Audio 09/05/19

Los microoganismos “seleccionados y clasificados” son conservados en bancos de cepas de levaduras

y bacterias se los puede conservar de tres maneras:
a) LIOFILIZADOS
b) EN TUBOS DE ENSAYOS CON MEDIO SOLIDO CON PICO DE FLAUTA CONSERVADA
c) POR SECADO SPRAY Y ENVASADO AL VACIO EN ATMOSFERA INERTE
Según el tiempo de conservación:
 Liofilizados : de 3-4 años ( es el más importante, no genera cambios bioquímicos ni mutaciones)
 En tubos de ensayo con medio solido en pico de flauta : 4- 5 meses
 Envasado al vacío por secado en spray en atmosfera inerte : 7-8 meses ( secado en spray
también llamado atomización, el medio inerte se lo hace en presencia de nitrógeno)

Esta clasificación está dada en función al “orden de importancia frente a riesgos de contaminación”
a) LIOFILIZACIÓN:
Tengo la levadura o bacteria seleccionada, que puede estar en un medio solido o líquido. Necesito
multiplicarla para ello agarro otro matraz de 100,125 o 150 ml u otro tubo que va a poseer el medio
de cultivo ( en el tubo de ensayo cargar 10ml, en el matraz 50 ml de medio de cultivo) , luego autoclavo
por 15 minutos a 121°C (esteriliza el medio) , luego enfrió el medio, destapar y sembrar el medio de
cultivo con la levadura o bacteria seleccionada, dejar en la estufa (incubación) por 24 – 48 hrs para
que la levadura o bacteria se desarrolle, multiplique y crezca.
Luego este medio de cultivo con bacterias o levaduras, para llevarlo a conservación se trabaja en una
Cámara de Flujo Laminar o al lado de un mechero, paso posterior verterlos en viales, luego llevar los
viales estériles ( sus tapas deben estar en la 1° posición que es de intercambio) a un equipo llamado
“Liofilizador” el cual baja la T° a -2°C, la muestra se congela dentro del vial. Una vez que el equipo a
enfriado a -2°C, crea un vacío profundo de 2-5 mmHg en ese vacío el agua se va a sublimar , se va a
vaporizar va a salir de vial quedando dentro solo la levadura o la bacteria.

Paso posterior coloco a la 2° posición la tapa de los viales la cuales estarían selladas, luego cubro los
viales con papel metalizado y lo coloco al refrigerador a 4°C. Uno de los viales me va a servir para
manipular y el otro solo para reproducción y posterior conservación.

La liofilización se usa principalmente en el campo del farmacéutico: para conservación de

Antibióticos, Microorganismos , Medicamentos.
b) TUBOS DE ENSAYO PICO DE FLAUTA EN MEDIO ESTÈRIL
Tengo dos tubo en pico de flauta donde se encuentra el medio de cultivo solido estèril, en los cuales
a partir de otro tubo que tenga levadura se realiza las siembras ( asa recta ) en una cámara de flujo
laminar o al lado de un mechero. Posterior a este paso llevar a incubar los tubos con la siembra durante
48 hrs a 30°C donde se produce el desarrollo y crecimiento. Luego para su conservación llevar a un
refrigerados a 4°C. Siempre hacerlo por duplicado. A un lado los tubos para manipulación ( repican,
aplican o se regalan) y a otro lado los tubos para la conservación.
Después de un tiempo el medio de cultivo empieza a secarse. Y de esos tubos de nueva manera se
hace el proceso anterior y se obtienen dos tubos nuevos para conservación y manipulación.
c) SECADO EN SPRAY Y ENVASADO AL VACÍO EN ATMOSFERA INERTE
Se multiplica grandes cantidades de bacterias o levaduras por asimilación por un asimilador grande
un biorreactor; primero voy a hacer vaporización a baja temperatura para que sea viable.
Grandes cantidades de bacterias o levaduras se decantan y queda un lodo el cual se lo lleva q a una
1° centrifugación a 1500 rpm ( lodo de gran volumen) , posterior de hace una 2° centrifugación a 4000
rpm ( lodo de menor volumen), con lo cual llego a concentrar este lodo de levaduras o bacterias; luego
evaporo al vacío hervir a 35°C ( donde se da la perdida de agua) con lo cual se puede hacer una
relación de que tengo 70% de sólido y 30% de agua… luego lo llevo al secado en Spray ( que es un
gran tubo cilíndrico), en el cual posee un disco que gira a 2000 rpm donde coloco la muestra, donde
este lodo entra a una ranura del tubo que lo va a atomizar, ya estas partículas atomizadas con
contracorriente de aire caliente , las bacterias tienden a descender totalmente secas al cual se añade
un poco le líquido para su venta, para que estas no se dispersen al aire por un simple movimiento o
flujo de aire.
Los sustratos que se utilizan para producir productos por fermentación o asimilación son muchos; los
cuales deben cumplir ciertos requisitos; actualmente se utilizan :
 Sustratos renovables: ( provenientes de la agricultura e industria)
 Sustratos no renovables: (provenientes del petróleo)
Los 5 requisitos para la selección de sustratos son:
1. Disponibilidad y abundancia ( cantidad , localización); ejm: en el mar tengo abundante
agua, pero poca agua disponible para tomar. Ejm. El suero de la leche es muy disponible
para producir otros productos lácteos , pero no es abundante.

2. Precio ( costo del sustrato o materia prima representa el 30 -50 % del costo total)

 Costo: cuánto cuesta producir una cantidad de algún producto en el mercado ( en

referencia a la siembra, aporcar, cultivo, cosecha, etc)
 Precio: Lo fija el mercado

3. Toxicidad ( sustratos industriales y sustratos agrícolas) ; si yo parto de un sustrato toxico

obvio tendre un producto toxico)

4. Eficiencia en la conversión
Ejm: pan

= masa del producto = 100 Kg de Levadura seca = 0,5 ----- 50%

Rendimiento masa del azúcar 200 Kg de azúcar

 5. Pretratamiento del sustrato
Ejm: Maíz
Primer paso la recepción del maíz , luego paso a moler luego pasa al proceso de;
Gelatinización : Liberación del almidón
Licuefacción : se hace la división del almidón en dextrinas ( con alfa amilasas)
Sacarificación: se hace la división de la dextrinas ( con beta amilasas)
Filtración: se elimina la casacarilla o cualquier residuo, después de filtrar se tiene un líquido claro
que es una mezcla de azucares y aminoácidos.
Dosificación: ese líquido claro se lo completa con otros nutrientes
Pasteurización: luego se procede a pasteurizar; lo que hace que el sustrato esté libre de
microorganismos.

“ Un sustrato debe ser asimilable ( se lo hace con pretratamiento del sustrato) , debe ser completo (
dosificación) y debe estar libre de microoganismos ( pasteurizado)”

Hacer el pretratamiento de diferentes sustratos; debemos saber cómo se lo realiza.