Journal of Chromatography A, 1564 (2018) 1-15

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Diario de Una cromatografía

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revisión artículo

Analítico métodos, ocurrencia y las tendencias de alcaloides tropano y calystegines: Un actualizar

ana Romera-Torres, Roberto Romero-González, José Luis Martínez Vidal, Antonia Garrido Frenich *

Departamento de Química y Física, Centro de Investigación para la Agricultura y la Alimentación Biotecnología (Bital), Universidad de Almería, Campus Internacional Agroalimentario Excelencia, ceiA3, Carretera de
Sacramento s / n, E-04120, Almería, España

información del artículo resumen

Artículo historia: En los últimos años, el interés por los metabolitos secundarios de las plantas ha ido creciendo, y más aún si tienen o tendrían aplicaciones médicas,
Recibido el 6 de abril de 2018 recibida en revisada la forma 1 de junio
como ocurre con los alcaloides del tropano y calystegines. Por lo tanto, el número de métodos analíticos para el análisis de estos compuestos ha ido
de 2,018 Aceptado el 3 de de junio de 2,018 Disponible en línea del 4
en aumento. En esta revisión, los métodos de extracción, así como las técnicas de separación y detección cromatográficas basadas en la
de junio de 2018
espectrometría de masas para determinar alcaloides tropano y calystegines en planta de materia prima y los alimentos se han descrito. Por último, un
resumen de la presencia natural de alcaloides tropano y calystegines en las matrices estudiadas, así como su presencia accidental en los alimentos,
se presenta, destacando las tendencias actuales y futuras de determinación.
palabras clave:

tropano alcaloides Calystegines

Gas Analysis Liquid cromatografía masa
© 2018 Elsevier BV Todos los derechos reservados.
cromatografía espectrometría

Contenido

1. Introducción . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
2. Muestra
Mue appreparación:
epa a ón e extracción
a ón y limpieza
mp e a . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
21
22 C
3 La epa a ón de e ón é n a 7
31 G m MS
311
312 C
32 m MS
321
322 C
4 D m TA m

AA ACN CE C m DAD DAR m m DSPE E m

E OH A m D m GBC HP C m HRMS m m AD
m m m E OD m PME m MAE m MA D m M OH m
M SPE m MS m m RMN m NPE P E PSA m m Q O
Q Q Q m Q RAP Q EC ERS R SBSE
SCX m SDME m S E SM S E SPE SPME m
AS C m

Em @ A G

m
©
2 A. Romera-Torres et al. / J. Chromatogr. A 1564 (2018) 1-15

4.1. Natural ocurrencia de TA y calystegines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11

4.2. Accidental ocurrencia de TA: muestras contaminadas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
5. Conclusiones y tendencias . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13 A
C Agradecimientos
m ........................................
R

1 n oducc ón m T m m m
m m
Ya que 1831 uando K Me n a ado a op na pa a a p me a e K Me n PL Ge ge K He e 1831 1833
a e u da ón de a e u u a de opano a a o de TAS po RM W ä e 1 E n e é en e ege a En 1988 a eg ne a a o de o ub e en agua no e e ado e a a on de Ca eg a
e unda a me abo o ae omo TAS a eg ne o b ogén o am na 2 Ha e ado e endo TA ep um u e u ua ue on a a ado do año má a de 9 10 A pe a de que e han e a do
on un g upo de Má de 200 e unda o me abo o que e p odu en de mane a na u a en nume o o p ande
a a o e do de a p an a e ud ada a a ón po a que han do de e ado de pué de 1990
am a p n pa men e en o aná ea E ho a eae Con o u a eae Que enen en omún un e que ue on de a ado on a a e a uo a M en a TA e de an de e que e o opano
e que e o opano F gu a 1 aa e ado po una e u u a de do an ado on p o d na an o a eg ne enen un e que e o no opano omún F gu a 1 Y e a a e an po ene a o
de p pe d na ompa endo un ún o á omo de n ógeno do a bono á omo La ma o a de e o g upo h d o o 11 Ca eg ne A B C enen d e en e núme o de g upo h d o o 3 4 o 5
on é e e de ado de á do o gán o h do opane mu ho de e o u gen de op na 3 e pe amen e F gu a 1 12 O o g upo de a eg ne amado N po ee un g upo am no
A guno de a má TA e uen e e mue an en F gu a 1 TA a en a e ado ono do en an gua abe a de puen e que amb én e p e en an on n ógeno me ado 13 Ten endo en uen a que
empo ue on u ado omo po one mág a e ea o hamán o e ha en enenada a eg ne on p odu o de a p eudo op na TA 14 Que ue on e ud ada n a men e en
edan e a u nógeno en e o a med na 4 5 Ho en d a e emp ean en on empo áneo a e am a de a o aná ea en o géne o A opa Da u a Dubo a H o amu S opo a que on
omo a med na o a mo og a a d o og a o ga oen e o og a deb do a que u an h o ne g An mu a nb en
o ono do pa a on ene TAS que e en on a on en e o géne o o o ae omo Mand ágo a
an emé o pa a mpa o a ane e a ne o o en a So anum o Ph a 8 Po e o e n e ga one demo a on u p e en a en a ma o pa e de a
e pe e de a am a Con o u a eae E ho a eae Ba a eae 15 17 Ca eg ne on
nh b do e de g u o da a

H E
 A. Romera-Torres et al. / J. Chromatogr. A 1564 (2018) 1-15 3

En cuanto a calystegines, que han sido estudiados en la patata y otras plantas de alimento por
GC-MS incluyendo 70 variedades de patata y varias frutas y verduras comestibles, así como
productos de patata procesados ​[ 24 ], Y en patatas, tomates y estramonio con otros compuestos
biológicamente activos [ 25 ]. El aislamiento, el análisis por TLC y GC, la aparición en el reino vegetal,
así como la biosíntesis, síntesis química y actividades de calystegines También se han descrito [ 13 ].
Además, las técnicas cromatográficas usadas para aislar, purificar, detectar y analizar alcaloides
polihidroxilados, incluyendo separación cromatográfica preparativa y análisis cromatográfico han sido
revisados ​[ 12 ].

El objetivo de esta revisión se Resumiendo las metodologías analíticas actuales utilizados para
la determinación de TA y calystegines, incluyendo la extracción y las etapas de limpieza, la
separación por técnicas cromatográficas y detección con MS, así como su presencia en planta de
materia prima y la comida. Bibliografía fue revisado a partir de 2000 para calystegines y 2010 para los
TA, teniendo en cuenta las últimas pruebas publicadas [ 12 , 19 ].

2. Preparación de la muestra: extracción y limpieza

Durante TA y calystegines determinación, preparación de la muestra por lo general incluye una

etapa de limpieza debido a la complejidad de las matrices, lo que permite un aislamiento y o
preconcentración adecuada de los compuestos específicos antes de la etapa cromatográfica, tal
como ha sido descrito en las siguientes secciones.

2.1. alcaloides tropano

TA se pueden encontrar en materia prima vegetal, así como en los alimentos, que han sido
contaminados con plantas TAS-que contienen. De acuerdo con la bibliografía revisada, varias técnicas de
extracción se han aplicado para el aislamiento de los TA de los alimentos, aunque SLE se utiliza
principalmente [ 26 , 27 ] ( tabla 1 ). Sin embargo, otras técnicas de preparación de muestras, tales como
Higo. 2. Algunos pasos de la vía de biosíntesis de alcaloides tropano (PMT putrescina Nmethyltransferase; TRI tropina
MAE [ 28 ], PLE [ 29 ], Fuera de línea-SPE [ 30 ] O en línea-SPE [ 31 ], También han sido utilizados. Aunque la
formador de reductasa tropinona; pseudotropineforming Trii tropinona reductasa). Reproducido de la referencia. [ 14 ]
mayoría de las muestras estudiadas son las plantas y alimentos contaminados, en el que esta revisión se
Con permiso de The Royal sociedad de Química.
centra en, TA también se han estudiado en suelo contaminado [ 32 ].

