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Cultivo Del Rotìfero Brachionus SP y Copèpodo Nativos en Ambiente Controlado PDF
Cultivo Del Rotìfero Brachionus SP y Copèpodo Nativos en Ambiente Controlado PDF
ROSARIO CISNEROS
MARCO DE LA CRUZ
Contacto: vyepez@imarpe.gob.pe
2007
1. INTRODUCCION
No debemos olvidar que el origen de muchos de los mas estruendosos fracasos en esos
intentos no está tanto en la carencia de una dieta adecuadamente formulada desde el
punto de vista energético y nutritivo, como, en una incorrecta presentación física del
alimento, un desconocimiento de los ciclos saciedad-apetito de la especie en cuestión,
un inadecuado dispositivo de dispensación del mismo, la carencia/exceso de factores
atrayentes/repelentes en la mezcla alimentaria (Cuenca & Garcia, 1989)
La idea de producción del alimento vivo surge como respuesta a la necesidad de simular
la alimentación en condiciones naturales de las larvas de peces obtenidas en hatchery, la
misma que en el tiempo ha ido consolidándose como la mejor opción por factores
propios de cultivo.
En la trama trófica del mar los copépodos son el principal nexo entre los productores
primarios del pélagos y los consumidores secundarios. Visto de otra manera, más del
90% de la energía radiante en el mar es fijada por las microalgas y los principales
consumidores primarios son los copépodos (Raymont, 1963). Estos diminutos
crustáceos constituyen más del 70% de los componentes del zooplancton de todos los
mares, salvo contadas excepciones. Estas características les significa estar en la dieta de
la mayoría de los depredadores, entre los cuales se cuentan las especies que constituyen
recursos cultivables, como peces y crustáceos (Gee, 1987).
Los copépodos son muy apropiados para la alimentación larvaria de peces marinos
debido a su elevado contenido en ácidos grasos polinsaturados, pero su cultivo es
bastante difícil, realizándose en muy pocos criaderos. En general existen tres grandes
grupos de copépodos susceptibles de cultivo: a) Calanoides, b) Harpacticoides y c)
Ciclopoides (Ortega, 1991)
MATERIAL Y METODOS
ROTIFEROS
Colecta y Aislamiento
Las muestras fueron tomadas de la laguna “La Encantada” que está ubicada en Las
Salinas – Chilca, perteneciente al distrito de Chilca en el departamento de Lima a 65 km
al sur de Lima.
La muestra pasó por captación del medio natural realizado con ayuda de un calcal
pequeño con tamaño de malla de 53 µ y colocada en baldes plásticos de 4 litros,
traslado, recepción de muestras, adaptación, limpieza, purificación y aislamiento de
cepas.
Cultivo inicial
Se realizó el trasvase de cepas a baldes plásticos (4 litros) conteniendo 2 litros de agua
de mar, se inocularon los rotíferos a una densidad de 8 a 45 rot.ml-1.
Los trabajos de desdoble se realizaron con un tamiz de 40 µ de base y uno de 245 µ con
el cual se filtraron las partículas grandes y que constituían restos de fondo existente en
los baldes de cultivo, se alcanzó densidades de 15 a 103 rot.ml-1, con lo cual se inició el
cultivo intermedio en baldes plásticos de 10 litros.
Cultivo intermedio
En baldes de plásticos de 10 litros se inocularon los rotíferos procedentes del cultivo
inicial a una densidad de 12 a 22 rot.ml-1.
Los desdobles se realizaron con ayuda de un tamiz de base de 40 µ y uno de 245 µ con
el cual se filtraron partículas procedentes del fondo o suspensión del balde.
Cultivo masivo
Se realizó en tanques de fibra de vidrio de 0,1 m3 y 0,3 m3, partiendo en ambos tanques
con una densidad inicial de 38 rot.ml-1.
Los rotíferos fueron sembrados para el tanque de 0,1 m3, en 90 litros de medio de
cultivo y alimentados con levadura de panificación, no se le practicó renovaciones
parciales de agua.
Durante las diferentes etapas de cultivo a excepción del cultivo masivo, se registró la
presencia de la diatomea Skeletonema sp, formando una sustancia mucilaginosa en los
bordes y fondo de los recipientes y que trajo como primera consecuencia la disminución
drástica de la densidad de rot.ml-1 provocando así una caída del cultivo. Frente a este
problema se realizaron acciones como: (1) dejar decantar el medio de cultivo en los
baldes quitando la aireación por períodos cortos y rescatando después la suspensión del
cultivo, (2) variar condiciones de cultivo tales como la iluminación y por ende la
temperatura, rescatando también la suspensión. La recuperación resulto en algunos
casos eficaces y en otros no, a la par se fue recuperando el cultivo con lo producido en
las cepas y también con nuevas colectas del medio natural acelerando así la
recuperación de la producción.
