Análisis comparativo entre las proteínas asociadas a virulencia Serralysin,

expresada en ​Serratia marcescens ​por el gen PrtA y en ​pseudomonas

aeruginosa ​por aprA.

*Juan Nicanor Marmolejos *Sandra Moscote Padron *Juan Sebastian

Adams.
MARCO TEÓRICO.

Serratia ​sp.

El género ​Serratia está formado por bacilos Gram negativos de 0,9 – 2 µm de largo y 0,5 –
0,8 µm de diámetro y forma parte de la familia Enterobacteriaceae. Miembros del género
Serratia​, particularmente la especie ​Serratia marcescens, causan importantes infecciones en
humanos, animales e insectos. Hay 14 especies y 2 subespecies reconocidas en el género, ​S.
entomophila, S. ficara, S. fonticola, S. glossinae, S. grimesii, S. liquefaciens, S. maercescens
subsp.​ ​marcescens, S. marcescens subsp. sakuensis, S. nematodiphila, S. odorifera, S.
plymuthica, S. proteamaculans, S. quinivorans, S. rubidaea, S. ureilytica1​ .​

La mayoría de las especies de ​Serratia son móviles mediante flagelos perítricos, anaerobios
facultativos, quimioorganotrofos con metabolismo de tipo respiratorio y fermentativo. Son
habitantes ubicuos de suelo, agua y plantas y se encuentran normalmente asociadas con
alimentos crudos, lo que causa el desperdicio de estos alimentos​11​. Además, son capaces de
colonizar una amplia variedad de superficies en el tracto digestivo de roedores, insectos,
peces y humanos. Plantean un peligro para la salud como patógenos oportunistas. En
particular, ​Serratia marcescens​, representa un importante patógeno nosocomial capaz de
causar neumonía, infecciones intravenosas asociadas a cateterismos, infecciones del tracto
urinario, osteomielitis y endocarditis que se ven exacerbadas por la existencia de cepas
resistentes a múltiples antibióticos​2​.

Serratia marcescens.
S. marcescens ​era considerado originalmente un organismo de agua saprófito, inocuo, no
patogénico y era utilizado como un marcador biológico debido a sus colonias rojas que son
fácilmente reconocibles. Luego de la revisión de ciertos incidentes en 1896, el profesor
Scheurlen de la Universidad de Estrasburgo concluyó que este organismo contribuía a más
muertes que muchas bacterias patogénicas. Desde 1960, la frecuencia del número de reportes
de infecciones causadas por este organismo aumentó considerablemente​3​.

La habilidad de causar infecciones se suponía limitada a pacientes con desórdenes

debilitantes, pero actualmente ​S. marcescens se ha implicado como el agente etiológico de
cada tipo de infección existente, incluyendo infecciones del tracto urinario, septicemia,
meningitis e infecciones de heridas. Se reportó que ​S. marcescens causa endocarditis
adquiridas en la comunidad y en los hospitales. El potencial de ​S. marcescens de utilizar un
amplio rango de nutrientes se ve expresado claramente por su habilidad de sobrevivir y crecer
bajo condiciones extremas, incluyendo desinfectantes, antisépticos y agua dos veces
destilada. Los aislamientos ambientales de S. marcescens producen un pigmento rojo
característico denominado prodigiosina. La bacteria pigmentada se encuentra en distintos
nichos ecológicos que incluyen suelo, agua, aire, plantas y animales. La habilidad de producir
prodigiosa es característica de ​S. marcescens, ​pero se desconoce la función de este pigmento
rojo ya que los aislamientos clínicos no suelen ser pigmentados​4​.

Serratia marcescens es un patógeno oportunista de humanos que representa un problema

creciente para la salud pública, particularmente para pacientes hospitalizados o
inmunocomprometidos. Como se mencionó anteriormente, es capaz de causar infecciones en
el sistema nervioso central, infecciones del tracto urinario, neumonía y otras infecciones
respiratorias, infecciones del torrente sanguíneo incluyendo endocarditis e infecciones de
heridas. Además, ​S. marcescens es un importante patógeno ocular, no necesariamente en
pacientes hospitalizados o inmunocomprometidos​9​. Si bien se han identificado diversos
factores de virulencia potenciales producidos por ​S. marcescens​, existen muy pocas
publicaciones donde se explora en profundidad los mecanismos que utiliza para invadir,
sobrevivir y proliferar dentro del hospedador​5

Hertle y Schwartz​4​, reportaron que ​S. marcescens es capaz de invadir distintas líneas
celulares epiteliales, por un mecanismo dependiente de la adhesión y de la producción de
hemolisina. Propusieron que dicha toxina facilita la internalización de la bacteria, pero no
estaría involucrada en la replicación intracelular.

