Está en la página 1de 26

CAPÍTULO 8: EL CRECIMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS

Un quimiostato andante
El sueño de la microbiología industrial es convertir un substrato barato y abundante en un producto de gran valor.
Los microbiólogos podrían no estar de acuerdo en cuanto al producto ideal pero sí en cuanto al substrato ideal.
Todos coinciden en que la celulosa — el componente mayoritario de la pared de la célula vegetal — es el
compuesto orgánico más abundante en el mundo y probablemente el más barato. Sin embargo, sólo los
microorganismos pueden utilizar la celulosa como substrato y, por lo tanto, convertirla en algo útil.
Al preguntarle a Robert Hungate, un microbiólogo norteamericano de primera linea, si se descubriria alguna vez
una conversión microbiana de la celulosa de interés comercial, éste replicó que ya existía - la vaca. La vaca y otros
rumiantes son fábricas andantes que utilizan los microorganismos para convertir la celulosa en carne y leche. Estos
rumiantes obtienen la celulosa (y pequeñas cantidades de otros substratos) al ingerir hierba y otros forrajes que
mastican para desmenuzarlos en pequeñas porciones que llegan al rumen, la gran cámara del estómago, constituido
por cuatro compartimientos. El rumen de la vaca es rico en bacterias y protozoos. Estos -y no la vaca- son los que
metabolizan la celulosa. La vaca no hace nada para obtener los nutrientes a partir de la celulosa. Sin embargo, los
obtiene en su mayor parte de los productos de la fermentación microbiana producida en su rumen y de las células
microbianas que pasan de manera continua desde el rumen de la vaca al intestino, donde son digeridas y
absorbidas.
Hungate y sus colegas han demotrado que el rumen de la vaca funciona como un quimiostato, un aparato que se
utiliza para cultivar microorganismos. Los nutrientes llegan de forma continua al rumen, donde los
microorganismos crecen también sin parar, y parte de su contenido pasa continuamente al sistema digestivo. Esto
no significa que las vacas estén siempre comiendo. Por el contrario, los rumiantes aportan nutrientes al rumen de
manera regular, rumiando el forraje, es decir, masticando el forraje regurgitado. Cuando mastican, fluyen al rumen
fragmentos de forraje suspendidos en la saliva. La vaca no rumia siempre que no esté comiendo, pero el aporte de
nutrientes al rumen es esencialmente continuo porque los fragmentos sólidos de celulosa actúan como reservorios
de nutrientes para los microorganismos.
Las vacas y otros rumiantes han alcanzado los objetivos que sueñan los microbiólogos industriales - convertir la
celulosa en productos de valor. Además, lo hacen eficaaanente, con mayor eficiencia que cualquier proceso
industrial conocido.

Comprender:
 Cómo crecen los microorganismos: el tiempo de duplicación y el crecimiento exponencial
 Las fases de crecimiento de un cultivo microbiano
 Los métodos que se pueden utilizar para mantener los microorganismos creciendo continuamente
 Qué tipos de nutrientes requieren los microorganismos para crecer
 Las condiciones ambientales que permiten el crecimiento microbiano: la temperatura, la presión
hidrostática, el pH y la fuerza osmótica

 Cómo medir el crecimiento de una población microbiana usando métodos indirectos - midiendo la turbidez,
el peso seco, o la actividad metabólica
 Cómo medir el crecimiento de una población microbiana mediante recuento directo, recuento en placa,
número más probable y mediante filtración
8.1 LAS POBLACIONES
Al estudiar el metabolismo y la genética de los microorganismos, nos hemos centrado en un individuo - la forma
en que se mantiene y se reproduce una célula microbiana. En este capítulo y en el siguiente, prestaremos atención
a los grandes grupos - estudiando cómo las poblaciones de microorganismos aumentan mediante el crecimiento y
disminuyen o desaparecen como resultado de la muerte.
Estudiar las poblaciones requiere que observemos a los microorganismos desde una nueva perspectiva. Cuantío
estudiamos individuos, lo que hacemos es describir. Describimos las partes de la célula implicadas en un proceso
particular, cómo produce la célula las moléculas que necesita para originar una nueva célula y cómo protege su
información genética cuando ésta pasa de una generación a la siguiente. Sin embargo, cuando estudiamos
poblaciones, lo que hacemos es Contar. De las poblaciones queremos saber "¿cuánto?","¿cuánto más?"o"¿cuánto
menos?". El estudio de las poblaciones, ya sean microbianas o humanas, se realiza desde un punto de vista
matemático.
A menos que digamos lo contrario, usaremos el término crecimiento microbiano para referirnos al crecimiento de
una población, no al incremento en tamaño de una célula individual. Las células microbianas individuales crecen,
pero la mayoria solo incrementan su tamaño hasta alrededor del doble, antes de que se dividan en dos. La división
celular se traduce en crecimiento o incremento en el número de celulas de la población (Figura 8.1).

8.2 CÓMO CRECEN LOS MICROORGANISMOS

En un ambiente favorable, una célula microbiana dada aumenta su tamaño; y cuando éste se duplica, la célula se
divide. La mayoría de las bacterias se alargan y se dividen mediante fisión binaria, o bipartición, cerca del ecuador
celular, para formar dos células hijas aproximadamente iguales. Algunos microorganismos unicelulares, incluidas
algunas bacterias, se replican por gemación, formando una yema que crece y se separa de la célula parental.
Aunque tratamos el crecimiento en términos de una población bacteriana que se divide mediante fisión binaria, los
mismos principios se pueden aplicar para los microorganismos que se reproducen mediante gemación (Capítulo 5).
El crecimiento de los microorganismos filamentosos (aquellos que forman largos tubos) y de los microorganismos
con ciclos de vida complejos siguen reglas más complicadas.

8.2.1 Tiempo de duplicación y tasa de crecimiento
El tiempo de duplicación (también conocido como el tiempo de generación) es el período que requieren las
células de una población microbiana para crecer, dividirse, y dar lugar a dos nuevas células por cada una de las que
existían anteriormente. El tiempo de duplicación es, aproximadamente, el mismo para todas las células de una
determinada población. No cambia hasta que se agotan los nutrientes o comienzan a acumularse los productos
metabólicos tóxicos. Cuando las condiciones para el crecimiento se hacen menos favorables, el tiempo de
duplicación aumenta antes de que el crecimiento se detenga.
El tiempo de duplicación varía dependiendo de la especie microbiana y de las condiciones de crecimiento de la
población. Por ejemplo, el tiempo de duplicación de Escherichia coli es de alrededor de 18 minutos en un medio
de laboratorio rico. Pero en el tracto intestinal de los vertebrados, en el cual los nutrientes son menos abundantes,
el tiempo de duplicación es de unas 12 horas. Algunas bacterias pueden crecer un poco más rápidamente que E.
coli; pero incluso en las condiciones más favorables, muchos microorganismos crecen mucho más lentamente,
requiriendo horas o días para duplicar su numero.
El valor del tiempo de duplicación nos indica la rapidez con que está creciendo una población, pero la relación es
inversa, Esto es, las poblaciones con un valor de tiempo de duplicación bajo están creciendo rápidamente, mientras
que las poblaciones con un valor más elevado de tiempo de duplicación están creciendo más lentamente. Por esta
razón, la misma informacion se expresa frecuentemente como tasa de crecimiento, o tiempo de duplicación por
hora, que es elevada para las poblaciones de crecimiento rápido y baja para las de crecimiento lento. Así, la tasa de
crecimiento de un cultivo de E. coli que tiene un tiempo de duplicación de 18 minutos será de 3,3 (60/18)
generaciones por hora.

8.2.2 El crecimiento exponencial

es decir. Esto es lógico si recordamos que por cada duplicación la población se duplica.en forma de escalera? De hecho. la célula replica su DNA y proporciona una copia a cada célula hija. Puesto que el crecimiento microbiano es exponencial. Por ejemplo. se duplica. este modelo. porque el tiempo de duplicación es de un día. la gráfica exponencial tiene ventajas significativas. una población microbiana se encuentra en crecimiento exponencial. Cuánto tardará en cubrir un estanque de una hectárea? La respuesta correcta es 31 días. el lirio cubre un estanque de media hectárea en unos 30 días. mientras que las fases de crecimiento posteriores dispararían la gráfica. se incrementa a dos células (21). donde N es el número de células en el cultivo después de que pasen n tiempos de duplicación. el incremento inicial apenas se apreciará. para la expresión gráfica del crecimiento de una población microbiana se utiliza una escala exponencial (Figura 8.Durante un periodo de tiempo de duplicación constante. una población que comienza como una célula (20). y dicho exponente es el número de generaciones que han transcurrido desde que la población comenzo a aumentar. más de un millón. En condiciones de crecimiento exponencial. los seres vivos se multiplican con una asombrosa rapidez. Así. el número total de células es igual a dos elevado a un exponente. 16 células (24). Utilizando una escala exponencial. se originan 64 células y durante la duplicación vigésimo primera. ¿Por qué la gráfica es una línea recta y no una línea en forma de escalera? Si una población microbiana proviene de una umea célula y tiene un tiempo de duplicación constante. ¿no se mantendría la población constante durante cada tiempo de duplicación y luego se incrementaría bruscamente . En la Íisión binaria. el número de células de la población se incrementa en un factor de dos. El concepto de crecimiento exponencial se ilustra mediante un paradigma matemático acerca de los lirios acuáticos. sólo se producen siete nuevas celulas. la curva se convierte en una línea recta. Un lirio de agua produce una hoja nueva cada día.1 La mayoría de las células microbianas se dividen por fisión binaria como se muestra en esta micrografía electrónica de barrido de la bacteria Staphylococcus aureus. Aunque la misma información podría expresarse utilizando una gráfica aritmética. Comenzando con una unica hoja. por cada hoja que tenía el día anterior. . no 60. La fórmula general es N = 2n. El numero de microorganismos de una población que aumenta exponencialmente se incrementa lentamente al principio y luego muy rápidamente. Esto significa que durante cada tiempo de duplicación. durante las tres primeras duplicaciones de una sola célula. luego a cuatro células (22). con una pendiente directamente relacionada con la tasa de crecimiento de la población. Durante cada tiempo de duplicación se producen tantas nuevas células como se habían producido anteriormente de manera acumulada. Si se expresa esta curva en una escala aritmética.2). Figura 8. En otras palabras. y asi sucesivamente. ocho células (23). o numerica sencilla. Durante la séptima duplicación.

Los tiempos de división efectivos se distribuyen alrededor del tiempo de duplicación.4 x 104 4. según un modelo de crecimiento asincrónico.602 60 1.408 180 3.903 80 1.709 200 3.33 1024000 1.66 256000 2.56 x 105 5.2x1O4 4.66 32000 3.00 64000 6.33 2000 2 X 103 3. Tiempo   Células / Mililitro         Notación   Minutos Horas Número Científica Logaritmo 0 0 1000 103 3. no se produce en circunstancias ordinarias.33 16000 1.00 8000 8x103 3.0 20 0.107 160 2. Por el contrario.28 x 105 5.505 120 2.806 140 2.00 512000 5.204 100 1.6X104 4.33 128000 1.12 x 105 5. de manera que el incremento de la población es uniforme y la gráfica aumenta como una línea recta.66 4000 4 x 103 3. las células individuales de la población suelen dividirse antes o después del tiempo de duplicación de la población.denominado crecimiento sincrónico.010 aa (a) .02 x 106 6.301 40 0.

