REPLICACIÓN Y

EXPRESIÓN GENÉTICA

M.Sc. Mauricio Quiroz Jara

Fig. 9.8 Some of the molecular events that control progression through the cell
cycle
in yeasts

La replicación ocurre
solo una vez durante el
ciclo celular y
específicamente a lo
largo de la fase S de la
interfase.
 Características Generales de la Replicación

1. Origen de replicación y Síntesis Bidireccional

2. Síntesis Semiconservativa
3. Hebra continua y discontinua (fragmentos de Okasaki)
4. Dirección de polimerización 5’ a 3’
5. Enzimas DNA polimerasa:
• Procariotas: I, II y II.
• Eucariotas: α, β, γ, δ y ε.
6. El complejo del replisoma (Una batería de moléculas
accesorias)
 1. Orígenes de Replicación y Síntesis Bidireccional

•Un solo origen en procariotas (Ori C en E. coli)

•Varios orígenes en eucariotas

Nota: La replicación es bidireccional

Los sitios de origen son reconocidos por proteínas

Horquilla
replicación
En el DNA nuclear de
eucariotas hay muchos
orígenes de replicación
(~500 en levaduras y
60000 en mamíferos).
Cada unidad de
replicación es un
replicón. La replicación
es bidireccional
06_09_Replic.forks.jpg
2. Síntesis Semiconservativa
Cada hebra sirve como molde para generar una cadena
complementaria.

8
Posibles modelos de replicación
 Experimento
•Semiconservativa: una cadena sirve de molde para una
nueva cadena
•El experimento de M. Meselson y F. Stahl (1958)
demuestra que la replicación es semiconservativa

Mathew Meselson Frank Stahl

06_04_replic.rounds.jpg
3. Cadenas Continua y Discontinua
•Componentes de la Replicación:

•Cebador (pequeño RNA 2-60 nucleótidos

añadido por enzima primasa o RNA pol que
provee 3’ OH)
•Ligación (DNA ligasa, enlace fosfodiéster)

•Cadena Continua (cadena adelantada) y

•Cadena Discontinua (cadena retrasada)

•Fragmento de Okazaki por DNA pol III
(1500 bp en procariotas y 150 en eucariotas)
•Pol I elimina cebador 3’ -> 5’ y llena huecos
(gap)
 Fragmentos de Okazaki

• RNA is added by Primase (3 - 10 bases)

• DNA is added by DNA Pol alpha
Primase can start RNA synthesis de novo
We have a RNA/DNA joint, so RNA is involved in eukaryote DNA replication
Relleno de espacios entre fragmentos de Okazaki
• RNA primer removed by RNase H
• DNA Pol delta fills the gap
• DNA Ligase - the gap closer
 4. Dirección de polimerización

Las polimerasas conocidas añaden

nucleótidos solamente en la dirección
5’  3’
 3’ 5’

3’ 5’ 3’ 5’
 5. Enzimas de Síntesis
•Enzimas que sintetizan el DNA: DNA polimerasas
•Procariotas
•DNA pol I (rellena huecos y repara)
•DNA pol II y III (función principal en la síntesis)
•Añade bases en ambas cadenas en la dirección 5’  3’
•Requiere un 3’ OH final
•Eucariotas
•5 tipos de polimerasas
• y  principales en replicación
•,  y  exonucleasas
•Corrección de pruebas: actividad 3’  5’ exonucleotídica.
Sustituye bases mal emparejadas (10-5) por correctas (10-7)

Comenten un error cada 108 a 109 de pares de bases.

 Corrección de las cadenas nuevas de DNA

• DNA polymerase initially

makes about 1 in 10,000
base pairing errors
• Enzymes proofread and
correct these mistakes
• The new error rate for
DNA that has been
proofread is 1 in 1 billion
base pairing errors

22
Resumen
 DNA Damage & Repair
• Chemicals & ultraviolet
radiation damage the DNA in
our body cells
• Cells must continuously repair
DAMAGED DNA
• Excision repair occurs when any
of over 50 repair enzymes
remove damaged parts of DNA
• DNA polymerase and DNA
ligase replace and bond the
new nucleotides together
25
Dogma Central de la
Biología Molecular
Modificaciones del Dogma central de la
Biología Molecular
 Participación de las macromoléculas en la expresión
génica
•El DNA almacena la información.
•Los RNAs son transportadores de la información del DNA a las proteínas.
•Las proteínas ejecutan funciones asignadas específicamente.
Genes: Las bases de la herencia
Genes: Las bases de la herencia
 ¿Qué es un gen?
• Es una secuencia de nucleótidos en la molécula de ADN,
equivalente a una unidad de transcripción.
• Contiene la información, a partir de la cual se sintetiza un
ácido ribonucleico: de transferencia, ribosomal o
mensajero (proteína).
Estructura normal
de los genes
• Transcripción = síntesis de ARN.
• Ocurre en el interior del núcleo (Eucariotas).
• Se inicia en sitios específicos llamados “promotores”.
• Necesita:
– Una cadena de DNA que actúe como molde (Solo se usa la
hebra de DNA de 3’ a 5’ para formar el RNA)
– Enzimas: ARN-polimerasa (dirección 5’ a 3’).
– Ribonucleótidos trifosfato de A, G, C y U. Se abre una
pequeña sección de DNA.
– Otras proteínas auxiliares.
• Etapas del Proceso:
– Iniciación, Elongación y Terminación
Modelo de la burbuja de Transcripción
Transcripción en Eucariotas
La transcripción en eucariotas es mucho mas compleja…
PROMOTOR
El promotor es una secuencia en el ADN que define el sitio de iniciación
de la transcripción del ARN.

