La cromatograf�a en capa fina (CCF) es una t�cnica cromatogr�fica que utiliza una

placa inmersa verticalmente en una fase m�vil (eluyente). Esta placa cromatogr�fica
consiste en una fase estacionaria polar (com�nmente se utiliza s�lica gel) adherida
a una superficie s�lida.1? . La fase estacionaria es una capa uniforme de un
absorbente mantenido sobre una placa, la cual puede ser de vidrio, aluminio u otro
soporte.

Est� t�cnica deriva de los trabajos del famac�utico alem�n Egon Stahl (1924-1986),
que la present� en 1956.2?

�ndice
1 Aplicaci�n de las muestras
2 Elecci�n del eluyente
3 Desarrollo de la cromatograf�a
4 Localizaci�n de sustancias
4.1 M�todos qu�micos
4.2 M�todos f�sicos
5 Constantes RF y Rx
6 Referencias
Aplicaci�n de las muestras
Los productos a examinar se disolver�n, cuando sea posible, en un disolvente
org�nico que tenga un punto de ebullici�n lo suficientemente bajo para que se
evapore despu�s de la aplicaci�n, lo m�s com�n es usar acetona.3? Frecuentemente se
emplean disoluciones al 1%, de manera que al aplicar 2 ml resulta en la carga 20 mg
de producto s�lido. Muchos reactivos de revelado llegan a detectar 0,1 mg de
material; por esto con esta carga puede llegarse a observar un 5% de impurezas.

Existe una gran variedad de micropipetas y microjeringuillas para realizar el

proceso de siembra de la muestra a analizar. Tambi�n pueden usarse tubos capilares.
El proceso de siembra se realiza tocando con la punta del capilar (micropipeta,
etc.) sobre la placa preparada, dejando una distancia al borde inferior de un
cent�metro aproximadamente. El punto de aplicaci�n de la muestra se denomina toque.

Una vez colocado el toque se deja secar para evaporar el disolvente, de forma que
en la placa solo quedar� la muestra a analizar.

Cromatograf�a en capa fina de B-carotenos.

Elecci�n del eluyente
La elecci�n del eluyente depende del componente a separar y del material en que la
separaci�n se lleva a cabo. Para la selecci�n del eluyente, puede ensayarse
previamente la cromatograf�a en capa fina con distintos disolventes y unas muestras
patr�n.

Principales eluyentes en orden creciente de polaridad:

�ter de petr�leo
�ter diet�lico
Ciclohexano
Tetracloruro de carbono�
Acetato de etilo
Piridina�
Cloroformo�
Diclorometano�
Benceno�
Etanol
Metanol
Agua
�cido ac�tico
� compuestos cancer�genos.

En la elecci�n del eluyente influyen varios factores:

Precio.
Pureza.
Volatilidad.
Presencia de trazas de metales (catalizadores).
La elecci�n del eluyente se realiza de forma emp�rica. Hay que estudiar la
polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez m�s polares.

Toque de la muestra sin aplicar ning�n eluyente.

Aplicando un eluyente poco polar.
Aplicando un eluyente m�s polar.
Al aplicar en primer lugar eluyentes poco polares, podemos seguir utilizando la
misma placa para aplicar otros eluyentes m�s polares, hasta dar con el m�s
apropiado.

Otra t�cnica para realizar la elecci�n del eluyente consiste en sembrar varias
muestras distanciadas suficientemente, y aplicar con un tubo capilar distintos
eluyentes sobre el centro de cada muestra. Esto permite desarrollar cada eluyente
radialmente por capilaridad, de forma que se aprecie el eluyente con el cual la
separaci�n se realiza de una manera m�s eficaz.

Desarrollo de la cromatograf�a
El desarrollo de los cromatogramas en capa fina se realiza normalmente por el
m�todo ascendente, esto es, al permitir que un eluyente ascienda por una placa casi
en vertical, en una cubeta, por la acci�n de la capilaridad. Para conseguir la
m�xima saturaci�n posible de la atm�sfera de la c�mara, .

Generalmente el eluyente se introduce en la c�mara una hora antes del desarrollo y

se impregnan las paredes para permitir la saturaci�n de la atm�sfera. El tiempo de
desarrollo, por lo general, no llega a los 30 minutos. El tiempo de una
cromatograf�a cualitativa suele ser de un par de minutos, mientras que el tiempo de
una cromatograf�a preparativa puede llegar a un par de horas.

Las placas pueden desarrollarse durante un tiempo prefijado, o hasta que se alcance
una l�nea dibujada a una distancia fija desde el origen. Esto se hace para
estandarizar los valores de RF. Frecuentemente esta distancia es de 10 cm, ya que
parece ser la m�s conveniente para medir valores de RF. Despu�s del desarrollo, las
placas pueden secarse r�pidamente con una corriente de aire caliente.