Las cepas mutantes que no pueden producir estas proteínas de la fase estacionaria mueren rápidamente cuando dejan de crecer.3). de manera que retomaremos el tema en este punto. Las células se hacen más pequeñas y comienzan a sintetizar componentes que les ayudan a sobrevivir.3 Fases del crecimiento Un cultivo microbiano pasa típicamente por cuatro fases de crecimiento. (b) La expresión del logaritmo del número de células frente al tiempo es una línea recta. distintas y secuenciales: la fase de latencia o fase lag (lag. pero no puede continuar indefinidamente. sin crecer. (c) La representación del número de células frente al tiempo es una curva que tiene una pendiente muy acusada. Algunas especies bacterianas han desarrollado sofisticados mecanismos. y modifica la composición de algunos de los ácidos grasos de sus membranas. el cultivo deja de crecer y entra en la fase estacionaria de crecimiento.0 (60/20) duplicaciones por hora. significa "retraso"). Cuando estudiamos el crecimiento exponencial. Las fases lag y de muerte pueden existir o no. se agota un nutriente esencial. Un cultivo que crece con esta tasa se incrementa. Aunque no se produce un aumento neto de la masa del cultivo durante la fase estacionaria.Figura 8. No todos los cultivos presentan todas las fases del crecimiento. desde 1000 hasta más de 1 millón de células por mililitro. (a) El número de células por mililitro en un cultivo que crece exponencial mente se mide cada 20 minutos y se expresa como el número. que no se encuentran en las células en la fase log. la masa de un cultivo microbiano que continuara creciendo de forma exponencial superaría rápidamente el peso del planeta. en inglés. o el pH se hace desfavorable. la composición celular cambia cuando el cultivo pasa a esta fase. Por lo tanto. el ciclo comienza generalmente con la fase lag. 8. cuando Escherichia coli entra en la fase estacionaria sintetiza alrededor de 30 proteínas. La fase log tiene lugar casi siempre cuando las células están en un ambiente favorable.2 Crecimiento exponencial de un cultivo bacteriano. como la formación de endosporas para sobrevivir a la fase estacionaria (Capítulo 4) . No obstante. estamos estudiando la fase log. Pero siempre sucede algo. la fase estacionaria y la fase de muerte (Figura 8. el tiempo de duplicación es de 20 minutos y la tasa de crecimiento es 3. la fase log (también llamada logarítmica oexponencial). de células o como el logaritmo del número de células. Por ejemplo.2. durante largos períodos de tiempo. se acumula un producto tóxico. De acuerdo con el ejemplo del lirio acuático. en 200 minutos. Puesto que el número de células se duplica cada 20 minutos.

Si las células empleadas para inocular (sembrar) un nuevo cultivo están en la fase log. comienza la fase de muerte. generalmente. Dicho crecimiento limitado por la concentración se consigue generalmente con un aparato de cultivo . Cuando se inocula un cultivo en fase estacionaria en un medio fresco que contiene las concentraciones adecuadas de todos los nutrientes esenciales. En la naturaleza raramente la tasa de crecimiento viene fijada por la acumulación de los productos metabólicos. Un quimiostato real tiene muchos controles electrónicos. o puede depender de un cambio en el medio. siempre que el nuevo medio de cultivo sea el mismo que el viejo y las demás condiciones permanezcan idénticas. Si las células han estado en la fase estacionaría sólo brevemente. los cultivos pasan. Pero el paso de un medio rico a uno pobre implica una fase lag de varias horas. pero uniforme. y las poblaciones crecen continuamente a una tasa baja. no existe fase lag. Durante esta fase. una fase log. La duración de la fase lag depende de cuánto tiempo haya estado el cultivo previo en fase estacionaria o de muerte. en la mayoría de los cultivos bacterianos. se produce cuando las células en fase estacionaria o en fase de muerte se inoculan en un medio de cultivo fresco.mucho menor que la tasa de incremento de las células durante la fase log. lo que significa que no se suministran nutrientes ni se eliminan los productos tóxicos. Pero si han permanecido en la fase estacionaría durante meses.2). la posterior fase lag podrá durar sólo unos minutos. Las células que no crecen no pueden generar nuevo ATP y. se produce la muerte cuando no existe suficiente energía para continuar la reparación celular o para reiniciar el crecimiento. la mayoría de los microorganismos se cultivan en sistemas cerrados. asimismo. La tasa de crecimiento está determinada por la concentración del nutriente limitante. ya que las células se preparan para crecer. como la fase exponencial y. Generalmente. antes de que las células puedan comenzar a crecer de nuevo. por tanto. una fase estacionaria y una fase de muerte. éste pasa secuencialmente por una fase lag. no existe fase lag.sale con la misma tasa. los nutrientes entran de manera continua y a bajas concentraciones en el ambiente de una célula. En la mayoría de las condiciones naturales.4 El quimiostato se utiliza para mantener una población microbiana en un estado de crecimiento constante. cuando existan nutrientes disponibles.Figura 8. El cultivo -que contiene las células y consume el medio parcialmente. por las cuatro etapas de crecimiento. Si un cultivo exponencial se pasa de un medio pobre a uno rico. pero a una velocidad lenta . un período en el que no hay crecimiento.4 Cultivo continuo de los microorganismos En el laboratorio.3 Fases de crecimiento de un cultivo bacteriano (esta gráfica se basa en el cultivo descrito en la Figura 8. Generalmente. aunque se produce a una tasa mucho más lenta. las células de la mayoría de las especies mueren exponencialmente. la muerte se produce porque las células han agotado sus reservas intracelulares de ATP y no pueden reparar los componentes celulares. o nutriente más escaso. Figura 8. es una línea recta. Una bomba peristáltica añade al cultivo el medio estéril desde un reservorio a una tasa constante. Esta preparación es necesaria porque los daños metabólicos sufridos durante las fases estacionaria o de muerte deben ser reparados completamente. porque generalmente otros microorganismos pueden usarlos a medida que se van formando. existe una actividad metabólica considerable. Sin embargo. 8. Consecuentemente. y las células del cultivo comienzan a morir. Es posible conseguir un cultivo continuo en el laboratorio en condiciones que imitan las de la naturaleza manteniendo la concentración de un nutriente esencial lo suficientemente baja como para que limite la tasa de crecimiento. los microorganismos no crecen de esta manera en la naturaleza.2. por tanto. Aunque en la fase lag no se produce crecimiento neto. La fase lag es. La fase de muerte es una fase de declive exponencial. Después de aproximadamente un día en fase estacionaria. la subsiguiente fase lag de las células sobrevivientes puede durar muchas horas.

Estos requerimientos son muy variados. Los distintos microorganismos forman colonias con diferentes formas y texturas. siempre que esté presente la misma cantidad total de nutrientes. coli. Un ser humano.2. particularmente las bacterias. . un reservorio.forma una masa sólida de células denominada colonia. el efecto de la nutrición en la tasa de crecimiento es enorme.1 Nutrición Todos los seres vivos utilizan compuestos químicos presentes en el medio ambiente para construir las moléculas necesarias para fabricar nuevas células. El cultivo crece lo suficientemente rápido como para reemplazar las células que se pierden a través del sistema de desagüe. Estas no tienen ya acceso a los nutrientes. Eschenchia coli puede llegar a crecer 10 veces más rápidamente en un ambiente rico en nutrientes. de elementos traza y de factores de crecimiento orgánicos. La bomba añade una cantidad controlada de medio fresco desde el reservorio. que se encuentran todas en la misma fase de crecimiento). porque una vez que las células del centro de una colonia han dejado de crecer. al cultivo. un cultivo puede alcanzar la misma densidad. El cultivo continuo tiene aplicaciones industriales importantes (Capítulo 29). También se requiere hidrógeno para el crecimiento. En estas condiciones. Ninguna célula de una colonia visible está en fase lag. Estos compuestos químicos se denominan nutrientes. no pueden hacerlo de nuevo hasta que se transfieren a un medio fresco. la misma con que se consume parcialmente el medio de cultivo y salen las células mediante el sistema de desagüe. las células permanecen indefinidamente en fase exponencial de crecimiento. El cultivo crece a la misma velocidad con que se suministra el nutriente limitante. porque los ambientes en los que las diferentes especies se han adaptado varian enormemente. de azufre. de manera continua. un animal o una planta bien alimentados crecen mas rápidamente que otros mal alimentados. que es. Las células en el centro de la colonia han dejado de crecer y se encuentran en la fase estacionaria o en la fase de muerte. Las células utilizan estos nutrientes para generar fuerza conductora o metabolitos precursores (Capítulo 5).4). dependiendo de su localización (a diferencia de las células de un cultivo liquido. 8. Las células de una colonia están en diferentes fases de crecimiento. de fósforo. como por ejemplo uno compuesto por succinato y sales. Por ejemplo en una colonia que crece en contacto con el aire.5 Crecimiento de una colonia Cuando una población de células microbianas se desarrolla a partir de una única célula en una superficie sólida por ejemplo. el número de células en el vaso de cultivo no cambia. Las células incluidas en el centro de la colonia son totalmente anaerobias.3 ¿QUÉ NECESITAN LOS MICROORGANISMOS PARA CRECER? Cada especie microbiana requiere para crecer unas condiciones particulares. al cabo de un tiempo suficiente. o máxima masa total. y un sistema de desagüe. Asimismo. Algunas colonias tienen un aspecto tan característico que los microbiólogos pueden identificar ciertos microorganismos observando las colonias que forman. Para los microorganismos. Un quimiostato consta de una bomba peristáltica. Por el contrario. en un medio solidificado con agar en una placa de Petrí . Los nutrientes que necesitan los microorganismos para crecer incluyen una fuente de carbono. tal como el extracto de carne que en un ambiente nutritivo pobre. Es una forma eficaz de producir células microbianas o sus productos (tales como antibióticos y vitaminas). Al mismo tiempo. una cantidad idéntica de cultivo sale continuamente a través del sistema de desague. El resultado es un crecimiento más lento. El medio con succinato y sales cubre todas las necesidades esenciales de E.continuo denominado quimiostato (Figura 8. 8. las células de la superficie son aerobias. La concentración del nutriente limitante en el cultivo fija la tasa de crecimiento del mismo. de un cultivo es directamente proporcional a la cantidad de nutrientes. las células del borde de la colonia están en contacto con los nutrientes y continúan creciendo activamente en fase log. Una tasa de crecimiento más elevada significa que un cultivo alcanza sus máximos número y masa totales de manera más rápida que en un ambiente pobre en nutrientes.3. la localización de una célula en una colonia determina el acceso a los nutrientes de otra forma. porque las células de la superficie de una colonia que crece en aerobiosis captan todo el oxigeno del aire que difunde a través de la colonia. asimismo. porque constantemente se obtiene un cultivo denso que sale por el desagüe del vaso de crecimiento.Sabemos que la nutrición afecta al crecimiento de todos los organismos. Por ejemplo. pero nunca es un factor limitante en cualquier medio que permita el crecimiento. Sin embargo. de oxígeno. 8. En el vaso de crecimiento del quimiostato. un recipiente de cultivo. El rendimiento. pero el crecimiento en dicho medio requiere que la célula realice más procesos biosintéticos. de nitrógeno.

