UNIVERSIDAD DE CORDOBA

FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS E INGENIERIAS

PROGRAMA DE BIOLOGIA

ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA

LABORATORIO 5: CONTEO DE MICROORGANISMOS VIABLES. UNIDADES

FORMADORAS DE COLONIAS (UFC)

1. INTRODUCCION

Se dispone de muchas técnicas de laboratorio para medir el crecimiento microbiano. Los aparatos
varían entre un equipo tan simple como un portaobjetos con una extensión de bacterias teñidas,
procedente de un volumen determinado ( recuento microscópico) y sofisticados electrónicos que
miden la fotoluminiscencia de compuestos producidos por algunas especies de bacterias.

El recuento de microorganismos en un alimento o en otro tipo de materiales tiene diversos

objetivos:

a) Determinar la eficiencia de un proceso de desinfección o de cualquier tipo de tratamiento que

tienda a mejorar su calidad a base de reducir la descarga microbiana.
b) determinar la aceptabilidad de un proceso en términos de cumplimiento de una norma
microbiana
c) Estimar el grado de peligrosidad en un alimento u otro material.

Existen métodos par cuantificar el número de microbios vivos o muertos y estos son:

Medición de la masa bacteriana

Estimación de la población total de células
Recuento total directo
Recuento viable indirecto.

En esta práctica se examinarán algunas de las propiedades de la muestra, desde el punto de

vista microbiológico. Primero emplearás el método de conteo de colonias para contar los
microorganismos. Este tipo de conteo es un buen indicador de la calidad de los alimentos.
Aunque no distingue un tipo de organismo de otro, sirve para indicar el grado de sanidad de un
alimento. Entre mas organismos encuentres, mayor es la probabilidad de que algunos de ellos
sean patógenos para los humanos. Naturalmente que los alimentos sin pasteurizar dará un conteo
mayor que uno no pasteurizado, lo cual no significa que sea de calidad inferior al otro.

2. OBJETIVO

Realizar el conteo de microorganismos viables de una muestra, como un método para

evaluar el crecimiento microbiano.

3. MATERIAL

Muestras de microorganismos
Tubos de ensayo
Pipetas de 1 ml estériles
Tubos de ensayo con 9 ml de agua estéril
Cajas de petri estériles
Contador de colonias.
Asas bacteriologicas

4. PROCEDIMIENTO

1. Prepare una batería de 6 tubos de ensayos con 9 mL de solución salina estéril.

Tápelos y rotúlelos con:

_
10 1, 10_2 , 10_3 , 10_4 , 10_5 , 10_6 .

2. Proceda a realizar la dilución de la muestra proporcionada de la siguiente manera:

Figura a.

a. Al tubo con agua destilada rotulado 10 _1 transfierale con la pipeta exactamente 1 ml de la

muestra proporcionada con microorganismos. Agitar bien la solución. (OBTENDRÁS UNA
-
DILUCIÓN 10 1 = 1: 10).

- -
b. Ahora transfiera exactamente 1 ml de esta dilución (10 1) al segundo tubo rotulado 10 2
-
mézclarla bien. (OBTENDRÁS UNA DILUCIÓN 10 2 = 1:100)

-
c. Repita la operación transfiriendo exactamente 1 ml de la anterior dilución (10 2) al tercer tubo
- -
rotulado 10 3. Agitarla bien. (OBTENDRÁS UNA DILUCIÓN 10 3 = 1:1000)

- - -
d. Repita la operación para los tubos rotulados 10 4 , 10 5 y 10 6 .

Figura a. Esquema de una dilución seriada.

1 mL de
muestra

9 mL solución
salina estéril.
Suspención de
celulas
microbianas.
DILUCION____ 1/10 1/100 1/1000 1/10.000 1/100.000 1/1´000.000

10
-1 10
-2
10
-3 10-4 10
-5
10-6

2. Siembre en cajas de Petri con agar Sabourud, las diluciones anteriormente

preparadas de la siguiente manera:

a. Agite bien la dilución 10 -1 y con la pipeta transfiera 1 mL en la caja de Petri con

el agar. Siembre masivamente el inóculo agregado.
-2 -3 - - -
b. Repita el paso anterior para la siembra de las diluciones, 10 , 10 10 4 , 10 5 y 10
6
.
Proceda a incubarlas a 37ºC durante 48 horas.

3. Al final del periodo de incubación, cuenta las colonias en cada caja con un contador de
colonias.

Descarta las cajas que tengan menos de 30 o mas de 300 colonias.

Anota los resultados de cada dilución y calcula el número promedio de células por mililitro
de la muestra original.

El número de colonias obtenidas se multiplica por el factor de dilución (que es el

recíproco o inverso de la dilución); determinando así el número original de
microorganismos.

Por ejemplo si se contaron 72 colonias en la dilución 10 -3 (1:1000) se multiplica 72 X 1000.

(1000 es el factor de dilución: el recíproco de 10 -3). El resultado es 72000 ufc/0.1 mL o 72
X 103 UFC/0.1mL. Hay que pasar a mL.
Compara los resultados obtenidos.

CUESTIONARIO

1.-Que técnica utilizaste par avaluar el crecimiento microbiano

2.- En que consistió la técnica que empleaste.
3.-En que diluciones se desarrollaron un número de colonias entre el rango representativo (entre
30 y 300 colonias?
4.-Registra el número de colonias contadas para las diferentes diluciones
5.-Registra el número de bacterias que contenía un mililitro de la muestra original para las
diferentes diluciones
6.- Que es la pasteurización

7.- Cuales son las condiciones de tiempo y temperatura que se emplean en el proceso de
pasteurización.

8. Porque se descartan las primeras diluciones para el conteo de unidades formadoras de

colonias. ufc

0BSERVACIONES:

A) Realiza un diagrama de las diluciones que realizaste.

B) Dibuja las colonias microbianas obtenidas al término de la incubación por 48 horas.