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REVISTA COLOMBIANA DE QUÍMICA, VOLUMEN 26, No.

2 DE 1997

DISEÑO Y PUESTA EN MARCHA DE UN "SISTEMA SEMICONTINUO EN


DOS ETAPAS: HIDRÓLISIS • FERMENTACIÓN" PARA LA PRODUCCIÓN
DE ETANOL A PARTIR DE ALMIDÓN DE PAPA USANDO
SIMULTANEAMENTEAs/?ergi7/MS nigery Saccharomyces cerevisiae
Amleto León Téllez*, Graciela Chálela Alvarez, Alba Lucia Roa

Recibido; Julio 31/97 - Aceptado: Octubre 27/97

K e y w o r d s : bioproduction, ethanol, results were similar to those obtained


starch, single protein unicelular, As- by the classic method the monocultive
pergillus niger and Saccharomyces but lower bioproduction times. The
cerevisiae, bioreactor. starch hydrolysis and its subsequent
fermentation produce high amount of
biomass and enzymes as a collateral
RESUMEN products of ethanol, those can be re-
moved during the process.
Se describe el diseño y evaluación
de las variables que gobiernan el sis-
tema semicontinuo en dos etapas: hi- INTRODUCCIÓN
drólisis - fermentación para la produc-
ción de etanol a partir de almidón de En la actualidad, los proceso más
papa usando simultáneamente Aspergi- utilizados, aunque no tan rentables para
llus niger y Saccharomyces cerevisiae, la obtención de etanol a partir de almi-
con resultados comparables a los del dón, son los que realizan una hidróli-
método clásico de monocultivo pero con sis previa para transformar este último
tiempos de bioproducción inferiores. a glucosa y, posteriormente, fermentar
La hidrólisis del almidón y posterior ésta a etanol mediante levaduras. Se
fermentación produjo cantidades sig- ha intentado, con resultados promete-
nificativas de biomasa, azúcares sim- dores eliminar el paso de sacarificación
ples, y enzimas como productos cola- y licuefacción enzimática mediante el
terales al etanol. empleo de un cocultivo simbiótico de
organismos amilolíticos y fermentado-
res de azúcares, disminuyendo así, los
ABSTRACT tiempos de producción.

The design and evaluation of the Dentro de los cultivos no convencio-


variables that govern the continuous nales, la papa es uno de los más pro-
system in two phases: hydrolysis - fer- metedores para la obtención de etanol
mentation by tíie production of ethanol en nuestro país, debido a su alto conte-
from potato starch using simulta- nido de hidratos de carbono fácilmente
neously Aspergillus niger and Saccha- fermentables, la rusticidad de la plan-
romyces cerevisiae are described. The ta y los altos rendimientos obtenidos.
Dentro de éste contexto se sitúa la pre-
sente investigación que se inclina al
aprovechamiento del recurso agrícola,
almidón de papa, como fuente energé-
•Escuela de Química. Universidad Industrial
tica en la producción de etanol y el
de Santander. Carrera 27 con 9. Bucaramanga, aprovechamiento de los productos in-
Colombia. termedios del bioproceso como son la

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proteína unicelular, la glucosa y los El bioreactor.