En un reporte más reciente se demostró que distintos aislamientos clínicos no pigmentados de

S. marcescens eran citotóxicos ante distintas líneas celulares epiteliales y de macrófagos, y
que esta citotoxicidad era dependiente del contacto entre las bacterias y las células eucariotas.
Además, se reportó que ​Serratia ​era capaz de inducir necrosis y apoptosis dependiente de
caspasas en estas líneas celulares​6​. ​S. marcescens es un potente patógeno de Drosophila
melanogaster en un modelo de herida séptica sin embargo, los insectos no sucumben en un
modelo de infección oral con ​Serratia. Las bacterias inyectadas resisten la respuesta inmune
sistémica, proceso que involucra al antígeno O del lipopolisacárido (LPS). Las bacterias
ingeridas escapan del tracto digestivo hacia el hemocele, a través del epitelio intestinal y son
sensibles a la respuesta local de la vía IMD (del inglés, immune deficiency pathway) que se
dispara en el intestino del insecto infectado. Además, la fagocitosis es un mecanismo de
defensa efectivo contra las bacterias ingeridas que escaparon hacia la hemolinfa​5​.

Kurz y colaboradores, realizaron una búsqueda de factores de virulencia en ​S. marcescens​,

demostrando la capacidad de esta enterobacteria para invadir un amplio rango de
hospedadores, tales como el nematodo Caenorhabditis elegans, la mosca de la fruta D.
melanogaster y cultivos de células epiteliales. Reportaron que los genes implicados en la
biosíntesis del lipopolisacárido (LPS), la captación de hierro y la producción de hemolisina
son necesarios para la virulencia de ​Serratia​ in vivo​7​.

RESISTENCIA
Las infecciones causadas por ​S. marcescens suelen ser difíciles de tratar debido a la
resistencia de esta enterobacteria a antibióticos β-lactámicos, aminoglucósidos y
fluoroquinolonas​8​.

El mecanismo más común de resistencia a aminoglucósidos en ​S. marcescens e​ stá mediado

por enzimas que modifican al antibiótico. Estas enzimas modifican su blanco al agregar
grupos acetilos (N-acetiltransferasas), grupos fosfatos (O'Fosfotransferasas) o nucleótidos
(O-nucleótido transferasas). De esta manera, el aminoglucósido es incapaz de unirse a su
blanco en el ribosoma​9​. La resistencia también puede estar dada debido a mecanismos
bacterianos que provocan la alteración del ribosoma mismo, la impermeabilización de la
célula o el aumento en la expresión de los canales de eflujo. Muchos brotes nosocomiales en
pacientes pediátricos y adultos son causados por cepas de ​S. marcescens ​resistentes a uno o
varios aminoglucósidos​10​.

Las especies del género ​Serratia son intrínsecamente resistentes a varios antibióticos
β-lactámicos como la penicilina G, ampicilina, amoxicilina y cefalosporinas. Algunas cepas
de ​S. marcescens poseen carbapenemasas cromosomales y βlactamasas codificadas por el gen
cromosomal ampC, que pueden hidrolizar cefalosporinas y penicilinas. El gen ampC de ​S.
marcescens es inducible por varios antibióticos β-lactámicos mediante un mecanismo
complejo que involucra el reciclado de la pared celular​9​.

La resistencia a antibióticos β-lactámicos en ​S. marcescens v​ iene dada por dos mecanismos:
la expresión de β-lactamasas activas capaces de degradar antibióticos de la familia de las
cefalosporinas, carbapenems y, penicilinas; y por otro lado, una menor permeabilidad de la
membrana debido a modificaciones en el antígeno O de su LPS​3​.