debido a su azúcar-mímica estructura con actividad selectiva para determinados glicosidasa, y generalmente Debido a la alta polaridad de estos compuestos, generalmente se extraen utilizando diferentes
competir con el sustrato para la sitio activo. Su actividad inhibidora es fuerte en la mayoría de los mezclas de metanol / agua. Como se puede observar en tabla 1 , Varios TA han sido aislados de
casos, con potencia comparable a swainsonina [ 14 ], Y algunos de ellos son glucosidasa y inhibidores
galactosidasa [ 8 ]. Ambos TA y pueden ser calystegines sintetizado de putrescina [ 14 ], Compartiendo infundibularis Physochlaina usando agua / metanol (25/75, v / v), pero las recuperaciones no son
varias medidas de biosintética vía ( Figura 2 ). Sin embargo, a partir de una analítica punto de vista, que reportados [ 33 ]. La atropina y escopolamina fueron extraídos de datura inoxia, D. metel, y D.
presentan varias diferencias, y que será discutido por separado. stramonium, el uso de un mayor porcentaje de agua, (extracción solución de agua / metanol (40/60, v /
v)), obtener recuperaciones van desde 95 hasta 101% [ 34 ]. El ácido fórmico se añade normalmente al
disolvente de extracción a relaciones de 0,2 a 2,0% para mejorar la extracción e fi ciencia. Una mezcla
de ácido fórmico al 2% en agua / metanol (93/7, v / v) fue empleado para extraer la atropina y
En cuanto a los TA, varios comentarios se han publicado discutir analítico métodos, destacando la la escopolamina desde datura inoxia, D. metel,
evolución de la cromatografía de gases (GC), líquida de alta resolución cromatografía (HPLC), capilar cromatografía
de electroforesis (CE) y de capa fina (TLC), y algunos de ellos incluye información sobre el producto
químico propiedades, muestra preparación y detección [ 18 ]. otros comentarios resumir De masa GC espectrometría
D. meteloides, y D. TATULA, pero no se reportan recuperaciones [ 35 ]. Un porcentaje inferior de ácido
(MS), HPLC-MS y CE-MS métodos para TA determinación [ 19 , 20 ]. Varios capítulos de libros Ha estado centrado
fórmico, 1% en agua / metanol (50/50, v / v),
en los TA. Por ejemplo, técnicas de extracción, como líquido sólido extracción (LES), la extracción de se utilizó para extraer los TA de 18 extractos de hierbas diferentes, incluyendo Hyoscyamus niger y D.
fluidos supercríticos (SFE), líquido-líquido particionamiento, la extracción asistida por microondas (MAE), extracción
stramonium [ 31 ]. Diferentes TA también se han aislado de los cereales y productos a base de
de líquido a presión (PLE), microextracción en fase sólida (SPME), entre otros, así como la cereales utilizando
separación y la detección técnicas (GC, HPLC, CE, MS, resonancia magnética nuclear (RMN)) son se ácido fórmico 0,4% en agua / metanol (40/60, v / v), con recuperaciones de extracción de 86-91% [ 36 ].
describe [ 21 , 22 ], O procedimientos de LC-MS junto con farmacológico información, propiedades El uso de un disolvente de extracción similares, que consiste en ácido fórmico 0,4% en agua / metanol
físico-químicas, la muestra preparación y separación cromatográfica se han revisado [ 23 ]. (25/75, v / v), 24 TA se aislaron a partir de cereales y a base de cereales productos con
recuperaciones que van desde 59 133% y de té con recuperaciones de 20 a 108% [ 37 ], Que son
inferiores a los obtenidos en el anterior estudio mencionado [ 36 ]. Esto se puede explicar porque el
mayor número de compuestos incluidos en el nuevo estudio. Además, las recuperaciones obtenidas
en la matriz de té son muy bajos, lo que podría ser causado por la complejidad de la matriz.
Utilizando esta última extracción
 Ultrasonidos + La +
La HAMPSHIRE
v / v); NUEVA QuEChERS + v / v) 0,4% Agitación +
v / v) 0,4% Agitación Agitación + QuEChERS+ v / v)
ES QuEChERS FA0,2%
Ultrasonidosy 0,2% de+ACN en H0,1 ultrasonidos
Agitación Ultrasonidos Dilución Extracción y limpiar
Limpiar LLE: Na Limpiar SPE: SCX Limpiar SPE: SCX Limpiar MI-SPE Limpiar DSPE: PSA
Limpiar y GBCPSA y GBC
DSPE: Limpiar SPE: C18
2 O / MeOH (40/60, v / v)
(NH
4 OH solución + ACN) x3

NaHCO sonicación ACN / H M HCl

MeOH / H 2 O (70/30, v / v) 25% NH MeOH / H
3 en
O (75/25, v / v)
2
4 OH solución pH 5-6 4solución 2O (60/40, v / v) 2% FA
heptano / CH con 70% EtOH (50/50, v / v)
2 Cl
FA en H FA en H .
agitación ES 2 O / MeOH (25/75,
2 O / MeOH (40/60,
agitación ES

do OH + CHCl
2/ MeOH (80/20,
3/
en MeOH / H
2 H 2 CO
2O (7/93, v / v)

4 Cl
3 y (+) hiosciamina
2

agitación acuosa AA / MeOH (33/66,

QTof QTRAP QTRAP QqQ QqQ QqQ QqQ QqQ QqQ QqQ QqQ Q Q Q Analizador

10 min 50 min
y tiempo
16 min 24 min 10 min 16 min 15 min 17 min 27 min 10 min 26 min 20 min 23 min 15 min

] Atropina ] Atropina ] Atropina Atropina atropina

C18 C8 C18 vancomicina C18 C18 C18 vancomicina C18 C18 C18 C18 C18 C18 Columna

UNA: 0,1%0,1% FAHen0,1%

FA en ACNA: env 1H
FANH / vmM
/ v) NH 2,0 mM0,5% NH FA 2,0 0.1 mMHoxálico
HmMSEGUNDO:
enUNA: A:MeOH ACN (50/50, v / v) H A: 10 mM
10/ mM
NHácido, en(NH / H NH 6,5 H
ACN UNA: mM UNA: 0,5% ( v / v) KH UNA: 0,1%
UNA: 0,1% FA en FANH
H A: en 20
H mM UNA: 0,2% FA en H A: FA en HA: 1%B:FA
2%enFA
H en
A: MeOH
2% FA en MeOH
Móvil fase
/H
EXTERIOR: 2 O / ACN (90/10, v / v) 2 OB: 2 O (90/10, v / v) 2 OB:
0.1 mM oxálico ácido, ] La atropina (-) y
0,1% dietanolamina en EtOH
ACN ACN ACN ACN a pH 3 B: ACN
MeOH / H MeOH
2 O / FA (94,5 / 5 / 0,5,
(7/93, v / v)
NH 1 mM 2 O
4 CH 4 CH
4 HCO2 OB:4 HCO 2 TRANSMISIÓN EXTERIOR: NH 6,5 mM 2 OB:
HCO HCO 2 OB:
4 4 OH 4 OH en H 4
4) 2 CO
OB: 3 CO 3 CO 2 OB: TRANSMISIÓN
2 2 correos 2
1% FA en MeOH
2 y 2 y EXTERIOR: 0,2% FA en MeOH
2 en 2 y 2 en
en
2 y
3 en 4

2 O
2 TRANSMISIÓN

DAKOTA DEL NORTE 76- 80- 61- 59- 20- 108 133 Cereales 86- 82- DAKOTA DEL NORTE
50- 78-
DAKOTA DEL NORTE 89- 95- DAKOTA DELRNORTE
96 95 Té 91 92 96
111 102 103 101 (%)

DAKOTA DEL NORTE 5 1-50 0.7-0.8 0,05-1 0,2-0,5 0,52-2,12 0.5 0,04 a 0,2 DAKOTA DEL
0.09NORTE
0.03- 3000 0,050-,1 0.15 0.075- LOD

g/L g / kg
g / kg g / kg g/L
g/L
g / kg g / kg g / kg
g / kg
g/L g/L

[ 33 ] [ 40 ] [ 38 ] [ 44 [ 37 ] [ 36 [ 50 [ 42 ] [ 41 [ 49 ] [ 27 [ 39 ] [ 34 [
35 ]
Árbitro.
 1/10 extracto / matriz La v / vH/ v)
2,5-dihidroxibenzoico
sonicación Un + y NaCl + v / v)
QuEChERS La + agitación
La H QuEChERS QuEChERS FA en+H v / v) 0,5% Agitación
+ v / v) 0,4% Agitación AA en H 0,5% ultrasonidos
H
2 O
Limpiar Limpiar Limpiar 2 ASI QUE Limpiar SPE: SCX Limpiar SPE: SCX
DSPE: C18 y Mg DSPE: PSA y Mg
2 ASI QUE 2 ASI QUE
Agitación
tratamiento 4+ zinc
0,5% tri fl ácido uoroacetic en H 4( cápsula blanda) 4 3 correos
2 O (50/50, v / v) 2% FA en H sonicación 1% FA en QuEChERS
H polvo
con ultrasonidos mezcla de acetato de de etilo, EtOH, yH
2 O (tabletas 2 O / MeOH (50/50, 4 en H
2 O (33/33/33, agitación ES agitación ES 2 O / MeOH (25/75, 2 O / MeOH (33/66,
y cápsulas) o norte-
en ACN y
Matrix solución: y agitación
2 O
hexano (Softgel)
CLUB Escopolamina
o nada (líquido) +
ácido
ACN (comprimidos, cápsula blanda, cápsulas) o 2% FA en ACN (líquido) + Mg
2 ASI QUE
-SPE en línea: hidrófila divinilbenceno

MALDI-TOF-MS-LADIDART-QTOF-MS qOrbitrap min qOrbitrap Orbitrap 29.5 min

orbitrap 14.5 min
orbitrap Orbitrap Orbitrap QTof

15 min
DART-
25 min 18 min 18 min 17 min
TOF-MS

29.5

BRITÁNICO: Acético ácido; ACN: acetonitrilo; DARDO: ambiente ionización directo análisis en realidad hora; DSPE: dispersivo fase sólida extracción; EtOH: etanol; FA: fórmico ácido; GBC: grafitado negro carbón; LADI: ablación laser directo análisis en tiempo real imágenes masa espectrometría; LLE: líquido-líquido extracción; LOD: limite de detección; MALDI: asistida por matriz láser desorción / ionización; M

C18 bifenilo C8 C18 C18 C18 C18 C18

acoplados a acoplados a
HILIC HILIC

UNA: UNA: UNA: 0,1% FA en H ]A:Atropina

NH 2 mM UNA: 0,1% AA en H UNA: 0,1% FA en H UNA: 0,1% FA en
UNA:
H 0,1% FA en H
con NH
0,1%
5 mM 0,1% 0,1%
FA con NH 5 mM FA con
FANH
con5 NH
mM5 mM FA 0,5 mM con NH 2 mM
4 HCO 4 HCO 4 CH 4 CH 4 HCO
EXTERIOR:
0,5 mM en H ACN ACN
3 CO 3 CO 2 TRANSMISIÓN
0,1% FA
2 en MeOH2 en H EXTERIOR:
/ ACN (95/5, v / v) 2 en MeOH / H
(95/5, v / v)
2 en MeOH2 en H 0,1% AA en MeOH / ACN (90/10, v / v)
4 HCO
EXTERIOR:
2 OA: 2 TRANSMISIÓN
2 TRANSMISIÓN 2 OB: 2 OB: 2 TRANSMISIÓN
2 TRANSMISIÓN
2, FA