preparados crudos de amilasas.
El Bioreactor semicontinuo en dos
En nuestro país la producción de etapas Hidrólisis - Fermentación cons-
papa promedio con 176.200 Ha culti- ta de un reactor por cada etapa del
vadas en 1994 fue de 2'660.000 Tone- proceso. Cada reactor tiene una capaci-
ladas (1), si consideramos el porcenta- dad de 2 litros construido en vidrio con
je de desperdicios del 3% por falta de tapas esmeriladas con cuatro accesos;
transporte, almacenamiento y conser- dos para la entrada y salida de gases,
vación tendríamos alrededor de 79.800 una para suministro de inoculo y de
Toneladas de papa residual al año que medio nuevo y otra para monitoreo de
podría ser utilizada en la producción muestras y control de temperatura (ver
de almidón, que sería de aproximada- figura 1. para mayor ilustración). Entre
mente 15.960 Toneladas, que por hi- los reactores se encuentra el Biofiltro,
drólisis enzimática se obtendría 15.162 de 1 litro de capacidad en vidrio con
Toneladas de azúcares fermentables y tapa esmerilada y unido con los reacto-
que por fermentación es posible produ- res por medio de conectores en vidrio
cir alrededor de 50 millones de litros provistos de válvulas de paso tipo
de alcohol. bureta. Dentro del biofiltro se encuen-
tra primero el prefiltro, que es una ma-
Paralelamente a estos hechos, la cre- lla circular en alambre que soporta una
ciente preocupación por la conserva- capa de lana de vidrio de 3 mm de
ción del medio ambiente se está plas- espesor con el fin de retener las partí-
mando en legislaciones concretas que culas más grandes como las dextrinas y
obligan, entre otras medidas, al uso de el micelio de Aspergillus niger; a 4 cm
combustibles menos contaminantes, del prefiltro se encuentra el filtro de
como el etanol. El Ministerio del Me- membrana de 0.2 mieras el cual retiene
dio Ambiente mediante Resolución N° las unidades reproductoras de Asper-
898 de Agosto 23 de 1995, establece gillus niger, las conidias, garantizando
que a partir de Enero 1 del 2001 las la esterilidad del los hidrolizados de
gasolinas colombianas deben tener oxi- almidón que van al reactor de fermen-
genados para disminuir las emisiones tación con la Saccharomyces cerevi-
nocivas ambientales. siae. Para disminuir el tiempo de fil-
tración y aumentar su eficiencia el
Con el diseño y puesta en marcha de biofiltro posee un desprendimiento la-
un sistema semicontinuo de dos eta- teral para la conexión a la bomba de
pas: hidrólisis-fermentación se garan- vacío con su respectiva trampa, otra
tiza una producción de etanol y de sus ventaja del biofiltro es su fácil remo-
productos intermedios de una manera ción para el cambio de las membranas
más acelerada que los métodos tradi- en caso de que se taponen sin necesi-
cionales de mono y cocultivo. dad de interrumpir el proceso conjunto
de hidrólisis y fermentación.

PARTE EXPERIMENTAL Se realizaron una serie de ensayos


preliminares con el fin de optimizar la
Los microorganismos. operación del bioreactor, una vez rea-
lizados, se programaron los experimen-
Las especies tipo nativo del Aspergi- tos en propiedad estudiando las varia-
llus niger y Saccharomyce cerevisiae bles características de un cultivo con-
utilizadas en este estudio fue suminis- tinuo.
trada por el Laboratorio de Investiga-
ciones Microbiológicas de la Universi- Las variables objeto de estudio fue-
dad Industrial de Santander. ron: Velocidad de crecimiento, tiempo
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de generación, sustrato limitante, con- Condiciones de cultivo para la etapa


