INSTITUTO SUPERIOR DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE TÉCNICO DE LABORATORIO 1

PRÁCTICA DE LABORATORIO IV (R.M. 5905/07) 2do. Año 3er. cuatrimestre

GRUPOS SANGUÍNEOS

Se sabe ahora que los glóbulos rojos de un individuo son raramente o nunca exactamente iguales a
los glóbulos rojos de otro. La diferencia reside en las estructuras químicas en la superficie globular
llamadas antígenos de los grupos sanguíneos. Se han reconocido ya más de un centenar de
antígenos globulares diferentes, cada uno constituyendo la expresión de un gen heredado. La vasta
cantidad de combinaciones de genes que puede ser heredados conduce a un número casi infinito de
combinaciones de antígenos. La función de los antígenos globulares aún no es conocida,
presumiblemente cumplen alguna función biológica.

Anticuerpo: es una proteína sintetizada por un organismo en respuesta a la presencia de una

sustancia extraña. Este anticuerpo posee una afinidad específica por ese agente extraño que produjo
su síntesis. Pueden ser univalentes cuando la combinación es de molécula a molécula, o bien
bivalente, o multivalente cuando el poder de combinación es de dos o más moléculas de antígenos.

Antígeno o inmunógeno: es la molécula extraña capaz de inducir la producción de anticuerpos por

células como los linfocitos o los macrófagos. Sus características son que deben ser extrañas al
cuerpo del animal, de naturaleza proteica o constituida por complejos polisacáridos, originar
anticuerpos específicos y fácilmente demostrables y poseer un peso molecular mayor a 10.000.

Con respecto a la persona que lo posee, un antígeno es inocuo, pero puede poner en peligro a otra
persona que no heredó ese antígeno en particular. La exposición a un antígeno extraño puede hacer
que un individuo produzca una sustancia cuya función es la de destruir el antígeno. La sustancia
destructiva, que puede ser demostrada en el suero, es el anticuerpo. Una vez que se ha producido, el
anticuerpo puede ser hallado en la circulación durante años, listo para destruir aquel antígeno en
particular, en el caso de que vuelva a ser reintroducido. El anticuerpo es muy específico en su
acción, destruirá solamente el antígeno idéntico al que estimuló su producción y es inocuo con
respecto a otros antígenos y al huésped.

La especificidad de un anticuerpo está dirigida contra un centro particular sobre el antígeno llamado
determinante antigénico. Las proteínas, los hidratos de carbono y los ácidos nucleicos son
antígenos, efectivos, pero existen muchas moléculas que el organismo reconoce como ajenas a él y
también se traza de antígenos. Si la molécula es muy pequeña quizás no estimule la formación de
anticuerpo pero puede hacerlo si va unida a macromoléculas que actúan de transportador de la
molécula pequeña (hapteno) atravesando distintas barreras, hasta llegar a un lugar donde sea
reconocido por las células que en su superficie posean los receptores que capten al antígeno. Los
haptenos son antígenos incompletos o parciales con estructura simple, al combinarse con una
proteína dan especificidad.

Los anticuerpos más comunes en nuestro organismo son las inmunoglobulinas y las que se
encuentran en mayor concentración son las Inmunoglobulinas G y Inmunoglobulinas M. Las
inmunoglobulinas tienen una estructura particular donde las proteínas se presentan en forma de
cadenas livianas (de menor peso molecular) y cadenas pesadas (con alto peso molecular). Estas
estructuras constan de dos cadenas livianas que se ubican en los extremos y dos cadenas pesadas
que se encuentran en el centro, dándole a la molécula de anticuerpo una forma particular de letra
“Y" lo que le otorga gran flexibilidad para la unión con el determinante antigénico de uno o más
antígenos. La parte superior de esa "Y" es 1a que se unirá con él o los Antígenos.
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Luego de una inmunización la aparición de la respuesta inmune por las Inmunoglobulinas G y M se

observa de la siguiente manera:

Nivel de Ig G
Anticuerpo Antígeno Antígeno
(escala
logarítmica)

Ig M

1 2 3 4 6 8 10 t (semanas)

