Microbiologia

 Una de las técnicas más usadas en el laboratorio de microbiología consiste en

transferir una muestra microbiológica de un ambiente determinado a un medio
de cultivo, lo que permite obtener cultivos microbianos.
 Al efectuar este procedimiento, es necesario considerar que en el área de
trabajo, existen muchos otros microorganismos; debido a esto, es necesario
tomar precauciones para impedir que éstos penetren y contaminen los cultivos
en estudio.
 el medio de cultivo se debe ajustar el pH y concentración de sales y durante la
incubación condiciones tales como la temperatura, oxigenación y la
luminosidad.
 Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el desarrollo
de éste en medios de cultivo y condiciones de laboratorio controladas.

 La población de microorganismos desarrollada en un medio se denomina

cultivo.
 Cuando éste contiene una sola especie de microorganismo, se denomina cultivo
puro o axénico
 cuando contiene más de una especie de microorganismos se denomina cultivo
mixto.
 Un cultivo tipo contiene una especie conocida de microorganismos y es
conservada en el laboratorio para realizar diversos ensayos y estudios.
 Un cultivo axénico consiste en una sola especie microbiana, proveniente de una
sola célula. Un cultivo axénico se obtiene artificialmente en el laboratorio.
 El segundo paso para obtener un cultivo axénico es inocular o introducir, una
sola célula de un microorganismo en un medio sólido o liquido, esterilizado
previamente.
 Un cultivo microbiano que ha estado creciendo por cierto tiempo en el mismo
tubo o matraz, debe ser transferido a un medio de cultivo nuevo, de otra
manera el crecimiento y sobrevivencia no pueden continuar.
 en la transferencia de una muestra microbiológica a otro recipiente, se deben
tener una serie de cuidados que eliminen los riesgos de contaminación.
 Al conjunto de procedimientos realizados para prevenir o evitar la
contaminación se le llama técnica aséptica
 Con relación a la concentración del inóculo, un error frecuente del principiante
consiste en tomar muestras grandes, lo que es innecesario. Una colonia de
bacterias del tamaño de la cabeza de un alfiler contiene varios millones de
microorganismos, es obvio que con una cantidad pequeñísima (casi invisible)
que se adhiera al asa, será más que suficiente para efectuar una transferencia
exitosa.

 BACTERIOLOGÍA:
Es la ciencia que estudia las bacterias,
  MICOLOGÍA:
es el estudio de los hongos en todas sus denominaciones, formas y procedencias.

Los Hongos, son organismos parasitarios que se forman en tejidos o materias en

descomposición

 VIROLOGÍA: Es el estudio de virus y virus como agentes: clasificación y

evolución, su estructura, sus formas de infectar y explotar las células para la
reproducción del virus, las enfermedades que causan, las técnicas para aislar y
la cultura de ellos y su uso en la investigación y terapia.

Tipos básicos de medios de cultivo.

 Dependiendo su estado Físico:
 Medios de cultivos sólido y liquido
 La forma más sencilla de clasificar los medios de cultivo es por su consistencia,
en donde aparecen los medios de cultivos solidos o líquidos (también llamados
caldos).
La diferencia de estos 2 medios radica en la presencia de una sustancia llamada Agar o
Agar-Agar, que es la encargada de darle la solides y consistencia al medio

 La ventaja de usar un medio de cultivo líquido, es que permite que crezcan

bacterias que se encuentran en muy poca cantidad. En el medio solido la
ventaja radica en que permite detectar los diferentes tipos de bacterias en una
sola muestra.

 Medio semisólidos
 Estas se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a estos un agente
solidificante en una proporción menor para preparar medios sólidos.

Dependiendo de su uso

1) Medios comunes:
Son aquellos que poseen los componentes mínimos para que pueda producirse el
crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales. (agar nutritivo o
agar común)

2) Medios de enriquecimiento:
Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie
de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes

3) Medios Selectivos.
Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en
una población microbiana. (caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento
de Salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias)
4) Medios inhibidores:
Cuando las sustancias añadidas a un medio selectivo impiden totalmente el
crecimiento de una población microbiana, se denomina inhibidor. (MacConkey que
permite el crecimiento de los gérmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los
Gram positivos.)

5) Medios diferenciales:
Se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que ayuden a
diferenciar géneros o especies. (El medio MacConkey es un medio diferencial porque
permite distinguir los gérmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen)

6) Medios de Identificación.
Son los destinados a comprobar una cualidad específica que nos permita reconocer la
identidad de un microorganismo.