2 O

EXTERIOR: MeOH / ACN (50/50, v / v) EXTERIOR: MeOH / ACN (80/20, v / v)

DAKOTA DEL NORTE

DAKOTA DEL NORTE 70- DAKOTA DEL NORTE 96- DAKOTA DEL NORTE
80- 75- 60- DAKOTA DEL NORTE
109 excepto
soja
120 109 120 128

10 0,15-0,2 0,04 a 0,2 10-50 DAKOTA DEL NORTE

DAKOTA DEL NORTE
0,1-2 01/22 a 12/05

g / kg

g / kg
g / kg
g/L g / kg
g/L

[ 67 ] [ 69 ] [ 45 ] [ 31 ] [ 46 ] [ 43 ] [ 68 [ 26 ] [ 30 ] [ 48
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ción solvente, 0,4% ácido fórmico en agua / metanol (25/75, v / v), 13 TA fueron extraído de muestras de ácido en agua y acetonitrilo (tabletas y cápsulas productos), o
té y té de hierbas con recuperaciones Entre 75-128% [ 26 ], Que son más altos que los previamente norte- hexano se han usado como disolventes de extracción [ 45 ]. Un método de extracción QuEChERS
comentado [ 37 ]. la adición de un polvo de zinc y 0,1 M de ácido sulfúrico se ha utilizado al principio de la extracción de
TA de miel [ 46 ] Para reducir al mínimo la viscosidad de la muestra y para reducir el NORTE- oxidesalkaloids
Otro procedimiento utilizado 0,2% de acetonitrilo y 0,2% de ácido fórmico en agua / metanol (40/60, v a alcaloides [ 47 ].
/ v) para extraer TA de trigo sarraceno. recuperaciones desde 88-89% (Escopolamina) y 79 a 111%
(atropina) eran adquirido sin el Además de acetonitrilo, mientras que cuando Además, otros procedimientos de extracción que consiste en 0,5% de ácido ortofosfórico se han
aplicado para extraer TA de duboisia myoporoides y leichhardtii duboisia, que proporciona una buena
0,2% de acetonitrilo se añadió al disolvente de extracción, recuperaciones mejoró a 98-102% (Escopolamina)extracción de los TA y, además, disminuye el contenido de otros compuestos en la solución de
y 104-105% (atropina) [ 27 ]. El ácido acético se añade también a metanol / agua para el aislamiento de TA. extracción final, como compuestos fenólicos [ 48 ].
Un acuoso solución de ácido acético ácido / metanol (33/67, v / v),

se ajustó a pH 5-6 con solución de amoníaco, se ha utilizado para extraer la atropina, escopolamina, y Además, TAS se extraen con disolventes básicos que alcanzaron recuperaciones similares a los
su NORTE- óxidos de té y té de hierbas, el logro recuperaciones de 80 a 95% [ 38 ]. Esta solución de obtenidos cuando se utilizaron ACIDI disolventes de extracción fi ed. Por ejemplo, atropina y
extracción tiene estado utilizado para la extracción de 14 TA de cereales, pseudocereales y base de escopolamina han sido extraídos de datura inoxia, D. stramonium y Brugmansia arborea usando una
cereal productos, recuperaciones logrando que van desde 60 a 109%, a excepción de algunos compuestos solución de amoniaco (25%), y luego una mezcla de diclorometano / metanol (80/20, v / v) [ 49 ] Se ha
de la soja [ 30 ]. Una extracción usando una mezcla de una solución acuosa de ácido clorhídrico 0,1 M, agregado para lograr una extracción exhaustiva de estos compuestos. Por otro lado, se usó una
basado en el procedimiento del Estado farmacopea XI, con 70% de etanol (50/50, v / v) se ha llevado a extracción tres veces usando solución de amoniaco y acetonitrilo, seguido de una SPE, la utilización
de un polímero de huella molecular (MIP-SPE) para extraer los TA de tangutica Przewalskia, obtener
cabo para extraer la atropina y escopolamina desde D. metel, obtener recuperaciones 89-96% [ 39 ]. Acetonitrilo
/ agua mezclas también se emplean para aislar TAS, en lugar de metanol / agua. Por lo tanto, una recuperaciones 82-102% [ 50 ]. Esta sintético MIP, que se utiliza como sorbente, se extrae
selectivamente la atropina, escopolamina, aposcopolamine, apoatropine, y anisodamina y
mezcla de acetonitrilo / agua (70/30, v / v) se utilizó para extraer los compuestos específicos de hierbas muestras
con recuperaciones entre 76 a 96% [ 40 ]. proporcionado excelentes resultados que demuestran la aplicabilidad de MIS-SPE para separar y
purificar los TA. Por otra parte, la atropina y escopolamina fueron extraídos utilizando hidróxido de
potasio al 5% en metanol y diclorometano a partir de D. stramonium semillas, Fagopyrum esculentum frutas,
y productos de cereales-base, obteniendo recuperaciones de 89 a 110% [ 51 ]. Para muestras grasos,
la grasa se eliminó la realización de una extracción Soxhlet anterior, utilizando norte- hexano como
disolvente de extracción ( Tabla 2 ). El metanol también ha sido empleado como disolvente de
En los últimos años, la QuEChERS conocidos (rápido, fácil, barato, Eficaz, Robusto y seguro) procedimiento
de extracción también ha sido usado. TA han sido extraída de cereales y pseudocereales utilizando ácido extracción cuando MAE se ha utilizado ( Tabla 2 ). Por ejemplo atropina y escopolamina fueron
fórmico agua y 1% en acetonitrilo ( v / v) [ 41 , 42 ] o acético ácido en lugar de ácido fórmico para la extraídos de Datura metel a 50-60 ◦ C durante 3-12 min, logrando recuperaciones de 93,5 a 109,5% [ 28 ].
extracción de los TA de miel, té y comida suplementos [ 43 ]. Sin embargo otras extracciones mezclas Este disolvente tiene
como 0,5% de ácido fórmico en acetonitrilo / agua (75/25, v / v)

[ 44 ] tener ha utilizado para la extracción de TA a partir de cereales, Datura stramonium o Brugmansia

arborea semillas. Varios TA también han sido aislado desde dietético suplementos, y dependiendo de la
matriz, 2% ácido fórmico en acetonitrilo (producto líquido), 2% fórmico

Tabla 2
Resumen de analitos, matrices, de extracción, y GC-MS técnicas de TA. una .

alcaloides Matriz Extracción y limpieza La derivatización Analizador y Columna R (%) LOD Árbitro.

hora

Atropina RE. stramonium Fagopyrum esculentum

Soxhlet 80 hexametildisilazano ◦ C Q 42 min polímero arileno DB5 89-110 0,3-1 g / kg [ 51 ]
La escopolamina norte- Hexano x 2 5% de durante 15 min MS Fenil
productos a base de cereales KOH en MeOH + CH 2 Cl 2

Atropina D. metel ultrasonidos La derivatización Bis Q 50 min HP Ultra 2 (5% -fenil) 89-96 3,000 g / L [ 39 ]
La escopolamina 0,1 HCl con 70% EtOH (50/50, v / (trimetilsilil) tri fl metilpoli-siloxano
+ 3 TA v) uoroacetamide 60 ◦ C
+ Limpieza SPE C18 durante 30 min
Atropina delagoense PLE MeOH 100 bar a - Q 12 min polímero arileno DB5 DAKOTA DEL NORTE
DAKOTA DEL NORTE [ 29 ]
La escopolamina Erythroxylum, 60 ◦ do MS Fenil
+ 6 TA E.emarginatum
E. pictum
67 TA Datura estramonio L. Ultrasonic MeOH / ACN (80/20, v / - Q 70 min HP5 MS (5% -fenil) DAKOTA DEL NORTE
DAKOTA DEL NORTE [ 52 ]
v) metilpoli-siloxano
La evaporación y la disolución en 0.2