La producción de anticuerpo hacia un antígeno de grupo

sanguíneo generalmente se precede por la introducción de
glóbulos extraños, ya sea mediante transfusión o embarazo.
Es imposible hallar dadores de sangre cuyos antígenos
globulares sean idénticos a los del receptor de una
transfusión, a menos que el dador y el receptor sean
mellizos idénticos. Se compatibilizan los antígenos más
importantes pero el receptor puede resultar inmunizado (es
decir, producir un anticuerpo hacia) por un antígeno
ausente de sus glóbulos pero presente en los glóbulos del
dador. En el embarazo existe una situación similar. El feto
puede tener un antígeno globular (heredado de su padre)
que es extraño a la madre y capaz de inmunizarla. Cuando
se conoce el estímulo que logra la inmunización, el
anticuerpo es descripto como un anticuerpo inmune y el
antígeno puede llamarse inmunógeno. Si bien la transfusión
y/o el embarazo son los estímulos habituales para la
producción de anticuerpos de grupos sanguíneos, se hallan
algunos anticuerpos en personas que jamás han sido
transfundidas y que tampoco han experimentado un
embarazo. Puesto que la estructura química de ciertos
antígenos de grupos sanguíneos se halla en muchas
semillas, alimentos, bacterias, se cree que la ingestión de
estas sustancias naturales puede ser suficiente para causar
la producción de anticuerpos si no se ha heredado material
similar. Tales anticuerpos muchas veces se describen como anticuerpos naturales ya que se hallan
sin que el antígeno haya sido introducido deliberadamente. Puesto que todos los anticuerpos son el
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resultado de una respuesta inmune, una terminología más correcta podría ser anticuerpos hacia
sustancias naturales.

Cuando ambos extremos de una misma molécula de anticuerpo se fijan en sitios antigénicos de dos
distintos glóbulos, se forma un puente que los mantiene juntos. Otras moléculas de anticuerpo y
otros glóbulos se unen a los primeros dos y se forman grumos o aglutinados visibles. Este tipo de
interacción antígeno-anticuerpo se conoce como aglutinación y los anticuerpos que se comportan de
estas manera se llaman aglutininas.

El Dr. Karl Landsteiner observó que extrayendo sangre a los integrantes de su laboratorio y
separando el suero de los glóbulos rojos, al mezclar luego cada uno de los sueros con cada una de
las muestras de glóbulos, algunas de esas “mezclas" presentaban aglutinación. Es decir, cuando se
prueban glóbulos rojos bajo las condiciones adecuadas empleando suero del cual se sabe que
contiene un anticuerpo específico y no habiendo interacción entre los glóbulos y el antisuero, puede
presumirse que los glóbulos carecen del antígenos hacia el cual están dirigidos los anticuerpos.
Inversamente, cualquier interacción implica que los glóbulos rojos poseen aquel antígeno. Se
observó que los glóbulos aglutinados se encontraban en tres disposiciones diferentes. Amplió el
número de muestras al año siguiente (1902) encontrando otra nueva disposición y a cada una la
nombró con una letra según aparecía la reacción de aglutinación: A, B, 0, AB. Así se completó lo
que actualmente conocemos como sistema de grupo sanguíneo ABO. Este sistema consta entonces
de cuatro factores que determinan la característica del grupo sanguíneo de cada persona.
El Dr. Karl Landsteiner obtuvo los siguientes resultados:

+ indica aglutinación.
- indica no aglutinación, reacción homogénea.

Suero Glóbulos rojos

A B AB 0
A - + + -
B + - + -
AB - - - -
0 + + + -

Estas reacciones se explican por el hecho que los glóbulos rojos contienen en superficie sustancias
aglutinables o aglutinógenos, también llamados reacciones de grupo, mientras que el suero contiene
sustancias aglutinantes o aglutininas. Los factores A y B son los antígenos. Los anticuerpos de estas
reacciones son las aglutininas anti-A y anti-B. La producción de anti-A y anti-B comienza alrededor
de los tres meses de edad, llega a su nivel máximo durante la adolescencia y decrece a medida que
avanza la edad.

Cuando se halla presente en los glóbulos rojos alguno de los factores de grupo en su suero, nunca se
encontrará la aglutinina correspondiente, sino la contraria a su factor. Esta es debido a que en
circulación, la sangre debe estar fluida siempre y de no presentarse de esta manera habría reacciones
antígeno-anticuerpo de aglutinación entra nuestros glóbulos y las aglutininas de nuestro suero, lo
que es sumamente peligroso.