VIRULENCIA
La ​serralisina PrtA se ha encontrado asociada a factores de virulencia y la formación de
vesículas de membrana externa (OMVs), las cuales de manera experimental a través de
ensayos con células de tejidos epiteliales, se relacionan directamente con la toxicidad, y la
capacidad de internalizarse en la célula hospedera, de forma dependiente a PrtA.
La regulación de ésta proteína se da de forma negativa mediante el sistema CprxRA, y
proteínas con alta homología a PrtA son codificadas por sistemas como: slpC, slpD, y slpE.​12
Esta se expresa durante la fase de diferenciación de las células flageladas, su actividad
proteasa se limita a IgA1, IgA2, dos clases de inmunoglobulina las cuales son cruciales en el
sistema inmune; como también la degradación de igG, la cual es la inmunoglobulina más
abundante en la sangre y el líquido encefalorraquídeo y se expresa en presencia de antígenos
de naturaleza bacteriana, fúngica o vírica.​13

Serralysin es una metaloproteasa dependiente de Zinc, la cual usa un catión divalente Zinc;
los iones metálicos suelen estar unidos a ligandos de aminoácidos como His, Glu, Asp o Lys,
y se requiere uno para la función catalítica que puede desempeñar un papel electrofílico.
La mayoría de las proteínas dependientes de Zinc comparten un patrón común en su
estructura primaria en la zona de unión al Zinc, por lo que se pueden agrupar en una
superfamilia llamada metzincinas.
Es importante mencionar, que las metzincinas comprenden también varias familias presentes
en proteasas, que aunque no están presentes en mamíferos, poseen un gran impacto en la
biología humana, al construir factores determinantes de infección por varios
microorganismos. Así la familia de las serralisinas, incluyen varios factores de virulencia
bacterianos; como la serralisina de serratia marcescens​, la mirabilisina en ​proteus mirabilis,
o la aeruginolisina de pseudomonas aeruginosa.​14 ​Este microorganismo (​pseudomonas
aeruginosa​), está presente en la naturaleza en dos formas, una forma móvil que nada
libremente y una segunda forma de micro comunidades envuelta en glicocálix. La motilidad
es importante para el establecimiento y la diseminación del microorganismo hacia nuevos
sitios. Por otra parte la micro-comunidad es la forma que se da en pulmones de pacientes con
fibrosis quística y la adherencia entre bacterias está mediada por pili. El glicocálix que las
envuelve protege a las células bacterianas de los anticuerpos dirigidos contra el antígeno O,
además de favorecer la adherencia a las mucinas producidas por los pacientes mencionados
anteriormente. El tamaño de estas micro-comunidades impide la fagocitosis. Por otra parte la
piocianina reduce el movimiento de los cilios respiratorios y contribuye al establecimiento
del microorganismo. ​P. aeruginosa produce además algunas toxinas entre las que se
destacan: la exotoxina A, que posee un mecanismo de acción similar al de la toxina diftérica
que al obrar como ADP-ribosil transferasa y detener la síntesis proteica, consigue muerte
celular y la exoenzima S, que también posee actividad ADP-ribosil transferasa.​15

METODOLOGÍA

Para este trabajo se buscó información en diferentes bases de datos inicialmente se indagò en
en la base de datos Uniprot que es una base con millones de secuencias de proteínas, es
complementada con informaciones de otras bases de datos e informa sobre funcionalidad y
estructuctura de la proteína, posteriormente se utilizó la base dato PDB la cual alberga
información sobre la estructura de la proteína y de ácidos nucleicos, en esta base se extrajo
imagenes y informacion funcional de la proteína, luego se extrajeron secuencias en archivo
FASTA de las proteínas de interés y se recurrió a compararlas en la base de dato BLAST y
Clustal Omega las cuales nos permiten alinear las secuencias y encontrar diferencias y
similitudes entre ellas para así inferir cada cambio que implica en el comportamiento del
microorganismo a investigar.

​ ase de dato Uniprot la cual fue utilizada para obtener en su mayoría información sobre la composición estructural y funcional
Imagen 1: B
de la proteína a estudiar.