centración del producto, concentración de hidrólisis.
celular, flujo volumétrico, tasa de di-
lución como base para la determina- Para todos los experimentos la ino-
ción de la ií , K , productividad, con- culación fue de aproximadamente 10'
centraciones de biomasa y sustrato en conidiosporas, conteo realizado me-
el equilibrio. Determinando lo anterior diante cámara de Neubahuer, las con-
se puede decir que se tiene la descrip- centraciones de las sales del medio de
ción experimental del cultivo continuo cultivo corresponden al medio mineral
de acuerdo a la Teoría del Quimiostato Czapek (composición, g/Iitro de NaNO^,
para cada etapa del proceso. 3; K,HPO^, 1; M g S 0 / 7 H , 0 , 0.5; KCI,
0.5; FeSO/7HjO, 0.01) y'almidón de
Se realizaron 3 experimentos com- papa como fuente de carbono. El volu-
pletos para concentraciones de almi- men total del medio fue de 1000 mL,
dón iniciales de 2, 4, y 8 g/lOOmL res- se suministró oxígeno al medio duran-
pectivamente. En cada experimento se te todo el proceso mediante bomba de
realizaron los siguientes pasos: Prime- acuario (Power 500, Aquarium Air
ro hidrólisis del almidón de papa por Pump) con una tasa de volumen de aire
Aspergillus niger a la concentración aproximadamente de 90 litros por hora.
inicial de almidón indicada, para un
volumen de 1 litro de cultivo y un tiem- Condiciones p a r a la etapa de fermen-
po de hidrólisis de 60 horas en la pri- tación.
mera etapa y 48 horas después de cada
suministro de medio nuevo. El segun- Para todos los experimentos la ino-
do paso, una vez trascurrido el tiempo culación fue de aproximadamente lO'
de la hidrólisis es la filtración de 500 levaduras, conteo realizado mediante
mL de hidrolizados eliminando Asper- cámara de Neubahuer, las concentra-
gillus niger y la dextrina limite con el ciones de las sales del medio de culti-
fin de "esterilizar" el futuro medio para vo corresponden al medio mineral pro-
la fermentación de los azúcares en el veniente del cultivo de la hidrólisis
tercer paso. En este ultimo paso el fil- una vez retirado el Aspergillus niger,
trado es recibido en el bioreactor de la fuente de carbono corresponde a los
fermentación que contiene el inoculo azúcares producto de la hidrólisis del
de Saccharomyces cerevisiae en un almidón. El volumen total del medio
medio de hidrolizado de almidón con fue de 1000 mL. Las concentraciones
el fin de eliminar la etapa de adapta- de azúcares están indicadas para cada
ción y arrancar en etapa de crecimien- experimento al igual que los intervalos
to exponencial para la producción de de muestreo. Cada muestra tomada fue
etanol. El tiempo de fermentación al- filtrada con el fin de separar la levadu-
cohólica fue de 48 horas a condiciones ra a través de dos capas de papel filtro
anaeróbicas. cualitativo Whatman. La masa celular
fue secada a 110 °C con pesos constan-
El suministro de medio e inoculo tes para evaluar la proteína unicelular.
nuevo, 500 mL, para el bioreactor de Los filtrados fueron utilizados para la
hidrólisis se realiza una vez se hayan cuantificación del alcohol los azúcares
evacuado los 500 mL de hidrolizado reductores y la glucosa.
hacia el biofiltro transcurridas las 60
horas iniciales de hidrólisis, después Determinación de nitrógeno y pro-
el periodo de suministro se realiza cada teína en la biomasa.
48 horas para un flujo volumétrico de
500 mL/48 horas en las dos etapas. Se La determinación de nitrógeno total
consideraron tres suministros para cada se realizó por el método de Kjeldalh
experimento a intervalos de 48 horas. (2).
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Determinación de c a r b o h i d r a t o s to- etapa pueden predecirse para un valor


tales. dado de la tasa de dilución si se cono-
cen las constantes M , , K y Y del or-
Los azúcares totales fueron determi- ganismo usado.
nados en muestras duplicadas de fil-
trados fúngales con el método de fenol- S = K D / n^^^ - D
ácido sulfúrico (3).
x = Y(S„-(KD/;.„,-D))
Determinación de los azúcares reduc-
tores. donde:

Los azúcares reductores fueron de- S = concentración de sustrato en el


terminados en muestras duplicadas de reactor en equilibrio estacionario.
filtrados fúngales con el método de
Bernfeld, utilizando el ácido 3,5-dini- X = concentración de masa celular en
trosalicílico. el reactor en equilibrio.

Determinación del almidón en el me- p.^^^ = velocidad específica máxima de


dio. crecimiento.

La determinación de almidón se hizo D = tasa de dilución.


mediante lecturas de absorbancias del
complejo coloreado de yoduro-yodato Y = constante de conversión o rendi-
más almidón a 640 nm contra una cur- miento que describe la relación entre
va de calibración (4). la biomasa formada y el sustrato con-
sumido.
Determinación de glucosa.
P a r a la etapa de hidrólisis.
La Glucosa fue determinada por el
Método de Glucosa Oxidasa y peroxida- Ver tablas 1 y 2.
sa utilizando el Kit de Sera-Pak.
Para evaluar la constante específica
Determinación de la concentración de crecimiento (p) se gráfica el logarit-
de etanol. mo natural de la biomasa (X) versus
tiempo, de acuerdo a la ecuación de
La concentración del etanol fue de- Monod (dx/dt = px) integrada Ln(X) =
terminada mediante el método de gra- pt + cte de Integración; que no es más
vedad específica por picnómetro, de que la ecuación de una recta donde el
acuerdo a la metodología de la A.O.A.C valor de la pendiente es fi.
9.012/80.
Calculamos p una vez aplicada la
regresión lineal a los datos con el fin
RESULTADOS Y DISCUSIÓN de ajustarlos a la ecuación de una rec-
ta. Calculamos la pendiente de la recta
Los experimentos fueron planeados (Y) graneando X contra S, mediante
con el fin de describir el proceso en regresión lineal.
semicontinuo para cada etapa usando
las ecuaciones del Quimiostato, así las P a r a la etapa de fermentación.
concentraciones de la masa celular y
del sustrato en los reactores para cada Ver tablas 3 y 4.
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Tabla 1. Datos de crecimiento celular y disminución del sustrato a través del


tiempo en la etapa de hidrólisis (para los tres experimentos).
EXPERIMENTO EXPERIMENTO EXPERIMENTO
N° 1 N°2 N°3

