CONOCIMIENTO DE

TÉCNICAS ANALÍTICAS

PARTE I:

FUNDAMENTOS DE
ESPECTROFOTOMETRÍA.
I. OBJETIVO GENERAL

Conocer y aplicar los fundamentos de la

ESPECTROFOTOMETRÍA
para la determinación de
concentraciones en soluciones.
II. OBJETIVOS PARTICULARES

a. Conocer los fundamentos de la espectrofotometría y las variables

involucradas en la ley de Lambert-Beer-Bourger.

b. Seleccionar la longitud de onda apropiada para DETERMINACIÓN de

absorbancia.

c. Construir una curva patrón de la solución de YODO-YODURADO (serie

tipo) a diferentes concentraciones .
III. PROBLEMA

A partir del espectro de absorción de una

solución acuosa de yodo-yoduro de potasio
seleccionar la longitud de onda apropiada para
determinar el coeficiente de absortividad molar
de soluciones acuosas de yodo por medio de
una curva patrón.

I2 + I- → I3-

0.002 0.2 2X10-3

Introducción

“Espectro” Espectro de radiación electromagnética

“Foto” Luz visible

“Metría” Medición
ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO
Tipos de Espectrofotometría

La espectrofotometría de
Absorción de infrarrojos
‡ ABSORCIÓN DE UV-VISIBLE
Resonancia magnética nuclear (RMN)
Fluorescencia
Emisión atómica
Absorción atómica de masas
Fluorescencia de Rayos X
Espectroscopia UV y Visible
Estudia el fenómeno de adsorción de la radiación UV-Visible de moléculas orgánicas e
inorgánicas.
La región UV del espectro electromagnético se encuentra entre 0.6 y 380 nm.

UV lejano UV cercano Visible

0.6 – 190 nm 190 – 380 nm 380 – 780 nm

UV “cercano o de cuarzo”. Región en la que el aire y el cuarzo son transparentes)

UV “lejano o de vacío” . intervalo 0.6 a 190 nm.
El UV lejano requiere técnicas especiales, ya que el aire que
se encuentra en el trayecto óptico absorbe intensamente en esta
región, no es útil desde un punto de vista práctico.

La región visible, a la que es sensible el ojo humano, se localiza entre los 380 y
780 nm.

La absorción de la radiación UV o Visible por moléculas ,

generalmente se produce por la excitación de los electrones de
enlace.
‡ La longitud de onda de los máximos de absorción se puede
relacionar con los enlaces de las especies absorbentes.
Espectrofotometría

Es el método de análisis óptico

más usado en el área de
investigación.

Es la medida de la cantidad de
energía radiante absorbida por
las moléculas de una muestra en
función de las longitudes de onda
específicas.
Los métodos espectroscópicos se basan en la
capacidad de las sustancias de ABSORBER o
EMITIR radiación electromagnética, y tales
métodos se pueden emplear para determinar
la concentración de un reactivo o producto
durante una reacción.

Pantalla de lecturas

Compartimento de Selector de medida λ

celda

Ajuste de cero
Encendido y ajuste de Absorbancia
Del cero de T
 El aparato detecta la cantidad de “luz” transmitida y/o
absorbida a través de la solución en la celda y la compara
con la que se transmite o absorbe a través de una solución
de referencia o “blanco”.

¿Qué establece la ley de Lambert-Beer-Bourger?

“A diferencia de la transmitancia,
P
la absorbancia de unaT =solución
≡ Transmitancia
aumentaP a medida que P
aumenta
P0
0
la atenuación del haz de luz”
P
Aλ = log
P0
P0
P A = − log T = log
Aλ = log = εbc P
P0
 P
Aλ = log = εbc ⇒ A = εbc
P0
ε.- Es la cte. de proporcionalidad llamada coeficiente de
absorción molar, de absortividad o coeficiente de extinción.

b.- Es el paso óptico, anchura de la celda que contiene la

muestra (cm).

c.- Es la concentración de la especie de la cual se esta

midiendo la absorbancia (M).

La ecuación mencionada es el fundamento de la

espectrofotometría, y se cumple para una radiación
monocromática que atraviesa una disolución diluida (≤ 0.01M),
cuando la especie absorbente no participa en un equilibrio que
dependa de su concentración.
 1 ERA PARTE
CALIBRACIÓN DEL ESPECTROFOTÓMETRO Y
BARRIDO DEL ESPECTRO DE ABSORCIÓN

1.- Encender el espectrofotómetro.

2.- Esperar 15 minutos.

3.- Calibración: oprimir la tecla MODE, hasta que la luz roja se

encuentre en A (absorbancia).

4.- Seleccionar la longitud de onda girando la perilla.

5.- Introducir la celda con el blanco (con un volumen por arriba de la

mitad; nunca llena) en la porta-celda, oprime la tecla Λ (0A/100%T) y
esperar a que se ponga en ceros la absorbancia.

6.- Tomar la lectura de absorbancia de la solución propuesta a una

longitud de onda baja (λ nm). utilizar como blanco agua destilada.

7.- Repetir el procedimiento desde el punto 4 dando incrementos

regulares a la longitud de onda. Registrar los datos en la tabla 1
 A5. ORGANIZACIÓN DE DATOS,
Temperatura:
Registrar los datos experimentales del espectro de absorción de yodo (2*10-4M) en la tabla 1.
Tabla 1. Absorbancia de la solución de I2 a diferentes longitudes de onda.

EVENTO λ(nm) ABSORBANCIA EVENTO λ (nm) ABSORBANCIA

1 380 9 460

2 390 10 470
3 400 11 480
4 410 12 490
5 420 13 500

6 430 14
7 440
8 450
 Espectro Yodo 0.0002M

1.8
1.6
1.4
1.2
1
Abs

0.8
0.6
0.4
0.2
0
300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520
l (nm)

Seleccionar una λ de esta zona

 2 DA PARTE

Curva Patrón

1.- Preparar soluciones de distinta concentración a partir de la

solución de referencia I2 –KI (0.0002M - 0.2M) (Serie tipo).

2.- Seleccionar una longitud de onda adecuada para hacer las

lecturas de Absorbancia para las soluciones de la serie tipo.

3.- Introducir la celda con el blanco (agua destilada), con un

volumen por arriba de la mitad; nunca llena, en la porta-celda,
oprimir la tecla Λ (0A/100%T) y esperar a que se ponga en
ceros la absorbancia.

4.- Tomar la lectura de absorbancia de las soluciones

propuestas para la serie tipo, a la longitud de onda
seleccionada (λ nm).

5.- Registrar las lecturas de absorbancia y concentración de la

serie tipo en la tabla 2
TABLA 2. Absorbancia a diferentes
concentraciones molares de I2

Mezcla I2 H2O (ml) I2 mol/L Abs

(0.002 M)
(ml)
1 6 4 CIV1=C2V2
2 5 5

3 4 6

4 3 7

5 2 8
TABLA 2. Absorbancia a diferentes
concentraciones molares de I2

Mezcl I2 (0.002 M) H2O (ml) I2 mol/L Abs

a (ml)
1 10 0 0.002 1.61

2 8 2 0.0016 1.290

3 6 4 0.0012 0.950

4 4 6 0.0008 0.625

5 2 8 0.00045 0.311
 Curva Patrón de soln de yodo ( Abs/ nm)

1.8
1.6
1.4
1.2
1
Abs

0.8
0.6 y = mx + b
0.4
0.2
0
0 0.0005 0.001 0.0015 0.002 0.0025
I2 (mol/L)

A = εbc