Imagen 2:​ Base de dato PDB la cual fue utilizada para obtener información estructural,funcional de la proteína a estudiar, y su secuencia
de aminoácidos.

Imagen 3:​ Base de datos BLAST la cual no permite el alineamiento de secuencias y por ende nos permite determinar diferencias
significativas entre secuencias.
 Imagen 4:​ Base de datos Omega Clustal la cual no permite el alineamiento de secuencias y por ende nos permite determinar diferencias
significativas entre secuencias.
Secuencia de aminoácidos obtenida en
PDB(código: 5D7W)
RESULTADOS
>5D7W:ATGYDAVDDLLHYHERGNGIQIN
GKDSFSNEQAGLFITRENQTWNGYKVFG
QPVKLTFSFPDYKFSSTNVAGDTGLSKFS
AEQQQQAKLSLQSWADVANITFTEVAAG
Serralysin PrtA ​(​Serratia marcescens)
QKANITFGNYSQDRPGHYDYGTQAYAFL
PNTIWQGQDLGGQTWYNVNQSNVKHPA
TEDYGRQTFTHEIGHALGLSHPGDYNAG
EGNPTYNDVTYAEDTRQFSLMSYWSETN
TGGDNGGHYAAAPLLDDIAAIQHLYGAN
LSTRTGDTVYGFNSNTGRDFLSTTSNSQK
VIFAAWDAGGNDTFDFSGYTANQRINLN
EKSFSDVGGLKGNVSIAAGVTIENAIGGS
GNDVIVGNAANNVLKGGAGNDVLFGGG
GADELWGGAGKDIFVFSAASDSAPGASD
WIRDFQKGIDKIDLSFFNKEANSSDFIHFV
DHFSGTAGEALLSYNASSNVTDLSVNIGG
HQAPDFLVKIVGQVDVATDFIV

Familia:​ M10B Peptidasa

Organismo: ​Serratia marcescens
Clasificación: ​Hidrolasa
Residuos de aminoácidos:​ 469
Peso molecular: ​50797.16 kDa
Ligandos:​ Zn (1), Ca (7), Glycerol (2)
Hélices alfa:​ 12
Láminas beta:​ 38
Localización: ​Matriz extracelular
Codigo de acceso Uniprot:
A0A1C3HCS0
​ erralysin PrtA
Imagen 5: Forma tridimensional de la proteína S
presente en S​ erratia marcescens Código de acceso a PDB: 5D7W
PI teórico: 5.39
Dominios Pfa
Imagen 6: ​Dominio Pfa extraído de la base de datos pfam.

Interacciones de aminoácidos con ligandos

Nota: La interacción de los ligandos pueden ser con diversos aminoácidos no solo con los que
aquí se describen (estos son solo algunas interacciones, una por cada ligando).

*Metal vinculante, Zinc - catalítico, posición 196

Imagen 7:​ Interacción del ligando Zinc con su respectivo aminoácido(Histidina).

*Metal vinculante, Calcio 1 - vía carbonil oxígeno , posición 269

Imagen 8:​ Interacción del ligando Calcio 1 con su respectivo aminoácido (Arginina).
*Metal vinculante, Calcio 2 - vía carbonil oxígeno , posición 304

Imagen 9:​ Interacción del ligando Calcio 2 con su respectivo aminoácido (Glicina).

*Metal vinculante, Calcio 3 - vía carbonil oxígeno , posición 350

Imagen 10:​ Interacción del ligando Calcio 3 con su respectivo aminoácido (Glicina).

*Metal vinculante, Calcio 4 - vía carbonil oxígeno , posición 359

Imagen 11: I​ nteracción del ligando Calcio 4 con su respectivo aminoácido(Asparagina).

*Metal vinculante, Calcio 5- vía carbonil oxígeno , posición 368

Imagen 12: I​ nteracción del ligando Calcio 5 con su respectivo aminoácido (Glicina).

*Metal vinculante, Calcio 6- vía carbonil oxígeno , posición 379

Imagen 13: I​ nteracción del ligando Calcio 6 con su respectivo aminoácido (Glicina).