Los promotores más frecuentes son los de tipo TATA (secuencia consenso
TATAAA) y CCAAT (secuencia consenso GGCCAATCT), denominados
motivos o cajas (box) por su alta conservación evolutiva.

• La TATA box está localizada 20-30 pb corriente arriba del sitio de inicio de
la transcripción (+1).

• LA CAAT box se encuentra unas 80 pb aguas arriba del sitio de iniciación

de la transcripción.

Si bien los promotores están preferentemente localizados corriente arriba

(5’) del inicio transcripcional, algunos pueden ubicarse corriente abajo (3’)
o bien ser de tipo intragénicos.
Existen factores de transcripción que se unen
a secuencias promotoras generales y otros a
secuencias específicas
La transcripción esta regulada por muchísimas
proteínas!!!
TRADUCCION
• Traducción = síntesis de proteínas.
• Intervienen los tres tipos principales de RNA.
• Necesita:
– Una cadena de RNAm que actúe como molde (Lleva
la información para la secuencia de aminoácidos de
la proteína
– Complejo enzimático: RNAr-Proteínas (Ribosoma).
– Aminoácidos unidos a RNAt de manera específica .
– Otras proteínas auxiliares (las aminoacil tRNA
transferasas).
• Etapas del Proceso:
– Iniciación, Elongación y Terminación
 Formación de una proteína

Iniciación Elongación Terminación

El Código Genético
 Propiedades del código genético
• Unidireccional – lee de 5’ a 3’
• No es superponible - codón independiente, (lee de tres
en tres)
• Colineal – la secuencia de a.a. corresponde a una
ubicación de la secuencia de cada tres nucleótidos.
• Redundante – la mayoría de los a.a. pueden ser
codificados por varios codones.
• Universal – el mismo código se cumple para todos los
seres vivos.
• Señal iniciadora – AUG corresponde a formil-metionina.
• Señal de terminación – UAA, UAG, UGA, tripletes sin
sentido.
La expresión génica
viene determinada
por la percepción
celular de señales.

Algunas señales son

extracelulares, otras
son intracelulares
Las múltiples señales que llegan a las células requieren
mecanismos de regulación y coordinación
La regulación de un gen se refiere al control celular
de la aparición de un producto génico en un
tiempo (etapa celular) y cantidad definidos.

Para la mayoria de los genes el punto central de

regulación es la transcripción (formación de
mRNA).
 Objetivos de la regulación a nivel celular
• Armonía estructural, equilibrio celular

• Adaptación a condiciones ambientales cambiantes (organismos unicelulares)

• Diferenciación celular

Objetivos de la coordinación a nivel de organismo

• Integración de las actividades celulares de diferentes tejidos, órganos y sistemas

• Respuesta coordinada y adaptación a cambios ambientales

• Desarrollo
Niveles de Regulación Génica
Hay varios puntos de regulación:

Transcripcionales
 Modificaciones de la cromatina
 Inicio de la Transcripción
Capacidad de terminar la transcripción.

Post-transcripcionales
 Estabilidad del mRNA.
 Transporte del mRNA.
 Degradación del mRNA.
 Traducción

Post-traduccionales
 Maduración de la proteína.
 Necesidad de cofactores.
 Degradación de la proteína.
 Modificaciones del DNA y la Cromatina

• Estructurales
– Las zonas que se encuentran
superenrrolladas no son activas
transcripcionalmente.
– Se controla por metilaciones,
fosforilaciones y acetilaciones de
las histonas.

• Quimicas
– La metilacion de citocinas
configura zonas de
“silenciamiento transcripcional”
 Regulación de la transcripción

¿Qué causa que un producto génico (proteína) sea

producido bajo ciertas condiciones y no otras?

EXISTEN PROTEÍNAS REGULADORAS QUE SE

UNEN AL DNA
Motivos de union al DNA

• Hélice-giro-hélice
• Helice-loop-hélice
• Dedos de zinc
• Cierre de Leucinas
• Receptor esteroideo
• Homeodominio
Las proteínas pueden “Leer” la forma
externa del DNA

• La geometría de la doble hélice del DNA

depende de la secuencia nucleotidica

Surco
menor

Surco
mayor