MH 2 ASI QUE 4, se lavó con CHCl 3 + NUEVA

HAMPSHIRE 4 solución OH + CHCl 3

N / A 2 ASI QUE 4

Atropina Datura metel Brugmansia MAE MeOH al 50-60 ◦ do 10% ((N, Obis (trimetilsilil) tri fl Q 10 min HP5 MS (5% -fenil) 93.5- 30003500 g / kg [ 28 ]
La escopolamina pittieri uoroacetamide y metilpoli-siloxano 109,5
+ Limpieza DSPE GBC y trimetilclorosilano en ACN
Z-Sep +

una Abreviaturas: ACN: acetonitrilo; DSEP: extracción en fase sólida de dispersión; EtOH: etanol; GBC: negro de carbón grafitado; LOD: límite de detección; LOQ: límite de cuantificación; MAE: extracción por microondas-asistencia; MeOH:

metanol; ND: no ha de fi nido; PLE: extracción líquido a presión; Q: cuadrupolo; R: recuperaciones; SPE: extracción en fase sólida.
 A. Romera-Torres et al. / J. Chromatogr. A 1564 (2018) 1-15
estado probado en PLE procedimientos para extraer varios TA de diferentes erythroxylum especies a
100 bar y 60 ◦ C, pero no son recuperaciones comunicado [ 29 ]. En Además una mezcla de metanol /
acetonitrilo (80/20, v / v) ha sido utilizado para extraer 67 TA de Datura stramonium, seguido por evaporación,
de estos compuestos. Una mezcla de metanol / agua (80/20, v / v) se ha aplicado a la extracción de la
disolución en ácido sulfúrico 0,2 M, y la extracto fue se lavó con cloroformo, pero no son recuperaciones presentado
[ 52 ] ( Tabla 2 ). Con el objetivo de mejorar fase separación, algunos estudios emplean extracción sales, sobre
calystegines A3 y B2 [ 11 ] Y la calystegines A3, B2, B3, B4, y N1 [ 58 ] desde Solanum tuberosum. Otra
todo cuando una procedimiento de extracción basado en QuEChERS es desarrollado ( tabla 1 ).
Diferente modi fi caciones de los QuEChERS originales Ha estado aplicada, incluyendo la AOAC 2007
[ 53 ] Y EN 15662 método [ 54 ]. Ambos los procedimientos se han aplicado, obteniendo similares los
resultados en relación a la fase de partición. Por ejemplo, magnesio sulfato y de cloruro de sodio han
sido utilizados durante la extracción de los TA de la dieta suplementos [ 45 ], Mientras que el sodio
anhidro sulfato y acetato de amonio se han utilizado para la extracción de TA a base de cereales y pseudo-cereales
[ 41 , 42 ]. Además, magnesio sulfato y acetato de sodio se acidificó con ácido acético proporcionar la
AOAC tamponada la extracción [ 43 ]. La otra variante de acuerdo con EN 15662 se ha aplicado la
adición de sulfato de magnesio, de sodio cloruro, y tampón de citrato, para extraer los TA a base de
cereales [ 44 ] y miel [ 46 ].
Un adicional limpiar-up pasos basada en SPE veces ha sido desarrollado con el fin de eliminar interferencias
y preconcentrar la analitos [ 18 ], aplicar ya sea fuera de línea SPE con los cartuchos C18 y SCX [ 26 , 30 , 37
] O en línea SPE con divinilbenceno hidrófilo cartuchos [ 31 ]. En este sentido, los cartuchos SCX se
utilizaron para preconcentrar hasta 14 TA a base de cereales y productos a base de cereales, obtención
recuperaciones 60-109%, excepto para la soja [ 30 ]. Otro estudio también utiliza SCX cartuchos para
concentran 24 TA base de cereales y a base de cereales productos, logrando recuperaciones de 61 a
105% [ 37 ]. En adición, sorbentes de fase inversa C18, tales como han sido usado durante off-line SPE
paso de limpieza para concentrar la atropina, escopolamina, apoatropine, anisodamina, y aposcopolamine una forma de cloruro columna de intercambio aniónico, se eluyó con agua, se utilizaron para obtener
con recuperaciones de 89% para atropina y 96% para escopolamina [ 39 ].
Dispersivo fase sólida extracción (DSPE) es una alternativa a la SPE convencional, y se ha
utilizado por varios autores probar diferentes absorbentes como primario amina secundaria (PSA),
negro grafitado carbón (GBC), Z-Sep +, o sulfato de magnesio. El uso de PSA y GBC como absorbentes,
una extracto incoloro y recuperaciones 75-92% eran obtenido [ 41 ]. Sin embargo, PSA y sulfato de
magnesio proporcionó una mejor recuperaciones y menos efecto de la matriz de SPE probado con
sorbentes SCX, así como se redujo el tiempo de extracción [ 46 ]. Una limpieza DSPE con C18 y sulfato
de magnesio se aplicó a Softgel suplementos dietéticos [ 45 ], la eliminación no polares compañeros de
extractos y la disminución de la matriz efectos. Esta limpieza parecía ser efectiva solo en la matriz
aceitosa como cápsula blanda, mientras que GBC y Z-Sep + Clorofila eliminado, ácidos carboxílicos y
lípidos a partir de matrices vegetales [ 28 ].
UNA líquido-líquido extracción (LLE) etapa de limpieza se ha propuesto para complejo matrices
como muestras de hierbas. Por lo tanto, un detector Toxi-Tube que contiene sodio carbonato y bicarbonato
en una mezcla de heptano / diclorometano / dicloroetano se usó y se proporcionó una mejor extracción
recuperaciones que otros procedimientos de limpieza como mixta modo catión intercambio o cartuchos
C18 SPE convencionales [ 40 ].
2.2. Calystegines
Teniendo en cuenta la alta polaridad y solubilidad en agua, calystegines son generalmente aislado
utilizando una mezcla de agua y orgánico disolventes ( Tabla 3 ), Siendo el metanol el más
ampliamente utilizado. Por lo tanto, una mezcla de metanol / agua (50/50, v / v) era el disolvente de
extracción más comúnmente utilizado, y se ha aplicado para extraer el calystegines A3, B2 y B4 de Solanumobjetivo, por lo que una reacción con hexametildisilazano en 80 ◦ C durante 15 min [ 51 ], con bis
tuberosum [ 55 , 56 ], la calystegines A3, B1, y B2 de Calystegia sepium [ 57 ], Y para evaluar la calystegines(trimetilsilil) tri fl uoroacetamide 60 ◦ C durante 30 min [ 39 ] O con 10% ((N, O-bis (trimetilsilil) tri fl
contenido en 45 especies pertenecientes a Ery-
7
throxylaceae familia [ 17 ], En 129 especies de la familia Convolvulaceae [ 15 ] Y en 43 especies de la
familia Brassicaceae [ dieciséis ].
Otras mezclas con diferentes proporciones de metanol / agua se han utilizado para la extracción
mezcla que consiste en metanol / agua (20/80, v / v) ha sido empleado para extraer varios calystegines
de Mandragora autumnalis, Datura metel, Hyoscyamus albus, Withania somnifera, Withania
frutescens, y Solanum sodomaeum [ 59 ].
Otros disolventes se han utilizado para extraer calystegines de diferentes matrices. Por ejemplo,
etanol / agua (50/50, v / v) ha sido probado para aislar estos compuestos a partir de Ipomoea carnea [ 60
], mientras
ácido fórmico al 0,2% en acetonitrilo / agua (50/50, v / v) como disolvente de extracción proporciona
resultados adecuados para extraer los analitos específicos de
Solanum tuberosum, Solanum melongena, y Capsicum annuum
[ 37 ]. Se puede observar que las diferentes mezclas de metanol / agua (20/80, 50/50, 80/20, v / v), etanol
/ agua (50/50, v / v) y ácido / acetonitrilo / agua fórmico (0,2 / 50/50, v / v / v) proporcionan resultados
similares en relación con el número de los calystegines extraídos. Además, la mayoría de los
estudios no discuten la selección ni la optimización de la extracción con disolventes.
Una vez se han extraído los calystegines, y anterior a la separación cromatográfica, los extractos
se evaporaron y generalmente purificó usando una columna de intercambio iónico o de resina. Por
ejemplo, el extracto obtenido por SLE se hace pasar a través de una resina de intercambio catiónico
de ácido fuerte; a continuación, la resina se lava con agua y fi nalmente, los compuestos se eluyen
con hidróxido de amonio, la obtención de un extracto más clara [ 56 , 57 ]. Una forma de catión ácido de
hidrógeno columna de intercambio, se lavó con agua y se eluyó con hidróxido de amonio, seguido de
un extracto purificado planta ed [ 59 ]. Otros estudios [ 11 , 15 ] Solamente seleccionado una forma de
hidrógeno resina de intercambio catiónico ácida, que se lavó con agua, y los compuestos se eluyeron
con hidróxido de amonio. Se realizó un procedimiento más complejo de purificación y aislamiento
empleando catión ácido y columnas básicas de intercambio de aniones, con hidrógeno, amino e
hidroxilo formas [ 60 ].
3. Las técnicas de separación y detección
Las técnicas cromatográficas son las herramientas más potentes utilizados para separar
moléculas pequeñas relativos y, acoplados a la EM, se han convertido en el procedimiento “estándar
de oro” para la determinación de los TA y calystegines en diferentes tipos de matrices. Además, hay
estudios escasos que emplea otras técnicas, tales como TLC [ 61 , 62 ] Y CE [ 63 , 64 ], O detectores
clásicos como detector de ionización de llama (FID) [ sesenta y cinco ], Detector de nitrógeno-fósforo
(NPD) o diodo detector array (DAD) [ 66 ], Que proporcionan una menor sensibilidad y selectividad que
los detectores de MS, por lo que las aplicaciones de MS se han evaluado en esta revisión.
3.1. La cromatografía de gases acoplada a MS
3.1.1. alcaloides tropano
La determinación primera de TA usando GC se realizó en 1960 y desde entonces, se han
desarrollado diferentes métodos cromatográficos. Debido al desarrollo de las interfaces entre LC y
MS, hoy en día, GC es menos utilizado que el LC para analizar los TA. Aunque la determinación de
TA podría llevarse a cabo sin derivatización, algunos estudios realizan una sililación de los analitos
uoroacetamide y
Catión intercambiar
La resina MeOH / H MeOH / H MeOH / H EtOHCatión
/H intercambiar
La resina Ultra-Turrax derivatización. Hoja Ultra-Turrax evaporación
v / v), + AlUltra-Turrax
Extracción y purificación
Raíz tejidos: de
purifica por la evaporación tejidos:
fuerte catiónico liofilización y
ácida resina de
MeOH / intercambio

de cationes intercambiar columna + anión columna

Catiónde intercambiar
intercambiocolumna + anión columna de intercambio
disuelto en agua MeOH / H
v / agitación MeOH ajustar
v), evaporación, /H el pH a 4.0 + v / v), evaporación, v / agitación MeOH ajustar
v), evaporación, / H v / el Hevaporación.
v),pH a 4.0 MeOH / H
2 O (50/50,
2 O (80/20, 2 O (50/50, 2 O (50/50, 2 O (50/50, 2 O (80/20, 2 O (20/80, O
2
2O (50/50,