Análisis de datos
K= ln Nt – ln No / T1 – T0
Donde:
ln = logaritmo natural
Nt =Numero de individuos en el tiempo t
No =Numero inicial de individuos
T1 - T0 =Tiempo en días
R= N2 – N1/ T2 – T1
Donde:
N1 =densidad al día 1
N2 =densidad al día 2
T2 – T1 =intervalo considerado
COPEPODOS
La muestra fue extraída con ayuda de una malla de 53 micras y trasladada en baldes
plásticos de 10 litros de capacidad, cerrados herméticamente previamente rotulados y
llevado al laboratorio para su adaptación, limpieza y posterior cultivo.
Adaptación
Consiste en la división de las muestras en un mayor número de recipientes a fin de
adicionar poco a poco cantidades de agua de mar filtrada, disminuyendo así la densidad
y adaptando a las especies a la salinidad de 35 ppm con la que se trabajará a lo largo de
su cultivo, luego se realizó el lavado de las mismas en envases plástico con tamiz base
de tamaño de malla 145 µ para separar adultos de nauplios.
Aislamiento
La selección de las cepas se realizó a través de pipeteo y al estereoscopio, esta consistió
en seleccionar hembras ovadas, las mismas que fueron colocadas en numero conocido
en vasos de precipitado de 500 ml con agua de mar filtrada y esterilizada (0.45 micras)
y se les suministró la microalga Nannochloris sp en concentración y volumen conocido,
se rotuló y almacenó en una incubadora a temperatura constante (18 ºC). Los cambios
de agua se realizaron cada 3 días por el consumo rápido del alimento y la producción de
excretas por los mismos.
Los copépodos obtenidos del medio natural, luego de pasar por las etapas de
acondicionamiento, lavado y purificación fueron colocados en envases de capacidad
conocido plásticos (10 litros) con agua filtrada a 1 micra, en un volumen de 5 litros con
250 mL/ día (microalgas), registrándose densidades poblacionales y tallas existentes.
Al finalizar la sexta semana las densidades de cultivo fueron disminuyendo hasta la
mortalidad total pudiéndose deber a la escasez de alimento o a las condiciones de
cultivo ya que estas permanecieron en ambientes con temperaturas superiores a 24 ºC.
Las cepas mantenidas en una incubadora a 18 ºC se mantuvieron mejor y con mayor
prolongación en días de cultivo.
RESULTADOS
En la Tabla 13, se muestra los resultados obtenidos del crecimiento poblacional del
rotífero Brachionus sp, mantenidos en una incubadora a temperatura constante, sin
iluminación ni aireación y con la adición diaria de alimento algal Nannochloris sp.
partiendo de una densidad promedio de 37 rot.ml-1, alcanzando un densidad absoluta
hacia el día 8 de cultivo con 202 rot.ml-1.
En la Figura 6 se observa la talla de lórica, corona, y huevos del rotífero Brachionus sp.,
con un aumento de 10 x.
DISCUSIÓN
Los datos registrados de tallas unitarias del rotífero Brachionus sp. procedentes de la
laguna “La Encantada” y que muestran promedios de 189 micras y 167 micras para las
tomas de muestras realizadas el 21/09/07 y 24/10/07, indicarían según IMARPE (1997)
que podría tratarse del rotífero Brachionus plicatilis, línea S, ya que este señala que
pertenece a esta especie si la talla de la lorica oscila entre los 100 a 210 micras, y
pertenece a la línea “L” si el tamaño de lórica oscila entre los 130 a 340 micras. De
manera distinta, Carrera (1999) considera que la línea “L” abarca dimensiones de 160 –
250 micras. Por otro lado, Ortega (1991) señala que Brachionus plicatilis presenta un
tamaño que oscila entre los 300 – 350 micras.
En las diferentes etapas de cultivo se observó que la densidad absoluta fue obtenida
entre los 4 – 7 días de cultivo, siendo las densidades de siembra diferentes tal como las
variaciones de temperatura a lo largo del día o periodo de cultivo, esto se debería a
condiciones naturales o propias de la especie, según Hoff & Snell (2001) quienes
establecen que los rotíferos (Brachionidae) cultivados a 25 ºC viven en promedio de 6 –
8 días para el caso de la hembras y cerca de 2 días para el caso de los machos.
El uso de la microalga Nannochloris sp. como alimento del rotífero Brachionus sp. fue
materia de análisis en diferentes experimentos. Carrera (1999) obtuvo densidades altas
de cultivo, por otro lado De La Cruz & Millares (1974) señalan la importancia de esta
microalga por su capacidad de fotosintetizar usando nutrientes inorgánicos y asimilar
sustancias orgánicas del medio, su pequeño tamaño y los mas importante su resistencia
a altas temperaturas lo que establece una relación favorable con el cultivo de los
rotíferos.
