ROESY

Definición

El experimento ROESY se basa en componentes de baja frecuencia de la densidad espectral

porque la interacción dipolar ROESY se produce cuando se aplica un spin-lock a los diversos Commented [MP1]: SPIN-LOCK: es una secuencia de
vectores de magnetización netos de los espines después de un pulso de 90 ° que coloca los pulsos que permite mantener la magnetización en el plano
transversal durante un período de tiempo determinado.
vectores de magnetización netos en el plano xy.

En el experimento ROESY, el intercambio de información de fase que conduce a la generación de

picos cruzados ocurre cuando los espines se alinean en el plano xy y a lo largo del componente de
campo magnético de la RF aplicada.

La interacción dipolar ocurre cuando los diversos spines tienen componentes alineados con el
campo B1.

En una muestra líquida, la densidad espectral por debajo de 1 MHz aumenta a medida que
aumenta el tiempo de correlación. Commented [MP2]: tiempo de correlación (Tc):
tiempo necesario para que el núcleo recorra una
circunferencia. (A mayor Tc menor movilidad).
Sistema de espínes acoplados dipolarmente (a través del espacio, en acoplamiento directo).
Identifica espines que evolucionan mediante relajación cruzada en condiciones de spin-lock
(espines fuertemente acoplados).

ROESY es similar a NOESY, excepto que el estado inicial es diferente. En lugar de observar la
relajación cruzada desde un estado inicial de magnetización z, la magnetización de equilibrio se gira
sobre el eje x y luego se bloquea por giro mediante un campo magnético externo, de modo que no
puede precesar.

Este método es útil para ciertas moléculas cuyo tiempo de correlación rotacional cae en un rango
donde el efecto Overhauser Nuclear es demasiado débil para ser detectable, usualmente moléculas
con un peso molecular de alrededor de 1000 daltons

en ROESY la constante de la tasa de relajación cruzada es siempre positiva.

EN ROESY EL NOE SIEMPRE ES POSITIVO

relajación cruzada: un spin transfiere magnetización a través del espacio al otro. Por tanto, la
intensidad de la señal del espín I cambia cuando se perturba el estado de equilibrio del espín
vecino. La perturbación puede realizarse mediante saturación o inversión con pulsos de
radiofrecuencia

En ROESY el NOE indirecto es de signo diferente por lo que se identifica inmediatamente.

Se diferencia del NOESY porque un NOE que aparezca en el NOESY y no se vea en el ROESY es
porque ese NOE es indirecto.

DESVENTAJAS
 - La principal desventaja con el experimento ROESY en comparación con el experimento
NOESY es que el experimento ROESY tiene una sensibilidad más baja para moléculas
pequeñas en soluciones no viscosas
- el Spin-lock requerido durante el tiempo de mezcla da como resultado el calentamiento de
la muestra, especialmente para soluciones saladas.

DIFERENCIA ENTRE ROESY Y TOCSY

- En TOCSY La frecuencia de Spin-lock se coloca típicamente en el centro de la ventana

espectral
- En ROESY la frecuencia de SPin-lock se coloca lejos de la ventana espectral

ESPECTRO

Los picos cruzados ROESY serán negativos (en relación con la fase de la diagonal) si surgen de
interacciones dipolares directas (el ROE), mientras que los picos cruzados derivados de la difusión
de espín (un efecto de tres giros o un ROE transmitido) serán positivos.

- Para dos espines acoplados directamente, las señales ROE son positivos.

TOCSY Los picos cruzados de TOCSY también se observan en muchos espectros ROESY, pero el
signo de estos picos cruzados es positivo e, de nuevo, les permite distinguirlos fácilmente de los
picos cruzados de ROE. Los picos cruzados derivados del intercambio químico en el espectro de
ROESY también son positivos.

El rango de los tiempos de correlación molecular en el estado líquido no es lo suficientemente

grande como para variar el signo de los picos cruzados que observamos en el espectro ROESY
porque la escala de tiempo de las interacciones dipolares es mucho más baja como resultado del
uso del mucho más débil Campo B1 en lugar de B0.

Secuencia de pulsos:

Después de una pulsación de 90º 1H de excitación, la magnetización

trasversal evoluciona durante un período t1 de evolución variable libre.

Tras el período t1, la aplicación de la secuencia spin lock hace que toda la magnetización sobre el
eje y evolucione por efecto la relajación cruzada. Así, si dos espines 1 y 2 están acoplados
dipolarmente, en el experimento ROE se transfiere directamente información desde I1y (que
evolucionó según T1 durante t1) al espín I2y (que evoluciona según T2 durante la adquisición, t2).

