Bioquimica, 4-QFA-A Acosta S., Gómez M.

, Henao K

PRACTICA DE LABORATORIO 2 IDENTIFICACIÓN CUALITATIVA DE BIOMOLECULAS

(CARBOHIDRATOS Y LIPIDOS)
Acosta S., Gómez M., Henao K1
jueves, 30 de agosto de 2018

1
Estudiantes cursoBioquimica, 4-QFA-A
RESUMEN

Un resumen es requerido para cualquier publicación-informe; deberá resumir brevemente el

motivo del trabajo, los principales resultados y las conclusiones del estudio. El resumen no debe
exceder de 100 palabras. No incluya ilustraciones, tablas, ecuaciones o referencias a otras partes
del documento. La razón es que el resumen debe ser comprensible en sí mismo y dar una idea
global del trabajo realizado.

Palabras Clave:Almidon, Molisch, Benedict, Lugol, Glucosa, Lipidos, Carbohidratos, Sobrenadante,

precipitado

ABSTRACT

Traducción del resumen en idioma inglés. Evitar traducciones automáticas.

Key Words: Traducción de las palabras clave al idioma inglés.

3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN realizo la misma prueba para ver la

formación del anillo purpura y poder
 Reconocimiento de monosacáridos comparar con los resultados obtenidos con
y polisacáridos las 2 soluciones de la papa.

Prueba de Molisch  Muestra 1 precipitado

Para llevar a cabo esta prueba se utilizaron El resultado en esta muestra fue positivo ya
2 soluciones las cuales fueron extraídas de que se genero la formación de un anillo
una muestra de papa en agua destilada, la purpura en la solución, esto indica
cual se filtro por medio de una gasa y en presencia de carbohidratos.
esta se obtuvieron dos fases (precipitado y
 Muestra 2 sobrenadante
sobrenadante) estas se tomaron por
separado para luego comprobar la posible El resultado de esta muestra fue positivo,
presencia de carbohidratos en cada uno de sin embargo la formación del anillo purpura
ellas. fue mínima, es decir que hay menor
presencia de carbohidratos que en la
Para esta prueba se tomo como referencia
muestra del precipitado.
una solución de glucosa, a la cual se le
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insoluble de color anaranjado rojizo. El cobre
es reducido por grandes cantidades de glucosa
y forma un sedimento color rojo sin color azul
remanente. Las menores concentraciones
forman soluciones coloreadas que van del color
verde al color óxido con cierto sedimento
rojo(Gennaro,2003).

Resultado positivo: la producción de óxido

cuproso, color amarillo o anaranjado rojo.