Biomasa % Almidón Biomasa % Almidón Biomasa % Almidón


Tiempo
(X) (SI (X) (S) (X) (S)
(Horas)
g/lOOmL g/lOOmL g/lOOmL g/lOOmL g/lOOmL g/lOOmL

0 0.24 2.00 0.26 4.00 0.51 8.00


12 0.51 1.42 0.74 2.62 1.44 5.46
24 0.75 1.12 1.25 1.78 2.63 4.21
36 0.94 0.92 1.78 1.24 3.08 3.74
48 1.24 0.81 2.46 0.95 3.74 2.58
60 1.36 0.42 2.87 0.54 4.21 2.12

Tabla 2. Datos de biomasa, concentración de almidón y azúcar reductor en


los tiempos de suministro de nuevo medio de cultivo en la etapa de hidrólisis
(para los tres experimentos).
EXPERIMENTO EXPERIMENTO EXPERIMENTO
N" 1 N°2 N°3

% % % % % %
Tiempo Biomasa Almidón Azúcar Biomasa Almidón Azúcar Biomasa Almidón Azúcar
(Horas) (X) (S) Reductor (X) (S) Reductor (X) (S) Reductor
g/lOOmL g/lOOmL g/lOOmL g/lOOmL g/lOOmL g/lOOmL g/lOOmL g/lOOmL g/tOOmL

0 0.24 2.0 0 0.26 4.0 0 0.28 8.0 0

60.0 1.36 0.42 1.84 2.87 0.64 3.25 5.21 2.12 5.24

60.5 0.88 1.24 1.02 1.34 2.62 1.72 2.74 5.72 2.64
RI

108.5 1.84 0.21 1.94 3.21 0.16 4.20 5.23 1.64 7.42

109.0 0.94 1.12 0.81 1.64 2.38 2.06 2.92 5.32 3.64
R2

157.0 1.74 0.14 1.56 3.56 0.22 4.42 7.47 1.24 8.25

157.5 1.01 1.32 0.74 2.84 2.64 2.24 3.94 5.74 4.23
R3

205.5 1.87 0.10 1.62 3.92 0.24 4.12 8.12 0.96 8.76

R I ; Primera recarga con medio nuevo e inoculo.


R2 : Segunda recarga con medio nuevo e inoculo.
R3 : Tercera recarga con medio nuevo e Inoculo.
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Tabla 3. Datos de crecimiento celular y disminución del sustrato a través del


tiempo en la etapa de fermentación alcohólica (para los tres experimentos).
EXPERIMENTO EXPERIMENTO EXPERIMENTO
N° 1 N°2 N°3

Levaduras % Azúcar Levaduras % Azúcar Levaduras % Azúcar


Tiempo
(m.o./mL) Reductor (m.o./mL) Reductor (m.o./mL) Reductor
(Horas)
•10' g/lOOmL •10' g/lOOmL •10' g/lOOmL

0 2.4 1.84 1.4 3.25 4.2 5.24


12 48.2 1.36 56.2 2.41 46.2 2.54
24 94.3 1.02 108.3 1.86 121.4 1.25
36 286.2 0.76 321.6 0.94 392.3 0.86
48 621.3 0.14 716.1 0.21 784.2 0.12

Tabla 4. Datos de concentración celular, concentración de azúcar reductor y


de alcohol en los tiempos de suministro de nuevo medio de cultivo en la etapa
de fermentación (para los tres experimentos).

