AUTOMATIZACION EN

MICROBIOLOGIA
 HISTORIA : MICROBIOLOGIA
Hipócrates Girolano
Marco Avicena
460 -377 a.C. Fracastoro
Terencio V 981-1037
Enfermedad 1478-1553
116-27 a.C. Describe
no es mágica Transmisibilidad
Insectos síntomas y
Enfermedad de las enfermedades
Vectores de tratamiento
alt. Fluido Poema sobre la sífilis
enfermedades de gusanos
Vital y miasma

ANTONY VAN
LEEUWENHOEK GALILEO GALILEI ZACARIAS JANSSEN
1632 – 1723 1564-1609 1590-1608
1676,observa y Construyo primer Construyo Sistema de
Dibuja bacterias Microscopio simple Lentes compuestos
de la saliva
Carta 39,
17 Sept.
1683
 EDWARD JENNER LOUIS PASTEUR ROBERTO KOCH
1749 – 1823 1822 – 1895 1843 – 1910
Padre de la Padre de la Nóbel Fis. y Med. (1905)
Imunología Bacteriología
Las enf. infecciosas son
1798: Preparó la 1856: Fermentación por provocadas por
vacuna contra la levaduras microorganismos y elaboro
viruela humana. 1857: Fermentación técnicas para identificar y
Realizó inoculaciones láctica aislar bacterias
a humanos utilizando 1861: Culmino con la 1876: Demuestra la etiología
pústulas de viruela teoría de Generación del Carbunco o Ántrax,
vacuna y comprobó espontánea Bacillus anthracis
que esta práctica 1866: Pasteurización 1882: “Myco. Tuberculosis”
protegía frente a la 1880: Identificó agente 1881: Estudio esporas y
viruela humana. del Cólera en la gallina. diferencias de los bacilos
26 de Octubre 1979 la 1881: Inmuniza ovejas 1881: técnicas de laboratorio:
O.M.S. da por contra el Carbunco medios de cultivo sólidos
erradicada esta 1885: Vacuna contra la 1883: descubre el Vibrión
enfermedad del mundo Rabia colérico en Egipto
 JOSEPH LISTER (1827 – 1912)

1867: Las bases de la desinfección y antisepsia en

cirugía, utilizando fenol y bicloruro de mercurio en
en el lavado del instrumental quirúrgico, manos y
heridas de pacientes

Frederich Loeffler (1852-1915)-Klebs:descubre bacilo diftérico

Karl Joseph Ebert (1835-1926): el agente causal de la fiebre
tifoidea
Armauer Hansen (1841-1912), Lepra
Albert Neisser (1855-1916), aísla el Gonococo
Arthur Nicolaier ,descubre el bacilo tetanico
Kitasato y Yersin ,descubren el bacilo de la peste
 Descubrimiento de la Penicilina (1929)

 Fleming, Sir Alexander.

Observó que un moho que contaminaba
una de sus placas de cultivo, había
destruido la bacteria cultivada en ella,
llamado Penicillium notatun.

Descubrimiento de la Estreptomicina (1944)

Schatz y Waksman: Descubren la
estreptomicina. Producida por hongo
Streptomyces griseus
HANS C. J. GRAM (1853 – 1938)
1884, Coloración GRAM

Tyndall (1820-1893) ,1877 Evidencia la presencia de

formas microbianas resistentes al calor (esporas
bacterianas).

Schaudinn y Hoffmann 1906 ; Descubren que

Treponema pallidum , causa la Sífilis

Paul Ehrlich ( 1854-1919 ) ,1910 desarrolla

quimioterapéutico
(Salvarsán) frente a la Sífilis
D’Herrelle y Twort 1915-1917 , Descubren los virus
bacterianos “Bacteriófagos”

Schönlein (1839) : Describe asociación de HONGOS

con
la Tiña (infección en piel)

ROBERTO GALLO ( U.S.A. )

JEAN LUC MONTANIER ( FRANCIA )
1984: Descubren el VIH
1910: Comienza la era de la Biología Molecular
1979: Se sintetiza la insulina por técnicas de ADN.
1982: Se desarrolla la vacuna contra la Hepatitis B.

Watson y Crick :1953 , Proponen la

estructura de la doble hélice para el ADN.

1933 el primer Microscopio Electrónico de

Transmisión.
1980 el primer Microscopio Electrónico de
Barrido
 El dinámico desarrollo de la
microbiología en el siglo XX-XXI
Biología Básica
Ac. nucleicos Hibridomas
Código genético Ac. monoclonales
Mecanismo de síntesis proteica específicos
Agentes infecciosos
Descubrimiento de

Antibioticoterapia

Revolución del

Microbiología
Laboratorio
Prevención

Bioquímica
Epidemias

Era de la

Genética
vacunas PCR
Aminoglucosidos

Automatización
B- lactamicos
Quinolonas
Macrolidos

Microbiología
En Procedimientos
Uso ordenadores de
gestión Microbiología
En diagnostico
¿PORQUE LLEGAR A LA AUTOMATIZACION?
Primer Método utilizado (1966), Estandarizado 0.5 Escala Mc
Farland (Turbidez-inoculo)
 Criterios de Interpretación (R, I, y S)
Los escatogramas o scatterplots

Para la interpretación de CIM y disco difusión .

