PRACTICAS DE LABORATORIO ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL

DE TOXICOLOGIA

PRACTICA DE LABORATORIO
EFECTOS DEL ACETATO DE PLOMO EN LA GERMINACION DE SEMILLAS Y
CRECIMIENTO DE PLANTULAS DE ARVEJAS

FUNDAMENTO

Es importante determinar el nivel de riesgo ambiental de los metales pesados sobre diversos representantes del ecosistema terrestre
utilizando bioensayos ecotoxicológicos (Iannacone y Gutiérrez, 1999; Arkhipchuk et al., 2000); entre ellos, las plantas terrestres
presentan especies representativas de los agroecosistemas hortícolas (Wang, 1991; Arambasic et al., 1995; Iannacone et al., 2000).
Los ensayos de fitotoxicidad con semillas germinadas son simples, versátiles y útiles para evaluar la toxicidad de aguas, sedimentos
y muestras de suelo (Walsh et al., 1991; Lewis, 1995; Rosa et al., 1999). Algunas especies de plantas tienen ventajas sobre otros
organismos biológicos, como por ejemplo:
1) Poder almacenarse en forma de semilla por un año o más;
2) Costo de mantenimiento mínimo;
3) Las muestras no requieren aireación;
4) Muestras con altas turbiedades no requieren filtración adicional; y
5) Las pruebas se pueden llevar a cabo sin ajuste de pH.

El efecto de metales pesados sobre plantas vasculares no se conoce bien en el Perú (Lerda, 1992; Barone et al., 1997; Rosa et al.,
1999; De Jong y De Haes, 2001). La determinación de algunos aspectos de la ecotoxicidad de metales pesados empleando
bioensayos sencillos y prácticos para catalogar toxicológicamente muestras ambientales contaminadas por Pb, Hg y Cr contribuirá,
en el Perú, a tomar medidas para evaluar la perturbación de los ecosistemas y promover alternativas de biorremediación (Shanker et
al., 1996; Iannacone y Alvariño, 1999).

Las plantas vasculares han sido recomendadas por la Agencia de Protección Ambiental (EPA) y por la Administración de Drogas y
Alimentos (FDA), ambas de EE.UU., debido a su buena sensibilidad, en comparación con semillas de otras especies de plantas
terrestres (Wang, 1991). El ensayo ecotoxicológico con semillas de plantas vasculares presenta algunas ventajas sobre otras especies
terrestres, lo que permite usar cuantitativamente el crecimiento de la raíz. Wang (1991) indicó que el crecimiento de raíz como punto
final de lectura, es más sensible a la toxicidad que la germinación de semillas, la cual presenta un alto coeficiente de variación (Rosa et
al., 1999). Calow (1993) presentó un resumen de los protocolos de bioensayos de germinación de semilla y de elongación de raíz con
diferentes especies de plantas, siendo comparables al protocolo usado en este estudio.

La sensibilidad de las especies a los metales pesados varía considerablemente a través de reinos y phyla, siendo las plantas
vasculares ligeramente más tolerantes (Rosa et al., 1999). Las diferentes respuestas de las plantas vasculares a metales pesados
pueden ser atribuidas a factores genéticos, fisiológicos; así como a las rutas toxicológicas y de destino ambiental de los tóxicos (Calow,
1993). Lerda (1992) encontró que el Pb reduce el crecimiento radicular y la frecuencia de células mitóticas, y el incremento de la
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frecuencia de células aberrantes en A. cepa. La intensidad del efecto está en función de la concentración del Pb. Pal y Nandi (1990)
y Liu et al. (1995) evaluaron el efecto citológico del Hg en las raíces de bulbos de A. cepa.

OBJETIVOS

1.- Conocer y evaluar los efectos del acetato de plomo en germinación de semillas y crecimiento de plántulas de arveja comparados
con un testigo

2.- Evaluar el efecto de las concentraciones de acetato de plomo 10, 30 y 50 ppm sobre la germinación y crecimiento ( radícula, talluelo
y hojas ) de la especie en estudio.

