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Cromatografia en Capa Fina A Analisis
Cromatografia en Capa Fina A Analisis
TRABAJO ENCARGADO:
“CROMATOGRAFIA”
CURSO:
ANÁLISIS DE ALIMENTOS
ALUMNA:
DOCENTE:
INDICE
Pag.
I. INTRODUCCION 3
II. OBJETIVOS 4
LA CROMATOGRAFIA
4
i. DEFINICION 4
ii. APLICACION
DE LA MUESTRA 6
iii. OBTENCION DEL
CROMATOGRAMA 7
iv. INTERPRETACION:
FACTOR DE RETENCION Rf 10
v. FACTORES QUE INFLUYEN
EN LA SEPARACIÓN POR
CROMATOGRAFÍA 11
vi. APARATOS, MATERIALES
Y GENERALIDADES 12
vii. CROMATOGRAFIA
BIDIMENSIONAL EN
CAPA FINA 16
IV. CONCLUSIONES 17
V. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 18
ANEXOS
2 Ingeniería Pesquera
“CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA” 2014
I. INTRODUCCION
3 Ingeniería Pesquera
“CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA” 2014
II. OBJETIVOS
Deducir, a través del Rf la relación que existe entre la polaridad de las sustancias
que se analizan y la de los eluyentes utilizados.
En esta técnica la fase estacionaria es una capa fina de gel de sílice u otro soporte
con propiedades adsorbentes dispuesta sobre un soporte de vidrio o aluminio que
denominaremos placa. El eluyente o fase móvil será la mezcla de disolventes
adecuada.
4 Ingeniería Pesquera
“CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA” 2014
5 Ingeniería Pesquera
“CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA” 2014
Luego, cuando la capa es expuesta a un flujo por acción capilar, se inicia una
competencia de enlaces entre los sitios activos del adsorbente y la sustancia con el
solvente. Los adsorbentes más utilizados en la Cromatografía de Capa Fina son:
Tamaño de Partícula
Volumen de Poro
Diámetro de Poro
Área Superficial
Homogeneidad
Pureza
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En la cubeta se introduce una tira de papel de filtro para que el vapor del eluyente
esté por toda la cubeta.
Para otros compuestos, las placas comerciales suelen llevar una sustancia
fluorescente que si se irradia con luz UV, se pueden ver los componentes como
manchas oscuras circulares. Estas manchas se deben marcar sobre la placa con
lápiz.
Otro método puede ser hacer reaccionar los componentes con alguna sustancia
que coloree esos compuestos para dar una señal visual.
La placa está formada por una capa de gel de sílice, una sustancia muy polar, y
por lo tanto, atraerá en mayor medida a componentes más polares.
Es decir, para un eluyente con mayor polaridad, éste estará más atraído por el
soporte y los componentes serán más libres para moverse mejor, por lo que, al
revelar la placa, los componentes saldrán más alejados de la línea base.
Por la misma razón, con un eluyente menos polar, éste casi no interacciona con
el soporte polar, y los compuestos tendrán una mayor interacción con el soporte,
por lo que su velocidad será más pequeña y al terminar la cromatografía, se
habrán desplazado muy poco a partir de la línea base.
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Aplicaciones
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Una vez que la placa ha sido revelada nos encontramos con una serie de manchas
circulares. Si la separación ha sido buena cada una de ellas se corresponderá a un
único compuesto de la mezcla inicial.
dc
Rf
de
Polaridad
Eluyentes más polares arrastran más fácilmente a los compuestos, es decir los
compuestos "corren más" en eluyentes más polares. Por el contrario, mezclas de
disolventes con poca polaridad desplazan los compuestos a través de la columna con
mayor lentitud.
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Los volúmenes mayores se cargan en varias veces, secando entre una y otra
(con aire frío o caliente, aire a presión o con nitrógeno), para evitar que las
manchas se extiendan.
Desarrollo
El eluyente, cuya composición depende de cada problema concreto, se pone en
la cubeta cromatográfica por lo menos 30 minutos antes del principio de la
separación hasta una altura de 0.5 cm. La cubeta se cerrar· con su tapa para
que se sature con los vapores del disolvente y se coloca en un lugar adecuado.
Para que la saturación sea mejor, se recubre la cubeta con papel secante (se
indicar· en el protocolo en el caso que sea necesario).
Para desarrollar la placa, su extremo inferior se introduce en el diluyente y se
vuelve a cerrar la cubeta inmediatamente. Para evitar eluciones, las manchas
cargadas deberán estar completamente por encima del nivel de eluyente.
Cálculos
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rf = ls (cm)
lL (cm)
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Aplicaciones
En la mayoría de los casos la TLC se realiza cuando se quieren hacer
evaluaciones cualitativas rápidas. Las determinaciones cuantitativas son
posibles por acoplamiento del equipamiento necesario (unidades de
carga,scanner); en estos casos, es mejor recurrir a las placas de HPTLC, porque
son más efectivas.
IV. CONCLUSIONES
V. REFERENCIA BIBLIOGRAFICAS
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LIBROS
Rojo Callejas F., Manual de Química Analítica Instrumental II, Anexo III,
Facultad de Química UNAM, México 2002
Principios de Análisis Instrumental. 5™ ed. (2001). Douglas A. Skoog, F.J.
Holler, T.A. Nieman. Mc Graw-Hill Interamericana.
Análisis Instrumental. (2001). K.A. Rubinson, J.F. Rubinson. Prentice Hall.
Análisis de los Alimentos. (1992). Matissek, Schnepel, Steiner. Ed.
Acribia, S.A.
Composición y Análisis de los Alimentos de Pearson. 2™ ed. (1996). R.S.
Kirk, R. Sawyer, H. Egan.
Química Analítica. 6™ ed. (1997). Skoog, West, Holler. Mc Graw-Hill.
PÁGINAS WEB
www.dq.fct.unl.pt/qof/hplcts.html
www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografÌa/hplc.html
www.merck.com.pe/MPSA%5csite%5cwmsp.nsg/contents/cromatografÍa
www.hplc.co.uk/homeframe.htm
www.shu.ac.uk/virtual_campus/courses/241/hplc.htm
www.dicdoc.ucv.cl/lab_sibyl
www.lafaw.com
www.aldbot.com/HPLC-Analysis.htm
www.richardscientific.com
http://ull.chemistry.uakron.edu/chemsep/
http://biologÌa.med.ub.es:8080/curso/curso.html
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