así como polisacáridos. los microorganismos que son capaces de una respiración acróbica usan el oxígeno para generar energía. por tanto. Según esto. sobrevivir en presencia del oxígeno. esto no ocurre porque no todas las células mueren durante la fase de muerte. Un ejemplo extremo es la nítrogenasa. Para los quimioheterotrofos. No obstante. Como resultado. alcoholes y aminoácidos. La mayoría de los microorganismos heterotrofos obtienen el oxígeno a partir de la misma molécula que les sirve como fuente de carbono. como la glucosa.que son acróbicas y producen oxígeno gaseoso mediante fotosíntesis . ¿sería sólo una cuestion de tiempo la eliminación de todas las especies bacterianas? De hecho. Pero. en un medio de cultivo al que se añade glucosa como fuente de carbono en lugar del aminoácido lisína.Carbono El carbono es la base estructural de los compuestos bioquímicos. Una de las fuentes más comúnmente utilizada por los microorganismos es la glucosa. como los átomos de carbono necesarios para fabricar los compuestos bioquímicos (Capítulo 5). frecuentemente se añaden a los medios como fuente de carbono otros azúcares. mientras que los microorganismos heterotrofos obtienen el carbono a partir de los compuestos orgánicos del ambiente (Capítulo 5). Redescubridores de microbios Los supervivientes ¿Cómo pueden sobrevivir las bacterias no formadoras de endosporas cuando dejan de crecer? Unas pocas horas después de que Escherichia coli (y otras bacterias no formadoras de endosporas) entra en la fase estacionaria de crecimiento. Oxígeno Todos los microorganismos requieren oxígeno elemental para fabricar sus componentes bioquímicos. los organismos deben hacer frente a los compuestos tóxicos que contienen oxigeno y que se producen durante el metabolismo acróbico. los microorganismos han desarrollado varios mecanismos para proteger incluso las enzimas altamente sensibles al oxigeno y. Algunas enzimas son destruidas rapída e irreversiblemente por la exposición al oxígeno atmosférico. La bacteria fijadora de nitrogeno Azotobacter realiza una respiración aerobica a una tasa lo suficientemente evada como para mantener anaeróbico el centro de la célula. para algunos organismos el oxigeno atmosférico es tóxico. Por ejemplo. que significa que cada molécula de hidratos de carbono proporciona a la célula un átomo de oxígeno por cada átomo de carbono. Escherichia coli crece el doble de rápido que en un cultivo idéntico excepto la adición mencionada. lo cual es suficiente para preservar la especie. mientras que las fuentes de carbono que son metabolizadas más lentamente permiten sólo un crecimiento lento. De hecho. Aunque el declive de la fase exponencial puede ser muy lento. Los heterocistes no producen oxígeno y son impermeables al mismo. Además de utilizar el oxígeno como nutriente. las moléculas orgánicas que contienen carbono. puede ocurrir la muerte de todas las células del cultivo. probablemente cualquier compuesto orgánico que se encuentra en la naturaleza es utilizado como fuente de carbono por alguna especie bacteriana. un microbiólogo de la Universidad de Harvard. Los microorganismos autotrofos obtienen su carbono a partir del dióxido de carbono (C02) de la atmósfera. pero unas pocas están programadas para sobrevivir. ácidos orgánicos. obtienen la mayor parte de su oxígeno a partir del CO2 fijado durante la fotosíntesis. donde está localizada la nítrogenasa. Las fuentes de carbono que son metabolizadas rápidamente permiten un crecimiento relativamente rápido. Los autotrofos. que se forma a partir del superóxido. un cultivo de E. .protegen la nitrogenasa. Algunas cianobacterias fijadoras de nitrógeno . que son incluso más tóxicos: superóxido (O2) y el radical hidroxilo (·OH). Las células del cultivo mueren exponencialmente en cuatro o cinco días. Los microorganismos heterotrofos utilizan como fuente de carbono muchas moléculas orgánicas diferentes. La fórmula química de los hidratos de carbono (una fuente de carbono común para los heterótrofos) es CH2O. segregándola en células especializadas. La mayoría de las células mueren. La mayoría de los microorganismos aerobios tienen enzimas denominadas oxigenasas que pueden añadir directamente oxígeno atmosférico a las moléculas orgánicas. pero no todos los microorganismos requieren oxígeno atmosférico. encontró que las bacterias no formadoras de endosporas han desarrollado sus propios mecanismos para sobrevivir períodos prolongados de escasez de nutrientes. denominadas heterocistes. Roberto Kolter. la glucosa es un ingrediente común de los medios de cultivo microbiológicos. Además del oxígeno. proporcionan tanto una fuente de energía para generar ATP. enzima que permite a las bacterias fijadoras de nitrógeno utilizar el nitrógeno atmosférico. Algunas enzimas permiten a los microorganismos utilizar el oxigeno presente en el agua mediante reacciones hidrolíticas. los compuestos bioquímicos se oxidan rápidamente y las células mueren. que generan energía a partir de la luz. pero ésta es una fuente minoritaria de oxígeno. Incluso después de un año de almacenamiento. pero las células que permanecen sobreviven durante largos períodos de tiempo. coli en fase estacionaría contiene más de un millón de células vivas por mililitro. Un radical libre es un compuesto con un electrón sin aparear que lo hace extraordinariamente reactivo. comienza la fase de muerte. Consecuentemente. una hexosa que juega un papel central en el metabolismo. Entre estos agentes tóxicos se encuentran el peróxido de hidrógeno (H2O2) y los radicales libres. Si se acumula superóxido.

Tabla 8. y algunos pueden utilizar formas inorgánicas. todos los microorganismos pueden usar amoníaco (NH 3) como fuente de nitrógeno. de manera que todos los seres vivos requieren una fuente de este elemento. en comparación con el 21 por ciento de oxígeno presente en el aire).1). Los organismos que carecen de ambos enzimas mueren rápidamente en un ambiente con oxígeno. porque la mayoría de los compuestos orgánicos que contienen fosfato no pueden pasar a través de la membrana plasmática. La forma de nitrógeno que utilizan los microorganismos depende de su capacidad metabólica y del ambiente en que se encuentran. es en si mismo un oxidante tóxico. lo utilizan como aceptor terminal de electrones. Es un constituyente de los ácidos nucleicos. de manera que cuando se vierte fosfato de los detergentes en estos sistemas acuáticos. y casi todos también contienen catalsa.1. Los aerobios obligados pueden crecer tan solo en presencia de oxígeno porque para generar energía requieren oxígeno como aceptor terminal de electrones. Cuando los microorganismos utilizan como fuente de fósforo un compuesto orgánico que contiene fosfato. La mayoría de los microorganismos pueden obtener amoníaco a partir de una variedad de compuestos orgánicos. porque cuando éste está disponible. mediante enzimas que son producidas por la propia célula. El fósforo entra en la célula en forma de ion fosfato.Los seres vivos que sobreviven en presencia del aire han desarrollado sistemas para eliminar los radicales libres. Elementos traza en las células microbianas Elemento Forma iónica principal Función . que destruye el superóxido convirtiéndolo en oxígeno y peróxido de hidrógeno El peróxido de hidrógeno. Se convierte en agua y oxígeno mediante la enzima catalasa. Constituye alrededor del 3 por ciento del peso seco de los microorganismos. Tabla 8. La relación entre el oxígeno y el crecimiento varia enormemente de una especie microbiana a otra. enzimas que lo utilizan para oxidar ciertos compuestos orgánicos. generalmente liberan el grupo fosfato fuera de la célula o en el periplasma. Probablemente. Los anaerobios obligados mueren en presencia del oxígeno. El peróxido de hidrógeno también es eliminado por las peroxidasas. Los microaerófilos toleran menos oxígeno (o requieren eoncentraciones mayores de CO2). incluidos los aminoácidos. el ion fosfato penetra en la célula. pero no mueren en presencia Ausente Presente del mismo Mueren en presencia de oxígeno Ausente Ausente Ejemplo Pseudomonas aeruginosa Escherichia coli Campylobacter jejuni Streptococcus pneumoniae Methanococcus vannielii Fósforo El fósforo se encuentra en las celulas exclusivamente en la forma de ion fosfato (Pol 3-4) o de compuestos orgánicos que contienen fosfato. Posteriormente. que es el producto de ésta y de otras reacciones catalizadas por enzimas. entre las que se incluye el ion nitrato (NO3). Éstos pueden crecer sólo a concentraciones reducidas de oxigeno (del 2 al 10 por ciento de oxígeno. Relación de las bacterias con el oxígeno Aerobios estrictos Requieren oxígeno Catalas Superóxido a dismutasa Presente Presente Anaerobios facultativos Microaeráfilos Anaerobios aerotolerantes Anaerobios estrictos Pueden crecer con o sin oxígeno Presente Presente Clase Microbiana Respuesta al oxígeno Crecen mejor con baja tensión de oxígeno Presente Presente Crecen sin oxígeno. utilizan otras rutas bioquímicas para generar energía. Todos los aerobios producen la enzima superóxido dismutasa. y casi todos también contienen catalasa. Es un constituyente de las proteínas y de los ácidos nucleicos así como de algunos metabolitos esenciales. estos organismos lijadores de nitrógeno prosperan en los ambientes en los que el nitrógeno es el nutriente limitante. o aumento en el desarrollo de algas y de otros microorganismos. Los anaerobios aerotolerantespueden generar energía sin oxígeno pero no mueren al ser expuestos al aire. Los organismos que pueden tolerar la exposición al oxigeno contienen superóxido dismutasa. El fosfato es el nutriente limitante en muchos lagos y arroyos. porque esta forma es la que se incorpora en la biosíntesis. Nitrógeno El nitrógeno constítuye alrededor del 14 por ciento del peso seco de la mayoría de los microorganismos. se produce eutroficación.2. pero cuando el oxigeno está ausente. Los organismos que pueden tolerar la exposición al oxígeno contienen superóxido dismutasa. Los anaerobios facultativos pueden crecer tanto en presencia como en ausencia de oxígeno. de los fosfolípidos y de ciertos metabolitos esenciales. porque carecen de los enzimas necesarios para eliminar el superóxido(Tabla 8. Algunos pueden lijar el nitrógeno atrnosférico gaseoso (N2).