MATERIALES

 4 Placas Petri estériles

 Papel toalla
 4 Jeringas de 10 cc
 Semillas : arvejas frescas y secas
 Regla
 Tijeras
 Agua de caño sin cloro para riego del testigo
 Concentraciones de metal pesado de plomo en 10 ppm, 30 ppm, 50 ppm
 Solución de hipoclorito al 5% para desinfectar las semillas
 Estufa a una temperatura de 25 o temperatura acondicionada
 hoja de cálculo (Excel) programa estadístico
 Información en Internet sobre el tema

PROCEDIMIENTO

1.- Desinfectar las placas Petri con ayuda del papel toalla e hipoclorito de sodio a 5%
2.- Desinfectar las semillas en hipoclorito por espacio de 5 minutos en un recipiente
3.- Enjuagar con agua destilada las semillas y luego secaras con papel toalla
4.- Colocar el papel toalla en las placas petri en forma circular en doble ancho, considerar una base y tapa de papel para cada placa
Petri.
5.- Sembrar 4 semillas de arvejas, considerar 2 frescas y dos secas por cada placa incluido en testigo, cubrir con el papel toalla
6.- Con ayuda de las jeringas descartables regar las placas con 5 a 10 ml de cada una de las concentraciones de acetato de plomo
interdiario por un periodo de 21 días y temperatura acondicionada 7.- Realizar las evaluaciones correspondientes interdiario y las
mediciones con ayuda de una regla milimetrada de la radícula y talluelo así como el conteo del número de hojas y registrar en el
cuadro correspondiente.
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Nota : Emplear un hilo para realizar las mediciones y evitar estirar la radícula y talluelo para no romperlas.

RESULTADOS : CUADRO DE REGISTRO

ANALISIS DE LOS RESULTADOS Y CONCLUSIONES

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RESULTADOS

CUADRO DE RESULTADOS PROMEDIO DE MEDICIONES

PROMEDIO DE LAS EVALUCIONES

EVALUACIONES
DIA DIA DIA

30 50 10 TEST 10 30 50 TEST 10 30 50 TEST

ppm ppm ppm ppm ppm ppm ppm ppm ppm
LONGITUD RAIZ

LONGITUD TALLO

No DE HOJAS

BIOMASA PLANTA

EVALUACIONES PROMEDIO DE LAS EVALUCIONES

DIA DIA DIA

30 50 10 TEST 10 30 50 TEST 10 30 50 TEST

ppm ppm ppm ppm ppm ppm ppm ppm ppm
LONGITUD RAIZ

LONGITUD TALLO

No DE HOJAS

BIOMASA PLANTA
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RESULTADOS

CUADRO DE RESULTADOS PROMEDIO DE MEDICIONES

PROMEDIO DE LAS EVALUCIONES

EVALUACIONES
DIA DIA DIA

30 50 10 TEST 10 30 50 TEST 10 30 50 TEST

ppm ppm ppm ppm ppm ppm ppm ppm ppm
LONGITUD RAIZ

LONGITUD TALLO

No DE HOJAS

BIOMASA PLANTA

EVALUACIONES PROMEDIO DE LAS EVALUCIONES

DIA DIA DIA

30 50 10 TEST 10 30 50 TEST 10 30 50 TEST

ppm ppm ppm ppm ppm ppm ppm ppm ppm
LONGITUD RAIZ

LONGITUD TALLO

No DE HOJAS

BIOMASA PLANTA
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PRACTICA No 09
EFECTOS DEL GAS ETILENO EN PLANTAS
INTRODUCCIÓN
El etileno es una sustancia natural (hormona) producida por las frutas. Aún a niveles bajos menores que 1 parte por millón (ppm), el
etileno es fisiológicamente activo, ejerciendo gran influencia sobre los procesos de maduración y senescencia de las frutas, influyendo
de esta manera en la calidad de las mismas. Asimismo, la formación de la zona de desprendimiento de la fruta del resto de la planta
(absición), también es regulada por esta sustancia. Lo mencionado evidencia la importancia que tiene el etileno en la fisiología post-
cosecha. No existe relación entre la cantidad de etileno que producen distintas frutas y su capacidad de conservación; sin embargo,
la aplicación externa de este gas generalmente promueve el deterioro del producto acortando su vida de anaquel (tiempo útil para su
comercialización)