Un paciente del grupo A que es transfundido con sangre de estos supuestos dadores universales del
grupo 0 no tienen antígeno en superficie de los glóbulos rojos pero si tienen anti-A y anti-B, el anti-
B no tiene importancia, pero el anti-A sí pues entrará en contacto con la superficie de los glóbulos
del paciente y aglutinará. Quizás esta aglutinación no sea muy activa y se diluya en el torrente
sanguíneo del receptor distribuyéndose en un importante volumen de glóbulos sin dañarlos. Pero en
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ciertos pacientes del grupo se encuentran aglutininas de una clase especial, casi siempre del tipo
aglutininas anti-A rara vez anti-B, excesivamente reactivas que encierran un grave riesgo para los
glóbulos del receptor. A estos individuos se los conoce como dadores universales peligrosos. Su
sangre se reserva para pacientes solo del grupo 0.

Herencia de los Grupos ABO

Se sabe que uno de los 23 pares de cromosomas del núcleo del eritroblasto tiene el control de las
propiedades de los grupos del sistema ABO. El huevo o cigota consta de 23 pares de cromosomas
(46 cromosomas) y en cada uno del par se porta la información en un sitio particular para ese gen,
ese sitio o lugar se denomina "locus" y corresponde a un factor de grupo sanguíneo para el sistema
ABO. Los antígenos A y B, al igual que otros antígenos de los grupos sanguíneos, constituyen la
expresión de genes heredados de la generación anterior. Si se pusiera en evidencia un antígeno
determinado, el gen que lo controla debe haberse heredado de uno o ambos padres, y este gen puede
ser transmitido a la próxima generación.

Los genes A, B y 0 son alelos, es decir, uno cualquiera de los tres puede ocupar el locus ABO en
cada uno del par de cromosomas responsables de este sistema. Si el cromosoma heredado del padre
era portador del gen A y el cromosoma heredado de la madre era portador del gen B, el genotipo de
la criatura será AB y los g1óbulos de la criatura tendrán ambos antígenos A y B. Los individuos que
heredan los genes 0 de ambos padres pertenecen al grupo 0. El gen 0 es un amorfo, es decir, no
produce un antígeno detectable. Los glóbulos grupo 0 se reconocen por la ausencia de antígeno AB.
Cuando el gen 0 es heredado conjuntamente con A, tan sólo el gen A se manifiesta. En prueba con
anti-A, los glóbulos rojos de un individuo con un genotipo A0 reaccionará en la misma forma que
los glóbulos de un individuo con el genotipo AA. De la misma forma, no es posible distinguir entre
B0 y BB en prueba con anti-B. Existen tres versiones o alelos posibles para ello: A, B y 0 y a su vez
cada cromosoma esta formado por dos alelos. El huevo recibe del óvulo uno de los dos cromosomas
del par y el otro proviene del espermatozoide. El conjunto de estos dos genes (A/B/0) forma el
genotipo del individuo para el sistema ABO. Los símbolos A y B indican fenotipos, mientras que
AA, B0, etc. son genotipos. Algunos genes parecen expresarse de manera más fuerte y siempre que
se encuentran son "dominantes" sobre los otros, como los de tipo A y B. Otros se expresan en forma
más ligera o solo se expresan sí no hay ningún otro gen presente que no sea el mismo y se los
conoce como "recesivos”.

Existen, por lo tanto, seis genotipos posibles en la población: AA, A0, BB, B0, 00, AB. Se
denominan homocigotas (el mismo gen ha sido heredado de ambos padres) a los genotipos
idénticos: AA, BB, 00. Se denominan heterocigotas (se heredan genes diferentes ) los otros: A0, B0,
AB. El genotipo de un individuo con fenotipo A (o B) puede deducirse si se realiza un estudio de su
familia. Un individuo AA homocigota transmitirá un gen A a cada uno de sus hijos, mientras que un
individuo heterocigota A0 puede transmitir tanto un gen A ó 0 a su descendencia. Tal como ocurre
con los cromosomas, sólo el azar determina cuál par formará parte del cigota del cual crea el nuevo
ser. Puesto que ambos del par de cromosomas de una persona AB son portadores de un gen A o un
gen B, un padre AB o una madre AB normalmente no puede tener un hijo del grupo 0. Mediante el
mismo razonamiento, un individuo que es grupo 0 no puede tener una criatura AB, puesto que la
criatura forzosamente debe heredar un gen 0 de ese progenitor, y el gen del otro no puede transmitir
A y B conjuntamente. Los grupos se heredan de forma mendeliana clásica por segregación de alelos
y los posibles genotipos de padres producirán. estos posibles genotipos:
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Padres Hijos posibles