constituyendo alrededor del 1 por ciento del peso seco de la mayoría de las células. Escherichia coli no necesita factores de crecimiento orgánicos. fundamentalmente como precursores de los cofactores de las enzimas.4. Pero si un microorganismo no puede sintetizar un bloque básico particular. Otros elementos traza forman parte de las coenzimas. pirimidinas. denominados sideróforos.2). Entre estos se incluyen el potasio y ciertos iones metálicos como son el cobre. por sales y lisina (una fuente de carbono que utiliza S. que contienen fuentes de carbono que pueden ser utilizadas más rápidamente (como la glucosa). La diversidad nutricional implica los diferentes requerimientos de factores de crecimiento orgánicos de los microorganismos. Typhimuriom muy lentamente). una bacteria del ácido láctico que agría la leche. los microorganismos requieren cantidades pequeñas. Si se encuentran en el medio ambiente los bloques básicos preformados. de algunas especies de RNA de transferencia y de ciertos metabolitos esenciales. tanto en los medios de laboratorio como en la naturaleza. éste debe ser suministrado a partir del ambiente. el tiempo de duplicación es largo y las células del medio contienen sólo el pequeño numero de ribosomas que necesitan para crecer lentamente. Los mecanismos de regulación permiten a los microorganismos explotar un ambiente de crecimiento rico. la tasa de crecimiento y el número de ribosomas por célula se muestra en la Tabla 8. son factores de crecimiento orgánicos para algunos microorganismos. Para ello. es el ion sulfato (SO42-). Así. En medios más ricos. o que son enriquecidos con bloques básicos tales como . iones inorganicos que deben estar presentes para que una enzima sea activa. Elementos traza Además de los elementos mayoritarios que necesitan para fabricar los compuestos bioquímicos. ácidos grasos. moléculas orgánicas que deben estar presentes para que una enzima sea activa. altamente insoluble. se encuentra predominantemente en la forma de hidróxido de hierro (férrico). Es un componente de dos aminoácidos.3). Algunos elementos traza son Cofactores. los elementos traza. La fuente principal de azufre en muchos suelos son los compuestos que contienen sulfato orgánico. producen más ribosomas. no disponible para los microorganismos a menos que éstos liberen compuestos que solubilizan el hierro. Por ejemplo. varias purinas y pirimídínas y 10 vitaminas (Tabla 8. de ciertos compuestos químicos inorgánicos. porque debe sintetizar las proteínas más rápidamente para crecer a mayor velocidad. Existe una gama considerable. Esta relación entre un medio rico. porque se requieren en cantidades muy pequeñas. tiene más de 10 veces más ribosomas por célula que cuando crece lentamente en un medio pobre. aunque el hierro es abundante en la naturaleza. Factores de crecimiento orgánicos Muchos microorganismos pueden sintetizar todos los bloques básicos (aminoácidos. Aunque el azufre entra en la biosíntesis como sulfuro (S2-). que son nutrientes que se requieren en muy pequeñas cantidades. etc. Aunque puede ocurrir. Por ejemplo. purinas. Estos bloques básicos preformados se denominan factores de crecimiento orgánicos. Por tanto. Pueden ser cualquiera de los diversos bloques básicos estudiados en el Capítulo 5: aminoácidos. el hierro y el zinc. nucleótidos. Los elementos traza cubren una variedad de funciones esenciales en la célula (Tabla 8. el cobalto. Por ejemplo. De esta manera. pero relativamente escaso en algunos lagos y suelos. cuando la bacteria Salmonella tiphimurium crece rápidamente en un ambiente rico. compuesto por ejemplo. En un medio pobre. que los microorganismos del suelo captan y convierten en sulfuro. El sulfato es abundante en el océano. deben suministrársele los 20 aminoácidos esenciales. la fuente de azufre más corriente. utilizan la capacidad metabólica que ahorran para crecer más rápidamente. la mayoria de las bacterias patógenas producen sideróforos. monosacáridos o disacáridos) necesarios para fabricar las macromoléculas a partir de las fuentes únicas de los elementos que se acaban de estudiar. en el cual abundan los bloques básicos preformados. la disponibilidad de los elementos traza raramente limita el crecimiento microbiano. cofactor de ciertas enzimas Cofactor de muchas enzimas Cofactor de ciertas enzimas En citocromosa y en ciertas enzimas Cofactor de algunas enzimas Presente en el coenzima de varias enzimas Presente en la vitamina B12 y coenzimas relacionadas Presente en varias enzimas Presente en varias enzimas Azufre El azufre es un constituyente minoritario pero esencial de la célula. la mayoría de los microorganismos los utilizan para aumentar su crecimiento. Los tejidos vivos son una fuente particularmente pobre de hierro disponible. aunque esenciales. a Leuconostoc mesenteroides. Las vitaminas. el microorganismo utiliza su capacidad metabólica para sintetizar sólo aquellos bloques básicos que no se encuentran disponibles en el medio ambiente.Potasio Magnesio Calcio Hierro Manganeso Molibdeno Cobalto Cobre Zinc K+ Mg2+ Ca2+ Fe2+/Fe3+ Mn2+ Mo2+ Co2+ Cu2+ Zn2+ Mantiene la presión de turgencia. Por el contrario.

en las cuales persiste la nieve durante largos períodos de tiempo y la luz es muy intensa. La mayoría de las bacterias crecen en un intervalo de temperatura de aproximadamente 40 grados Celsius. si se sumerge la mano en ella.2 g 1. hasta la temperatura máxima de crecimiento.pH y presión osmótica. Sin embargo.temperatura y presión hidrostática . la tasa de crecimiento disminuye rápidamente. al igual que los otros. origina enormes manchas rojas en las zonas montañosas nevadas. o temperatura más elevada que permite el crecimiento. especialmente las proteínas. Los termófilos (amantes del calor) crecen a altas temperaturas.tan bajas como las que pueden tolerar algunas especies bacterianas . porque algunos componentes celulares. denominadas algas de la nieve. diez grados Celsius por encima del punto de ebullición del agua pura al nivel del mar. por encima de la temperatura óptima. incluidas las reacciones catalizadas por las enzimas. Aunque los psicrófilos son capaces de crecer a bajas temperaturas. La tasa de crecimiento aumenta desde la temperatura mínima a la temperatura óptima. aunque algunos hongos pueden crecer a temperaturas inferiores al punto de congelación .4 g 20mg 40mg 20mg Factores de crecimiento Alanina (aminoácidos) Arginina HCl Asparragina Aspartato Cistina Fenilalanina Glicina Glutamato Histidina HCl Isoleucina 400 mg 484 mg Ninguno 800 mg 200 mg 100 mg 200 mg 200 mg 600 mg 124 mg 500 mg a Escherichia coli Glucosa 2g NH4Cl Na2HPO4 KH2PO4 NaCl Na2SO4 MgCl2·6H2O CaCl2 FeCI·6H2O (Gleobacter Violaceus) Ninguno 2g Ninguno 6g K2HPO4·H2O 3g MgSO·7H2O 3g CaCl2·H2O 11 g Citrato férrico amónico 0. los microorganismos procariotas toleran temperaturas más extremas que los eucariotas.y algunas algas crecen cerca del punto de congelación del agua. La temperatura óptima de una especie es aquella a la cual crece el microorganismo más rápidamente.una temperatura a la cual el agua causa dolor.2 g 0. occultum se encuentra en fuentes termales.8 mg Ninguno 40 mg 75 mg 36 mg 6 mg 20 mg 1 ml . El termófilo extremo Pyrodictium occultum puede crecer a 110 0C. ya que las reacciones químicas. Los mesófilos (amantes de una temperatura moderada) crecen a temperaturas intermedias. la temperatura óptima es tan sólo unos grados inferior a la temperatura máxima de crecimiento. existen otros factores que influyen en el crecimiento de las poblaciones microbianas. Temperatura Cada especie microbiana crece en un rango de temperatura. se inactivan más rápidamente de lo que pueden ser reemplazados. Escherichia coli y una cianobacteria Bacteria del ácido láctico Cianobacteria Fuente del nutriente (Leuconostoc mesenteroides) Carbono Glucosa Acetato sódico Fuente nitrogenada NH4Cl Sales inorgánicas KH2PO4 K2HPO4 MgSO4·7H2O FeSO4 MnSO4 NaCl 50 g 40 g 6g 1. temperaturas en las que la mayoría de los demas seres vivos no pueden crecer. y los psicrófilos (amantes del frío) crecen a bajas temperaturas.4 mg Na2CO3 11 mg Solución de metales trazab 0. Los microorganismos crecen a temperaturas extremas. Entre ellos se encuentran los factores físicos . 8.y los factores químicos . Tabla 8.2 El ambiente no nutritivo Además de la nutrición.3. Generalmente.3. desde la temperatura mínima de crecimiento. La mayoría de los microorganismos eucariotas tienen un intervalo más estrecho. Las bacterias termófilas crecen a temperaturas superiores a 50 0C . para acomodarse al crecimiento más rápido del cultivo. o temperatura más baja que permite el crecimiento. Ningún eucariota puede crecer en el punto de ebullición del agua. se realizan mas rapidamente cuando aumenta la temperatura (Figura 8.aminoácidos y materiales que se encuentran en el extracto de came. estos microorganismos. En general. Comparación de los ingredientes de los medios que se requieren para permitir el crecimiento de una bacteria del ácido láctico. P. crecen más rápidamente cerca de la temperatura máxima de crecimiento. EI crecimiento de algunas algas rojas. el tiempo de duplicacion disminuye y el número de ribosomas que contiene la célula aumenta. Según el intervalo de temperatura en el cual pueden crecer los microorganismos se dividen en tres categorías diferentes.5).

incorporan el selenio en determinadas proteínas en forma de selenocisteina.6 mg 1. en California (EE. Muchos de estos organismos pueden verse en un lago cerca de Kesterton. Cuando el selenio se encuentra a elevadas concentraciones.0 mg 1.0 µg 20 µg Ninguno Ninguno Tabla 8. El selenio es un material tóxico peligroso.0 mg 0.0 mg 2. y su incorporación en la proteína está codificada por un codón sin sentido (UGA). La selenocisteina es un aminoácido idéntico a la cisteina. Tasa de crecimiento de la bacteria Salmonella typhimurium en diferentes medios. o podría convertirse en una nueva criatura. Algunos animales del lago están mutilados. pero algunas bacterias del lago generan ATP oxidando el selenio. que recibe el agua de riego de suelos que contienen más selenio de lo normal.2 mg 2. y algunos pájaros tienen el pico torcido y las alas deformadas. la fórmico deshidrogenasa.Leucina Lisina Metionina Prolina Serina Tirosina Treonina Triptófano valina Factores de crecimiento Adenina·S04 (bases) Guanina HCl Uracilo Xantina Factores de crecimiento Tiamina·HCI (vitaminas) Piridoxina·HCI Piridoxamina·HCI Piridoxal·HCI Pantotenato Riboflarina Nicotinato p-Aminobenzoato Biotina Folato 500 mg 500 mg 500 mg 200 mg 100 mg 200 mg 400 mg 80 mg 50 mg 20 mg Ninguno 20 mg 20 mg 20 mg 1 mg Ninguno 2 mg 0. Tiempo de duplicación Número de ribosomas por célula Medio Composición (minutos) Mínimo con lisina El aminoácido lisina + sales 97 7000 Mínimo con glucosa Glucosa + sales 20 aminoácidos Cerebro-corazón 50 17000 32 42000 21 83000 20 aminoácidos + sales Extracto de cerebro y corazón de vaca El selenio: ¿Banquete o veneno? El selenio es un elemento que se parece mucho al azufre. Y otras bacterias. Si el átomo de selenio es reemplazado por un átomo de azufre. incluida Escherichia coli. que participa en el metabolismo central. la enzima se vuelve prácticamente inactiva.UU. ¿Cómo puede el selenio reemplazar al azufre de esta cisteina y sólo de ella? El fenómeno se produce de una manera muy poco usual. ¿Por qué sólo éste codón sin sentido señala la incorporación de selenocisteina? Presumiblemente. E. pero con un átomo de selenio en lugar del átomo de azufre de la cisteina ordinaria. El resultado puede ser desastroso. algunas enzimas que catalizan normalmente las reacciones de compuestos azufrados lo usan en su lugar. El selenio se incorpora en las macromoléculas del organismo. El organismo podría morir. de alguna manera la estructura del .).6 mg 0. Coli contiene un monómero de selenocisteina en una enzima.4. las cuales no funcionan normalmente. La selenocisteina se produce a partir de un tipo especial de tRNA que sirve sólo para este propósito. de manera parecida a como algunas bacterias obtienen su energía oxidando el azufre (Capítulo 5). Si el selenio reemplazara el azufre de otras cisteinas de esta enzima o de cualquier otra enzima. presumiblemente también se harían inactivas.

