organismos vivos por lo cual muchos
son capaces de destruirlo a través de
una reacción espontanea antes de
que se pueda realizar daño; el H2O2
se convierte en oxígeno y agua
según la siguiente ecuación:
2H2O2 = 2H2O+O2
En razón a que las condiciones de
pH y temperatura a los que trabaja la
enzima son de gran importancia, la
temperatura en la mayoría de los
organismos de oscila en un intervalo
el cual sus enzimas sobreviven y
funcionan; además si el ambiente
donde se encuentra la enzima es
demasiado acido o demasiado
básico, esta puede desnaturalizarse
de forma irreversible o transformarse
de modo que su forma no le permita
realizar sus funciones catalíticas.
Al tratarse de la catalasa, se sabe
que esta se encuentra en la sangre
(en este caso humana) a un pH
neutro, razón por la cual la
preparación del peróxido se debió
hacer en una solución buffer fosfato
de pH 7, para simular las
condiciones de la sangre.
Se realizó el efecto que tiene la
concentración de la enzima en la
descomposición de H2O2, a partir de
lo que se logró identificar para que la
relación entre la concentración de la
enzima es directamente
proporcional, pues a medida que
aumenta la concentración de
catalasa existe una mayor cantidad
de micro moles de H2O2
descompuestas por minuto sobre
cada ml de esta. En cuanto a los
datos obtenidos se observó que la
concentración óptima para una mejor
reacción es de 2ml de enzima, sin
embargo, la reacción puede ser más
efectiva con mayores
concentraciones de enzima.
Posteriormente se realizó el efecto
del tiempo en la descomposición del
peróxido, de lo cual se observó que
a mayor tiempo de reacción es
menor la actividad enzimática, ya
que los moles del sustrato residuales
aumentan a medida que aumenta el
tiempo, pues dichas moles no
reaccionan y las moles del sustrato
descompuestas disminuyen.
CONCLUSIONES
La toxicidad del peróxido de
hidrogeno hace necesaria la
reacción de descomposición de esta
ya que resulta de la oxidación
metaboliza y puede ser nocivo; para
lo anterior la sangre cuente con una
enzima de accionar inmediato para
descompones el H2O2 en H2O y O2.
Se analizó que el efecto de la
concentración de enzima sobre la
actividad catalítica es directamente
proporcional, es decir, cuando
aumenta la concentración también lo
hace la actividad enzimática puesto
que a medida que transcurre la
reacción el peróxido de hidrogeno se
transforma en agua y oxígeno.
REFERECIAS
Ciudad de las artes y las ciencias, estudio de
los factores que influyen en la actividad
enzimatica de la catalasa, recuperado de:
http://www.cac.es/cursomotivar-2013-19
octubre.
x. fuentes Arderiu. Biouimia clínica y
patología molecular, volumen 1. Reverte,
1997-604 pag.