AA y AA AA
AA y BB AB
00 Y 00 00
AA y A0 AA y A0
AA y B0 AB y A0
A0 y 00 A0 y 00
AB y B0 AB, A0, BB, B0
AB y AB AA, AB, AB, BB
AB y 00 A0 y B0
AB y A0 AA, A0, AB, B0

Sustancias de grupo sanguíneo específicas

Las sustancias de grupo sanguíneo específicas son antígenos solubles. Cuando se agrega una
sustancia específica a su correspondiente anticuerpo, éste combina con el antígeno soluble y ya no
es capaz de reaccionar con el mismo antígeno en los glóbulos rojos. La interacción de anticuerpo
con antígeno soluble es reconocida por las pruebas de inhibición o neutralización. Las sustancias de
grupo sanguíneo específicas A y B comercialmente disponibles son extractos de estómago porcino y
equino respectivamente. La sustancia B por lo general también contiene alguna sustancia A. Estos
extractos se emplean en pruebas para determinar la presencia de anti-A y anti-B inmunes (en
contraste con las isoaglutininas) en suero humano. Mientras que las isoaglutininas que se hallan
habitualmente son neutralizadas mediante el agregado de pequeñas cantidades de sustancias
específicas al suero, las formas inmunes de los anticuerpos se mantienen activas a menos que se
agreguen grandes cantidades de las sustancias. Luego del agregado de pequeñas cantidades de
sustancias específicas, se determina la actividad de los anticuerpos probando el suero con glóbulos
rojos A y B. Esta es la base de las pruebas de neutralización parcial.

Aproximadamente el 78 % de la población de los Estados Unidos de Norteamérica segrega, en

saliva, sustancias solubles de la misma especificidad que las que se hallan en sus glóbulos rojos.
Estas sustancias son similares a las sustancias de grupo sanguíneo específicas. Aunque los genes
ABO y H son los responsables de la producción de todos los antígenos ABH, la aparición de los
antígenos en saliva es regulada por otro juego de genes, Se y su alelo se. Individuos con los
genotipos SeSe y Sese segregan sustancias de grupo sanguíneo en saliva. Individuos con el genotipo
sese se denominan no secretores porque su saliva no contiene sustancias ABH. Los genes Se- se se
heredan en forma independiente de los genes ABO y H. Las sustancias específicas que se hallan
normalmente en la saliva de secretores son:
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Grupo Sanguíneo Antígenos en Saliva

A AyH
B ByH
0 H
AB A, B y H

Las pruebas de secreción ABH pueden coadyuvar para establecer el genotipo ABO de un individuo
cuyos antígenos globulares están poco desarrollados o ausentes. Por ejemplo, cuando se demuestra
que la saliva contiene sustancia A y H, se pone en evidencia la herencia de un gen A, un gen H y un
Se. Un individuo que pertenece a un subgrupo débil de A o B puede tener antígenos globulares poco
desarrollados. Alternativamente, los antígenos pueden estar ausentes debido a que el gen común que
regula la aparición de antígeno celular se halla ausente. Asimismo, algunos pacientes que sufren de
leucemia pueden haber perdido los antígenos globulares.

Con todas las reservas del caso y tomando en cuenta lo establecido para los dadores del grupo 0, se
puede concluir:
* Receptores universales de glóbulos: grupo AB, solo pueden recibir glóbulos, porque su suero no
aglutinará ningún glóbulo recibido ya que no tiene aglutininas.
* Dadores universales de glóbulos: ya que no poseen antígenos en la superficie pero no pueden
donar suero ya que están las aglutininas.