Las bacterias psicrófilas crecen a una tasa significativa a 5 oC. ¿Qué determina la temperatura máxima o mínima a la cual es capaz de crecer un organismo? Sin duda. las proteínas son las macromoléculas de una célula más sensibles al calor y no puede darse crecimiento a temperaturas a las que se desnaturalizan las proteínas de una célula (Capítulo 2). semejante al yogurt o mantequilla. la tasa de crecimiento disminuye. y la forma de las proteínas cambia ligeramente. de unos 37 oC Termófilos Crecen por encima de 50 0C Termófilos facultativos Pueden crecer por debajo de 37 0C Estenotermófilos No pueden crecer por debajo de 37 0C Termólilos extremos Crecen por encima de 80 0C (algunos por encima de 100 0C) Ambiente típico Agua de mar fría Suelo y agua Animales Suelo Abono Fuentes termales Las causas de la temperatura mínima de crecimiento son más complejas.. A 37oC. y por lo tanto. Por el contrario. del orden de 37 0C Para estos organismos. también puede ser esencial. A temperaturas más elevadas. el selenio. la temperatura del cuerpo humano es demasíado fría para su crecimiento. que puede ser tóxico. como algunas bacterias del suelo tales como Bacillus stearothermophilus. E. Figura 8. coli crece desde los 8oC hasta los 48oC. porque estas bacterias son psicrófilas. Los psicrófilos se subdividen en dos grupos: estrictos y facultativos. Generalmente. incluidas las que regulan el metabolismo. Los mecanismos de regulación de algunos termófilos comienzan a degradarse a temperaturas elevadas. Los termófilos crecen a temperaturas elevadas porque sus proteínas son excepcionalmente estables al calor. es particularmente sensible a dichos cambios. La función de algunas proteínas. una mutación que cambie cualquier aminoácido de una proteína estable al calor con toda probabilidad disminuirá su estabilidad al calor. y el tiempo de duplicación de unos 21. la temperatura máxima de crecimiento está determinada por la estabilidad al calor de las proteínas de un organismo. Los psicrófílos facultativos también se llaman psicrotrofos ("que crecen en el frío").5). coli. frecuentemente tiene el olor afrutado de Pseudomonas spp. su temperatura máxima de crecimiento.5. pero la mayoría tienen la misma base. Escherichia coli. Respuesta de crecimiento a distintas temperaturas entre los diversos grupos de bacterias Clase Propiedades Psicrófilos (también llamados psicrotrofos) Crecen de forma apreciable por debajo de 5 oC Psicrófilos estrictos No crecen a o por encima de 20 oC Psicrófilos facultativos Pueden crecer por encima de 20 oC Mesófilos Crecen mejor a temperaturas moderadas. de las bajas temperaturas. a bajas temperaturas.mRNA que rodea a este codón es única. Las bacterias mesólilas crecen mejor alrededor de 37 oC. más que beneficiarse. Cuando la leche se estropea en un frigorífico. la leche que se vuehe agria a temperatura ambiente tiene un aroma más agradable. Esto es.8 duplicaciones por hora. lo cual indica lo caliente que puede estar la superlicie del suelo durante un día soleado.4 minutos. Los termófilos se subdividen en estenotermófilos. o el olor fétido de Achromobacter spp. . la temperatura del cuerpo humano.a la cual funciona normalmente un frigorífico. y el crecimiento se detiene a 43 oC. debido al agriado.5 Tasa de crecimiento de Escherichia coli en un medio rico a varias temperaturas. al igual que la mayoría de las bacterias que causan enfermedades. los mecanismos de regulación metabólica se distorsionan y se detiene el crecimiento. es un mesófilo. la temperatura úptima de crecimiento de E. La tasa de crecimiento aumenta rápidamente a partir de 8 oC. para indicar que pueden tolerar. estas bacterias se encuentran en suelos normales de climas templados. La estabilidad al calor refleja la estructura proteica total. la tasa de crecimiento es de 2. termófilos facultativos y termófilos extremos (Tabla 8. los psicrófilos pueden crecer sólo a bajas temperaturas porque algunas de sus proteínas son inusualmente sensibles al calor. Tabla 8. Las interaciones hidrofóbicas de las proteínas se hacen más débiles cuando disminuye la temperatura. sin duda. Pero. Sorprendentemente. o por debajo de esta temperatura . porque a esta temperatura predominan las bacterias del ácido láctico que son mesófilas. que crece de manera natural en el intestino de los seres humanos y de otros animales.

Los hongos crecen mejor a un pH ligeramente ácido. tal como Escherichia coli. algunas especies. La presión de turgencia suministra la fuerza a la célula para crecer. viven en ambientes con un pH extremadamente bajo. Una atmósfera equivale a 1. y algunos lagos desérticos tienen un color rojo intenso debido a su presencia. la bacteria debe mantener positiva la presión de turgencia. o neutro. bombean iones de hidrógeno fuera o dentro de la célula. existen excepciones. la mayoría de levaduras no pueden crecer a presiones superiores a 8 atmósferas. del orden de 300 atmósferas.0 . alcalino. que incrementan la presión osmótica y. Por ejemplo. el pH interno se mantiene en un valor muy cercano a 7. no pueden crecer a temperaturas inferiores al punto de congelación de su medio o por encima del punto de ebullición. o concentración de solutos disueltos en la célula y en su medio ambiente.0 y 8. coli. crecen más rápidamente a presiones superiores a 1 atmósfera y las barófilas obligadas crecen sólo a presiones superiores a 1 atmósfera. Mediante diferentes mecanismos. Para hacer esto. en lugar de la presión de turgencia. de alrededor de 12. Presión osmótica Todos los microorganismos necesitan agua líquida para crecer. Pero. algunos acidólilos crecen en la lixiviación ácida de los desechos de las minas. al igual que la mayoría de las demás bacterias. por debajo de pH 7. sin embargo. El volumen molecular cambia durante el curso de la mayoría de las reacciones químicas. Sin embargo. y los protozoos y las algas a un pH neutro. pero el efecto es bioquímico.el valor óptimo para su metabolismo.Presión hidrostática La presión hidrostática es la presión que se aplica a un líquido. del orden de pH 1.0 . De esta manera. se iguala la presión dentro y fuera de la célula. bombea hacia la célula iones potasio (K+) y/o compuestos osmoprotectores. próxima al pH 7 (Capítulo 2).0l3 Newton por metro cuadrado. pH La escala de pH mide la concentración de iones de hidrógeno e hidroxilo de una solución e índica si el ambiente es ácido.la alcalinidad de las cremas o líquidos depiladores. sino que también dependen de la misma para la estabilidad de sus cubiertas celulares. Una presión osmótica elevada también priva a una célula del agua. Por esta razón. Una presión elevada no destruye una célula microbiana como ocurriría con un ser humano. cuando se colocan en agua destilada. . pueden realizar reacciones metabólicas vitales sólo dentro de un intervalo de pH limitado. sistemas con agua de mar que se deja evaporar para producir la sal de mesa. La mayoría de las bacterias sobreviven en ambientes con un intervalo de pH relativamente amplio. es el citoesqueleto el que proporciona la fuerza para agrandar la célula.0. frecuentes en los desiertos del oeste de Norteamérica. La presión elevada inhibe cualquier reacción química que conlleve un incremento en el volumen molecular y favorece cualquier reacción química que implique una disminución del volumen molecular. impiden el crecimiento microbiano. porque la presión osmótica de su contenido celular es mayor que la presión osmótica del medio ambiente (Capítulo 4). o sintetiza el disacárido trehalosa. las reacciones bioquímicas esenciales de los barófilos disminuyen el volumen molecular y se realizan más rápidamente cuando se incrementa la presión. Aunque una elevada presión osmótica evita el crecimiento de la mayoría de las bacterias. Sin embargo. las bacterias crecen mejor a un pH ligeramente alcalino (básico). Las membranas celulares son muy permeables al agua. crecen a presiones muy elevadas. Las arqueobacterias denominadas halobacterias se desarrollan en aguas saturadas de sal. En cambio. algunos alcalólilos crecen en los lagos alcalinos. En éstos. denominadas halófilas (amantes de la sal). la presión a la que estamos expuestos en la superficie de la Tierra. de manera que el agua entra o sale de una célula dependiendo de la presión osmótica relativa. Generalmente. por encima de pH 7. Las bacterias ordinarias. eventualmente. Estos solutos mantienen dentro de la célula una presión osmótica superior a la presion osmótica del exterior. se lisan inmediatamente. en las cuales los valores de pH son muy bajos. Una manera tradicional de conservar los alimentos es añadir azúcar o sal. porque muchas de sus enzimas funcionan adecuadamente sólo en un intervalo estrecho de pH (Capítulo 2). por lo tanto. las barófilas (amantes de la presión). una presión muy baja. los valores de pH son muy elevados. o en agua ordinaria. Las bacterias que se encuentran en el fondo del océano toleran hasta 1 500 atmósferas. Si aumenta la concentración de los solutos en el ambiente externo. Los alcalófilos (amantes de las bases) viven en ambientes con un pH extremadamente alto. Una elevada presión puede detener el crecimiento microbiano. Escherichia coli puede crecer en ambientes con un intervalo de pH entre 5. De esta manera los ambientes con una elevada presión osmótica inhiben el crecimiento bacteriano. pueden vivir a concentraciones de sal extremadamente elevadas. Algunas bacterias.la acidez del ácido sulfúrico. En general. tales como el aminoácido prolina. E. este incremento en la presión osmótica interna daña enzimas esenciales e interfiere en el metabolismo de la célula.6 . Por ejemplo. suficientes para aplastar cualquier cosa excepto los recipientes de acero más resistentes. Algunas reacciones bioquímicas incrementan el volumen molecular y se hacen más lentas o prácticamente se paralizan al incrementar la presión. Los acidófilos (amantes del ácido). especialmente entre las bacterias. Estas bacterias no sólo toleran elevadas concentraciones intracelulares de sal. independientmente del pH externo. porque el agua pasa rápidamente a través de la membrana celular. Las salinas. la presión hidrostática se mide en atmósferas. Por ejemplo. ajustando su pH intracelular. Las bacterias mantienen una presión de turgencia positiva. En los microorganismos eucariotas.