7) Medios de Transporte. Se usan para el transporte de muestras clínicas que no

pueden sembrarse inmediatamente en los medios adecuados.

8) Medios de Conservación:
Se utilizan para conservar una cepa que nos interese mantener.
 Se pueden conservar las cepas de tres formas
a) Haciendo pases periódicos de placa a placa.
b) Mediante liofilización de una suspensión bacteriana.
c) Congelando cepas en leche descremada estéril al 0.1%.

El crecimiento bacteriano es la división de una bacteria en dos células hijas en un

proceso llamado fisión binaria

 . La medición de una curva del crecimiento exponencial de las bacterias; Los

procesos fundamentales empleados para ello son la enumeración bacteriana
(conteo bacteriano)
 A) Por métodos directos e individuales (microscopía, citometría de flujo),
 B) Por métodos directos y masivos (biomasa), por métodos indirectos e
individuales (conteo de colonias), o
 C) Por métodos indirectos y en bloque (número más probable, turbidez,
absorción de nutrientes).

Condiciones ambientales idóneas para el cultivo en el laboratorio

 Temperatura
Cada especie bacteriana se caracteriza por un intervalo de temperatura en el cual
presenta su crecimiento óptimo.
  pH
El pH óptimo depende de la especie bacteriana, pero cada una de ellas crece en un
intervalo de pH relativamente estrecho. Casi todas las bacterias crecen mejor a
valores de pH próximos a la neutralidad, en el intervalo de 6,5 a7,5. Sin embargo, los
hongos crecen mejor entre 4,5 y 6,0.

Aunque el pH de un medio sea el adecuado cuando se inicia el cultivo, a menudo el

crecimiento microbiano lo modifica.

. Para disminuir los cambios de pH en los medios definidos se suelen utilizar

tampones

 Oxígeno
dependiendo del microorganismo que se vaya a cultivar, se tendrá que
suministrar, restringir o eliminar el oxígeno (aerobios estrictos, anaerobios
estrictos, anaerobios facultativos o los anaerobios aerotolerantes)

Luz ambiental
 La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que
en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos.

Condiciones adecuadas de humedad

 Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas
de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así
que se deseque el medio.

Esterilidad del medio

 El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que
utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante)

TINCION DE GRAM.
Tinción empleada en microbiología para la visualización de bacterias en
muestras clínicas

 Las bacterias pueden diferenciarse con esta tinción en dos grupos. Los
microorganismos Gram-positivos se tiñen de azul, mientras que
aproximadamente un tercio de los cocos, la mitad de los bacilos y todos los
organismos espirulados se tiñen de rojo y se dice que son gramnegativos.

Las aplicaciones más comunes de la coloración de Gram son las siguientes:

 La presencia de cocos grampositivos agrupados sugiere estafilococos; en
cadenas sugiere estreptococos; en forma de lanceta a los diplococos
 La presencia de diplococos gramnegativos son características de especies de
Neisseria
 Los bacilos Gram. positivos grandes sugieren especies de Bacillus o
clostridium, los bacilos Gram. positivos pequeños sugieren especies de Listeria
o una de las corineiformes ( difteroides)
 Los bacilos Gram. negativos son las bacterias mas comunes halladas en los
laboratorios clínicos e incluyen a Enterobacteriaceae, bacilos no fermentados
y especies de Haemophilus.

PRUEBAS BIOQUIMICAS
Son una serie de pruebas que permiten evidenciar una caracteristica
determinada ( ej. Fisica, metabolica) permitiendo forma un patron que ayude a
la identificacion y diferenciacion de un microorganismo de otros relacionados
con el mismo.