El etileno se sintetiza a partir del aminoacido metionina, primero se da la conversión de metionina a S-adenosil-L-metionina (SAM)
catalizada por la enzima SAM sintetasa, luego se presenta la formación de 1-aminociclopropano-1-ácido carboxílico (ACC) a partir de
a partir de SAM tmediante la enzima ACC sintasa (ACS) y finalmente la conversión de ACC a etileno, catalizada por la ACC oxidasa
(ACO) (Bapat et al., 2010). La metionina es reciclada en el ciclo de “Yang” lo que conlleva a tener altas tasas de producción de etileno
sin necesidad de altos niveles de metionina intracelular (Barry y Giovannoni, 2007).

El hecho que la hormona etileno haya resultado ser un gas, es con respecto a la formulación de las otras hormonas “no gaseosas” un
hecho sorprendente, además dado que los mínimos niveles que implican un efecto; son comúnmente menores a 1.0 ppm (1.0 ul.L-1).
Independientemente, algunos fenómenos afines al efecto de gases sobre plantas habían ido aconteciendo por comienzos del Siglo
XX. En parques residenciales de Europa, se observaba la caída particular de las hojas de sólo algunos árboles dispuestos en algunos
sitios de parques próximos al iluminado y desde E.E.U.U., se hacía referencia también a la caída total de hojas en cultivos de rosas
en desarrollo bajo condiciones de invernadero. En ambos casos estaba involucrado el combustible distribuido que emanaba de una
tubería defectuosa que contenía gas urbano para alumbrado de los faroles y calefacción de esa época. En general, el etileno se
encuentra como subproducto de la combustión de petroquímicos. Esto condujo a reconocer experimentalmente, aún a comienzos de
siglo que, varios gases como el etileno, podían inducir varias respuestas en plantas, al poder afectar los patrones de crecimiento y
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germinación, aunque este último, no como una hormona vegetal. Sin embargo a partir de los 1980s se descifra totalmente su ciclo de
síntesis, enzimas y diferentes factores bióticos y abióticos que afectan dicho proceso y etileno es reconocido como otra hormona
vegetal. Se asume que estaría relacionado con la acción de auxina dado que en presencia que se admite que por su forma gaseosa,
puede llegar a zonas adyacentes más rápidamente donde la auxina no puede acceder.

OBJETIVOS

 Evaluar los efectos del gas etileno natural producido por la maduración de platano en condiciones experimentales de
recipientes herméticoses sobre especies de plantas ornamentales

MATERIALES
 Especie ornamental embolsada con base
 Recipiente hermético
 Plátanos maduros
 Termómetro
 Agua de riego sin cloro

PROCEDIMIENTO

1.- Disponer de una planta ornamental, en buenas condiciones ( estado Lozano ), si es posible en plena floración
2.- Realizar la limpieza del recipiente hermético ( base y tapa )(recipiente secador )
3.- Acomodar un termómetro dentro del recipiente con ayuda de una cinta de embalaje de manera que sea visible su observación
de la temperatura.
4.- Colocar dentro del recipiente la base o platillo para que sobre éste se coloque la planta ornamental previamente bien regada con
agua de riego sin cloro
5.- En otro recipiente colocar los tres plátanos maduros y colocarlo dentro del recipiente hermético
6.- Colocar la tapa y sellar para que no ingrese aire
7.- Colocar una etiqueta con los datos respectivos del experimento, considerar la fecha de incio y finalización
8.- Evaluar el experimento dos veces por semana, durante quince días, verificar el riego para mantener con humedad a la planta

CUADRO DE RESULTADOS

FECHA TEMPERTURA LONGITUD NUMERO NUMERO

PROMEDIO DE HOJAS DE
DEL TALLO LOZANAS FLORES
LOZANAS
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Graficar el procedimiento
ANALISIS DE LOS RESULTADOS
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CONCLUSIONES
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CUESTIONARIO
1.- En que consiste el proceso de síntesis del gas etileno
2.- Cuales son los efectos probables del gas etileno en plantas