(50/50, v / v),
catiónico resina
Strong ácido intercambio .
fenólicos 2 O
eliminar compuestos
3 para

v / v), Tres veces, v / v),), Tres veces,

v / v), Tres veces,

catión intercambiar columna

la evaporación Strong ácidolacatión
evaporación
intercambiar
Strongresina
ácido catión intercambiar resina
la evaporación fuertemente ácido catión intercambiar resina

trimetilclorosilano
N-metil-N-trimetilsilil-tri
La derivatización
derivatización
La La + hexametildisilazano La La + La + La 50 ◦ La La derivatización
con piridina ethyldisilazane derivatización derivatización
hexam- y trimetilclorosilano
Piyidine + hexametildisilazano Pirydine + N-metil-N- derivatización trimetilclorosilano
(10: 1) 60 ◦
trimetilclorosilano
fl uoroacetamide50
50◦ ◦ / trimetilclorosilano
50 ◦50 ◦ piridina + N-metil-N-trimethylsilyltri
(trimetilsilil) tri fluoro-acetamida 60 ◦ 70 ◦
C durante 30 minC durante 30 min C durante 15 min C durante 15 min. C durante 1 h C durante
fl uoro- acetamida 100 ◦ 30 min C durante 30 min C durante 15 min
C durante 1 h
derivatización Piyidine
+
hexametildisilazano

derivatización

/ triclorosilano (90/10, v / v)

derivatización piridina + hexametildisilazano derivatización piridina + hexametildisilazano

Q Q Q Q Q Q Q Q Q segundo Analizador Columna

DB5 (5% HP1 (5% HP5 HP1 DB1 Dimethylpoly-siloxano

SE-30 SE (5% HP5 EM (5% HP5 (5% DB5

HP5 Dimethylpoly-siloxano
Dimethylpoly-siloxano

-fenil) -methylpoly- siloxano

-fenil) -methylpoly- siloxano -fenil) -methylpoly- siloxano -fenil) -methylpoly- siloxano -fenil) -methylpoly- siloxano

El poli (dimetil silicona)

30goma
El polifase
(dimetil silicona) goma fase

MS Fenil arileno polímero

- 3 mg / kg -
DAKOTA DEL NORTE - - 1-2 - 1 LOD

mg / L

[ 58 ] [ dieciséis ] [ 17 ] [ 15 ] [ 60 ] [ 11 ] [ 57 ] [ 56 ] Árbitro.

mg / L [ 59 ]
 A. Romera-Torres et al. / J. Chromatogr. A 1564 (2018) 1-15 9

Higo. 3. Típico GC-MS de una mezcla de calystegines estándar sililados con octadecano como estándar interno. Reimpreso con el permiso de la referencia. [ 59 ]. Los derechos de autor (2001) Elsevier.

trimetilclorosilano mezcla en acetonitrilo [ 28 ] ha sido desarrollado. Sin embargo, hay otros estudios que 15 m [ 58 ] Y 60 m [ 11 , 60 ] Se utilizaron longitudes de columna. Calystegines por lo general han sido
no incluyen esta etapa de derivación [ 29 , 52 ]. determinados por GC-Q-MS con IE ( Tabla 3 ), Pero ionización química (CI) también se ha aplicado el
logro de sensibilidad adecuado [ 56 ]. Los LOQ reportados variaron de 3 a 6 mg / L o de 2 a 20 mg /
Dos fases estacionarias tienen sido utilizado habitualmente, un arileno fenilo polímero (DB5 MS) y (5% kg, dependiendo de la matriz.
-fenil) -metilpolisiloxano (HP Ultra2 y HP5 MS). La longitud de las columnas utilizadas es de 30 m con
una tamaño de partícula de 0,25 mm para DB5 MS y HP5 MS y 0,32 mm para HP Ultra2. El tiempo total
de ejecución varía de 10 a 70 min ( Tabla 2 ). En relación con el analizador, todos los estudios
3.2. cromatografía líquida acoplada a MS
emplearon un solo cuadrupolo (Q) analizador, con ionización por impacto electrónico (EI), y utilizando ion
único modo de vigilancia (SIM).
3.2.1. alcaloides tropano
LC es la técnica más utilizada para la separación de los TA. Por lo general, TAS se analizan
usando el modo de fase inversa, y la fase estacionaria es apolar ( tabla 1 ). C18 es la fase estacionaria
límites de de detección (LD) y los límites de cuanti fi cación (LOQ) dependen de la extracción procedimiento,
más utilizado, aunque C8, vancomicina, también se utilizan HILIC, y fases de bifenilo. C18 columnas
la complejidad de la matriz y analizador, por lo que la límites reportados son muy diversas ( Tabla 2 ).
de relleno se aplican principalmente para el análisis de la atropina y escopolamina [ 27 , 34 , 35 , 38 , 41 , 49 ].
Además, dependiendo del estudio, LD y LOQ se expresan en peso o volumen unidades. LD varió de 0,003
Además, esta columna se ha utilizado para la separación de varios TA [ 33 , 36 , 39 , 48 , 50 ], Destacando
a 3,5 mg / kg y LOQ oscilaron desde 0,001 a 10,4 mg / kg. Además, un estudio presentado LD y LOQ de
el estudio que analizó hasta veinticuatro TA [ 37 ]. La longitud de las columnas varía de 50 a 250 mm
3 y 10 mg / L, respectivamente, que podría corresponder a la límites instrumentales [ 39 ].
con tamaños de partícula de 2 a 4.6 mm, siendo 2.1 mm el más utilizado. Como ejemplo, una
MS-cromatograma de los alcaloides más abundantes en

3.1.2. Calystegines duboisia especie, obtenida con una columna C18, se muestra en Fig. 4 . Dos estudios describen
Debido a la baja peso molecular de calystegines, alta polaridad y alto número de grupos hidroxilo, métodos cromatográficos utilizando columnas C8, ambas de 150 mm de longitud de la columna, el
que se derivatizan GC antes análisis. Hay unos pocos procedimientos establecidos que emplean análisis de la atropina y escopolamina [ 46 ] Con 3 mm de tamaño de partícula, o anisodamina,
piridina con Los agentes de sililación. Uno de los procedimientos fue como sigue: la compuestos son disolvió anisodina, atropina, escopolamina y con 4.6 mm de tamaño de partícula [ 40 ]. Generalmente, tiempos
en piridina, y la solución es mezclado con y hexametildisilazano triclorosilano (10: 1, v / v), de retención obtenidos usando C8 son más altos que los obtenidos con columnas C18.

y mantenido a ca. 50 ◦ C durante 15 min [ 56 ]. El segundo modi fi ed los primeros procedimiento, usando trimetilclorosilano
Debido a la alta polaridad de algunos TAS, un enfoque novedad consistía en una columna C18
en vez de triclorosilano, y manteniendo el de reacción a 50 ◦ C durante 15 min [ 15 , 17 ] o 30 min a 50 [ dieciséis
(100 × 2.1 mm, 1.8 m) acoplado a una columna de HILIC (100 × 2.1 mm, 3.5 m), que mejora la separación,
], 60 [ 59 ] O 70 ◦ C [ 57 ]. En la última, piridina y Nmethyl- NORTE- trimethylsilyltri fl uoroacetamide se debido a las interacciones hidrófilas ( Fig. 5 ). Este enfoque se ha aplicado para determinar catorce TA
añaden al extracto y la mezcla se mantiene a ca. 50 ◦ C durante 30 min [ 58 ], O durante 60 min a 60 ◦ C [ 60en cereales y pseudocereales [ 30 ] Y trece TA en tés e infusiones [ 26 ]. Otra alternativa es el uso de
] O 100 ◦ C [ 11 ]. Un típico GC MS cromatograma de una mezcla de silada estándar calystegines se una columna de bifenilo (150 × 3 mm, 2.7 m), que fue seleccionado para el análisis de TAS, atropina y
mostró en Fig. 3 . Con respecto a columnas cromatográficas, DB5, HP5, HP5 MS fusionado sílice capilar columnas,
escopolamina, con otros varios alcaloides [ 31 ].
que consta de (5% -fenil) metilpolisiloxano, DB5 MS, que contiene un polímero fenil arileno, DB1 de dimetilpolisiloxano,
HP1 de dimetilpolisiloxano, y SE30 de poli (dimetil silicona) fase de goma, son las columnas
empleadas en el separación de calystegines por GC ( Tabla 3 ). Generalmente, la longitud de la la
columna fue de 30 m [ 15-17 , 56 , 57 , 59 ], pero también La atropina es una mezcla racémica compuesta de (+) - hiosciamina y (-) - hiosciamina, que es
el compuesto activo, naturalmente, se produjo y racemiza para (+) - hiosciamina durante el proceso
de extracción. Su separación enantiomérica se realizó usando una columna de fase vancomicina
unida de 150 mm de longitud [ 30 ]. Esta columna (250 × 4.6 mm) también se ha utilizado para la
separación de estos enan-
10 A. Romera-Torres et al. / J. Chromatogr. A 1564 (2018) 1-15

Higo. 4. MS-cromatograma de los alcaloides más abundantes en duboisia spec .: escopolamina (5), norscopolamine (6), 6- -hidroxi-hiosciamina (4), hiosciamina (2), norhyoscyamine (3), littorine (1), aposcopolamine (19). A) Soln estándar. a un nivel de
concentración de 20 mg / l. B) Extracto de hoja de genotipo C ( Duboisia leichhardtii). Reproducido con el permiso de la referencia. [ 48 ]. Los derechos de autor (2016) Elsevier.

tiomers y otros TAS, pero usando las condiciones optimizadas para la separación de los demás TAS,
la separación cromatográfica de (+) hiosciamina y (-) - hiosciamina no se logró y fueron cuanti fi como
suma (atropina) [ 44 ].