•Los aislamientos son analizados con los métodos estándar de
difusión por disco y CIM del NCCLS. La CIM y su correspondiente
diámetro de zona son delineados para cada aislamiento.
La prueba de microdilucion en caldo - Panel de microdilucion
CIM se realiza en placas de poliestireno
(0.1 ml) . en Caldo - CIM
Una placa contiene de 7 a 8 diluciones
de 12 diferentes antibióticos
Una celdilla es control (+)
(caldo+inoculo)
Control (-) (solo caldo)

Placas para Gram negativos y Gram (+)

Caldo Muller Hinton recomendable
Hay paneles específicos

Caldo contiene Cationes Ca ++ y Mg ++

Cada lote examinado PH después de

preparado (7.2 a 7.4) y Tº 25ºc

Para neumococo suplementar 2-5%

sangre caballo lisado

Colocar standares de control de calidad

 Posición aminoacídica
39 42 104 164 237 238 240 265
TEM-1 Ala Glu Arg Ala Gly Glu Thr
TEM-2
TEM-3 Lys Ser
TEM-4 Lys Ser Met
TEM-5 Ser Thr Lys
TEM-6 Lys His
TEM-7 Lys Ser
TEM-8 Lys Lys Ser Ser
Anillo Tiazolidinico TEM-9 Lys Ser Met
TEM-10 Ser Lys
TEM-11 Lys His
TEM-12 Ser
Grupo N acilo TEM-13 Lys Met
TEM-14 Lys Lys Ser Met
TEM-15 Lys Ser

Posición aminoacídica Posición aminoacídica

69 165 244 275 276
35 179 205 238 240 TEM-1 Met Trp Arg Arg Asn
SHV-1 Leu Asp Arg Gly Glu TEM-31 (IRT-1) Cys

SHV-2 Ser TEM-30 (IRT-2) Ser

SHV-2a Gly Ser TEM-32 (IRT-3) Ile

TEM-35 (IRT-4) Leu Asp
SHV-3 Leu Ser
TEM-33 (IRT-5) Leu
SHV-4 Leu Ser Lys TEM-34 (IRT-6) Val
SHV-5 Ser Lys TEM-36 (IRT-7) Val Asp
SHV-7 Ser Lys TEM-37 (IRT-8) Ile Asp
SHV-8 Asn TEM-38 (IRT-9) Val Leu

SHV-11 Gln TEM-39 (IRT-10) Leu Arg Asp

TEM-40 (IRT-I67) Ile
SHV-12 Gln Ser
TEM-41 Thr
TEM-45 (IRT-14) Leu Gln
BLEE B- Lactamasa País de origen En especies
relacionada detectadas
TEM TEM1 Y TEM2 FRANCIA Enterobacterias

SHV SHV 1 / LEN ALEMANIA P. Aeruginosa /

BGNNF
CTX-M KLUA Kluyvera Alemania/Argentin E. coli, Salmonella
cefotaxaminasas

OXA OXA 10 Turquía/Francia P- aeruginosa

PER FRANCIA P.- aeruginosa

VEB PER Vietnam/Tailandia E. Coli

TLA CME-1 MEXICO E. Coli

GES/IBC Guayana/ Sudafr. K. Pneumoniae y

Pseudomona
BES Y. Enterocolitica Brasil S. marcescens

SFO AmpA S. fonticola Japon E. cloacae

1 Antibiótico en sangre
2 Bacterias sensibles a los
antibióticos
3 Bacteria no sensible a los
antibióticos
4 Bacterias muertas por
antibióticos
6 Bacteria con resistencia creciente
a antibióticos
7 Bacterias muertas por
antibióticos
8 Población bacteriana con
resistencia creciente al antibiótico
GENES DE RESISTENCIA BACTERIANA:

1 Plásmido
2 Antibiótico expulsado
3 Genes de resistencia antibiótica
4 Enzima que degrada al antibiotico
5 Antibiótico que ingresa
6 Antibiótico que ingresa
7 Enzima que altera el antibiótico
8 Antibiótico que ingresa
9 Cromosoma
 MRSA O SARM O SUPERBUG
STAFILOCOCO AUREUS RESISTENTE A
LA METICILINA
•E.U. 300,000 contraen infecciones en hospitalizacion /año
•CDC ,número de muertes 12,000 por año
•UCI ,aislamiento llega a 50% (R) a Meticilina, Penicilina,
Tetraciclina y Eritromicina

•Factores de riesgo: prolongada hospitalización, uso múltiple

de antibióticos previos,etc.
•En la comunidad niños ,ancianos y portadores enf. crónicas
•Endémico en Hospitales ,Neumonía ,Infecc. qx, bacteriemias.

En el Perú : UCI ,Unidad de Quemados, Oncologia y Cirugía,

Resistencia del 58% (500 cepas aisladas-1995)
En la actualidad brotes epidémico relacionado a la colonización
Del personal de salud (MINSA)
 VISA – Resistencia Intermedia a la
Vancomicina (GISA)
Susceptibilidad intermedia a la Vancomicina, CIM 8-16 ug /ml
y completamente Resistentes a CIM >= 32 ug /ml

VISA debido al engrosamiento de la pared celular que contiene

precursores capaces de ligar Vancomicina extracelularmente.
La mayoría contiene mecA ,las MIC de 4 ug /ml reportadas se
consideraran VISA potenciales y se recomienda repetir
pruebas
Descrito 1996 en Japón
En EU. en pacientes con MRSA, que reciben Vancomicina por tiempo
prolongado, en diálisis.