Sign of tocsy peaks is alway

Se trata de un experimento con spin-lock similar al TOCSY. Mientras que en los experimentos NOE
clásicos los cambios en las poblaciones se encuentran afectados por la relajación longitudinal (en
la dirección z), en el ROESY estos tienen lugar, debido a la relajación transversal, en la direccion y’
del sistema de coordenadas rotatorio durante el tiempo de spin-lock.

El tiempo que se requiere para un espectro ROESY es generalmente inferior al necesario para un
NOESY puesto que necesita un periodo de tiempo más corto para el spin-lock. Una desventaja del
ROESY se debe a la posibilidad de aparición de señales de correlación TOCSY, aunque mediante
algunas modificaciones en la secuencia de pulsos se pueden eliminar de forma completa.

El espectro de ROESY como se muestra en la fig. 2 para etilbenceno (fig. 3) contiene una diagonal y
picos cruzados. La diagonal consiste en el espectro 1D. Las señales de picos cruzados que surgen
de los protones que están cerca en el espacio. Por convención, la diagonal es negativa y todas las
señales de ROE deseadas son positivas y de fase pura. En la práctica, algunos trazan la diagonal
negativa y otros la grafican. Aquí, la diagonal se grafica como positiva y las señales de ROE son
negativas. Las señales ROE son intrínsecamente más débiles que las señales NOE adquiridas en
condiciones ideales. Sin embargo, para moléculas de tamaño intermedio, la intensidad NOE puede
ser cercana a cero. Además, cuando el tiempo de relajación longitudinal es largo, el tiempo de
relajación transversal puede ser mucho más corto, lo que permite la adquisición de ROESY mucho
más rápido que de NOESY. Los artefactos de tipo TOCSY aparecen en correlaciones que también
están vinculadas. La señal TOCSY es pura fase y negativa por convención, pero representada como
positiva aquí. El etilbenceno (fig. 3) no muestra correlaciones ROE fuertes. La correlación entre H1
'y H2' a 2,65 y 1,24 ppm es principalmente del tipo TOCSY. Una correlación a través del espacio
mucho más débil aparece entre H1 'y H2 a 2,65 y 7,20 ppm. Las señales de intercambio también
son negativas por convención, pero parecen positivas a medida que las trazamos. Además, los
artefactos (señales no deseadas) también aparecen en el espectro como rayas verticales
(interferencia y ruido f1) ya lo largo de la 'V' invertida. Estos artefactos rara vez están en fase con
las señales deseadas y aparecen en ubicaciones específicas (FIG. 4).

This has several consequences:

- off resonance, the efficieny of the ROE drops off with sin qi sin qj for the ROE from proton i to
proton j, where q is the angle between the spins' precession axis and the x,y plane. This angle can
be calculated for each spin from the ratio between the frequency offset (causing a precessing
about the z axis) and the spin-lock field (causing the x,y precession component):

TOCSY contributions ... yet another complication in ROESY spectra! The pulse sequences for ROESY
and TOCSY are virtually identical, therefore it is obvious that TOCSY transfer will also be observed in
a ROESY experiment. This will, of course, only affect protons which have a mutual sclar coupling!
106 Since TOCSY cross-peaks are also in-phase, but of the opposite sign as ROESY cross-peaks
(TOCSY: same sign as diagonal peaks; ROESY: opposite sign as diagonal), they will partially cancel
the ROESY cross-peak intensities, leading to distances that are too long. However, when the
crosspeak used for distance reference contains a large TOCSY contribution (as do all CH2 peaks!),
then the other cross-peaks appear too intense, resulting in distances that are too short.

TOCSY
Secuencia de pulsos:

El primer pulso de 90º pasa la magnetización longitudinal a magnetización transversal.

Pasado un tiempo T1 se aplica otro pulso de 90ºx que restaura parte de la magnetización
longitudinal.

El tercer pulso nos permite ver la variación de la intensidad de los distintos protones que provocan
la transferencia de polarización (se denomina pulso de medida).
TOCSY se usa generalmente en moléculas grandes con muchas redes de acoplamiento separadas,
como péptidos, proteínas, oligosacáridos y polisacáridos

El primer impulso de 90 ° x hace girar los vectores de magnetización en el plano xOy, en el que
evolucionan libremente durante el tiempo tl, bajo la influencia de su desplazamiento químico y las
constantes de acoplamiento escalares. Aplicamos entonces un bloqueo de giro en el eje x, que
significa un impulso de baja potencia o un conjunto de impulsos cuya duración representa el
tiempo de mezcla tm. Durante este tiempo, se intercambia la coherencia de giro del sistema. Al
aumentar el tiempo de mezcla aumentamos el número de transiciones visibles. Es decir, dentro
del mismo experimento, obtenemos la información de un COSY, de un LR COSY y de un relé COSY.