el cultivo liquido debe contener alrededor de 10 millones de células bacterianas de un tamaño intermedio por mililitro y. LUCHANDO CONTRA EL FRIO Puesto que los microorganismos crecen en un amplio intervalo de temperaturas. utilizan un instrumento óptico denominado espectrofotómetro (Figura 8.4. pero el de maíz se mantiene fluido. En Escherichia coli este preciso ajuste se hace de una manera muy sencilla. la presencia de un pequeño número de células microbianas no deseadas. de sangre caliente. tanto las vivas como las muertas. En otras palabras. un espectrofotómetro no es útil para detectar una pequeña contaminación. es decir. (A veces la filtración es una etapa preliminar en las medidas directas. Generalmente. en la parte insaturada. y se fabrican más ácidos grasos mediante la rama "saturada". Este mismo proceso ocurre en los microorganismos. el espectrofotómetro también puede emplearse para cultivos de levaduras. la célula puede recuperarse de la plasmolisis (a menos que la presión osmótica sea extrema) incrementando su presión osmótica interna (Figura 8. Los recuentos en placa y el NMP son recuentos de viables. . la membrana plasmática se separa de la pared celular rígida. Pero al mezclar el aceite de maíz y el de olíva en las proporciones adecuadas. se enfrentan a desafios ambientales impensables para los seres humanos. dos células pesan el doble que una célula. Los microorganismos eucarióticos. Las medidas directas incluyen los recuentos directos al microscopio o recuento electrónico.de la masa de células de una población. son más sensibles a la plasmolisis.4 MEDIDA DEL NÚMERO DE MICROORGANISMOS La medida del crecimiento y muerte de los microorganismos en el laboratorio requiere técnicas especiales. o una actividad metabólica . en el refrigerador o a cualquier temperatura intermedia. las membranas deben mantener el grado de fluidez adecuado en un intervalo de temperatura. Cuando aumenta la temperatura. En las bacterias. Cada una de estas técnicas tienen sus ventajas y sus inconvenientes.Cuando un incremento en la presión osmótica externa hace que salga agua de la célula. Otras técnicas son directas. y así su fluidez es óptima a cualquier temperatura de crecimiento. Esto sucede porque el aceite de maíz. el aceite de maíz es más fluido que el aceite de oliva. no es muy sensible con respecto al número de células bacterianas. y así sucesivamente. El resultado es una fluidez constante a todas las temperaturas. su numero es proporcional a su peso. Las consecuencias de la plasmolisis difieren según el tipo de célula. por lo tanto. Cuando se usa la filtración. Una rama lleva a ácidos grasos saturados y la otra a ácidos grasos insaturados. cuatro células pesan el doble que dos. Una enzima cerca del punto de ramificación. Puesto que un espectrofotómetro mide con exactitud lo que vemos cuando examinamos visualmente un cultivo liquido. y el aceite de oliva tiene ácidos grasos más saturados (no contienen dobles enlaces). el recuento en placa. A la temperatura ambiente. es sensible a las elevadas temperaturas. es rico en ácidos grasos insaturados (contienen dobles enlaces).1 Turbidez Debido a que todas las células de un cultivo axénico son aproximadamente del mismo tamaño. como la mayoría de los lipidos. porque carecen de una pared rígida.Cómo lo hacen? De la siguiente manera: la composición en ácidos grasos de los fosfolípidos de sus membranas cambia con la temperatura ambiental. los microbiólogos no recogen de manera laboriosa las células y las pesan. De esta manera. El efecto de la composidón de ácidos grasos en la fluidez de los lípidos es enorme. se obtiene un recuento de viables. se produce la plasmolisis. encogiéndose el citoplasma (Capitulo 4). Las membranas están compuestas por fosfolípidos. se transmitirá menos luz y la lectura en el espectofotómetro será mayor. Un recuento de viables mide sólo las células vivas de una población. 8. aquellas capaces de reproducirse (viable significa "que puede vivir"). Cuando disminuye la temperatura de crecimiento.) El recuento directo al microscopio o el recuento electrónico proporcionan un recuento de todas las células. una alta proporción de los ácidos grasos de los fosfolípidos de las membranas son insaturados. En el refrigerador. particularmente los protozoos. su actividad disminuye. ocurre lo contrario. podemos estimar el tamaño de una población microbiana a partir de su peso total. Cuando disminuye la temperatura. se puede obtener un nivel de fluidez intermedio a temperatura ambiente. el aceite de oliva solídifica. 8. &iquest. Cuanto mayor masa de células tenga un cultivo. pero generalmente. o el cálculo del número más probable (NMP). Los ácidos grasos se sintetizan mediante una ruta metabólica ramificada. el peso seco. Para que el líquido se vea turbio. solidifican con el frio y se hacen líquidos con el calor. En su lugar.6). por lo tanto. Uno de los mayores retos es mantener una fluidez de la membrana adecuada.es decir. Para funcionar adecuadamente. Estas miden una propiedad . Un espectrofotómetro mide la cantidad de luz que transmite una solución o un cultivo líquido de células microbianas.7).la turbidez. Algunas técnicas son medidas indirectas. Al igual que para la mayoría de los cultivos bacterianos. mayor será su turbídez.

y no puede distinguir entre células muertas y vivas. Sus medidas son rápidas y reproducibles. el espectrofotómetro se utiliza para estimar masa de un cultivo relativamente denso. el espectrofotómetro tiene ventajas y desventajas. La fermentación se detiene cuando la presión en la botella alcanza las 8 atmósferas. hasta que se modera la tasa de fermentacion. y poder así registrar crecimiento de una población microbiana (Figura 8. Sin embargo.7). Pero las levaduras son una excepción sorprendente. lugares en los que la membrana plasmática se une a la membrana externa mediante la pared celular (Capítulo 4). Éstas dejan de crecer y de fermentar a tan sólo 8 atmósferas de presión. Las burbujas de dióxido de carbono del champán se forman en una fermentación secundaria que se realiza generalmente en la botella. se puede determinar a partir de la gráfica la masa celular que se corresponde con cualquier lectura en el espectrofotómetro.Figura 8. Para asegurarse de que se producirá una determinada cantidad de dióxido de carbono. preparar una curva patrón. Como cualquier otro instrumento. excepto en las uniones Bayer. se añade una cantidad calculada de azúcar.6 La plasmólisis de una célula bacteriana separa la membrana plasmática de la pared celular. Los productores de vino alemanes explotan la sensibilidad a la presión de las levaduras para disminuir la tasa de la fermentación por levaduras que convierten el zumo de uva en vino. No existe prácticamente riesgo de que se produzca demasiado dióxido de carbono y explote la botella. Generalmente. ¿POR QUÉ EL CHAMPÁN SE ENVASA EN UNA BOTELLA TAN PESADA? La mayoría de los microorganismos pueden soportar elevadas presiones hudrostáticas. o gráfica en la que se relacionan las medidas del espectrofotómetro con la masa celular de un determinado cultivo. Para medir la masa o el número de células con un espectrofotómetro. Realizan la fermentación en tanques de acero cerrados y dejan que aumente la presión debido a la producción de dióxido de carbono. una presión que la pesada botella de champán puede soportar perfectamente. en primer lugar. Aunque no se sabe por qué la levadura es tan sensible a la presión. porque dejan de suspenderse rápidamente y desaparece la turbidez. Las curvas patrón también pueden obtenerse para relacionar las lecturas en el espectrofotómetro con el número células de un cultivo. La sensibilidad de las levaduras a la presión es incluso más critica en la obtención del champán. . Generalmente los distintos tipos de bacterias producen una turbidez diferent Posteriormente. Así se previene la formación de calor y el daño que se puede causar al sabor del vino. este hecho constituye una ventaja para la obtención del vino. sólo puede utilizarse para cultivos relativamente densos. necesano. Esta micrografía electrónica de transmisión muestra la plasmolisis de Escherichia coli. Tampoco puede utilizarse con células que tiendan a formar agregados.

se pesan las células. una lectura de 1. (a) El espectrofotómetro mide la turbidez. Una centrífuga es un instrumento que hace girar unos recipientes denominados tubos de centrífuga a una velocidad elevada.3 Actividad metabólica La actividad metabólica puede utilizarse. El de la derecba contiene alrededor de mil millones (10 9) de células por mililitro y. (c) La curva patrón relaciona la absorbancia con el número de células bacterianas por mililitro. expresada en unidades de absorbancia.4.7 El espectrofotómetro. Las células se separan mediante filtración (Capítulo 3) o mediantecentrifugación. está turbio. para medir indirectamente la cantidad de células microbianas. la muestra debe contener más de unos 10 millones de células. se vavan al fondo del tubo. además. se requieren alrededor de 25 ml de un cultivo relativamente denso. 8. tiene ciertas aplicaciones. para evitar que capten la humedad del aire.4. mediante varios procedimientos. Luego. 8. Un desecador es una cámara que se mantiene con una humedad muy baja. Después del segundo lavado. El peso seco de las células de un cultivo se determina separándolas del medio. desecándolas y pesándolas. se lavan las células. a partir de esta curva. las células se desecan en un horno a 1050C durante unas 24 horas y luego se enfrían en un desecador. tales como gases o ácidos. Una vez que se obtiene.2 Peso seco El número de células de un cultivo se puede medir dividiendo el peso seco del cultivo por el peso seco de una célula individual. La medida del peso seco es tediosa y requiere un cierto tiempo.6 unidades de absorbancia significa que el cultivo contiene 100 millones (108) de células por mililitro. la cantidad de luz que transmite un cultivo. que produce un . No obstante. es decir. (b) El tubo de la izquierda no tiene células bacterianas y está transparente. y que se utiliza para desecar los materiales o para mantenerlos desecados. La tasa de formación de productos metabólicos. incluidas las células microbianas. bien químicamente o mecanicamente. se resuspenden en agua destilada y se filtran o centrifugan de nuevo. generando una fuerza centrífuga que hace que las partículas pequeñas. esta curva puede usarse para convertir cualquier medida de absorbancia en número de células. Finalmente. Por ejemplo. de manera que no es detectada por el detector sensible a la luz. debe utilizarse para construir la curva patrón que relaciona las medidas en el espectrofotómetro con las de la masa celular. Por ejemplo.Figura 8. Para obtener una medida precisa. por lo tanto. La célula bacteriana dispersa la luz.

tal vez sea la más utilizada en los laboratorios de microbiología (Figura 8. utilizando un microscopio y un porta especial denominadocámara de recuento. Una persona que realiza un recuento microscópico puede discriminar entre las células microbianas y las partículas extrañas.8 Recuento microscópico directo. el recuento electrónico requiere un equipo caro. En el fondo del porta hay grabada una rejilla de 1 mm2.001 µl). mediante una bomba de vacío. Pero es un proceso tedioso y lento. sin necesidad de usar instrumentos. La cámara de recuento de Petroff-Hauser se usa. El recuento microscópico es necesario si la muestra contiene partículas extrañas. la tasa de utilización de un substrato.cultivo. cada uno de los cuales está dividido en 16 cuadrados más pequeños. cada cuadrado que observamos al microscopio representa un volumen determinado de líquido. 8. el volumen total de la rejilla es de 0. y cada cuadrado grande es un veinticincoavo de esta cantidad. tan sólo se necesita una cámara de recuento. Asimismo. es otra forma de estimar la masa microbiana. dividida en 25 cuadrados grandes. refleja la masa de células presente en el mismo.02 (un quinceavo) mm3. El poro forma parte de un circuito eléctrico. . Finalmente. El recuento microscópico no requiere de un equipo caro. la técnica puede utilizarse con materiales complejos. junto a un microscopio. Puesto que las células vivas y las muertas tienen un aspecto parecido observadas al microscopio. como el suelo o la leche. pero es muy rápido y preciso. pero se usan en situaciones muy diferentes. contando las células de varios cuadrados y haciendo la media. El recuento directo puede hacerse visualmente. por lo tanto. además del microscopio óptico que existe en cualquier laboratorio de microbiología. si las células son las únicas partículas presentes (el recuento electrónico también se usa en los laboratorios clínicos para contar las células sanguíneas). Los dos métodos principales de recuento directo .02 mm de profundidad). no muy cara. El recuento directo también puede hacerse electrónicamente. Existen muchos tipos de cámaras de recuento. que oxida el azul de metileno. llamada así en honor de los que la desarrollaron. Por el contrario. De esta manera.dan resultados semejantes. como el oxígeno o la glucosa. de manera que cada vez que pasa una célula a través del mismo. Consecuentemente. el contador electrónico las contará como células. Todas las cámaras de recuento poseen una profundidad conocida y tienen marcados unos cuadrados de dimensiones también conocidas. Se coloca en una cámara del contador un volumen determinado del cultivo y se hace pasar a través de un pequeño poro (de unos 15 µm de diámetro) a otra cámara.4 Recuento directo Un recuento directo es un recuento de las células individuales de una población microbiana. Consta de un porta que tiene unos pocillos superíiciales (de 0. el recuento directo es un recuento total de células. el azul de metileno se vuelve incoloro cuando es reducido por los componentes de la cadena de transporte de electrones de los microorganismos. La tasa de reducción del colorante es una medida muy indirecta y. pero la cámara de Petroff-Hauser. en ausencia de oxígeno. con un instrumento denominado contador Coulter. por ejemplo. no es una medida precisa de la masa microbiana. la tasa de decoloración de este compuesto mide la masa microbiana.microscópico y recuento electrónico . refleja la masa celular. Por ejemplo.8).4. Se puede calcular cuántas células están presentes en 1 ml o en cualquier otro volumen del cultivo. Figura 8. como células sanguíneas o fragmentos de suelo. la tasa de reducción de determinados colorantes. pero si tienen aproximadamente el mismo tamaño. para realizar un recuento directo de células. Sin embargo. la conductividad del circuito disminuye y la presencia de la célula es detectada electrónicamente en el contador. un microlitro (0. De esta manera. El recuento electrónico es posible porque las células microbianas no conducen la electricidad tan bien como el medio en el que están suspendidas.