*Metal vinculante, Calcio 7- vía carbonil oxígeno , posición 386

Imagen 14:​ Interacción del ligando Calcio 7 con su respectivo aminoácido (Glicina).
Sitio activo: Ácido glutámico, posición 193

Imagen 15: S​ itio activo de la proteína Serralysin PrtA.

Diferentes experimentos de
cristalización, Serralysin PrtA.
1.
2.

Imagen 17:​ Ensayo de cristalización para la proteína

Serralysin PrtA.
Imagen 16:​ Ensayo de cristalización para la proteína
Serralysin PrtA.
3. 4.

Imagen 19:​ Ensayo de cristalización para la proteína

Imagen18:​ Ensayo de cristalización para la proteína Serralysin Serralysin PrtA.
PrtA.

5.

Imagen 20:​ Ensayo de cristalización para la proteína Serralysin PrtA.

Serralysin aprA ​(Pseudomonas AAAPDTLRDFVSGQDKIDLSGLDAFVNG
aeruginosa) GLVLQYVDAFAGKAGQAILSYDAASKA
GSLAIDFSGDAHADFAINLIGQATQADIV
V

Familia: M10B PEPTIDASA

Organismo:​ Pseudomonas aeruginosa
Clasificación:​ Hidrolasa
Residuos de aminoácidos:​ 463
Peso molecular:​ 49169.63 kDa
Ligandos:​ Zn (1), Ca (8), SO4(1)
Hélices alfa:​ 14
Láminas beta:​ 33
Localización: ​Matriz extracelular
Codigo de acceso Uniprot: Q03023
Código de acceso PDB: 1AKL
PI teórico: 4.25

Dominio Pfa
Imagen 21:​ Forma tridimensional de la proteína ​Serralysin
aprA en Pseudomonas aeruginosa

Secuencia de aminoácidos obtenida en

PDB (código:1AKL)
>1AKL:GRSDAYTQVDNFLHAYARGGDE
LVNGHPSYTVDQAAEQILREQASWQKAP
GDSVLTLSYSFLTKPNDFFNTPWKYVSDI
YSLGKFSAFSAQQQAQAKLSLQSWSDVT
NIHFVDAGQGDQGDLTFGNFSSSVGGAA
FAFLPDVPDALKGQSWYLINSSYSANVN
PANGNYGRQTLTHEIGHTLGLSHPGDYN
AGEGDPTYADATYAEDTRAYSVMSYWE
EQNTGQDFKGAYSSAPLLDDIAAIQKLY
GANLTTRTGDTVYGFNSNTERDFYSATS
SSSKLVFSVWDAGGNDTLDFSGFSQNQK
INLNEKALSDVGGLKGNVSIAAGVTVEN
AIGGSGSDLLIGNDVANVLKGGAGNDIL imagen 22: ​ D
​ ominio Pfa extraído de la base de datos pfam

YGGLGADQLWGGAGADTFVYGDIAESS
Interacciones de aminoácidos con ligandos
Nota: La interacción de los ligandos pueden ser con diversos aminoácidos no solo con los que
aquí se describen (estos son solo algunas interacciones, una por cada ligando).

*Metal vinculante, Zinc - via tele nitrogen; Catalytic, posición 189

Imagen 23:I​ nteracción del ligando Zinc con su respectivo aminoácido (Histidina).

*Metal vinculante, Calcio 1 - vía carbonil oxígeno, posición 262

Imagen 24:I​ nteracción del ligando Calcio 1 con su respectivo aminoácido (Arginina).

*Metal vinculante, Calcio 2 - vía carbonil oxígeno, posición 336

Imagen 25:I​ nteracción del ligando Calcio 2 con su respectivo aminoácido (Treonina).
*Metal vinculante, Calcio 3 - vía carbonil oxígeno, posición 343

Imagen 26:I​ nteracción del ligando Calcio 3 con su respectivo aminoácido (Glicina).

*Metal vinculante, Calcio 4- vía carbonil oxígeno, posición 352

Imagen 27:I​ nteracción del ligando Calcio 4 con su respectivo aminoácido (Asparagina).