REA Glucosa Fructosa Sacarosa Maltosa

CTI (+) (+) (-) (+)
VO Anaranj Anaranj Azul Anaranj
DE ado ado ado
BEN sin
EDI precipita
CT do
Tabla libro (Gennaro.2003)
Figura 1. Resultados prueba de Molish
En esta prueba se tomo como blanco una
Todos los carbohidratos reaccionan con el solución de glucosa a la cual se le realizo toda
reactivo de Molisch y producen una disolución la prueba y el resultado obtenido fue una
color purpura. Esto ocurre porque el coloración naranja con un precipitado en el
carbohidrato experimenta una serie de fondo, a partir de esta se realizo la
reacciones de deshidratación sucesivas comparación con las demás muestras.
catalizadas por el ácido sulfúrico concentrado,
 Almidón
el cual se emplea en el proceso de este
ensayo, produciendo furfural a partir de las Fue usado como referencia, ya que la papa
pentosas o 5-hidroximetilfurfural a partir de las posee almidón, en este caso la coloración se
hexosas. El reactivo de Molisch es 15% de genero de color azul agua marina, esto indica
naftol en etanol. El naftol reacciona con el que los azucares presente en la solución de
furfural, a través de una reacción de almidon son azúcares que no reducen, como
condensación, para producir un compuesto de la sacarosa, no producen cambios en color y la
color purpura. También los disacáridos y solución se mantiene azul.
polisacáridos de esta prueba positiva porque se
hidrolizan en medio ácido a los monosacáridos  Muestra 1 precipitado
correspondientes (Herrera, Bolaños, Luzt.
El resultado obtenido fue una coloración
2003).
verdosa y la solución se dividió en dos fases; la
Prueba de Benedict fase inferior era un verde mucho más claro casi
llegando a amarillo y la fase superior un verde
Se basa en la reducción de iones cúpricos en un poco más oscuro, un cambio a color verde
una solución alcalina, para dar oxido cuproso
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indica la presencia de menos
reductores. (Gennaro.2003)
 Muestra 2 sobrenadante
Para el caso de esta muestra solo se genero
una fase y su coloración fue un verde
intermedio entre el color generado en la
glucosa y el almidón (mezcla del naranja y
azul) Es decir que hay presencia de azucares
reductores pero un poca concentración por la
generación del color verde.
Figura 2. Prueba de Benedict
Prueba de Lugol
El lugol tiñe específicamente el almidón de azul
violeta. El color del producto puede variar
según la constitución precisa del almidón y en
particular, de la proporción de amilosa y
amilopectina. (Sandoval. 2005)
Se tomo como punto de referencia una
solución de almidón para después poder
comparar con esta la coloración obtenida en
las muestras extraídas de la solución de papa
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azúcares en agua. El almidón claramente se coloreo
totalmente de un color azul oscuro.
 Glucosa
Se le realizo la prueba de lugol para verificar
presencia de almidón en esta, efectivamente la
solución se coloreo de amarillo, esto indica
presencia de amilopectina es de estructura
ramificada, con enlaces α (1-4) (1-6), que
forma hélices mucho más cortas y las
moléculas de yodo son incapaces de juntarse
presentando un color intermedio entre
anaranjado o amarillo. (Sandoval. 2005)
 Muestra 1 precipitado
En esta muestra se obtuvo un color verdoso en
toda la solución, con generación de una gran
parte solida azul en el fondo del tubo. La
formación de este precipitado en el fondo
indica positivo para almidón por su coloración
azul.
 Muestras 2 sobrenadante
En esta muestra se obtuvo un color verdoso en
toda la solución, con la formación de una
pequeña fracción de solido azul en el fondo del
tubo. La formación de este precipitado en el
fondo indica positivo, pero al ser en tan poca
cantidad hay una mínima concentración de
almidón en la muestra.
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genero espuma, lo que determina que es
saponificable.

Fosfatos

La positividad de esta reacción indica la

presencia de fósforo inorgánico. Las sustancias
orgánicas dan la reacción positiva, siempre que
se haga una hidrólisis previa. La reacción
positiva se manifiesta por la reacción de un
precipitado amarillo. (Jaramillo.2004)

 M2

Esta muestra fue obtenida de la mezcla entre

el filtrado obtenido en la saponificación el tubo
Figura 3. Prueba de Lugol N°2 de la fracción M2 y de la fracción M3, a la
cual se le agregaron una serie de soluciones,
 Reconocimiento de lípidos generándole un cambio de color en la solución,
Saponificación en donde finalmente esta se coloreo de
amarillo indicando positivo para la prueba de
Es una prueba para identificar ácidos grasos, fosfatos, esto quiere decir que la muestra
por lo tanto, general para los lípidos que los contaba con presencia de fosforo inorgánico.
contengan. Los jabones se define
químicamente como, las sales metálicas de los  Reconocimiento de aminoácidos
ácidos grasos superiores (Jaramillo.2004)

En el caso de la M2 la fracción saponificable

(precipitado de la yema disuelta en etanol
centrifugado, el sobrenadante); según la
prueba se logró determinar que es una
solución no saponificable, ya que no genero
espuma y obtuvo un viraje de color a verde
oscuro. Además se realizó la misma prueba en
la M2 en la fracción insaponificable lo que por
el contrario indico que es una solución Figura 5. Reconocimiento de aminoácidos
saponificable y esta obtuvo un cambio de color
a naranja.