EXPERIMENTO EXPERIMENTO EXPERIMENTO


N° 1 N° 2 N°3

% % %
Tiempo Levad. Azúcar Etanol Levad. Azúcar Etanol Levad. Azúcar Etanol
(Horas) m.o./mL Reduc. g/lOOmL m.o./mL Reduc. g/lOOmL m.o./mL Reduc. g/IOOmL
•10' g/lOOmL •10' g/lOOmL •10' g/lOOmL

0 2.4 1.84 0 1.4 3.25 0 4.2 5.24 0


Suministro
Hidrolizado
de Almidón

48.0 621.3 0.14 1.04 716.1 0.07 1.86 784.2 0.12 2.54

48.5 304.5 1.04 0.47 364.2 2.16 0.78 382.3 3.86 1.31
Segundo
Suministro
Hidrolizados

96.5 824.3 0.25 1.31 0.05 2.42 824.3 0.02 2.92

97.0 425.3 0.92 0.56 495.3 2.38 0.56 472.2 4.23 1.52
Tercer
Suministro
Hidrolizados

145 921.3 0.12 1.34 1124.2 0.02 2.62 1221.6 0.04 3.42
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Cálculo de u , K , X y S p a r a las a 1.24 en la etapa de hidrólisis y 147.30


etapas de hidrólisis y fermentación. en la etapa de fermentación.

Para etapa de hidrólisis del almidón El valor de la dilución, D, (D = F/V,


de papa: ver tabla 5. flujo volumétrico entre el volumen de
cultivo) fue de 0.5L/48h/lL para to-
Para la etapa de la fermentación alco- dos los experimentos.
hólica: ver tabla 6.
A nivel industrial, teniendo en cuen-
Con los datos de las tablas 5 y 6 ta la cinética de crecimiento en cultivo
graficamos velocidad específica versus continuo es posible en función de la
concentración de sustrato, para así ob- productividad deseada, dimensionar
tener los valores de u igual a 0.038 con precisión los fermentadores y las
h ' y de K^ igual a 2.30 g/lOOmL en la instalaciones anexas (bomba, compre-
etapa de hidrólisis, y los valores de sor, extractor, columna de destilación)
^_^^^ igual a 0.124 h ' y de K^ igual a y de este modo reducir al máximo las
1.10 g/lOOmL en la etapa de fermenta- inversiones y los gastos de funciona-
ción alcohólica. El valor de Y se obtie- miento. Los cultivos continuos permi-
ne del promedio de los calculados en ten igualmente tener una producción
los tres experimentos, resultando igual homogénea, de calidad constante, lo

Tabla 5. Datos de velocidad específica de crecimiento y de la constante de


conversión p a r a las diferentes concentraciones de sustrato iniciales, en la
etapa de hidrólisis.
SUSTRATO
VELOCIDAD CONSTANTE DE
INICIAL
EXPERIMENTO ESPECIFICA CONVERSIÓN (Y)
Almidón
M (h') g biomasa/g almidón
g/lOOmL

1 2 0.016 1.10

2 4 0.037 1.22

3 8 0.038 1.40

Tabla 6. Datos de velocidad específica de crecimiento y de la constante de


conversión para las diferentes concentraciones de azúcar r e d u c t o r inicial, en
la etapa de fermentación.
SUSTRATO
VELOCIDAD CONSTANTE DE
INICIAL
EXPERIMENTO ESPECIFICA CONVERSIÓN (Y)
Azúcar reductor
Ií (h ') No. levad.xlO'/g a z ú c a r
iniciaL g/lOOmL

1 1.84 0.090 3.68

2 3.25 0.124 295.4

3 5.24 0.115 142.8


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cual es importante para las transfor- vegetables, Industrial & Engineering


maciones ulteriores. Chemistry, 15(3), 1963.

En el diseño y puesta en marcha del 5. Abouzied, M.M.; Reddy, A.C. Direct


reactor semicontinuo en dos etapas se Fermentation of Potato Starch to
logró, dentro de las limitaciones pro- Ethanol by Cocultures of Aspergillus
pias del diseño, describir las más im- niger and Saccharomyces cerevisiae.,
portantes variables del proceso conti- Appl. Environ. Microbiol. 1986, 52(5),
nuo. 1055-1059.