VRSA : STAPHYLOCOCCUS AUREUS RESISTENTE A VANCOMICINA ,

2002 EN EE.UU.
HOSPITAL BASE VALDIVIA
2007
RESISTENCIA DEL
ESTAFILOCOCO AUREUS
 RESISTENCIA INDUCIBLE A
CLINDAMICINA

bacterias poseen gen de B- Lactamasa

y se exponen un agente B-Lactàmico.
Esta acción antimicrobiana en la pared
celular activa mecanismo genético en
cascada que inicia la producción de
B-Lactamasa.

la producción cesa en ausencia de

antimicrobianos en la pared
B-Lactamasa AmpC
 Panorama actual
 La aparición cada vez más frecuente y diversa de los
mecanismos de resistencia microbiana, sobre todo en
bacterias patógenas facultativas y oportunistas, ha traído
consecuencias importantes en términos de morbilidad y
mortalidad y millonarias pérdidas humanas y económicas

 Resistencia incrementada en caso de staphilococcus,

streptococcus y enterococcus y bacilos Gram negativos
(enterobacterias y no fermentadores)

 Dificultad para predecir los patrones de resistencia en

pacientes críticos

 El uso de la Terapia de amplio espectro de alto costo y

numerosos efectos secundarios o adversos que se
presentan
 Panorama actual
 La necesidad de
entrega de resultados
oportunos ,evita que la
terapia inicial se
prolonga
innecesariamente

 Mortalidad :
Resultado > 72 hrs. da
como consecuencia el
aumento de mortalidad
en pacientes críticos y
sobrevida disminuye
30% por cada día de
retardo a entrega de
resultados
 VIGILANCIA DE LA RESISTENCIA A LOS
ANTIMICROBIANOS Perú 2007 -INS
STAPHYLOCOCCUS AUREUS

HOSPITAL Aislados E. Pediátricas Aislados H. Unanue

(R)
(R)
ANTIBIOT.
Cefazolina
Clindamicina 28 53.6 % 46 87
Eritromicina 29 69 46 91.3
Gentamicina 27 59.3 38 81.6
Oxacilina 29 58.6 43 90.7
Vancomicina 29 0 36 0
 VIGILANCIA DE LA RESISTENCIA A LOS
ANTIMICROBIANOS Perú 2007 -INS
TEM-1 de E. coli Escherichia coli-Resistencia
1.8 A de resolución

Hospital aislado H. Unanue aislado I.M.P aislado E. Pediátricas

Antibiot
Amicacina 84 2.4 % 106 8.5 % 82 4.9 %
Amox.Cl 227 63.9 83 18.1 79 55.7
Cefotaxima 69 31.9 66 27.3 78 32.1
Ceftriaxona 180 30.5 115 34.8 82 32.9
Cefuroxima 71 23.9
Ciprofloxac 74 65.4 116 30.4 45 33.3
ESBL 53 98.1 31 71 82 32.9
Nitrofurant 190 7.9 102 8.4 69 1.4
Trimet- Sulf 220 65.9 95 80 80
 ANTIMICROBIANOS Perú 2007 – INS
Pseudomonas aeruginosa
Hospital aislado 2 de Mayo aislado H. Unanue

Antibiótico
Amicacina 72 37.5% 73 47.9%

Aztreonam 75 33.3 71 80.3%

Ciprofloxacina 73 46.6% 80 65
Gentamicina 76 46.1 72 65.3%
Imipenem 64 43.8
Meropenem 52 50%
 ANTIMICROBIANOS Perú 2007 – INS
Klebsiella pneumoniae
Hospital aislado IMP aislado H. Unanue aislado S. Bernales
Antibiótico
Amicacina 56 60.7% 42 11.9 31 19.4
Amp. Clav 48 22.9 75 77.3 31(A-S) 41.9 (A-S)
Aztreonam 36 80.6
B-lactamasa 42 95.2
Cefalotina 75 76
Cefazolina 31 93.5 31 58.1
Cefotaxima 36 77.8 31 45.2
Ceftriaxona 63 81.1 31 45.2
Cefuroxima 31 51.6
Ciprofloxacin 52 21.2 66 45.5 31 25.8
 Factores de riesgo de adquirir infecciones
por cepas productoras de BLEE
Gravedad de la infección
Duración de la estadía en el
hospital y en UCI
Procedimientos invasivos
Receptores oncológicos Desnutrición
Bajo peso al nacer
 Reservorios y vectores

Termómetros
Cánulas de oxígeno
Mascaras y tubos de ventiladores mecánicos
Jabón líquido
Insectos
Gel para ecografías
Trabajadores de la salud
 Papel de la Automatización
 Los sistemas automatizados acortan los
tiempos porque mejoran la sensibilidad
analítica de los métodos

 Capaces de detectar el desarrollo bacteriano

en una suspensión con y sin
antimicrobianos antes que el laboratorista
detecte turbidez (fundamento de los sistemas
automatizados)

 Metodología: colorimetría – turbidimetria

-fluorometria etc.
 CONDICIONES SOBRE SU UTILIZACION

ventajas Especificación
Impacto clínico Rapidez en el resultado
de 3 a 10 horas.
Inicio o cambio precoz del
antimicrobiano
costos hospitalización y
análisis de laboratorio ,de
usos de antibióticos