Por otro lado, en el caso de la M3 (precipitado

de la yema disuelto en etanol centrifugado, el
precipitado disuelto nuevamente en etanol);
según la prueba se observó que la solución

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Figura 6. Reconocimiento de
aminoácidos en Mta 1 y clara de
huevo
Prueba de Ninhidrina
La determinación con ninhidrina de la
presencia del producto final glicina involucrada
inicialmente un proceso que se da en dos
pasos, en el que un grupo amino es eliminada.
Pasó 1: se elimina hidrogeno, produciendo un
aminoácido y finalmente se combina con
oxigeno de la ninhidrina para formar agua
Pasó 2: el aminoácido es hidrolizado a un
cetoacido y amoniaco. El amoniaco no se
acumula, sino que se transforma en pasos
secuenciales, produciendo color.
La ninhidrina es positiva para todos los grupos
libres, como lo son los aminoácidos, péptidos o
proteínas. En el caso de un aminoácido libre
que posee un grupo carboxilo libre (COOH)
adyacente al grupo amino la reacción adicional
causa la descarboxilacion del aminoácido a
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dióxido de carbono y al próximo aldehído
inferior, amoniaco y la reacción de color. La
reacción de descarboxilante de la ninhidrina es
positiva para proteínas y péptidos.
Durante la oxidación se libera un aldehído NH3,
CO2 y ninhidrina reducida, el NH3 reacciona
con la ninhidrina residual y la ninhidrina
reducida, para formar un producto de color
purpura lo cual indica que la prueba es positiva
y hay presencia de proteínas. (MacFaddin.
2000)
Reacción con la ninhidrina (Hidrato de
Tricetohidrindeno): Esta reacción tiene un gran
interés, ya que da lugar a una reacción
coloreada de los aminoácidos, ampliamente
utilizada para la identificación y sobre todo
para su determinación cuantitativamente. La
ninhidrina decarboxila y desamina al
aminoácido gracias a su poder oxidante. La
ninhidrina decarboxila y desamina al
aminoácido gracias a su fuerte poder oxidante.
La ninhidrina reducida formada reacciona con
una molecula de ninhidrina no reducida y con
el amoniaco resultante de la desaminacion
para formar un compuesto complejo que
presenta coloración violeta. Algunos
aminoácidos en particular como la prolina y la
hidroxiprolina, dan con la ninhidrina una
coloración amarilla. Los aminoácidos con
grupos fenólicos, como la tirosina, dan una
reacción característica produciéndose una
reacción de coloración naranja; reacción de
Millon (Teijon J.M., 2006).
La reacción de la ninhidrina se basa en la
medición del CO2, la determinación de ser NH3
presente y el cambio de color. En la hidrolisis
del piruvato, solo se usa el desarrollo de color
para caracterizar una reacción positiva, aunque
pueden usarse los otros medios de
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determinación para identificación de Glicina.
Durante la oxidación se libera un alfehido, NH3,
CO2 y ninhidrina reducida, hidrindantina, para
formar un producto de reacción de color
purpura. La ninhidrina puede usarse porque el
sustrato contiene solo hipurato de sodio
acuoso, que no reacciona con la ninhidrina y
porque solo uno de los productos, la glicina, es
un aminoácido (MacFaddin, 2003).
Se determina positivo (+) cuando genera un
color purpura-azul oscuro (violeta cristal)
dentro de los 10 min posteriores al agregado
de ninhidrina, indicando que el Hipurato está
hidrolizado. Y negativo (-) cuando no se
genera ningún cambio de color, el medio
permanece incoloro o a veces tiene un débil
tono purpura, inidcando que el hipurato no
está hidrolizado (MacFaddin, 2003).
 Reconocimiento de Proteínas
Figura 7. Reconocimiento de proteínas
por medio de reactivo de ninhidrina
Como se mencionó anteriormente se determina
positivo cuando genera un color violeta – azul
oscuro y negativo cuando se mantiene incoloro
o con un violeta claro.
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Prueba Biuret
La reacción de biuret es un método general
para la determinación de proteínas o péptidos.
Se basa en la reacción del sulfato de cobre con
compuestos que tengas dos o más enlaces