La mejor posici�n de desarrollo para un componente es el punto medio entre el

origen y el frente del eluyente, ya que permite separar las impurezas que se
desplazan con mayor y menor velocidad. El frente del eluyente nunca debe llegar a
tocar el borde de la placa.

Localizaci�n de sustancias
Si los compuestos separados no son coloreados es necesario revelar la posici�n de
dichos compuestos, para ello existen dos tipos de m�todos:

M�todos qu�micos.
M�todos f�sicos.
M�todos qu�micos
Consisten en la reacci�n qu�mica entre un reactivo revelador y los componentes
separados, para lo cual se pulveriza la placa con los reactivos reveladores.

Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo, que forma complejos

coloreados con los componentes org�nicos (con tonos amarillo-marr�n), pero las
manchas desaparecen con el tiempo con lo que es conveniente se�alar las manchas
aparecidas.

Otro reactivo revelador bastante utilizado es el �cido sulf�rico, que reacciona con
los componentes org�nicos produciendo manchas negras tras ser carbonizadas. Tambi�n
es �til el permanganato pot�sico, que deja unas manchas de color amarillo. El
tama�o de las manchas no est� relacionado con la cantidad de componente separado.

Adem�s de estos reveladores generales, existen otros espec�ficos4?:

2,4-dinitrofenilhidracina (para aldeh�dos y acetonas).

Verde de bromocresol (para �cidos carbox�licos).
Para-dimetilaminobenzaldehido (para aminas).
Ninhidrina (para amino�cidos).
M�todos f�sicos
El m�s com�n consiste en a�adir al absorbente un indicador fluorescente, de tal
forma que al colocar la placa bajo una l�mpara ultravioleta, y dependiendo del
indicador y de la longitud de onda, aparecen manchas fluorescentes en las zonas en
las que hay componentes, o en otros casos aparece toda la placa fluorescente
excepto donde hay componentes.

Algunos compuestos poseen cierta fluorescencia (aunque no es normal) con lo que

pueden ser detectados directamente en una l�mpara de ultravioleta.

Constantes RF y Rx
La constante RF (Ratio of Front) es simplemente una manera de expresar la posici�n
de un compuesto sobre una placa como una fracci�n decimal, mide la retenci�n de un
componente. Se define como:

RF= Distancia de la muestra desde el origen/Distancia del eluyente desde el origen

La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el centro de la

mancha, los c�lculos se simplifican si el denominador es 10. Para que los RF sean
reproducibles deben fijarse una serie de condiciones (espesor de la placa, fase
m�vil, fase estacionaria, cantidad de muestra). El m�ximo valor de RF que se puede
alcanzar es de 1, lo ideal es un RF entre 0.55 y 0.7.

Para averiguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre la misma placa
y se aplican varios eluyentes. Se calculan los RF y si son distintos, puede
deducirse con toda seguridad que no se trataba del mismo compuesto. Por el
contrario si los RF son iguales los compuestos pueden ser iguales o no5?.

Si se sospecha que dos compuestos son muy parecidos, se eluyen sobre la misma placa
con el mismo eluyente u otros de menor polaridad, hasta apreciar una separaci�n
m�nima. En este caso no se pueden usar reveladores qu�micos, ya que alterar�an los
compuestos, sino indicador ultravioleta.

Tambi�n se puede operar de la manera siguiente: se selecciona un compuesto (X), que

tenga una posici�n de desarrollo adecuada; todos los dem�s compuestos sobre la
placa se relacionan con este.

De esta manera se obtiene el RX:

Rx= Distancia recorrida por el compuesto de referencia (X) /Distancia recorrida por
el eluyente

Referencias
Harry W. Lewis Daniela R.P & Christopher J. Moody (13 de junio de 1989).
Experimental Organic Chemistry: Principles and Practice (ilustrada edici�n).
WileyBlackwell. pp. 159-173. ISBN 978-0-632-02017-1.
�Thin Layer Chromatography (TLC): Principle (with Animation) | Analytical
Chemistry�. PharmaXChange.info (en ingl�s estadounidense). 8 de noviembre de 2012.
Consultado el 28 de abril de 2019.
A.I. Vogel; A.R. Tatchell; B.S. Furnis; A.J. Hannaford; P.W.G. Smith. Vogel's
Textbook of Practical Organic Chemistry (5� edici�n). ISBN 0-582-46236-3.
�TLC stains�. www.reachdevices.com. Consultado el 28 de abril de 2019.
Nguyen, Kelly; Mata-Chavez, Hector; Nguyen, Lien; Stoddard, Jonathan M. (13 de
marzo de 2007). �TLC plates as a convenient platform for solvent-free reactions�.
Chemical Communications (en ingl�s) 0 (12): 1240-1241. ISSN 1364-548X.
doi:10.1039/B616311D. Consultado el 28 de abril de 2019.