La hidrólisis del almidón y posterior 6. Grosz, R.; Stephanopoulos, G. Phy-


fermentación produjo cantidades signi- siological, Biochemical, and Mathema-
ficativas de biomasa, azúcares simples, tical Studies of Micro-Aerobic Continu-
y enzimas como productos colaterales ous Ethanol Fermentation by Saccha-
al etanol, que se pueden ir retirando romyces cerevisiae. I: Mathematical
durante el proceso semicontinuo. El sis- Model of Cellular Energetics and Ca-
tema también demostró una mejor rela- tabolism., B i o t e c h n o l Bioeng., 36,
ción y producción de etanol, si lo com- 1030-1040, 1990.
paramos con el monocultivo (5).
7. Banerjee, M.; Debnath, S.; Majum-
La fermentación bajo el sistema tie- dar, S.K. Production of Alcohol from
ne la ventaja particular de producir eta- Starch by Direct Fermentation., Biote-
nol industrial, siempre y cuando dicho chnol Bioeng., 32, 831-834, 1988.
etanol pueda ser económicamente re-
movido. El almidón es menos costoso 8. Fujii, M.; Homma, T.; Taniguchi,
que la glucosa como substrato de in- M. Synergisra of alpha Amylase and
ventario y el sistema produce directa- Glucoamylase on Hydrolysis of Native
mente su propia amilasa. Se puede ob- Starch Granules., Biotechnol Bioeng.,
servar que la tasa de productividad (P= 32, 910-915, 1988.
X. D) para transformar el almidón en
etanol, está cercana a los valores re- 9. García G., Mariano; Quintero R.,
portados para la transformación de Rodolfo y López M., Agustín; Biotecno-
la glucosa en etanol mediante la logía Alimentaría. Limusa Noriega Edi-
Saccharomyces cerevisiae ( 6). tores. México, 1993.

10. Godfrey, T. y Reichelt, J. Indus-


BIBLIOGRAFÍA trial Enzymology, The Nature Press,
1983.
1. Ballesteros, M.; Martínez, J. y
Carrasco, J. Obtención de Bioalcohol. 11. Goulter, P.R.; Potter, G.E. The Rate
Ingeniería Química. Madrid, España at Which Starch Becomes Suceptible
Febrero 1994. to Hydrolysis by Enzymes., Ind. Eng.
Chem., 13(4), 324-327, 1984.
2. AOAC. Ofificial Methods of Analysis
of the Association Oficial Anality 12. Hong, J. and Lee, C.K. Unsteady-
Chemist. De. Sidney Wiliiam. 1984. state operation of continuos fermentor
for enhancement of cell mass produc-
3. Wistler Roy, L. "Methods in Carbo- tion. Biotechnol. Bioeng. 30, 187,
hydrate Chemistry" Vol. 1, II, III y IV. 1987.
Academic Press 1964.
13. Hyun, H.H.; Zeikus, J.G. Simulta-
4. Nielson, J. Rapid determination of neous and Enhanced Production of
Starch: An índex to maturity in starchy Thermostable Amylases and Ethanol
REVISTA COLOMBIANA DE QUÍMICA, VOLUMEN 26, No. 2 DE 1997

from Starcha by Colcultures oi Clostri- 17. Olsvik, E.; Tucker, K.G.; Thomas,
dium thermosulfurogenes and Clostri- C.R.; Kristiansen, B. Correlation of
dium thermohydrosulfuricum., Appl. Aspergillus niger Broth Pheological
Environ. Microbiol. 49(5), 1174-1181, Properties with Biomass Concentration
1985. and the Shape of Mycelial Agreegates.,
Biotechnol. Bioeng., 42, 1046-1052,
14. Kim Hock; Lynda Ferguson and 1993.
Carlton Constanse. Conversión of Cas-
sava Starch to Biomass, Carbohidrates, 18. Quintero R., Rodolfo. Ingeniería
and Acids by Aspergillus niger. J. Appl Bioquímica. Teoría y Aplicaciones. Ed.
Biochem. 80-90, 1984. Alambra. México, 1981.

15. Mihail, R. and Straja, S. An 19. Renick, M. Genetic control of


analysis of the steady states of a radiation sensitivity in Saccharomyces
chemostat with applications to its cerevisiae. Genetics, 62:519-531, 1995.
design. Biotechnol. Bioeng. 29, 775,
1987. 20. Roukas, T. Ethanol Production from
Nonsterilized Carob Pod Extract by
16. Murphy, T; Cyanamid, A. Design Free and Immobilized Saccharomyces
and analysis of industrial experiments. cerevisiae Cells Using Fed-Batch
Chem. Ing. June. 1977. Culture., Biotechnol. Bioeng., 43, 189-
194, 1994.

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