EJEMPLOS DE GRAM POSITIVOS

1. Staphylococcus aureus. Responsable de abscesos, dermatitis, infecciones

localizadas y posibles gastroenteritis.
2. Streptococcus pyrogenes. Causante de infecciones supurativas en el trayecto
respiratorio, así como de fiebre reumática.
3. Streptococcus aglactiae. Frecuente en casos de meningitis neonatal,
endometritis y neumonía.
4. Streptococcus faecalis. Usual en infecciones en vías biliares y urinarias, habita
en el colon humano.
5. Streptococcus pneumoniae. Responsable de neumonías e infecciones en las vías
respiratorias, así como otitis, meningitis y peritonitis.
6. Streptococcus sanguis. Causante de endocarditis, cuando ingresa al torrente
sanguíneo a través de lesiones en su hábitat, la boca y la mucosa dental.
7. Clostridium tetani. Bacterias responsables de los tétanos, entran al cuerpo
desde el suelo por traumatismos en las extremidades.
8. Bacillus antracis. Se trata de la conocida bacteria del ántrax, tanto en su
versión cutánea como en la pulmonar.
9. Clostridium botullinum. Causante del botulismo clásico y el infantil, habita en el
suelo y en los alimentos mal conservados.
10. Clostridium perfringens. Esta bacteria segrega toxinas que destruyen la pared
celular, y es responsable de las gangrenas gaseosas, la enteritis necrosante y la
endometritis.
 EJEMPLOS DE GRAM NEGATIVOS

1. Neisseria meningitidis. Peligrosa bacteria causante de meningitis y

meningocococemias, coloniza las vías respiratorias humanas y asciende a las
meninges por vía sanguínea.
2. Neisseria gonorrhoeae. Conocidísima por ser la causante de la gonorrea,
común enfermedad de transmisión sexual.
3. Escherichia coli. Habitante usual del colon humano, está involucrada en las
llamadas “diarreas del viajero”, así como en meningitis neonatal, sepsis e
infecciones urinarias.
4. Salmonella typhi. Bacteria responsable de la enfermedad conocida como
fiebre tifoidea, suele transmitirse por vía fecal-oral: contaminación de aguas,
mala disposición de excretas o higiene defectuosa.
5. Salmonella enteritidis. Suele ocasionar enterocoitis y septicemia con abscesos si
llega a pasar del intestino a la sangre.

6. Haemophilus influenzae. Bacilo usualmente aerobio, es responsable de

numerosas meningitis, otitis, sinusitis, bronconeumonías, celulitis y artritis
séptica.
7. Bordetella pertussis. Causante de la enfermedad conocida como Tos ferina, de
alta mortalidad infantil.
8. Brucella abortus. Ocasiona la brucelosis, una enfermedad del ganado que se
transmite al hombre por contacto con los animales o por ingesta de lácteos sin
pasteurizar.
9. Francisella tularensis. Responsable de la llamada “fiebre del conejo” o
tularemia, se transmite al hombre mediante vectores (ácaros u otro tipo de
exoparásitos) de los conejos, ciervos y animales semejantes.
10. Pasteurella multocida. Bacilo anaeróbico, transmitido por la mordedura de
animales domésticos infectados, tales como perros y gatos. Se disemina a
través de la piel e infecta el sistema respiratorio, causando también celulitis.

UROCULTIVO
 Realizarse aseo genital con sol. de benzal, recolectar la orina del chorro
intermedio.
 Llevar inmediatamente su muestra (antes de que pasen 2 horas).
 Sin tratamiento antimicrobiano por 48 hs

Cultivo faríngeo
 Sin aseo Bucal y ayuno de 8 hs
 Sin tratamiento antimicrobiano por 48 hs

Cultivo de secreción ótica

 Sin tratamiento antimicrobiano por 48 hs
 No haberse aplicado pomadas o soluciones en el conducto auditivo u oreja
 Coprocultivo
 Sin tratamiento antimicrobiano por 48 hs
 Muestra de heces recientes

Cultivo Conjuntival
 Sin tratamiento antimicrobiano por 48 hs
 Sin aseo local

Cultivo Cervico vaginal

 Sin tratamiento antimicrobiano por 48 hs
 No haberse aplicado cremas, ovulos o duchas vaginales en las últimas 48 hs.
 Evitar el estudio durante el periodo menstrual

Cultivo Uretral
 Sin tratamiento antimicrobiano por 48 hs
 Sin aseo de la región

Cultivo de Expectoración
 Sin aseo Bucal y ayuno de 8 hs
 Sin tratamiento antimicrobiano por 48 hs
 Muestra de Flemas obtenida en ayunas tosiéndo profundamente. No saliva

Cultivo de Líquido Bronquial

 Muestra recientemente obtenida remitida en frasco estéril.
 Sin tratamiento antimicrobiano por 48 hrs.

Cultivo de Líquido Cefalorraquídeo

 Muestra de LCR remitida en jeringa o frasco estéril

Cultivo de Semen (Espermocultivo)

 No haber recibido tratamiento antimicrobiano las últimas 48 hs.
 Muestra recientemente obtenida remitida en recipiente estéril.