*Metal vinculante, Calcio 5 - vía carbonil oxígeno, posición 361

Imagen 28:I​ nteracción del ligando Calcio 5 con su respectivo aminoácido (Glicina)
*Metal vinculante, Calcio 6- vía carbonil oxígeno, posición 370

Imagen 29:I​ nteracción del ligando Calcio 6 con su respectivo aminoácido (Glicina).

*Metal vinculante, Calcio 7 - vía carbonil oxígeno, posición 379

Imagen 30:I​ nteracción del ligando Calcio 7 con su respectivo aminoácido (Glicina).

*Metal vinculante, Calcio 8 - vía carbonil oxígeno, posición 461

Imagen 31:I​ nteracción del ligando Calcio 8 con su respectivo aminoácido (Histidina).
Sitio activo: Ácido glutámico; posición 186

Imagen 32:​ Sitio activo de la proteína Serralysin aprA.

Diferentes experimentos de
cristalización, Serralysin ​aprA.
3.

1.

I​ magen 35:​ Ensayo de cristalización para la proteína

Serralysin aprA.

4.
I​ magen 33:​ Ensayo de cristalización para la proteína
Serralysin aprA.

2.

I​ magen 34:​ Ensayo de cristalización para la proteína I​ magen 36:​ Ensayo de cristalización para la proteína
Serralysin aprA. Serralysin aprA.
COMPARACIÓN

Alineación de las secuencias de las proteínas Serralysin aprA y Serralysin PrtA en la

base de datos BLAST:

Imagen 37:​ Alineamiento obtenida en la base de datos BLAST de dos secuencia de las proteínas Serralysin aprA y Serralysin PrtA, donde
se encontró que tienen una identidad del 55%.

Alineamiento detallado de las secuencias de las proteínas Serralysin aprA y Serralysin

PrtA en la base de datos BLAST:

Imagen 38:​ Secuencia de aminoácidos obtenida en la base de daro BLAST que componen a las proteínas Serralysin aprA y Serralysin PrtA
donde se da información más específica sobre la identidad y la cantidad de residuos totales.
Gráfica de linealidad para las similitudes y diferencia de la secuencia de aminoácidos
presentes en las proteínas Serralysin aprA y Serralysin PrtA obtenidas en la base de
dato BLAST:

Gráfica 1:​ Muestra la linealidad de la comparación entre aminoácidos presentes en las proteínas Serralysin aprA y Serralysin PrtA,
obtenida en la base de dato BLAST (los fragmentos lineales significan la similitud entre los aminoácidos presentes en esa ubicación,
mientras que los fragmentos discontinuo muestra que hay diferencias en los aminoácidos presentes en esa ubicación).

Alineamiento se las secuencias de dos proteínas Serralysin aprA y Serralysin PrtA en la

base de datos Clustal Omega.

Imagen 39:​ Alineamiento obtenida en la base de datos Clustal Omega de dos secuencia de las proteínas Serralysin aprA y Serralysin
PrtA, donde se evidencian con asteriscos las regiones conservadas, con un punto las regiones que no tienen similitud o muy poca, con dos
puntos las regiones que tiene similitud y guiones regiones desconocidas.
Porcentaje de identidad entre las proteínas Serralysin aprA y Serralysin PrtA según la
base de dato Clustal Omega

Imagen 40:​ Porcentaje de identidad del 55.80% entre dos secuencia de las proteínas Serralysin aprA y Serralysin PrtA, obtenido tras la
alineación de sus secuencias en la base de dato Clustal Omega.

