UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y ALIMENTARIAS

EXTRACCIÓN DE ADN

ANDRES GOMEZ RESTREPO CC: 1214738805

JUAN DAVID CRISTANCHO GUZMAN CC: 1111201133

DAVID GIRON GOMEZ CC: 1035428527

JUAN JACOBO DELGADO CC: 1085343371

MEDELLIN
 RESULTADOS
Tabla 1. Datos de absorbancia de las muestras de ADN a 260nm y 280nm
Grupo Cantidad de Absorbancia
muestra (mg) 260nm
1 72.6 2.230
2 71.1 2.466
3 72.6 2.230
4 76.3 2.220
ANALISIS DE RESULTADOS
En esta práctica se tenía como objetivo
aislar el ADN de una muestra vegetal
(arvejas), para lo cual se realizaron una
serie de pasos y procedimientos, que
permitieron aislar el material genético de
este espécimen. El paso inicial consistió en
degradar la pared celular, para lo cual se
sometió la muestra a una temperatura de -
4°C, con posterior maceración, lo que dio
lugar a la liberación del contenido
intracelular. Posteriormente se adicionó el
primer buffer de extracción, conformado
por Tris-HCl, EDTA, Sorbitol,
mercaptoetanol y polietilenglicol, en donde
cada componente tenía una función
definida. El pH ligeramente básico del
buffer (cercano a 8), permitió que las
enzimas nucleasas no degradaran los
ácidos nucleicos, ya estas permanecen
inactivas a este pH, adicional a esto, su
actividad se vio reducida aún más por la
acción del agente quelante EDTA, el cual
atrapa a los iones divalentes de Mg,
cofactor necesario para la actividad
enzimática de las nucleasas. Cabe aclarar
que el magnesio también tiene la función
de mantener la envoltura celular.
La desnaturalización de las proteínas se
realizó con mercaptoetanol, una sustancia
que reduce los puentes disulfuro de las
cisteínas y da lugar a que se pierda su
conformación estructural. El sorbitol
Absorbancia Absorbancia 260nm/
280nm Absorbancia 280nm
2.257 0.998
2.350 1.049
2.260 0.987
2.240 0.991
contribuyó a disminuir la viscosidad de la
muestra, y ayudó en la separación de
carbohidratos, mientras que el
polietilenglicol tenía la función de precipitar
el ADN y de esa manera reducir la
complejidad de la mezcla.
La separación del ADN precipitado se
realizó por centrifugación a 5000rpm
durante 10 minutos, con lo que se aisló de
los demás componentes intracelulares, no
obstante, éste tuvo que ser tratado con otro
buffer, para alcanzar la mayor pureza
posible. La composición del segundo buffer
es similar a la del primero, con la excepción
que este no contiene polietilenglicol, sino
que en su lugar presenta sodio sarkosyl,
NaCl y CTAB. El sodio sarkosyl y el CTAB
son detergentes de carga negativa y
positiva respectivamente y se utilizan para
degradar las membranas de los
componentes celulares, mientras que el
NaCl es una sal que aumenta la fuerza
iónica del medio y promueve la
solubilización del ADN.
Un paso importante en el proceso de
purificación, fue la incubación de la
muestra a 60°C por 10 minutos, con lo cual
se dió la degradación del ARN, eliminando
así este interferente de la sustancia de
interés. La posterior adición de cloroformo
permitió precipitar las proteínas y los
lípidos, los cuales fueron separados por
centrifugación. Cabe mencionar que en
este paso se utilizó alcohol isoamilico junto
con el cloroformo, con el fin de evitar la
formación de espuma y así evidenciar
mejor las fases.
La fase acuosa que contenía el ADN se
trató con isopropanol frio, el cual al reducir
la fuerza iónica del medio, ocasionó que el
ADN precipitara. Nuevamente se hizo uso
de la centrifugación para separar el ADN
del alcohol y el resto de sustancias solubles
en este, para repetir el proceso con Etanol
al 70% y de esta manera lograr un mayor
grado de pureza.
Los datos de absorbancias obtenidos por
los distintos grupos mostraron una
variación notoria, lo que nos indica que a
pesar de utilizar el mismo método, errores
en la medición de volúmenes, tiempos de
agitación, entre otros, pueden llegar a ser
críticos en el resultado final
Para alcanzar un mayor grado de pureza
de las muestras de ADN, se recomienda
repetir el lavado con etanol, de manera que
se elimine la mayor cantidad de
contaminantes posibles.

La evaluación de la calidad y la pureza del

ADN extraído se realizó por BIBLIOGRAFÍA
espectrofotometría, midiendo las Savala J. (2005) Manual de técnicas
absorbancias de las muestras a 260nm y básicas de biología molecular. Ediciones
280nm (tabla 1). Cabe mencionar que a de la Universidad Autónoma de Yucatán.
260nm absorben las bases nitrogenadas Volumen 1. pág 31-33.
de los nucleótidos del ADN, mientras que a
280nm los residuos aromáticos de los Corbin L. (1998) Protocolos de laboratorio
aminoácidos de las proteínas, que también de biología molecular. Edición 2da. pág 1-
al presentar enlaces conjugados en sus 4
estructuras, tienen máximos de absorción
en el rango UV.

De esta manera la relación entre las dos

absorbancias (260nm/280nm) nos da un
indicio de que tan puro se encuentra el
ADN extraído, considerándose este
contaminado cuando la relación
mencionada da un valor menor a 1.8. Los
datos mostrados en la tabla 1 nos indican
que las muestras aisladas por los 4 grupos
se encuentran significativamente
contaminadas con proteínas, dado que la
relación de absorbancias dio muy por
debajo del valor establecido.

CONCLUSIONES

Las muestras de ADN extraídas en el

laboratorio presentaron un significativo
grado de contaminación proteica, dado que
en todos los casos la relación de
absorbancias 260nm/280nm dieron valores
inferiores a 1.8.