En cuanto a la fase acuosa, por lo general es modi fi con 0,1%

ácido acético o con ácido fórmico, a concentraciones de 0,1 a 2,0% ( v / v) ( tabla 1 ). A veces, cuando
se utiliza ácido fórmico, formiato de amonio 1-20 mM o 0,2-5,0 mM también se agregan acetato de
amonio, así como 0,1 mM de ácido oxálico [ 38 ]. Otras sales de amoníaco también se añaden como
modificadores fi de la fase acuosa, tales como hidróxido de amonio (6,5 mM) o carbonato de amonio
(10 mM). Cuando mM de formiato de amonio 20 y 0,1% de ácido fórmico en agua se utilizan, mejor
resolución, separación y forma de los picos que los obtenidos con ácido fórmico al 0,1% en agua o en
20 mM de formiato de amonio en agua [ 49 ] se obtuvieron. Por otro lado, el uso de 2 o 5 mM de
formiato de amonio [ 43 , 45 ] Con ácido fórmico en fase orgánica y acuosa evitado la formación de
sodio o aducto de potasio. Además, la retención y la forma de los picos para alcaloides básicos se
optimizaron a pH 5 [ 49 ]. Otros autores [ 37 ] Añadió carbonato de amonio 10 mM, trabajando a pH 10,
el logro de tiempo de retención adecuado y la separación de compuestos isobáricas. Además, 0,5%
de fosfato de dihidrógeno de potasio ( v / v) se añade a la fase acuosa, pero no hay ventajas se han
indicado [ 50 ]. Algunos estudios se añaden disolventes orgánicos a la fase acuosa como
modificadores fi. Por ejemplo, metanol [ 35 ] O acetonitrilo [ 44 ] Se han añadido a la fase acuosa en
porcentajes iguales o inferiores a 10%, la mejora de la sensibilidad, así como la separación
cromatográfica de los compuestos diana.

Debido a columnas de fase reversa se seleccionan comúnmente, las fases móviles consistían en
metanol, acetonitrilo o una mezcla de ellos (50/50 o 80/20, v / v) como fase orgánica se utilizan, y otras
veces son acidifica con ácido fórmico o acético ( tabla 1 ). Además, como ocurre con la fase acuosa se
emplean varios modificadores de, como ácido fórmico 0,2-2,0% en ácido oxálico metanol o [ 38 ]. fase
orgánica similar se ha preparado con formiato de amonio 1 mM y ácido fórmico al 0,1% en acetonitrilo
[ 40 ], En lugar de metanol, o con 5 mM de acetato de amonio y ácido fórmico al 0,1%

Higo. 5. ion Extraídas cromatograma de anisodamina cuando diferentes fases estacionarias son usado.
 A. Romera-Torres et al. / J. Chromatogr. A 1564 (2018) 1-15 11

en metanol / acetonitrilo (95/5, v / v) [ 31 ]. Además, de amonio 6,5 mM hidróxido en acetonitrilo / agua presente de forma natural, mientras que el segundo está compuesto por la comida que ha sido
(90/10, v / v) ha sido utilizado como orgánico fase [ 36 ]. contaminada con plantas o parte de TA que contienen plantas. Hasta ahora, el estudio de calystegines
se ha centrado en el primer grupo, mientras que la presencia de TA se ha examinado en los dos
Sobre el Por otra parte, una en particular estudio empleó fase normal para la enantiomérica separación grupos debido a la toxicidad de algunos de estos compuestos ( Las tablas 4 y 5 ).
de TAS, utilizando como fase móvil 0,1% de dietanolamina en etanol para lograr la separación de (+) y
(-
) - hiosciamina [ 42 ]. Aunque el análisis LC toma generalmente de 10 a 30 min, con el excepción de 50 4.1. La presencia natural de los TA y calystegines
min [ 39 ], El tiempo de ejecución común es alrededor 15-17 min.
En cuanto a la primer grupo, TAS generalmente se analizaron en varios Datura, sino también en Brugmansia
Con respecto a analizadores, TAS han sido cuanti fi usando baja resolución analizadores como Q y Hyoscyamus especies, siendo los compuestos más estudiados atropina y escopolamina ( Tabla 4 ).
[ 34 , 35 , 39 ], De triple cuadrupolo (QqQ) [ 27 , 36 , 37 , 41 , 42 , 44 , 49 , 50 ], O híbrido analizador tal comoLa atropina y escopolamina se han determinado en concentraciones que van desde 378 hasta 1283
quadrupoleion trampa (QTRAP) [ 38 , 40 ]. Por otra parte, la espectrometría de masas de alta resolución analizadores,
mg / kg, respectivamente [ 51 ] en Datura stramonium semillas, mientras que su concentración varió
como Orbitrap [ 26 , 30 , 43 ], Q acoplado a tiempo de fl ight (QTOF) [ 33 , 48 ] Y Q acoplado a Orbitrap 65-2788 (atropina) y 448 a 2020 mg / kg (escopolamina) en D. metel y Brugmansia pittieri [ 28 ]. En otros
(qOrbitrap) [ 31 , 45 , 46 ], También han sido utilizados. los ventajas del uso de alta resolución masa espectrometría
estudios, las concentraciones variaron de 20-5910 g / kg de atropina y 10 a 4530 g / kg de
(HRMS) son el alto grado de selectividad proporcionada por la masa poder de resolución, lo que escopolamina en D. innoxia, D. metel y D. stramonium [ 34 ], O de
permite la inequívoca identificación de la compuestos dirigidos y no dirigidos, así como la per fi l de
varias especies de plantas [ 31 , 43 ]. Además, un no directo la detección de TA ha sido desarrollado
utilizando una base de datos que contiene nombre, fórmula molecular, tiempo de retención, la masa
0,19 a 31,00 mg / l de atropina y 11,00 a 400,04 mg / L de la escopolamina en D. innoxia, D. metel, D.
exacta de ion primario y fragmentos, lo que permite la La confirmación de anisodamina, tropinona y apohyoscyamine
[ 31 ]. meteloides, y D. TATULA [ 35 ]. A fin de aumentar la información relacionada con la presencia de TAS,
otros estudios analizaron varios TAS, como la atropina, escopolamina, apoatropine, aposcopolamine,
y anisodamina, en D. metel pero sólo se informaron concentraciones de atropina (10-900 mg / kg) y la
escopolamina (200 a 1700 mg / kg) [ 39 ]. Estas concentraciones son mucho mayores que los
obtenidos en 18 extractos de hierbas, donde se analizaron atropina, escopolamina, apoatropine,
los LOD y LOQ son reportados se resume en tabla 1 , anisodamina, y tropinona, presentando concentración que varía de 0,18 (escopolamina) a 204 mg / kg
a pesar de que algunos estudios sólo informan de una de ellas. Cuando Q es analizador usados, LODs oscilado(atropina) [ 31 ]. Además, un estudio, se centró en la separación y determinación de ( -) y (+) -
entre 0.05 a 3000 g / L y LOQ de hiosciamina en D. stramonium y Brugmansia arborea semillas, concentraciones que van desde
0,167 a 10 000 g / L. Cuando QqQ se utiliza, LODs de 0,52-2,12 g / L o 0,03-1,00 g / kg y LOQ de 0,1-5,0 obtenidos 16,21 ((-) - hiosciamina) a 1454,30 mg / kg ((-) - hiosciamina) [ 42 ].
g / kg se obtienen, y QTRAP analizador tiene proporcionadas LODs de 5 g / L o LOQ de 1 g / kg, dependiendo
de la matriz. Cuando HRMS se aplica, LODs de Se obtuvieron 1.22 a 12.5 g / L y LOQ de 160 g / L
cuando QTof se utiliza el analizador, mientras que con Orbitrap, LODs variaron de

0,04-50 g / kg y LOQ de 0,1-50 / kg. Por último, si el analizador es qOrbitrap de segunda mano, LODs La mayoría de los estudios analizados calystegines en Solanum tuberosum ( patata), pero
de 0,15-0,20 g / L o 10 g / kg y LOQ de también se determinaron en Capsicum annuum, Calystegia sepium o Ipomoea carnea, entre otros ( Tabla
5 ). En
/ Se alcanzan 0,51 a 0,65 g / L o 50 g kg. En relación a la sensibilidad, QqQ analizador espectáculos excelentes
LOD y LOQ. Sin embargo, qOrbitrap mejora selectividad, proporcionar una más fiable catión identi fi de la Solanum tuberosum tubérculos, el calystegines A3 y B2 se determinaron a concentraciones de 0,2
compuestos debido a la masa exacta. (A3) a 2100.0 (B2) mg / kg [ 11 ]. En otro estudio el contenido total de calystegines, incluyendo A3, B2 y
B4, se ha determinado en tubérculos y plantas durante las diferentes etapas y después de la
cosecha, la detección de concentraciones de hasta 3000 mg / kg [ 56 ]. Se observó una clara variación