CONCLUSIONES
Las cepas obtenidas a través de distintos aislamiento fueron renovadas con menor
frecuencia debido a que en sucesivos aislamiento y con condiciones cada vez más
favorables en temperatura y alimento, fueron tomando un ritmo productivo más estable
y menos expuestos a contaminaciones.
El cultivo inicial e intermedio mostró una evolución notable en cuanto a las densidades
poblacionales obtenidas, pero hay que recalcar la influencia directa del factor
temperatura el cual se evidencia más en los últimos tres meses de la experiencia.
La alimentación fue la base del cultivo, las dietas probadas no mostraron superioridad
alguna sobre la suministrada normalmente (Nannochloris sp.) pero constituyeron
alternativas de fácil uso y bajo costo por ello pueden ser consideras dentro de un sistema
de producción.
REFRENCIAS BIBLIOGRAFICAS
De La Cruz, A., y Millares, N., 1974. Método de cultivo masivo de Brachionus plicatilis
(Rotifera) a escala experimental. Ciencias serie 8. Investigaciones Marinas. Nº 11. 1
– 29 p.
Fielder. D. S., Purser, G. J., Battaglene, S. C., 2000. Effect of rapid changes in
temperature and salinity on availability of the rotifers Brachionus rotundiformis and
Brachionus plicatilis. Aquaculture 189: 85–99 p.
Hoff, F. H., Snell, T. W. 2001. Plankton culture manual. Florida Aqua Farms. Fifth
edition. 60 – 94 p.
Ismiño, O. 2002. Cultivo masivo de alimento vivo para larvas de peces. Instituto de
Investigaciones de la Amazonía Peruana IIAP. Programa de ecosistemas acuáticos.
Centro de investigaciones Quistococha. Aparatado postal 784. Iquitos – Perú. 23 –
24 p.
Klein Breteler W., N. Schogt y S. González. 1990. On the role off food quality in
grazing and development of life stages, and genetic change of body size during
cultivation of pelagic copepods. J. Exp. Mar. Biol. Ecol., 135: 177-189.
Raymont, J.E.G. 1963. Plankton and productivity in the oceans. Pergamon Press,
Oxford, 660 pp.
Soorgelos, P:, Tackaerts, W., P. Larger, P. Lavens (1989) El cultivo y uso de la Artemia
en acuacultura. En: El cultivo del camarón, langostinos y cangrejos en el mundo:
bases y tecnología, J.C. Chávez y S. Nishizaki. Mc Graw Hill. México 187 pp
Srivastava, A., Hamre, K., Stoss, J., Chakrabarti, R., Tonheim, K. 2006. Protein content
and amino acid composition of the live feed rotifer (Brachionus plicatilis): With
emphasis on the water soluble fraction. Aquaculture 254: 534–543 p.
a
Temperatura (ºC)
Medio de cultivo Promedio
08:30 12:00 16:00
22.7 23.3 23.2 23.1
24 22.8 22.9 23.2
23.5 23.6 23.7 23.6
26 27 26 26.3
26 27 27 26.7
28 29 28 28.3
25.0 25.5 25.1 25.2
b
Temperatura (ºC)
Ambiental Promedio
08:30 12:00 16:00
23.4 23.2 23.5 23.4
23.4 25.5 24.5 24.5
26.5 25.5 23.5 25.2
28 29 28 28.3
28 29 28 28.3
29 30 28 29.0
26.4 27.0 25.9 26.4
Tabla 2. Registro de temperaturas en cultivo inicial e intermedio
del Rotifero Brachionus sp, en baldes plásticos de 4 y 10 L, en ambiente semicontrolado
e iluminación constante. (a) Medio de cultivo y (b) Ambiente
a
Temperatura (ºC)
Medio de cultivo Promedio
08:30 12:00 16:00
20.9 21.4 21.5 21.2
21.3 22.0 21.8 21.7
23.7 23.9 23.5 23.7
24 25.5 26.5 25.3
26 27 27 26.7
26.5 27.5 27.2 27.1
Promedio 23.7 24.6 24.6 24.3
b
Temperatura (ºC)
Ambiental Promedio
08:30 12:00 16:00
21.0 21.8 22.1 21.7
21.4 21.9 22.2 21.8
23.6 24.1 24.4 24.0
26 27 27 26.7
27.5 26 26.5 26.7
27 26.5 27 26.8
Promedio 24.4 24.5 24.9 24.6
Tabla 3. Registro de tallas unitarias de Rotífero Brachionus sp, procedente de Chilca, laguna
"La encantada" *mantenido en laboratorio a temperatura de 23,8 ºC, iluminación artificial y
aireación constante.