peptídicos, en un medio alcalino. El producto
es un complejo violeta, cuya intensidad de
color depende de la cantidad de enlaces
peptídicos presentes. Los dipeptidos y los
aminoácidos dan esta prueba negativa
(Quesada S. 2007).
Es un reactivo de sulfato de cobre diluido en
álcali fuerte. Es un reactivo muy bueno para
demostrar presencia de proteínas e incluso
cuantificarlas. La prueba la dan positiva todos
los componentes que tengan dos o más
uniones peptidicas, por lo cual es propia para
proteínas y pepetidos.
La intensidad de color de la reacción es
proporcional a la cantidad de proteína en la
muestra. El color azul morado de la reacción
positiva se debe a un complejo de coordinación
entre el catión divalente de cobre y cuatro
atomos de nitrógeno, dos de cadena peptidica.
Los dipeptidos y los aminoácidos no dan
positiva la reacción, excepto treonina y serina.
Esta reacción requiere relativamente grandes
cantidades de proteína de 1 a 5mg, para la
formación del color
El criterio para determina si la muestra de
estudio resulta positiva o negativa, se debe a
que el reactivo, de color azul, cambia a violeta
en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando
se combina con polipéptidos de cadena corta.
Por lo cual si la solución final nos da una
coloración violeta, se refiere a que se ha
detectado una presencia de proteínas o mejor
dicho de enlaces peptidicos y precipitando a
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una coloración amarilla la reacción torna
negativa al no haber presencia de proteínas.
(Vejar.2005)
Para la ejecución de esta prueba se tomaron
como referencia la caseína la cual se coloreo
de azul violeta y la albumina de un violeta
transparente esto indica presencia de proteínas
en estas dos soluciones tomadas como
patrones para comparar con las demás
muestras el color obtenido y poder identificar si
hay o no presencia de proteínas para cada tipo
de muestra diferente, en este caso los
resultados obtenidos fueron:
 Leche descremada
El color generado fue un violeta esto indica
positivo para proteínas en esta muestra.
 Leche entera
Azul violeta, el cambio fue poco lo cual indica
que la concentración de proteínas presente en
esta muestra es mucho menor, ya que el
reactivo es inicialmente azul y el color violeta
generado es muy mínimo.
 Leche deslactosada
En esta muestra no se genero un cambio en el
color inicial, al agregar el reactivo, de color
azul, cambia a violeta en presencia
de proteínas, para este caso se mantuvo el
color azul y no cambio a violeta por ende, no
hay presencia de proteínas en este tipo de
leche.
 M1
Azul claro no se genero cambios en el color de
la muestra esto quiere decir que para esta
solución la prueba es negativa, no hay
presencia de proteínas.
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 M4
Esta prueba género en presencia del reactivo
de Biuret una coloración verde manzana, esto
indica que no hay presencia de proteínas ya
que en la literatura solo se indica que hay
presencia de proteínas cuando la coloración
generada es violeta o morada.
Figura 8. Reconocimiento de proteínas por
medio de reactivo de Biuret
4. CONCLUSIONES
5. BIBLIOGRAFÍA
GENARO, A. (2003). Remington Farmacia. Ed.
Panamericana (Argentina).
HERRERA, C., BOLAÑOS, N., & LUTZ, G. (2003).
Química de Alimentos Manual de laboratorio. Ed. La
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JARAMILLO SÁNCHES, J. (2004). Biologia. Ed. Mad,
S.L (España).
RAMIREZ ORTIZ, M. (2017). Propiedades
funcionales de hoy. Ed. OmniaScience (Mexico).
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de la anatomía vegetal. Ed. Universidad Nacional
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MACFADDIN, J. (2003). Pruebas bioquímicas para
la identificación de bacterias de importancia
clínica.Ed. Médica Panamericana (España).
TEIJON J. M. (2006). Fundamentos de bioquímica.
Ed. Tebar (España).
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QUESADA MORA Manual de S. (2007).
experimentos de laboratorio para bioquímica. Ed.
Universidad estatal a distancia.

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