 El nitrógeno molecular o dinitrógeno, componente

mayoritario de la atmósfera, es inerte y no

aprovechable directamente por la mayoría de los
seres vivos.
 La fijación biológica del nitrógeno atmosférico,
consistente en la reducción de N2 a NH4+ realizado
mediante la actividad catalítica de la enzima
Nitrogenasa, es, después de la fotosíntesis, la ruta
metabólica más importante para el mantenimiento de
la vida en la Biosfera.
 Curiosamente, este proceso crucial sólo puede ser
llevado a cabo por unos pocos grupos de seres vivos,
todos ellos procariotes (Sprent J. y Sprent P., 1990).
 La atmósfera es el principal reservorio de
nitrógeno, donde constituye hasta un 78 % de
los gases.
 Sin embargo, como la mayoría de los seres vivos
no pueden utilizar el nitrógeno atmosférico para
elaborar aminoácidos y otros compuestos
nitrogenados, dependen del nitrógeno presente
en los minerales del suelo.
 Por lo tanto, a pesar de la gran cantidad de
nitrógeno en la atmósfera, la escasez de
nitrógeno en el suelo constituye un factor
limitante para el crecimiento de los vegetales.
 Fijación Biológica. El término fijación del
Nitrógeno se usa normalmente para definir la
fijación de Nitrógeno por bacterias, libres o en
asociación simbiótica. Este tipo de fijación de
Nitrógeno desde el estado gaseoso a la forma
orgánica se lleva a cabo biológicamente por
microorganismos especializados: cianobacterias
(algas verdes-azules) y bacterias (por ejemplo,
rhizobium y frankia) que convierten el N2 en
otras formas químicas (amonio y nitratos)
asimilables por las plantas.
 Fijación Físico-química. Existen otros
mecanismos de fijación de Nitrógeno en que no
participan los microorganismos, sino que es
realizada por reacciones de tipo electroquímico
(tormentas eléctricas) y fotoquímico (reacciones
entre el ozono y el N2 atmosférico).
 Fijación Antropogénica. Pero lo que es más
importante aún, el término fijación también
incluye la realizada por actividades humanas
(producción de energía, producción de
fertilizantes y cultivos) que produce Nitrógeno
reactivo� (NOX, NHY y N orgánico).
 Los microorganismos fijadores de nitrógeno no
constituyen un grupo taxonómico homogéneo, la
única característica que comparten es la presencia de
la enzima Nitrogenasa.
 Dichas bacterias comprenden organismos fotótrofos,
como bacterias pertenecientes a la familia
Rhodospirillaceae, Clorobiaceae y Cianobacteriae;
organismos quimio autótrofos, como bacterias de los
géneros Thiobacillus, Xanthobacter y Desulfovibrio y
organismos heterótrofos como las bacterias
pertenecientes a la familia Frankiaceae, al grupo
Rhizobiaceae y a los géneros Azotobacter,
Enterobacter, Klebsiella y Clostridium.
 Estos organismos pueden realizar la fijación biológica
de nitrógeno ya sea independientemente (a excepción
de las rizobiáceas) o estableciendo relaciones
simbióticas con otros organismos.
 Para poder disminuir la dependencia a fertilizantes
nitrogenados que está adquiriendo la agricultura
mundial se han propuesto varias alternativas que
abarcan desde la modificación genética de las plantas
a la optimización y mejora de la fijación biológica de
nitrógeno.
 La realizan algunas bacterias libres o asociadas en
simbiosis a vegetales y ciertas arqueobacterias.
 Es un proceso que globalmente tiene una variación
relativamente baja de energía libre (-8 kcal/mol) pero la
particular rotura del triple enlace que une a los dos átomos
de Nitrógeno exige a la Nitrogenasa reductasa recibir un
potencial reductor de apoyo (-1.200 mv) que parece
sorprendentemente alto, equivalente a una variación de
energía libre de +50 kcal/mol.
 Este potencial es el mas alto de los conocidos entre los
procesos de óxido reducción biológica.
 A pesar de los problemas que plantea, el sistema es tan
eficaz que se ha constituido en la principal fuente natural
de entrada de N en la biosfera.
 La fijación de N2 es un proceso redox estrictamente
anaerobio. Lo cataliza un complejo ferro-enzimático
denominado Nitrogenasa, tan importante que la
naturaleza nos muestra tres tipos:
 Tipo I. Es el sistema más eficiente y el más frecuente. Se
conforma en medios donde hay suficiente molibdeno
 Tipo II. Propio de bacterias que como el Azotobacter,
crecen en medios donde no hay Molibeno y el Vanadio le
sustituye.
 Tipo III. Se conforma en medios donde existe una carencia
simultánea de Molibdeno y Vanadio. El Azotobacter
también puede expresar este complejo. Es el sistema
menos eficiente de los tres.
 Las proteínas fierro azufre de alto
potencial (HiPIPs) son una familia
sui generis de ferredoxinas Fe4S4
que funcionan en las cadenas
anaeróbicas de transporte de
electrones. Algunas de estas
HiPIPs poseen un opotencial
redox más alto que cualquier otra
proteína fierro-azufre conocida
(Vgr., HiPIP de Rhodopila
globiformis tiene un potencial
redox de ca. 450 mV). Como en
otras ferredoxinas bacterianas,
los grupos [Fe4S4] adoptan una
conformación cubiforme y están
unidas a las proteínas por medio
de cuatro residuos de Cys.
 La fijación en general supone la incorporación a la biosfera
de una importante cantidad de nitrógeno, que a nivel
global puede alcanzar unos 250 millones de toneladas por
año, de las que 150 corresponden a la fijación biológica.
 La fijación biológica es un proceso altamente consumidor
de energía que ocurre con la mediación de la enzima
Nitrogenasa según la siguiente ecuación:
N2 + 16ATP + 8e- + 8H+ ―> 2NH3 + 2H2 + 16ADP + 16Pi
La Nitrogenasa está bastante bien conservada en todos
los microorganismos fijadores, y está constituida por dos
metaloproteínas: ferroproteína y molibdoferroproteína,.
Complejo Enzimático de la Nitrogenasa
 Aunque el amoniaco (NH3) es el producto directo de esta reacción,
es rápidamente ionizada a amonio (NH4+).
 En diazótrofos de vida libre, el amonio de la Nitrogenasa es
asimilada en glutamato a través del ciclo de síntesis Glutamina
Sintetasa/glutamato.
 Tensiones bajas de oxígeno parecen ser indispensables para el
funcionamiento de la Nitrogenasa, por tal razón este mecanismo
es preferentemente realizado por diferentes bacterias que viven
en anaerobiosis, respirando niveles bajos de oxígeno, u
obteniendo el oxígeno con una proteína (e.g. leghemoglobina).
 En muchas bacterias, las enzimas nitrogenasas son muy
susceptibles a la destrucción por oxígeno (la mayor parte de las
bacterias cesan de producir enzimas en presencia de oxígeno).
 La Nitrogenasa, que cataliza la reducción de
N2 a amonio, está constituida por dos
metaloproteínas: la ferroproteína o
nitrogenasa reductasa, y la ferromolibdo-
proteína o nitrogenasa.
 La primera es un homodímero (alpha:alpha)
la segunda un tretámero (alpha:alpha:
beta:beta) que contiene dos grupos P (P-
clusters), uno, (8Fe-7S) y el otro, (Mo:7Fe-
9S): homocitrato, que constituye el cofactor
conocido como FeMoco (cofactor hierro
molibdeno) a nivel del cual ocurre la
reducción del N2.
 La Fe-proteína, activada por ATP-Mg,
transfiere los electrones a la nitrogenasa que
a su vez los distribuye entre N2 y protones
para dar amonio e hidrógeno.
 Esta reducción de protones es siempre
concomitante con la producción de amonio.
Supone una pérdida de eficiencia del proceso.
 Algunas especies y cepas microbianas estan
provistas de una actividad de hidrogenasa
que recicla en parte la energía perdida por la
liberación de hidrógeno.
 Molibdoferredoxina