(*) La obtención de la muestra se registró el día 21/09/07 a horas 10:30 am, en la laguna "La encantada" se registró
temperatura ambiental (18 ºC), temperatura del agua (18,2 ºC) y Salinidad de 44 ‰
Tabla 4. Registro de tallas unitarias de Rotifero Brachionus sp, procedente de Chilca, laguna "La encantada"
mantenido en laboratorio a temperatura de 23,8 ºC, iluminacion artificial y aireación constante
(*) La obtención de la muestra se registró el día 24/10/07 a horas 10:30 am, en la laguna "La encantada" se registró
temperatura ambiental (19,5 ºC), temperatura del agua (20,5 ºC) y Salinidad de 43 ‰
Tabla 5. Evolución del mantenimiento de cepas del rotifero Brachionus sp, en un volumen
de 500 ml, iluminacion artificial y temperatura semicontrolada*
Densidad poblacional
M1 M2 M3
-1 -1 -1
(Rot.ml ) (Rot.ml ) (Rot.ml )
38 36 38
28 25 41
50 38 45
41 40 52
52 56 58
67 50 57
74 67 72
81 83 86
89 92 96
106 112 124
171 175 168
155 138 152
28 38 56
Densidad poblacional
M1 M2 M3
-1 -1 -1
(Rot.ml ) (Rot.ml ) (Rot.ml )
38 37 36
28 25 22
50 45 52
88 76 72
95 88 94
84 76 81
61 51 55
49 38 42
Tabla 10. Constante de crecimiento (K), y, Rendimiento Poblacional (R) en cepas del rotifero Brachionus sp,
en un volumen de 500 ml, iluminacion artificial y temperatura semicontrolada.
Tabla 11. Constante de crecimiento (K), y, Rendimiento Poblacional (R) en cepas del rotifero Brachionus sp,
en un volumen de 4 L, iluminacion artificial y temperatura semicontrolada
35 42 0.09 3.5
25 52 0.37 13.5
25 65 0.48 20.0
31 82 0.49 25.5
45 90 0.35 22.5
45 76 0.26 15.5
48 96 0.35 24.0
52 105 0.35 26.5
40 85 0.38 22.5
35 76 0.39 20.5
18 60 0.60 21.0
20 70 0.63 25.0
20 75 0.66 27.5
15 65 0.73 25.0
28 46 0.25 9.0
25 110 0.74 42.5
41 146 0.64 52.5
22 172 1.03 75.0
22 90 0.70 34.0
40 98 0.45 29.0
45 159 0.63 57.0
35 115 0.59 40.0
42 126 0.55 42.0
20 121 0.90 50.5
Tabla 13. Crecimiento poblacional de Rotiferos Brachionus en cultivo inicial (4 l), con alimento microalgal Nannochloris sp
mantenido en una incubadora a temperatura constante de 25,5 ºC y en oscuridad.
Densidad poblacional
Día M1 M2 M3
-1 -1 -1
rot.ml rot.ml rot.ml
1 36 38 36
2 47 50 49
3 68 76 75
4 78 88 87
5 68 96 86
6 46 10 20
7 91 105 95
8 257 148 203
Tabla 14. Densidad en cultivo mixto de copépodos y rotífero Brachionus sp. en
recipientes de 4 L. Temperatura 23ºC, iluminación artificial y aireación constante.
R* 3.16666667
* Rendimiento poblacional
100
Densidad (rot/mL)
80
89
73
60 73
40 40 46
25
20 20
11 16 20
19 22
0
Figura 1. Densidad inicial y densidad absoluta obtenida en el mantenimiento de Cepas del rotifero Brachionus sp
en un volumen de 500 ml, iluminacion artificial y temperatura semicontrolada
70
60
Densidad (rot/mL)
61
50
40 43
30
20 17
12 20
10 17
0 0 0
0 0
1
0 0
Figura 2. Densidad inicial y densidad absoluta obtenida en el cultivo inicial del rotifero Brachionus sp
en un volumen de 4 L, iluminacion artificial y temperatura semicontrolada
140
120
Densidad (rot/mL)
130
100 110
80
60 72 77
40
22 36
20 9 29 30 36
0 0 0
1
Figura 3. Densidad inicial y densidad absoluta obtenida en el cultivo intermedio del rotifero Brachionus sp
en un volumen de 10 L, iluminación artificial y temperatura semicontrolada.
300
250
Densidad (Rot/mL)
200
150
100
50
0
1 2* 3* 4 5 6 7 8
Días
Prueba 1 Prueba 2 Prueba 3
40
30
20
10
0
1 2 3 4 7 8 9 10 11
Días
a b
c d