5 Recuento en placa Para realizar un recuento en placa se utilizan los métodos de extensión o de vertido en placa. bien extendiéndolo en la superficie de la misma (método de extensión en placa) o mezclándolo con el medio (método de vertido en placa). generalmente después de un día. En primer lugar.8. puede detectarse incluso una única célula viva. Posteriormente se añade 0. el recuento en placa no requiere un equipo complicado. nos permite calcular la concentración de células presente en la muestra original (Figura 8. Algunas muestras de un cultivo contendrán más células que otras. Si se utiliza un medio y unas condiciones de incubación adecuadas. Este proceso se repite basta obtener una dilución apropiada en este ejemplo. transfiriendo 1 ml de la muestra a 9 ml de medio estéril y se mezclan adecuadamente. Dicho error es la imprecisión que resulta inevitable. con independencia de lo cuidadosamente que se hagan las disoluciones y las inoculaciones. se seleccionan para el recuento de colonias las placas en las que éstas están bien separadas. porque las muestras no son siempre representativas de la población total en conjunto.9). que se describieron en el Capítulo 3. Las placas que tienen entre 30 y 300 colonias ofrecen una buena relación entre la rapidez del recuento y la precisión en el resultado obtenido. una muestra del cultivo y luego sembrar una pequeña cantidad de cada dilución en una placa o bien mezclarla con el medio a sobrefusión. porque la precisión depende del recuento de un número elevado de colonias. El recuento en placa es un recuento de viables. La técnica consiste en diluir de manera seriada. junto con la dilución de la muestra que se inoculó en ella. La precisión aumenta con el número de colonias que se recuentan. la muestra se diluye seriadamente. . el número real de células viables no difiere del número determinado en más del doble de la raíz cuadrada del número de colonias recontadas. Un inconveniente es que el recuento en placa es lento y tedioso y no es muy preciso. Debido a razones estadísticas.9 Un recuento en placa es una medida directa y proporciona un recuento de viables. 1:100000 (10 -5). Figura 8.1 ml a una placa de agar nutritivo. generalmente diez veces por cada dilución. las placas deben contener entre 30 y 300 colonias. El número de colonias de una placa. cuando se siembre en una placa de agar. ya que disminuye el error debido al muestreo. la placa tiene 225 colonias.4. la placa debe ser incubada en las condiciones adecuadas. Se basa en el principio de que una única célula viable originará una colonia visible. En este ejemplo. La ventaja del método de recuento en placa es su gran sensibilidad. Las placas se incuban y se recuentan las colonias que se desarrollan. pero en el 95 por ciento de los casos. Ademas. A continuación. Una vez que se han formado colonias visibles. empleados para cultivar los microorganismos.

se alcanzará un punto en el cual algunos tubos contendrán tan sólo un organismo y otros. El método del NMP se utiliza para contar microorganismos que son dificiles de cultivar en medio sólido.6 muestra una tabla del NMP. y la presencia de E. utilizando para ello una tabla estadística. Una vez que ha pasado suficiente tiempo como para que crezca el microorganismo. Posteriormente. al igual que el método de recuento en placa. Tablas del número más probable Número de tubos con turbidez inoculados a partir de tres diluciones sucesivas NMP Número de tubos con turbidez inoculados a partir de tres diluciones sucesivas NMP 0 1 0 0.Figura 8.3 .0) en la primera de las tres diluciones. ninguno.1 1 1 0 0.10 El método del número más probable (NMP) proporciona un recuento de viables. se incuban las muestras de dichos tubos problema. Al determinar la probabilidad de que los tubos no recibieran ninguna célula. El NMP requiere la realizacion una serie de diluciones seriadas al décimo de la muestra de cultivo. se pondrán turbios. coli en el agua potable es una prueba presuntiva de contaminación.6).18 5 0 0 2. se alcanza un punto en el que algunos tubos contienen sólo un organismo y los otros. Tabla 8. determinando el número de bacterias que pueden crecer en un medio que contiene lactosa. mediante una tabla de números más probables (Tabla 8. 1). mientras que los tubos que no recibieron ninguna célula permanecerán transparentes. La Tabla 8.20 5 0 1 3. Estas bacterias probablemente sean Escherichia coli provenientes de aguas residuales contaminadas.10).40 5 1 0 3.6. ninguno. multiplicado por el factor de dilución nos proporciona el número de células viables de la muestra. 8.4. determinado por los tubos que presentan turbidez en tres diluciones sucesivas (en este caso 5. Al aumentar el factor de dilución. También se usa para determinar el número de células de un cultivo mixto que pueden crecer en un medio líquido detcrminado. 3. La precisión del número más probable aumenta con el número de tubos que se usan. puede determinarse el número más probable de células estadisticamente (11.6 Número más probable El método del número más probable (NMP). A medida que se aumenta el factor de dilución. A partir del número. aunque cinco tubos por dilución se considera como una relación apropiada entre la precisión y la economía. Aquellos tubos que fueron inoculados con una o más células microbianas a partir de la muestra. Este valor. se examinan los tubos.3 1 0 0 0. en un medio líquido adecuado para el crecimiento de dicho organismo (Figura 8. Se basa en el principio de que una única célula viva puede desarrollarse y producir un cultivo turbio. se puede determinar el numero más probable de microorganismos presentes en la muestra original. puede emplearse para determinar la contaminación del agua potable. nos proporciona un recuento de viables. Por ejemplo.

11). Supongamos que queremos determinar las bacterias que existen en una piscina.7 Filtración Los métodos que dependen de la formación de colonias (recuento en placa) o del desarrollo de turbidez (número más probable) pueden detectar una única célula microbiana viable. mediante filtracion síguiendo el mismo método descrito en el Capitulo 3. Los poros del filtro son lo suficientemente pequeños como para que no puedan pasar las células microbianas.1 5 3 1 11.0 4 3 0 2.0 8. Generalmente. . El número de colonias que se desarrollan es el número de células microbianas viables en el volumen de fluido que se filtró.7 5 4 2 22. La concentración de los microorganismos de las muestras se hace.0 4 1 1 2.0 4 1 0 1. se hace pasar un volumen conocido de líquido o de aire a través de un filtro de membrana.4. pero debido a razones prácticas.6 2 0 1 0. Los diversos métodos de determinación del número de microorganismos se resumen en la Tabla 8.1 5 3 2 14.7 5 4 3 28.4 5 4 0 13. sólo se utiliza alrededor de un mililitro de la muestra corno inóculo para la placa o para el tubo. Para ello.2 5 5 1 35.5 3 0 0 0.1 5 5 0 24. Posteriormente se coloca el filtro en un medio sólido adecuado y se incuba.7 5 5 3 92.68 5 2 0 4. generalmente.0 4 2 0 2. haciendo vacio.45 5 1 1 4. no se detectan las poblaciones con menos de una célula por mililitro.68 5 2 1 7.7.0 3 1 0 1.0 3 2 0 1.2 0 0 0.0 4 0 1 1.6 5 5 2 54.0 2 2 0 0. Por lo tanto.78 5 3 0 7.3 5 4 1 17. La muestra debe concentrarse antes de proceder al recuento.9 3 0 1 1.93 5 2 2 9. los resultados se expresan como organismos presentes por litro (Figura 8.0 4 0 0 1.0 5 5 4 160.9 2 1 0 0.0 4 2 1 2.

RESUMEN LAS POBLACIONES (p. La tasa de crecimiento se mide normalmente como el tiempo de duplicación por hora. Tabla 8. 3. el número de células de la población se incrementa por un factor de dos. El crecimiento microbiano se refiere al crecimiento de una poblacion . El crecimiento microbiano se representa gráficamente en una escala logarítmica.un aumento en el número de células. donde N es el número de células en el cultivo después de que han pasado n tiempos de duplicación.7. dividirse y dar lugar a dos nuevas células por cada una de las que existían anteriormente. para placa unicelular viable evitar el error debido al muestreo. 192) 1. Figura 8. rápido y y levaduras reproducible. pero preciso y reproducible Actividad Cualquier microorganismo Viables Requiere un cierto tiempo y puede ser impreciso. 2. no un aumento en el tamaño de una célula individual. .192-196) 1. requiere un cierto tiempo Filtración Cualquier microorganismo Viables Se concentra una muestra. la suspensión debe contener más de unos l0 millones de células por ml.puede detectar incluso una célula. requiere microscópico unicelular un cierto tiempo. rápido y electrónico unicelular preciso. lento y tedioso.11 Filtración. puede utilizarse con metabólica viable materiales complejos Directo Recuento Cualquier microorganismo Total Muy útil para el recuento de un tipo de células de una mezcla. se requiere una curva patron Peso seco Cualquier microorganismo Total Tedioso y requiere un cierto tiempo. El crecimiento exponencial significa que durante cada tiempo de duplicación. 4. no es adecuado para cultivos diluidos Recuento Cualquier microorganismo Total Muy útil para el recuento de células de un cultivo axénico. se debe recontar un gran número de colonias Numero más Cualquier microorganismo Viables Utilizado para microorganismos que son dificiles de cultivar en medio problable viable sólido y para determinar contaminación por Escherichia coli en aguas. Microorganismos para Tipo de Método Usos / Limitaciones los que se utiliza recuento Indirecto Turbidez La mayoria de las bacterias Total Determina la turbidez con un espectrofotómetro. La fórmula es N = 2n. Métodos de determinación del número de microorganismos. de manera que se puede recontar un viable pequeño número de células a partir de grandes volúmenes de un líquido o de un gas CÓMO CRECEN LOS MICROORGANISMOS (pp. no debe estar presente material extralio Recuento en Cualquier microorganismo Viables Muy sensible . El tiempo de duplicación es el período que requieren las células de una población microbiana para crecer.