Estandarización y control de la reproductibilidad

de calidad intra e ínter laboratorio
Disminución de la carga Requieren manos
de trabajo personal en métodos del
MIC
ventajas Especificación
Disminución de errores Evita la transcripción
post analíticos errónea de resultados
por el uso de programas
Utilización de sistemas Permite actualizar
de expertos anualmente las guias de
NCCLS que permite el
informe selectivo de los
antimicrobianos.
Monitorizar resultados
inconsistentes
ventajas Especificación
Patrones fenotipitos de Permite sospechar la
resistencia presencia de B
lactamasas de espectro
extendido y
cefalosporinas
Facilita las estadísticas Almacenar y procesar
información para una
análisis de tendencias
anuales de
susceptibilidad
Facilita el control en el Informe de resultados
uso de antimicrobianos en línea con el comité
farmacológico
desventajas Especificaciones
Alto costo (3 veces mayor El equipamiento y los
Que los manuales) insumos (paneles o
tarjetas) - “tarifas
diferenciadas o “uso para
hospitalización y críticos”
Requieren método de Frente a cualquier falla se
respaldo necesita un back up o
metodología manual de
respaldo
No existen normas Sin embargo se deben
NCCLS para sistemas considerar los métodos
automatizados, no empleados (puntos de
aplicables a todas las corte o MIC)
bacterias
desventajas Especificaciones
Poca flexibilidad en los Paneles o tarjetas están
antimicrobianos determinadas por el
ensayados fabricante.
Existen tarjetas
especiales pero requiere
consumo mínimo
 desventajas Especificaciones

Discrepancia con Problemas:

métodos convencionales Haemophilus Influenza
de referencia Neumococos, Gram (-)
no fermentadores, y
Anaerobios .
Cefepime y Pseudomonas
Vancomicina (I) en el caso
de Enterococcus
Imipenem ,falsa (R) o (S)
con Pseudomona y
Acinetobacter baumanii .
 desventajas Especificaciones

Discrepancia con Problemas:

métodos convencionales B lactamasa en algunos
de referencia Gram negativos requieren
prolongada incubación
para expresar ( R )
FDA recomienda para
errores mayores (sistema
informe R siendo (S) ,la
tasa no > 1.5% ,la
concordancia sea 90% ,
fallas de crecimiento =<
10%
 SISTEMAS AUTOMATIZADOS

 Diferentes grados de automatización

 Métodos Calorimétricos,
Turbidimetricos , Fluorescencia
 Lectura a tiempos determinados
 Lectores muy sensibles al
crecimiento aumentan la velocidad de
entrega de los resultados
Componentes Tecnológicos
 Panel o tarjeta de Trabajo
 Software
Microbiológico
Control de Calidad Cepas ATCC
Motor de Base de Datos
Estadístico y Epidemiológico
Normas de la CLSI (antes
NCCLS)
Comunicación (Interfaz)
Biomeriux Siemens Becton Dickinson
Vitek MicroScan BD Phoenix
 Panel o Tarjeta de Trabajo

Biomeriux
Vitek Becton Dickinson Siemens
BD Phoenix MicroScan
Caracteristicas de Paneles
MICRO Scan

Identificación solamente

Sensibilidad solamente
(BP o MIC)

Combo (ID+ATB)
 Tecnología del Panel
 Paneles Convencionales – Colorimetrica y Turbidez
– Gram Negativo / Gram Positivo
 Paneles Cromogénicos – Colorimetrica Enzimatica
 Identificación en 4 hrs
– ID de Levaduras
– HNID (Haemophilus, Neisseria, Moraxella y Gardnerella)
– ID de Anaerobios
 Paneles Rápidos Fluorescentes - Fluorescencia
– Gram Negativo
– Gram Positivo
 Synergies Plus Panels – Fluorescencia y Turbidez
– Gram Negativo
– Gram Positivo
 Paneles Especializados – Turbidez
– MicroStrep Plus
– ESBL confirmatorio
 Colorimetrica y Colorimetrica
Turbidez Enzimatica

Fluorescente Fluorescente y
Turbidez
 ANTIBIOGRAMA

 BP (Breakpoint)
 Susceptibilidad in  MIC
vitro cualitativa (S, (Concentración
I, ó R) Mínima Inhibitoria)
 Concentración de  Concentración del
antibiótico antibiótico in vitro
equivalente a las por método
reglas CLSI - cuantitativo.
breakpoints  4 – 5 diluciones
 1-2 diluciones por por antibiótico
droga - 29-33 ATB  17 – 27 ATB /panel
por panel
 PANEL ESβL plus
 Confirmar la producción de Beta Lactamasas de Espectro Extendido
en E. coli, Klebsiella oxytoca y Klebsiella pneumoniae.

 La inoculación con la técnica de turbidimetría o de prompt. Incubar

20-24 hrs. A 35 ± 1°C sin CO2 en incubadora externa.
 Determinación cualitativa con lectura manual de crecimiento en
pocillos como turbidez o nebulosidad en todo el pocillo.
 Interpretación del resultado (disminución 3 diluciones en Caz y
Caz/CA ó Cft y Cft/CA):
ESBL positivo ESBL negativo

ESBL panel (B1027-101)

Se ingresa al software
manualmente el
resultado en el apartado
de ESBL para confirmar
el resultado si es
positivo o negativo.
 PANEL MICro STREP plus
 Determinar la sensibilidad de antimicrobianos para estreptococos
aerobios no enterococos (incluidos St. pneumoniae).
 Inoculación del panel (turbidimetría con tubo 0.5 de Mc Farland).