Grupo Aglutinógeno (antígeno) Aglutinina (anticuerpo)

Glóbulo rojo Suero
A A Anti-B
B B Anti-A
AB AB Ningún anticuerpo
0 Ningún antígeno Anti-A y anti-B

Los riesgos de incompatibilidad pueden ser muy altos si no se conocen las reacciones de
aglutinación de cada grupo: por ejemplo, un paciente del grupo A puede recibir sangre entera
(glóbulos y plasma) de su propio grupo, si no hay sangre en existencia en el banco de ése grupo se
le puede brindar sangre reconstituida con glóbulos del grupo 0 más plasma artificial (mantenida en
solución fisiológica, dextrosa, inositol que no posee carga, por lo tanto atraviesa membrana y
reconstituye el 2,3 difosfoglicerol), pero no puede recibir plasma del grupo 0 porque en él se
encuentran las aglutininas anti-A que producirían reacciones de aglutinación en el paciente. Con
este criterio tampoco puede recibir sangre del grupo B ni del AB porque en el suero del paciente A
se encuentra aglutinina anti-B que aglutinaría la sangre recién transfundida y lo mismo para el
grupo AB, solo que el inconveniente se halla en los glóbulos que tienen antígenos que aglutinarían
con el suero del paciente A.

Las reacciones de aglutinación se efectúan con sueros de los grupos A y B, que son sueros testigos
seleccionados porque sus aglutininas son particularmente poderosas para la reacción de
aglutinación.

+ indica aglutinación.
- indica no aglutinación, reacción homogénea.

Sueros testigos Grupos sanguíneos

Anti-A Anti-B
- - 0
+ - A
- + B
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+ + AB

Existe la denominación de “dadores universales" para individuos del grupo 0 ya que sus glóbulos no
son aglutinados por suero de individuos de otros grupos, pero ésta es una mala definición pues al
transfundir estamos pasándole sangre con glóbulos y con plasma, lo cual hace que se vuelva
peligrosa, además se toma en cuenta la compatibilidad del sistema del sistema ABO y no la de otros
sistemas de grupos (actualmente existen 400 detectados).

En las personas de raza blanca de origen europeo los porcentajes para cada grupo son de 45% el
grupo A, 43% para el grupo 0, 9% para el grupo B y 3% para el grupo AB, aunque estas cifras
varían mucho de población en población. En otras razas los porcentajes varían y se debe a
características propias de cada lugar.

Los aglutinógenos del sistema ABO son termorresistentes pues se destruyen recién a más de 75º C,
son resistentes a la desecación y son destruidos por ácidos y bases. Son poco sensibles en el
momento del nacimiento (un quinto del normal) y aumentan durante los primeros años de vida hasta
la pubertad, y desde allí quedan inmutables.

Clasificación de Subgrupos

Entre las células de los grupos A y B se encuentran algunas que dan más reacción que otras por lo
que se observó una diferencia entre la aglutinación que daban los grupos A y se estableció la
existencia de dos subgrupos: A1 y A2. Lo mismo se estableció para el grupo B: B x y Bw. Esto se
manifiesta en el grupo AB de la siguiente manera: A 1B y A2B. Existen mas subgrupos dentro de
cada grupo pero son muy escasos.

En base a los resultados de pruebas con anti-A, anti-AB y anti-A1, los glóbulos de grupo A pueden
ser subdivididos en A1, A intermedia, A2, A3 y A0 (Ax).

Reacciones de Glóbulos con:

Suero Lecitina Anti-A1 en

Subgrupo Anti-A Anti-AB Anti-A1 Anti-A1 Suero

A1 + + + + No

A int. + + + + No

A2 + + Neg. Neg. 1-2%

A3 +* +* Neg. Neg. Algunas

Veces

A0 Neg. + Neg. Neg. Frecuente

* Indica una aglutinación de campo mixto, es decir, pequeños agrupamientos en un campo de glóbulos no aglutinados.