10. 7. pero existe una actividad metabólica considerable. 6. 7. incluso aunque sean capaces de fabricarlos. Los factores de crecimiento orgánicos pueden ser aminoácidos. Todos los seres vivos requieren alguna forma de nitrógeno (un constituyente de las proteínas y de los ácidos nucleicos. 11. utilizando los bloques básicos preformados.como nutriente. Los aerobios estrictos pueden crecer tan sólo en presencia de oxígeno. . 9. purinas. de algunos tipos de tRNA. La diversidad nutricional se refiere a los diferentes requerimientos de factores de crecimiento orgánicos de los microorganismos. Es un período de no crecimiento. 3. pero las células se hacen más pequeñas y sintetizan componentes que les ayudan a sobrevivir durante los períodos de no crecimiento. 196-203) Nutrición (pp. porque el carbono es la base estructural de los compuestos bioquímicos. El oxígeno desempeña un papel complejo en el metabolismo microbiano . Los anaerobios estrictos mueren en presencia de oxígeno. 4. que se requieren en cantidades pequeñas. Todos los microorganismos requieren una fuente de carbono para crecer. ácidos grasos o vitaminas. debe ser suministrado a partir del ambiente. Los anaerobios aerotolerantes no requieren oxígeno pero no mueren al ser expuestos a él. Los anaerobios facultativos pueden crecer tanto en presencia como en ausencia de oxígeno. pero a una tasa más baja de la que crecen en la fase log. En condiciones naturales. como aceptor de electrones y como generador de productos tóxicos. tales como el potasio. Generalmente. Los nutrientes son compuestos químicos procedentes del medio ambiente que son utilizados por una célula para sintetizar las moléculas necesarias para fabricar nuevas células. En el laboratorio. el hierro y el zinc. Durante la fase de muerte. 5. 12. que los microorganismos necesitan para crecer. 196-201) 1. la fase lag se produce cuando las células en fase estacionaria o en fase de muerte se inoculan en un medio de cultivo fresco. Las células que crecen en la superficie de una colonia son acróbicas y las que están en el centro son anaeróbicas. Generalmente la muerte se produce porque las células agotan sus reservas intracelulares de ATP y no pueden reparar los componentes celulares. Durante la fase estacionaria no se produce un incremento neto de la masa. 2. de manera que la tasa de crecimiento es fijada por la concentración del nutriente mas escaso. 10 Los microorganismos crecen en un ambiente rico. o nutriente limitante. Entre ellos se encuentran el peróxido de hidrógeno y los radicales libres superóxido y el radical hidroxilo. la fase estacionaria y la fase de muerte. 6. Un cultivo microbiano pasa típicamente por cuatro fases distintas de crecimiento: la fase lag. Algunos elementos traza son cofactores. Los factores de crecimiento orgánicos son bloques básicos esenciales.5. pirimidinas. Los microaerófilos toleran menos oxígeno. Las células de una colonia están en fases diferentes de crecimiento dependiendo de su localización. ¿QUÉ NECESITAN LOS MICROORGANISMOS PARA CRECER? (pp. de fósforo (un constituyente de los acidos nucleicos. Los microorganismos que son capaces de una respiración aeróbica utilizan el oxígeno gaseoso para generar energía. y de determinados metabolitos esenciales). la fase log. ya que las células se preparan para crecer. los nutrientes entran de manera continua en el ambiente de una célula a bajas concentraciones. 9. 8. aunque son esenciales. Los compuestos tóxicos que contienen oxígeno son productos del metabolismo aeróbico. Los elementos traza son compuestos químicos inorgánicos. así como de determinados metabolitos esenciales). La concentración del nutriente limitante en el cultivo fija la tasa de crecimiento del mismo. Si un microorganismo no puede sintetizar un determinado bloque básico en particular. las células mueren exponencialmente. Las fases lag y de muerte no se producen a veces en un cultivo determinado. La fase log no continúa indefinidamente debido a factores como la reducción de nutrientes o a la acumulación de productos tóxicos. se consigue un cultivo continuo con un quimiostato. de los fosfolípidos y de ciertos metabolitos esenciales) y de azufre (un componente de dos aminoácidos. 8.

un recuento de todas las células. El número más problable <NMP> se basa en el principio de que una única célula viva puede desarrollarse y producir un cultivo turbio. 203-210) 1. 6. . y los hongos crecen mejor a un pH ligeramente ácido. 4. Se seleccionan las placas que tienen entre 30 y 300 colonias y se recuentan. desde la temperatura mínima de crecimiento a una temperatura máxima de crecimiento. se incuban los tubos problema.El ambiente no nutritivo (pp. o una actividad metabólica . La estabilidad al calor de las proteínas de los microorganismos determina la temperatura máxima a la cual puede crecer. Se utiliza una curva patrón para relacionar las medidas en el espectrofotómetro con la masa celular o con el nómero de células de un cultivo particular. El recuento al microscopio o el recuento electrónico dan un recuento total . vivas y muertas. Un recuento de viables es un recuento de tan sólo las células vivas. En el recuento en placa. 6. Los psicrófilos crecen a 5 0C o por debajo de ésta temperatura. La turbidez se mide con un espectrofotómetro. el número de microorganismos que estaban presentes de manera más probable en la muestra original. y posteriormente. que produce un cultivo. Los tubos que se ponen turbios recibieron una o más células. Otros métodos son directos. como el oxígeno o la glucosa. 9.El recuento microscópico sc hace con un porta especial determinado cámara de recuento. es decir. la tasa de utilización de un substrato. 3. la presión osmótica del interior de la célula es mayor que la presión osmótica de su ambiente externo. Hay varios procedimientos por los que se puede usar la actividad metabólica para medir el número de células: la tasa de formación de productos metabólicos. las bacterias crecen mejor a un pH ligeramente alcalino. Las bacterias mantienen una presión de turgencia positiva. Determinando la dilución media a la que los tubos no reciben células. se desecan y se pesan. como la cámara de Petroff-Hauser . 199-203) 1. la tasa de reducción de determinados colorantes. Los mesófilos crecen mejor a temperaturas cercanas a los 37 0C. las halófilas. se inocula o se mezcla en una placa y se incuba. 8. Para la determinación del peso seco se separan las células del medio. la temperatura del cuerpo humano.A partir de la prolundidad del pocillo y de la rejilla. la temperatura de un frigorífico. Los barófilos crecen mejor (facultativos) o sólamente (estrictos) a presiones superiores a 1 atmósfera. Cada especie microbiana crece en un intenvalo de temperatura. MEDIDA DEL NÚMERO DE MICROORGANISMOS (pp. La presión hidrostática es la presión que se aplica a un líquido. 7. contando las células individuales.de la masa de células de una población. La temperatura óptima de una especie es aquella a la cual crece más rápidamente. y miden una propiedad la turbidez. 7. se puede calcular. El recuento electrónico es posible porque las células microbianas no conducen la electricidad tan bien como su medio. se diluye varias veces al décimo o al centésimo una muestra del cultivo. 4. se puede determinar el número de células de un volumen determinado de muestra.El recuento electrónico se hace con un contador Coulter. El recuento en placa y el NMP son recuentos de viables. utilizando una tabla del NMP. La mayoría de los microorganismos toleran altas presiones hidrostáticas. 5. Algunos métodos de medida son indirectos. La temperatura minima está determinada por el debilitamiento de las interacciones hidrofóbicas de las proteínas. Los acidófilos viven en un ambiente con un pH extremadamente bajo. Determinadas especies bacterianas. tales como gases o ácidos. 5. Los termófilos crecen mejor a temperaturas superiores a los 50 0C. 2. Después de varias diluciones seriadas al décimo. 3. La plasmolisis se produce cuando un incremento en la presión osmotica externa hace que salga agua de la célula. 2. encogiéndose el citoplasma. El espectrofotómetro mide la cantidad de luz que transmite un cultivo líquido de células microbianas. En general. el peso seco. aquellas que son capaces de reproducirse. requieren elevadas presiones osmóticas externas. mientras que los alcalófilos viven en ambientes con un pH elevado.

¿Qué valores de pH prefieren las bacterias? ¿Y los hongos? ¿Qué son los acidófilos y los alcalófilos? Si las funciones metabólicas requieren un intervalo de pH relativamente estrecho. mesófilos. 4. ¿Qué son los nutrientes? Explique la función de cada uno de estos nutrientes: carbono. 3. 7.10. factores orgánicos de crecimiento. Defina los siguientes términos: termófilos. Explique esta frase: el oxígeno juega un papel complejo en el metabolismo microbiano. anaerobios facultativos. cómo pueden las bacterias existir en ambientes con un amplio intervalo de valores de pH? 11. ¿Qué es la presión hidrostática? ¿Por qué los microorganismos pueden soportar elevadas presiones hidrostráticas? ¿Hasta qué punto es perjudicial la presión hidrostática para los microorganismos? 10. ¿Un qué se diferencian las halófilas de otras bacterias? Cómo mantienen las bacterias la presión de turgencia? ¿Qué es la plasmolisis? . psicrólilos. Cómo se mantiene un cultivo continuo en el laboratorio? 5. anaerobios aerotolerantes y anaerobios obligados. Explique cómo crecen las distintas especies en un intervalo de temperaturas. ¿Qué es el tiempo de duplicación? ¿Por qué se usa frecuentemente la tasa de crecimiento. La filtración se hace antes de medir un número pequeño de microorganismos en grandes volúmenes de líquido o gas. Explique esta frase: los microorganismos crecen exponencialmente. azufre. elementos traza. las fases de crecimiento de un cultivo. Defina el término colonia. 9. Explique cada una de ellas. 8. teniperatura óptima. Explique las distintas relaciones que tienen con el oxígeno los siguientes tipos de micoorganismos: aerobios obligados. Nombre los factores químicos más significativos. microaerófilos. Utilice estos términos en su comentario: temperatura mínima de crecimiento. Utilice el término radical libre en su explicación. temperatura máxima de crecimiento. Explique qué determina la temperatura maxima y mínima. oxígeno. PREGUNTAS DE REVISIÓN LAS POBLACIONES 1. ¿A qué se refiere la diversidad nutricional? 5. Cómo afecta la localizacion en una colonia a la fase de crecimiento de una célula? Cómo afecta la localización al acceso del oxígeno? ¿QUÉ NECESITAN LOS MICROORGANIMOS PARA CRECER? 1. Nombre los factores físicos significativos para un microorganismo en un ambiente no nutritivo. ¿A qué se rofiere el término crecimiento microbiano? CÓMO CRECEN LOS MICROORGANISMOS 1. En condiciones naturales. 3. 4. en lugar del tiempo de duplicación? 2. secuencialmente. ¿qué fija normalmente la tasa de crecimiento? 6. ¿Qué es un ambiente de crecimiento rico? ¿Cómo explotan los microoroanismos un ambiente de crecimiento rico? 6. 2. Nombre.

Growth of the bacterial cell. Kolter. R. microscopia directa e.htm . . Theory and practice in experimental bacteriology.. A. Maaloe. recuento en placa g. y Niedhardt.. describa el procedimiento y explique las ventajas y desventajas. New York: Cambridge University Press. Discuta el efecto de la riqueza de un medio y de la concentración de un nutriente en la tasa de crecimiento. 1992.MEDIDA DEL NÚMERO DE MICROORGANISMOS 1. L.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/58/texthtml/cap805. Growth rate of Escherichia coli. turbidez b. 1983. Fuente: http://aulavirtual. filtración Preguntas de ensayo 1. y Mynell. Discuta las ventajas y desventajas del cultivo continuo para la obtención de antibióticos. O. Life and death in stationary phase. Sunderland. 1991. número más probable (NMP) h. J.usal. F.Microbiological Reviews 55:3l6-33. Mass: Sinauer. 2. G. a. Indique si cada uno de los siguientes métodos de medida es directo o indirecto y si de un recuento total o de viables. LECTURAS RECOMENDADAS Ingraham. G. Mynell. G. peso seco c. ASM News 58:75-79 Marr. actividad metabólica d. E. 1970. C. recuento electrónico directo f. ¿Un qué se diferencian los métodos directos e indirectos de medida de las poblaciones de los microorganismos? ¿Cuál es la diferencia entre un recuento total y un recuento de viables? 2.