Salina (B1015-12)
100 mcl

4-5 colonias 25 ml de LHB (B1015-25)

2 veces

Incubar 20-24
Inoculador hrs. a 35 ± 1 °C
en una
incubadora
TSA con 5% de sangre de
0.5 McFarland = externa.
carnero

0.08 ± 0.02
turbidímetro

Se ingresa al software
manualmente el resultado MICro STREP panel
donde el crecimiento se (B1027-201)
presenta como turbidez.
Cualquier cambio de color
en el medio no se
considera crecimiento.
 PANELES Synergies Plus
 Organismos Gram Negativos
Gram Positivos

 Tipos de Panel Combo, MIC sólamente, ID

 Medio de cultivo Agar Sangre para Gram Negativos
 Identificación 138 Gram negativos
 Antibióticos 31 para Gram negativos

 Tiempo de Lectura 2.5 hrs ID con base en la fluorescencia

 MIC 4.5-16 hrs, Read-When-Ready
 80% MIC en 6.5 hrs
 Método de Lectura Sistema WalkAway®

 Almacenamiento Temperatura Ambiente

 Vida de Anaquel Un año
 Reactivos Ninguno
 ANTIBIÓTICOS EN PANELES
SYNERGIES PLUS
 Antibióticos que se liberarán Antibióticos de incubación convencional
en cuanto estén listos
 Amikacina
Amoxicillina/Clavulanato
 Ampicillina
 Ampicillina/Sulbactam* Aztreonam
 Ceftazidima Cefazolina
 Ceftriaxona Cefepime
 Cefuroxima
 Ciprofloxacina Cefotaxime
 Gatifloxacina Cefotetan
 Gentamicina Cefoxitin
 Imipenem
 Levofloxacina Cefalotina
 Meropenem Cloramfenicol
 Moxifloxacina Tetraciclina
 Nitrofurantoina*
Ticarcillina
 Norfloxacina
 Piperacillina/Tazobactam* Ticarcillina/Clavulanato
 Piperacillina*
 Tobramicina * Antibióticos de incubación
 Trimetoprim/Sulfametoxazol convencional en algunos paneles.
 INOCULACIÓN DE PANELES

2- Imprimir y pegar el
1-Desembolsar 3- Tomar la colonia 4- Un prompt para ID y
código de barras al
el Panel panel sensibilidad.

5- Vaciar suspensión 6- Preparar una 7- Usar el Renok para 8- Cargar el panel en el

bacteriana al placa de pureza inocular panel WA
inoculador
 Siemens
MicroScan

Colorimetría, mide color de

soluciones.
Fluorometría, mide fluorescencia y
luz dispersa y reemitida en varias
direcciones.
Turbidimetría, mide luz no dispersa
a través de una solución turbia.
Dual combinacion de dos
tecnologias a la vez
Lectura
Visual sin equipo
Equipo AS-4
Equipo WA 40/96 SI
Centro de Comando LabPro

Muestra lista de
códigos de barra de
nuevas ordenes del LIS
 Cargar Paneles

Paneles Paneles recién

completados cargados

Probabilidad del organismo

Resultados suprimidos
Interpretaciones CLSI
del reporte

Texto de
Alerta
ordenado
Informaciones necesárias para tomar decisiones por prioridad
aparecen en la misma pantalla
 Click +
para exibir texto
de instrucciones
de alertas
 Sumário y Edición de Resultados QC

Entrada &
información
Código de acción correctiva &
colores para manutención de
resultados archivos w/QC;
apoya guias del CAP
“Fuera de
Control”
 LabPro: Epidemiologia

Reporte
ordenado
por
organismo

Reportes
de
Critério de Incidencia
aislados Bacteriana
duplicados
definidos
por el
usuário

Excluir drogas no-formulário

 Sistema
– Elaborado por el usuario
– Automatizado programado día y hora
 Interfaz
– Unidireccional y/o bidireccional
– Labpro – Labpro
– Labpro – Sistema del Hospital
– Labpro - Whonet

Control de Calidad MicroScan

Nacional : MINSA – INS

Internacional m: NCCLS - USA

Streptococcus pneumoniae
Resistente a Penicilina: Evaluación Cuantitativo

<0,12 µg/ml 0,12 - 1,0 µg/ml ≥2,0 µg/ml

S I R
 Hansman & Bullen, 1967, en Australia.

 Appelbaum et al., 1977; Jacobs et al., 1978; Koornhof et al.,

1978, en África del Sur. CIM≥2,0 mg/ml de penicilina

 Resistencia se incrementa a nivel mundial, España, Africa del

Sur, Sudeste Asiático y Estados Unidos
 VRE – Enterococo Resistente a
Vancomicina

 Resistencia intrínseca
 Resistencia a las Cefalosporinas

 “National Nosocomial Infections

Surveillance System” (1999)
– 2º en bactiremias
– 2º en infecciones urinarias
 EQUIPOS DE APOYO
El Eddy Jet para realizar las siembras en espiral.
El uso de una micro-jeringa desechable de gran
precisión, evita la contaminación cruzada.