3.2.2. Calystegines del contenido calystegines después de la cosecha, la observación de la concentración más alta

Hasta ahora, calystegines han sido ampliamente analizado por GC, pero hay pocos informes centrado después de 5 meses de almacenamiento en frío, pero 8 meses después de la cosecha, esta
en el análisis LC. Una de las razones es porque son hidrófila, y no son susceptibles de ser separados concentración se redujo hasta el 50%. Además, estos calystegines se determinaron en tubérculos de

por LC convencional columnas de fase inversa. Por otra parte, la cromatográfico separación de patata bajo la herida y la exposición de luz [ 55 ], Y las concentraciones de 35 (A3) a 84 (A3) mg / kg

isómeros compuestos es un reto, y por lo general una quiral Se necesita columna. Los dos estudios se encontraron. Varios calystegines se analizaron en dos Solanum tuberosum grupos, Phureja y

publicados utilizan una acuoso fase con acetato de amonio, a las 5 y 20 mM, pero el orgánico fases son tuberosum, concentraciones hallazgo de 7,4 (N1) a

puros metanol y acetonitrilo, respectivamente. los primera uno es una estudio de colaboración y
empleado un quiral vancomicina columna (150 × 2.1 mm, 5 m) acoplado tanto QqQ y qOrbitrap para la análisis
de la calystegines A3, A5, B1, B2, B3, y B4, alcanzando LD de 0,25-1,0 mg / kg y LOQ de 1,0-2,5 mg /
kg, con recuperaciones que van desde 83 a 100% [ 37 ]. Cuando la columna quiral fue usé la calystegines 10,145.0 (B2) mg / kg y diferentes concentraciones se pueden observar dentro de las varias partes de

están completamente separados, y se eluyeron con tiempos de retención de 2,4 (B2) a 6,7 min (A3). En la planta como se muestra en Fig. 6 [ 58 ]. Otros estudios analizados hasta 404 muestras consistentes

el segundo uno, una HILIC columna (100 × 3 mm, 3 m) acoplado a un analizador de QTRAP estaba de Solanum tuberosum, Solanum melongena ( berenjena) y Capsicum annuum

acostumbrado a analizar la calystegines A3, B2, B4 y, lograr LD de 0,4-0,6 mg / kg [ 55 ]. Los

calystegines también eran enteramente separado, con tiempos de retención de 4,1 (B2), 4,5 (B4) y
(Pimiento) y las concentraciones variaron de 0,3 (B4) a 409,9 (A3) mg / kg [ 37 ] se obtuvieron. La
acumulación de calystegines se ha estudiado en Calystegia sepium durante el crecimiento de la
planta. Se detectó la calistegina A3 en la concentración más alta y la acumulación máxima de
calystegines totales fue en la etapa de cultivo a altas horas de 1500 mg / kg [ 57 ], mientras en Ipomoea
carnea, las concentraciones de calystegines individuales variaron de 40 (B3) a 210 (B2) mg / kg [ 60 ].
Una investigación del contenido de calystegines en la familia de las solanáceas, que incluye Datura
metel, Atropa belladona, Hyoscyamus albus, y brunfelsia nitida entre otros, reveló la aparición de los

5.1 (A3) min. calystegines A3, A5, B1, B2, B3, B4, C1, y N1 [ 59 ]. El contenido calystegines presenta diversas
variaciones dentro de las especies. Datura metel no presenta ninguna de las calyste- estudiado

4. Determinación de los TA y calystegines en muestras reales

Dos muestra grupos pueden ser distinguido. La primera corresponde a la prima material en el que
los TA y / o calystegines son
12 A. Romera-Torres et al. / J. Chromatogr. A 1564 (2018) 1-15

Tabla 4
Resumen de TA analizados y concentraciones encontradas en muestras reales.

analitos Matriz Rango de concentración observaciones Árbitro.

Atropina La escopolamina Datura metel Brugmansia Atropina 64,67 a 2788 mg / kg de [ 28 ]

pittieri escopolamina 448,2-2.020 mg / kg
Atropina Datura especies Atropina 0,19 a 37,00 mg / L escopolamina 11,00 [ 35 ]
La escopolamina a 400,04 mg / L
Atropina Datura especies La atropina 20-5910 mg / kg de escopolamina [ 34 ]
La escopolamina 010-4530 mg / kg
Atropina Datura stramonium semilla La atropina 1283 mg / kg de [ 51 ]
La escopolamina escopolamina 678 mg / kg
Atropina trigo sarraceno productos alforfón-deribed Atropina 1,1 a 111 mg / kg de 16 muestras de alimentos, [ 51 ]
La escopolamina contaminados escopolamina 0,07 a 66 mg / kg positivo en todos

contaminada

Atropina D. stramonium semillas (-) - hiosciamina [ 42 ]

(-) - hiosciamina (+) - Brugmansia arborea semillas 326,91 a 1454,30 mg / kg (+) - hiosciamina 16,21 a
hiosciamina 17,89 mg / kg
Atropina trigo sarraceno contaminada (-) - hiosciamina 0,10 a 0,17 mg / kg (+) - [ 42 ]
(-) - hiosciamina (+) - hiosciamina 0,01-0,01 mg / kg
hiosciamina
Atropina Alforfón Atropina 13,9 a 83,9 g / kg de escopolamina 5.7 26 muestras, 11% de [ 27 ]
La escopolamina a 10.4 g / kg positivos
Atropina Alforfón <LOD 8 muestras [ 41 ]
La escopolamina

Atropina Alimentación Atropina 7,2 g / kg 32 muestras [ 68 ]

La escopolamina animal

Atropina Miel La atropina hasta 3,8 g / kg 40 muestras, 22% de las muestras [ 46 ]

La escopolamina con atropina

Atropina suplementos <LOD método de cribado [ 43 ]

La escopolamina alimenticios miel té
Tropine

4 TA Herbal No de fi nido 269 ​muestras, 10% de [ 40 ]

orina positivos
4 TA Suplementos dietéticos <LOD 23 muestras [ 45 ]
5 TA extracto de hierbas 0,18 (escopolamina) -204 mg / kg de atropina 18 muestras [ 31 ]
Untarget (18)

5 TA Datura metel La atropina 10-900 mg / kg de escopolamina [ 39 ]

200-1700 mg / kg
5 Tas Cereales cereales 2.5 a 12.7 g / kg (atropina) [ 44 ]
Pseudo

6 TA productos a base de cereales 0,42 (escopolamina) -65.6 (atropina) g / kg 113 muestras, 22% [ 36 ]
positivas
13 TA té de té de hierbas 5 (apoatropine) -4340 g / kg (suma de 11 muestras, 55% [ 26 ]
physoperuvine, pseudotropina y tropina) positivas

14 TA Cereales, productos a base de 3 (littorine) - 23 g / kg (escopolamina) 15 muestras, 13% [ 30 ]

cereales Pseudocereal positivas
24 TA Cereales, Pseudocereal a base de 0,05 (atropina, escopolamina) - 1998.0 (Tropine) g / kg 1709 muestras [ 37 ]
cereales té productss

Tabla 5
Resumen de analizado calystegines y concentraciones encontradas en las muestras.

analitos Matriz Rango de concentración Árbitro.

A3 B2 Solanum tuberosum 0,2 (A3) -2100 (B2) mg / kg [ 11 ]

A3 B4 B2 Solanum tuberosum Hasta 3000 (B2) mg / kg [ 56 ]
A3 B4 B2 Solanum tuberosum 23- 84 (A3) mg / kg [ 55 ]
A3 B1 B2 Calystegia sepium Hasta 1500 mg / kg [ 57 ]
B1 B2 B3 C1 Ipomoea carnea 4 (B3) -21 (B2) mg / kg [ 60 ]
A3 A5 B1 B2 B3 B4 C1 N1 Mandragora autumnalis Datura Hasta 357 (C1) mg / kg [ 59 ]
metel Hyoscyamus albus
Withania somnifera de Withania
frutescens Solanum sodomaeum.