 Dinitrogenasa 1, componente I ó Molibdoferredoxina,

es el componente que presenta los centro metálicos
implicados funcionalmente en la reducción del N2.
 Son los centros P conformados por cuatro grupos
(“clusters”) “4Fe-4S” cuya función es la de almacenar y
transferir los electrones que se precisan para
desarrollar el proceso de reducción, y dos cofactores de
“Fe7MoS9 homocitrato” (llamados amigablemente
FeMoco), donde se realiza la unión y la reducción del
N2 y también donde ejerce su acción inhibidora el O2.
 Molibdoferredoxina

 El FeMoco es bastante lento, y tiene errores de

reconocimiento, pues frecuentemente confunde el
triple enlace del N2 con el del acetileno lo que
convierte a este proceso en uno de los grandes
productores de metano.
 También recibe a los cianuros, isocianuros, azidas
y óxido nitroso.
 El monóxido de carbono es un inhibidor
competitivo y el oxígeno bloquea el centro activo
definitivamente.
 La Nitrogenasa Reductasa 1 ó componente II, es un
homodímero que contiene cuatro grupos 4Fe-4S
actuando como puente entre las cuatro proteínas que
la conforman y cuya masa molecular alcanza los
60.000 Kda (ferredoxina).
 Cuando las concentraciones de Fe disponible en el
medio son bajas es sustituida por una flavodoxina.
 Su función se centra en donar electrones para la
dinitrogenasa I (el otro componente).
 En muchos casos la fuente donadora de electrones es
el ácido pirúvico, gracias a la actividad acoplada de
una piruvato flavodoxina reductasa, que funciona
cediendo los electrones a la flavodoxina.
 El oxígeno inhibe la síntesis de Nitrogenasa,
pues la expresión de los genes nif está
estrictamente regulada, tanto por oxígeno
como por nitrógeno combinado a través del
sistema Ntr-NifA.
 Asímismo, la enzima nitrogensa es fácilmente
inactivada por oxígeno, de tal forma que todos
los sistemas fijadores han desarrollado
estrategias especiales para protegerse de
concentraciones elevadas de este elemento y
evitar su inactivación
 Estas estrategias van desde la anaerobiosis total,
como en Clostridium, a la producción de gran
cantidad de polisacáridos extracelulares que hacen
de filtro para el oxígeno, exclusión metabólica
(Azotobacter) o la compartimentación, caso de las
cianobacterias.
 En la simbiosis Rhizobium-leguminosa, la estructura
del nódulo crea el ambiente microaerobio adecuado
y la leghemoglobina facilita el transporte de
oxígeno al bacteroide para soportar el metabolismo
aerobio requerido para obtener la energía necesaria
para la reducción del nitrógeno.