Instrumento óptico que utilizado con un ordenador WXp

o Vista se convierte en un potente contador de colonias.
Con un software opcional se puede utilizar para un
número ilimitado de nuevas aplicaciones.
EQUIPOS DE APOYO
El Spin Air es el instrumento para el muestreo
microbiológico del aire.
El diseño especial de los orificios combinado con
la lenta rotación de la cápsula permite el uso del
100% de la superficie comparado con el 5% de
la misma que emplean los aparatos fijos.

Para realizar diluciones volumétricas 1 a 10ml para

muestras microbiológicas.
También pueden realizar diluciones gravimétricas
utilizando una balanza externa. reducen la mano
de obra, ahorran tiempo y aseguran esterilidad y
precisión.
 Coloración GRAM
Poly Stainer : automático para la
tinción de Gram.
totalmente programable
Almacena diez programas
diferentes, para definir el baño, el
tiempo de inmersión y la agitación.
 Phoenix
 Sistema automatizado de identificación y sensibilidad
 Comunicación con el equipo por iconos.
 Capacidad de incubación de 100 paneles
 Sistema de fácil inoculación
 Control y calibración interna, no requiere mantenimiento.
 Lectura : convencional, fluoro génico y cromogénico.
 Medidas cinéticas de las reacciones: cada 20 min.
 Funcionamiento autónomo, incluyendo el sistema experto
BDXper.
 Conexión al sistema Epicenter
 Conexión al Sistema de Gestión de Laboratorio
Phoenix: Pantalla
 Phoenix: Insumos
 Panel y sellador: bandeja de
poliestireno, moldeada sellada
y autoinoculante. 136 pozos:
51 ID y 85 en AST.
 Caldo Phoenix ID y AST
 Indicador Azul de Alamar
 Estación de Inoculación
 Recipiente para paneles
 Nefelómetro Crystal Spec o
BD Phoenix Spec.
 Pipeta 25 ul con micropuntas.
 Phoenix: Insumos
 Identificación: 45 substratos:
convencionales, fluorogénicos y
cromogénicos, Carbohidratos,
fuentes de carbón o Esculina.
 Sin adición de reactivos
 5 bases de datos
 Resultados a 2,3,4, 6 y 12 hrs.
 Información de valores de
confianza y reacciones de los
substratos.
 B-Lact en la parte ID para los
paneles G+
 Phoenix: Insumos
 Paneles para ID/AST Combo
o solo AST para 1x25:
• Gram negativos: NMIC/ID
• Gram positivos PMIC/ID
• Streptococcus SMIC/ID
• Panel de formato único:
NID,PID,PMIC,NMIC,SMIC.
 Temp. almacenamiento de
reactivos: ambiente.
 Bioseguridad: Cierre hermético
 Resultados rápidos: 80% de
los resultados de AST
completo en < de 10h.
 Phoenix: Insumos
Sensibilidad:
 Caldo AST/AST-S 8 ml, Azul de
Alamar.
 20 a 22 antibióticos por panel.
 > de 3 diluciones por Antibiótico
 Doble diluciones
 ESBL incluido en cada panel G-
con 2 métodos de detección
 NMIC/ID, NMIC, PMIC/ID,
PMIC, SMIC/ID, SMIC.
Phoenix: Medios de Obtención de Inoculo
Phoenix: Inoculación
 Colonias puras, 18-
24 hr de incubación.

 Hacer escala de
McFarland 0.5 o
0.25.

 Añadir una gota del

indicador azul de
Alamar.
Phoenix: Inoculación
 Transferir 25 ul o 50 ul
de inoculo ID al caldo
AST.

 Servir ambas
soluciones en el panel
según corresponde ID o
AST.

 Cierre el panel:
hermético.
Phoenix: Incubación
1. Escanear el
código de barras. 3. Introducir el panel en el
Phoenix.

2. Teclear o escanear el
numero de muestra.
Phoenix: Control de Calidad
 Lectura de lotes
automática
 Cepas ATCC
variadas
Phoenix: Método de Identificación
 Substratos: convencionales. Cromogenicos, fluoro
génicos, Esculina H.C.

 Base de datos después de 2,3,4,6, y 12 hrs. de

incubación.
Phoenix: Método de análisis
 Sensibilidad: Diluciones seriadas con MIC real
doble dilución: mínimo 3 dil por antibiótico.
 Lectura basada en:
– Indicador de actividad metabólica: redox
– Cambios de turbidez
 Medición cinética cada 20 min. 6 – 16 hr.
.
 Phoenix: Marcador de Resistencia
 Marcadores de Resistencia: tests específicos (ESBL) o
Características fenotípicas

 No se requiere de Test de confirmación adicional

 BDXpert utiliza estos marcadores para tomar acción
apropiada o hacer recomendaciones.
 Los marcadores son:
– ß-Lactamasa de Staphylococcus (Nitrocefinasa)
– MRSA (basado en Interpretacion de Oxacilina y
Cefoxitin.)
– VRE (basado en MIC Vancomicina).
– Sinergia con aminoglicosidos en Enterococcus
(Gentamicin500mcg/ml y Streptomycin1000mcg/ml)
– ESBL
Epi Center