Discusión
Una de las proteínas de membrana asociadas a factores de virulencia en ​serratia marcescens
reportada por la bibliografía corresponde a la Serralysin, codificada por el gen PrtA, una
hidrolasa cuya actividad proteolítica ataca inmunoglobulinas tales como, igA1, igA2, e igG.
Cuenta con los ligandos, Zn(1), Ca(7), Gly(2); sitio activo, y ácido glutámico (193-186).
Estructuras proteicas con alta homología se presentan en diversas especies de este género
como, ​Serratia nematodiphila,​ y de otros géneros, como ​Klebsiella oxytoca y ​Pseudomonas
aeruginosa​, reportadas como agentes patógenos en la literatura.
La Serralysin aprA, presente en ​Pseudomonas aeruginosa tiene un porcentaje de homología,
segun Clustal Omega de 55,80%, y segun Blast 55%; con PrtA; es una proteína de
membrana cuyas regiones conservadas son las regiones (APLLDDIAA), que corresponden a
la posiciones (232-240) y para (APLLDDIAA), (230-238); y regiones conservadas no
idénticas que van desde, 163-406,
-VKHPATEDYGRQTFTHEIGHALGLSHPGDYNAGEGNPTYNDVTYAEDTRQFSLMS
YWSETNTGGDNGGHYAAAPLLDDIAAIQHLYGANLSTRTGDTVYGFNSNTGRDFLS
TTSNSQKVIFAAWDAGGNDTFDFSGYTANQRINLNEKSFSDVGGLKGNVSIAAGVTI
ENAIGGSGNDVIVGNAANNVLKGGAGNDVLFGGGGADELWGGAGKDIFVFSAASD
SAPGASDWIRDFQKGIDKIDLSFFN- Para ​serratia marcens;​ y para ​Pseudomona
aeuroginosa
NPANGNYGRQTFTHEIGHALGLSHPGDYNAGEGNPTYNDVTYAEDTRQFSLMSYWS
ETNTGGDNGGHYAAAPLLDDIAAIQHLYGANLSTRTGDTVYGFNSNTGRDFLSTTSN
SQKVIFAAWDAGGNDTFDFSGYTANQRINLNEKSFSDVGGLKGNVSIAAGVTIENAG
GSGNDVIVGNAANNVLKGGAGNDVLFGGGGADELWGGAGKDIFVFSAASDSAPGA
SDWIRDFQKGIDKIDLS ,(163-404).
En ésta zona suceden interacciones importantes y debido a ésto deben ser conservada para
conservar ciertas características funcionales. Dentro de ésta se encuentran las uniones a
ligandos Zn, en las posiciones 175, 179, y 185 para ​serratia,​ mientras que en ​pseudomona
son 185, 189, y 195, con sitios activos intermedios a éste ligando, 176 para ​serratia, 186 en
pseudomonas,​ ambas poseen ácido glutámico en éstos sitios, y presentan sus uniones a iones
calcio a lo largo de esta secuencia.

*Se realizó una comparación de la interacción de los ligandos con aminoácidos y teniendo
en cuenta que los ligandos pueden interactuar con diversos aminoácidos se realizó un ejemplo
por cada uno donde se encontró que el Calcio 2 que participa en la vía carbonil oxígeno, y
está en la posición 336 perteneciente Serralysin aprA ​(Pseudomonas aeruginosa) i​ nteractúa
con una ​treonina mientras que el Calcio 2 que participa en la vía carbonil oxígeno en la
posición 304 perteneciente a Serralysin PrtA ​(Serratia marcescens) i​ nteractúa con una
glicina

*Ambas proteínas poseen el mismo sitio activo E (ácido glutámico)

Conclusión
Según los datos obtenidos las proteínas solo tienen una similitud del 55% lo cual da pie para
inferir que estas tienen gran diferencia, desde el punto estructural como funcional. Por otra
parte algunos de los ligandos de cada una de las proteínas actúan con diferentes aminoácidos
que no tienen similitud alguna, entre las regiones con más alto grado de conservación se
encuentran solo tres y la proteína Serralysin aprA ​(Pseudomonas aeruginosa) ​tiene un
ligando que es el sulfato mientras que la proteína Serralysin PrtA ​(Serratia marcescens)
tiene un ligando diferente el cual es el glicerol, lo cual no ha llevado a suponer que el
proteina serralysin no es determinante en el caso de la virulencia de dichos microorganismos,
es decir que a pesar de que está altamente asociada con la virulencia presenta muchas
diferencias estructurales generalmente entre los microorganismos a estudiar por ende se cree
que la virulencia de dichos microorganismos está ligada más estricta mente a otra serie de
factores.

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Abril a setiembre 2015. ​DEL NACIONAL​.
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gramnegativas multirresistentes: enterobacterias, Pseudomonas aeruginosa,
Acinetobacter baumannii y otros bacilos gramnegativos no fermentadores.
Enfermedades Infecciosas y Microbiologia Clinica.​