A3 A5 B1 B2 45 erythroxylum especies Hasta 2500 (B2) mg / kg 46 [ 17 ]

muestras
A3 A5 B3 B2 43 especies de Brassicaceae Hasta 5000 mg / kg [ dieciséis ]

A3 A5 A6 A7 B1 B2 B3 B4 C1 129 especies convolvulaceae No de fi nido [ 15 ]

A3 B2 B3 B4 N1 Solanum tuberosum 7,4 (N1) -10145 (B2) mg / kg [ 58 ]

grupo Phureja Solanum tuberosum
grupo tuberosum
A3 A5 B1 B2 B3 B4 Solanum melongena solanum tuberosum Capsicum annuum 0,3 (B4) -409,9 (A3) mg / kg 404 [ 37 ]
muestras
 A. Romera-Torres et al. / J. Chromatogr. A 1564 (2018) 1-15 13

y mieles ( Tabla 4 ). Por ejemplo, se investigaron 26 muestras de trigo sarraceno, y atropina y

escopolamina se encontraron en el 11% de ellos en concentraciones que van desde 13,9 a 83,9 g / kg
y
5.7 a 10.4 g / kg, respectivamente [ 27 ]. Sin embargo, en otro estudio, se analizaron 8 muestras de
trigo sarraceno, pero tampoco atropina ni escopolamina se determinaron por encima de los LD [ 41 ].
Se encontraron resultados similares [ 51 ] En alforfón y trigo sarraceno productos derivados, pero la
atropina y escopolamina solamente se detectaron en el trigo sarraceno contaminado con Datura
stramonium a concentraciones de

1,1 a 111,0 mg / kg de atropina y desde 0,07 a 66,00 mg / kg de escopolamina. Por otra parte, los
estudios de varios analitos se han desarrollado en los productos a base de cereales y los cereales
seudo. Un estudio determinó cinco TA en varios cereales, pero no se detectó sólo atropina y
escopolamina en concentraciones que van desde 2,5 a 12,7 g / kg de atropina [ 44 ]. En otro estudio, 6
TA se analizaron en 113 muestras de cereales y pseudo-cereales, fi Nding la menor concentración de
escopolamina (0,42 g / kg) y la más alta de atropina (65,60 g / kg) en 22% de las muestras [ 36 ],
Mientras que en otra investigación 14 TA se determinaron en 15 muestras de cereales y
pseudo-cereales, la detección de hasta 5 AATT en concentraciones de 3 (littorine) a 23 g / kg
(escopolamina), y 13% de las muestras contienen TA [ 30 ]. Un trabajo colaborativo [ 37 ] Monitoreado
la presencia de 24 TA en 1709 muestras que comprenden cereales, productos a base de cereales, y
el té. Los resultados mostraron que se detectaron algunas TA en 21% de harinas, 20% de los
productos a base de cereales o 70% de los tés, las concentraciones hallazgo que van desde 0,05
(atropina, escopolamina) a 1998.00 g / kg (tropina) [ 37 ]. En otro trabajo [ 26 ] 13 TA se investigaron en
11 muestras de tés y tés de hierbas, y las concentraciones de 5 (apoatropine) a 4,340 g / kg (suma
de physoperuvine, pseudotropina y tropina) se obtuvieron, con un 55% de muestras positivas.

Por otra parte, se analizaron 40 muestras de miel (22% de las muestras positivas) y
concentraciones de hasta 3,8 g / Se encontraron kg de atropina [ 46 ], Mientras que un estudio de
cribado de la atropina, escopolamina, y tropina a cabo en la miel, suplementos de té y de los alimentos
no revelaron cualquiera de los compuestos dirigidos por encima de sus LD [ 43 ]. También se obtuvieron
resultados negativos cuando los TA 4 se determinaron en los suplementos dietéticos [ 45 ]. Sin
embargo, durante la proyección de las muestras de orina y de la hierba, se observó que los TA se
detectó en 18 de 269 de muestras estudiadas [ 40 ].

Por otra parte, hay varios informes se centraron en fines distintos a la cuanti fi cación de los TA y
Higo. 6. total de iones cromatograma (TIC) traza que muestra la distribución de calystegines en extractos de (A, B) tubérculo calystegines. Por ejemplo, un método de cribado de la planta de toxinas usando GC-MS se ha
carne, (C) la cáscara, y D) los brotes de la línea Solanum phureja DB 333-16 (. (1) Primario tropina estándar interno (TMS);
aplicado para el seguimiento de alteración temporal en concentraciones de TA como precursores de
calystegines: (2) A 3 ( TMS) 3,
cocaína en Sudáfrica erythroxylum especies [ 29 ]. Otro procedimiento de selección, se centró en la
(2a) B 4 ( TMS) 4, ( 2b) B 3 ( TMS) 4, ( 3) A 3 ( TMS) 4, ( 3a) X 2 ( TMS) 2, ( 3b) N 1 ( TMS) 3, ( 4) B 2
(TMS) 4, ( 5) B 2 ( TMS) 5; ( 6) secundaria estándar perseitol interno (TMS) 6. Reproducido con el permiso de la referencia. [ 58 ]. Los identificación de hasta 67 TA en Datura stramonium puesto de manifiesto la existencia de nueve
derechos de autor (2008) American Chemical Society. nuevas TA para la primera vez en esta planta [ 52 ]. Además, un método de cribado, que no utilizó
separación cromatográfica, se ha desarrollado para obtener la distribución espacial en tiempo real de
los TA sin pretratamiento matriz. El método consiste en un análisis de ablación con láser directo en
Gines, mientras brunfelsia nitida presenta la mayor concentración en 357 mg / kg de calistegina C1.
tiempo real espectrometría de masas de formación de imágenes (LADI-MS) y se puede aplicar para
Cuando calystegines fueron estudiados en 46 muestras de 45 erythroxylum especies, los calystegines
determinar productos naturales de una amplia gama de polaridades en una diversidad de tipos de
A3, A5, B1, y B2 fueron encontrado, y la máximo concentración alcanzado fue de 2500 mg / kg correspondiente
muestras [ 67 ].
a la calistegina B2 [ 17 ], Mientras que en 43 Brassicaceae especie, la calystegines A3, A5, B2 y B3 se
determinaron a concentraciones de hasta 5000 mg / kg [ dieciséis ] Y en 129 Convolvulaceae especie,
la calystegines A3, A5, A6, A7, B1, B2, B3, B4 y C1 eran estudiados, pero sin se reportan
concentraciones [ 15 ], mostrando que alcaloides tetrahydroxylated B2 y B1 son los más frecuente compuestos
(90% y 68% de las especies positivas, respectivamente) Seguido por el trihydroxynortropane A3
(38%).
5. Conclusiones y tendencias

No hay duda de que hay un interés creciente en metabolitos secundarios de plantas tales como
ATs y calystegines. Por eso, en los últimos años un gran número de métodos de análisis han sido
publicados para su determinación, aunque la mayoría de ellos utilizan técnicas de determinación
4.2. Accidental ocurrencia de TA: muestras contaminadas similares.

Sobre muestras contaminadas por TAS, atropina y escopolamina son los más frecuentemente determinado Por lo tanto, SLE sigue siendo la técnica de extracción más ampliamente utilizado debido a su
y, a pesar de los cereales y pseudo-cereales son las matrices más estudiados, hay también un son número simplicidad y resultados adecuados, pero otras alternativas como PLE o MAE también han sido probados.
de estudios se centraron en las hierbas, suplementos dietéticos Debido a la complejidad de las matrices donde se encuentran estos compuestos, una etapa de limpieza es
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comúnmente necesarios, y SPE y DSPE se han utilizado principalmente. Así, durante calystegines determinación,
[8] N. Asano, soluble en agua alcaloides nortropano en fármacos en bruto, frutas comestibles y
una puri paso fi cación basada en el intercambio de iones columnas o resinas son habitualmente es
necesario. Sin embargo, en el siguiente pocos años, más esfuerzos deben centrarse en la aplicación
de micro-extracción técnicas, como fase sólida microextracción (SPME), líquido fase microextracción
(LPME), la extracción de una barra de agitación de sorción (SBSE), o sola gota microextracción
(SDME), con el fin de minimizar solvente, etapa de pre-tratamiento y el tiempo, teniendo en cuenta la principal
principios de la química verde.
cromatográfico técnicas acopladas a Q o QqQ se han utilizado Para el determinación de TA y calystegines,
[11] M. Friedman, JN Roitman, N. Kozukue, glicoalcaloide y calistegina
siendo TA analizados por LC y calystegines por GC, teniendo en cuenta la diferente físico-químico propiedades
de ambas clases de compuestos. Considerando ese calystegines tienen que estar derivado de GC determinación,
más métodos basado en LC son exigente con el fin de evitar este paso, simplificando muestra tratamiento.
Además, el alcance de estos métodos analíticos podría ser aumentar si alto resolución analizadores
(QTOF, Orbitrap, qOrbitrap) son además siendo aplicado. Estas analizadores proporcionan una
sensibilidad adecuada y mejor especificidad de QqQ para el análisis de metabolitos secundarios y
permitir que el identificación de compuestos dirigidos y no dirigidos, por lo TA o desconocidos calystegines
podrían ser detectados en cereales, pseudocereales, patata, tomate, y Productos a base de cereales, los
cuales son los más matrices contaminadas por TA. Además de atropina y escopolamina, que son los
TA o calystegines más estudiados A3 y B2, que son los más frecuentemente detectado en patata, otro compuestos
[17] A. Brock, S. Bieri, P. Christen, B. Dräger, en Calystegines silvestres y cultivadas
también se pueden detectar usando estos analizadores. Ellos además permitir el uso de fi toma de
huellas digitales enfoques, proporcionando una adecuado herramienta para diferenciar entre especies
(i. mi. silvestre y los híbridos especies) o por la calidad evaluaciones.
Por lo tanto, lleno scan-HRMS es una poderosa herramienta para el análisis de objetivo y no
directo compuestos, lo que permite el desarrollo de desconocido de cribado en la que metabolitos o
compuestos no orientados podría ser tentativamente identi fi. Además, los enfoques pueden ser
metabolómicas desarrollado. De esta manera no focalizados pueden ser alcaloides tentativamente identi
fi cado en la base de la masa exacta y el patrón isotópico, destacando la enorme potencial de esta
técnica en la metabolómica investigación, basada en enfoques genéricos de extracción que permite adecuado
[23] H. John, LC-MS en bioanálisis de drogas, en: P. Alan Xu, Timoteo L. Madden (Eds.),
extracción de una amplia gama de compuestos.
Expresiones de gratitud
los autores con agradecimiento reconocer al Ministerio de Economía español y competitividad (MINECO)
y FEDER (proyecto de ref. CTQ2015-69899-R) para el apoyo fi nanciero.
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