Inter-conexión de Microbiología
EpiCenter: Informe Clínico
EpiCenter: Estadística y Epidemiología
EpiCenter: Graficos
EpiCenter: Cubo Dinamico.
DESARROLLADO PARA LA INVESTIGACIÓN ESPACIAL
TARJEDAS PEQUEÑAS-SE INCOCULA CON UN SISTEMA
DE VACÍO- ENTRE 4 Y 10 HORAS (JORNADA LABORAL)
LECTURA CADA 60 MINUTOS
 Tecnología – Tarjeta
Seguridad
Unidades
Trazabilidad Selladas
Unión electrónica
Por código de
Barras

Rendimiento Simplicidad
64 pocillos Inóculo único
 2 Entrada
1 Preparación de la código barras
Muestra

3 Carga del sistema

 Aumento de la productividad
Completo menú ID

123 especies 159 especies 52 especies

98% de la rutina ID realizable

en una plataforma
 Menú de antibióticos FLEXIBLE

~ 20 antibióticos por tarjeta +

Rango MIC EXPANDIDO +
Antibióticos deducidos
Manejo de ICONOS - Árbol de navegación
Resultados para el médico

1 Entrada 2 tarjetas 3 Muestra

cassette
los resultados e Identificaciones precisas

API referencia
 Reporte correcto de Interpretación
Equipado Sistema de Expertos™

Alerta de mecanismos
de resistencia
 Resultados rápidos - ID
Tiempo respuesta - 80% aislamientos

E. coli 5
K. pneumoniae 5
P. aeruginosa 6
P. mirabilis 4

E. faecalis 4
S. aureus 5
S. pneumoniae 5
S. epidermidis 6

95% de la rutina bacteriana en 6 horas

Soporte a las decisiones terapéuticas
 3 Resultados en el dia - Sensibilidad

< 5 hrs Staph Oxa R

6 hrs Enterobacteriaceae
9 hrs No-fermentadores

Método 18-24hrs Todos los

Microorganismos
tradicional

Detección rápida de la resistencia Bacteriana

 Rápido ajuste y rotación del tratamiento
 Rápido aislamiento del paciente
 La automatización en el aislamiento
primario :Hemocultivos
Desinfección adecuada de la zona , tiempo de espera de acción
desinfectante,punción tradicional desinfección final del septum de la botella.

Espera
2 min.

Desinfectar
septum
 BACTERIEMIA Y FUNGEMIA

“Presencia de Bacterias y/o levaduras y/o hongos

en sangre indicando la falla del sistema inmune
del huésped para localizar la infección en su foco
primario o la falla del médico remover, drenar y/o
esterilizar aquel foco.”
“... La tasa de mortalidad está entre 20% al 50% ”
HEMOCULTIVOS
Síntomas de sospecha de bacteremia :
 Fiebre de origen desconocido ( >
38°C) o hipotermia ( <36°C)
 shock, escalofríos
 Infecciones severas (meningitis,
endocarditis, neumonia, pielonefritis,
Absceso abdominal…).
 Frecuencia cardíaca acelerada
 Alta o baja presión sanguínea
 Aumento de la frecuencia
respiratoria
 Hemocultivos: importancia del volumen

WASHINGTON, J.MAYO WEINSTEIN,M.REV INF

CLIN PROC. 1975 DIS,1983

Nº DE EPISODIOS= 80 Nº DE EPISODIOS= 282

3 MUESTRAS DE 20 ml 3 MUESTRAS DE 15 ml
CADA UNA CADA UNA
 1º= 80% POSITIV.  1º= 91% POSITIV
 2º= 88% POSITIV  2º= >99% POSITIV
 3º= 99% POSITIV
 Criterios de interpretación
MICROORGANISMOS QUE SIEMPRE
REPRESENTAN BACTERIEMA
S.pneumoniae, H.influenzae, N.meningitidis,
S.agalactiae, Brucella spp, M.tuberculosis,
Bacteroides spp, Fusobacterium spp,
H.capsulatum, C.neoformans, Leptospira.

MICROORGANISMOS QUE GENERALMENTE

REPRESENTAN BACTERIEMIA
S.aureus, enterobacterias, P.aeruginosa,
S.pyogenes, C.albicans
 Criterios de interpretación
MICROORGANISMOS QUE PUEDEN SER
CONTAMINANTES O REPRESENTAR
BACTERIEMIAS VERDADERAS:
Estreptococos grupo viridans, Clostridium
spp, C.tropicalis.

MICROORGANISMOS QUE GENERALMENTE

REPRESENTAN CONTAMINACION:
SCN, Bacillus spp, Corynebacterium spp,
P.acnes, bacilos gram negativos no
fermentadores (excluyendo a P.aeruginosa)
 Método tradicional

Paso 2 Paso 3
Dia 1 al 15
24 – 48 hrs 24 – 72 hrs.
Subcultivo Identificación y
antibiograma

Se requiere un máximo de 15 días

para descartar un negativo
Tecnología Colorimétrica

• Utilización de un sensor
liquido tipo plasma.

• Membrana de silicona
impregnada al plasma de
sensibilidad

• Cambio sensitivo de CO2

diluido

• Generación de color
permanente.
 Tecnología Colorimétrica
Uso para hemocultivos, fluídos corporales y micobacterias.

• Algoritmos
Unidades de reflectancia
– Independientes al tipo
de medio Ref lect ance Unit s
monitoreado. 6000

5000
– Immediata 4000
3

notificación de 3000
1 Sust ained acceler at ion
2 Rat e
positivos. 3 I nit ial t hr eshold
2000
2
1000 1
2
– Algoritmo de alto 0
valor inicial. (ventaja 0 1 2 3 4 5 6 7
Days t est ed
en la entrada de La curva de crecimiento es automáticamente
botellas demoradas). GRABADA
ANALIZADA
GUARDADA
 Importancia de la automatizacion
Tiempo de recuperación

Bourbeau PP et al. Routine incubation of BacT/ALERT FA and FN

blood culture bottles for more than 3 days may not be necessary. J
Clin Microbiol. 2005;43:2506-2509
 74% en Día 1
 20% en Día 2
 4% en Día 3
 2% en Día 4
 1% en Día 5
Estos resultados demuestran que el 98% de los aislamientos
clínicamente significativos fueron recuperados en los 3 primeros días
de incubación y el 94% dentro de los 2 días de incubación.
 Importancia de la automatizacion
Tiempo de recuperación

1.Cockerill FR III, Wilson J.W., Vetter E.A., et al. Optimal testing

parameters for blood cultures. Clin Infect Dis. 2004 ;38 :1724-1730

99.5% de la infecciones de sistema circulatorio (no

endocarditis) y 100% de los episodios de endocarditis
fueron detectados con 5 días de incubación.

Estos datos sugieren que períodos de incubación extendidos

previamente recomendados para la detección de
microorganismos fastidiosos que a veces causan endocarditis,
incluyendo Brucella, Capnocytophaga y Campylobacter spp., y el
grupo HACEK (Haemophilus, Actinobacillus, Cardiobacterium,
Eikenella y Kingella spp.) no son necesarios
CUANDO SE UTILIZA SISTEMAS DE HEMOCULTIVOS
AUTOMATIZADOS DE MONITORIZACIÓN CONTINUA
 Impacto de la contaminación

Un hemocultivos falso positivo puede conducir a un

tratamiento antibiótico innecesario, mayor tiempo de
hospitalización y mayores costos.

Se ha estimado que cada hemocultivo contaminado

puede llevar a un aumento en:

 estadía del paciente - en 6 días en promedio,

 el tiempo de terapia antibiótica – en 3 días,
 el costo de la administración de antibióticos puede ser
de hasta US$ 4400
Barenfanger et al. Clinical and Financial Benefits of Rapid Bacterial Identification and
Antimicrobial Susceptibility Testing J. Clin. Micr, May 1999 p1415-1418
 BACTEC 9050

Tecnología de monitoreo contínuo de la

serie BACTEC ® 9000
Sistema no invasivo
Capacidad de 50 viales
Interfase gráfica de fácil uso:
Pantalla de cristal líquido
Teclado sencillo
Lector de código de barras fijo
ajuste de la intensidad de la
alarma
formato de fecha/hora
 LED

CO2

Fotodiodo

El material del sensor es

una sustancia sensible a
la concentración de CO2 SENSOR

Filtro de
El sensor genera una Filtro de Excitación
señal fluorescente, la cual Detección
es detectada por el
analizador.
La fluorescencia aumenta
a medida que aumenta la Photodiode
LED
concentración de CO2
FELIZ NAVIDAD Y PROSPERO
AÑO NUEVO
 COSTOS DE UCI-HSR
 HOSPITALIZACION 106.00 / día
 OXIGENO 53.00 / día
 DESCARTABLE 20.00 (sondas , mascaras)
 MEDICAMENTOS 100.00 (Imipenem – asociados)
 Materiales de asepsia 40.00
 total 319.00 gasto por día
 Promedio de estancia 5 días
 Total = 1595.00
 Sin considerar análisis de control y Rx (15.00)si amerita
 Gases arteriales : 25.00 + hemograma 12.00 +
coagulación 25.00 + bioquímica 18.00
(glucosa,urea,creatinina) +hemocultivo 45.00 + otros 17
=142.00
 Importancia de la automatización
Conclusiones

 Tratamiento inicial acertado

– Beneficios clínicos
– Menor morbi-mortalidad
– Menor tiempo de internación
– Menor toxicidad
– Reducción de costos
– Beneficios epidemiológicos
 Disminuir presión de selección de cepas R
 Estudio de resistencia los antibacterianos en
el Centro Medico Naval -2000
 Escherichia coli ( R) 60% Penicilinas ,B lactamicos, ,
Cefalosporinas

 Recomendamos estudiar con detalles la resistencia de

Estafilococo aureus y tomar las medidas necesarias para
evitar su desiminacion : (R) Penicilinas y Céfalosporinas:
70%
 Necesario que el Dep. de Microbiologia realice una vigilancia
permanente de la resistencia a los antimicrobianos y la
aparición de cepas multiresistentes
 Farmacia debe realizar estudios de utilización de antibióticos
 El personal de enfermería alerta ante el problema de
resistencia y establezca medidas para evitar la diseminación
 Comité de Infecciones y la vigilancia Epidemiológica
 Uso racional de antibióticos
 Programa de Evaluación Externa del
Desempeño (PEED)
 Vigilancia de la Resistencia Antimicrobiana
 de bacterias patógenas asociadas a
 Enfermedades Diarreicas Agudas, Infecciones
Respiratorias Agudas e Infecciones
Intrahospitalarias
 INS - CNSP
 LRN Enteropatógenos
 LRN IRAs E IIH
GRACIAS

POR NO DORMIR