La diferencia entre un subgrupo y otro es por lo menos parcialmente cuantitativa, los glóbulos A 1
contienen la mayor cantidad de antígeno A, mientras que los glóbulos A 0 tienen la menor. Son raros
los subgrupos de B, por lo general son reconocidos por variaciones en la potencia de la reacción con
anti-B y no se dispone de ningún reactivo para diferenciarlos entre si. Existe menos aglutinación en
los subgrupos A2 y A2B que en los mismos del grupo A l y AlB, y esto es debido a la presencia de
Isoaglutininas dentro de esa sangre que reaccionan con eritrocitos de otros subgrupos. A nivel de
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ejemplo, se cita que el suero de una persona A 2 o A2B puede tener anti-A1 y anti-A1B
respectivamente y por lo tanto estas disminuyen la aglutinación que le correspondería por su propio
subgrupo. Estos anticuerpos son raros y se los conoce como “Isoaglutininas irregulares". Se aplica
el término de isoaglutininas al anti-A y anti-B cuya presencia resultara demostrada en el
agrupamiento inverso (presencia o ausencia de anticuerpos en suero). Puede que el antígeno sea tan
débil que no permita su reconocimiento y los glóbulos rojos pueden ser informados erróneamente
como de grupo 0. Esto es particularmente peligroso si se tratara de los glóbulos de un dador. Si bien
los glóbulos A0 no son aglutinados por suero anti-A, si lo son con suero anti-AB. Ocasionalmente
surgen problemas porque el suero de un A 2 o A2B contiene anti-A1. Este anticuerpo puede ser
detectado mediante el agrupamiento inverso o en las pruebas de compatibilidad. Los dadores de
grupo A2 (A2B) deben ser los seleccionados para un receptor A (AB) en cuyo suero se ha hallado
anti-A1. Es improbable que el anti-A1 dé lugar a una reacción transfusional, pero interferirá con las
pruebas de compatibilidad si se realizan las pruebas cruzadas con dadores A 1 (A1B). En una
paciente obstétrica, anti-A1 carece de importancia, no provoca enfermedad hemolítica del recién
nacido. Aproximadamente 1-2 % de individuos dé grupo A2 y aproximadamente 25 % de individuos
de grupo A2B producen anti-A1. Parece ser un anticuerpo hacia una sustancia natural, puesto que es
hallado en algunos individuos sin antecedentes transfusionales o de embarazo.

El Gen H: su Función en la Expresión de los Genes A y B

Parece ser necesaria la acción del gen H para la formación de los antígenos A, B y para la
producción de H, un antígeno hallado en su mayor concentración en individuos de grupo 0. El gen
H es muy común, la mayoría de nosotros somos HH homocigotas, habiendo recibido el gen de
ambos padres. Parece ser que h, el alelo recesivo de H, es bastante raro. No podemos reconocer el
heterocigota Hh, pero los individuos con el genotipo hh son sumamente infrecuentes, tienen el
llamado fenotipo “Bombay”, careciendo de la expresión normal de los genes A, B y 0 que
heredaron. La herencia de H es independiente de la herencia de ABO, pero los antígenos A, B y H
se forman todos del mismo material básico, que en sí es presumiblemente producto de un gen. El
material básico tiene una estructura proteica o lipídica, a la cual se adhieren glúcidos. El agregado
de otro glúcido a la cadena da lugar a un nuevo antígeno. El tipo de glúcido y la posición en que se
adhiere determina la especificidad del antígeno. Cada uno de los genes H, A y B controla la fijación
de un glúcido distinto. H actúa primero y fija un glúcido (fucosa) al material básico. La molécula
resultante es reconocible como un antígeno H, capaz de estimular y reaccionar con anti-H. Puesto
que el gen 0 es inactivo, no agrega nada más a la molécula, haciendo que los glóbulos de un
individuo de grupo 0 reaccionen fuertemente con anti-H. La presencia de un gen A resulta en la
fijación de otro glúcido (N-acetilgalactosamina) al sustrato formado por el gen H. El glúcido
agregado forma un nuevo antígeno (A), pero parece hacer que la fucosa sea menos accesible, puesto
que anti-H no reacciona tan bien con glóbulos de grupo A como con glóbulos de grupo 0. Glóbulos
A2 dan mejores reacciones con anti-H que glóbulos A1, y se ha sugerido que esto se debe a que
algunas de las cadenas de los glúcidos que conforman el antígeno A 2 son incompletas, haciendo que
la fucosa sea el glúcido terminal en lugar de N-acetilgalactosamina. El glúcido que da a la cadena la
especificidad B es galactosa, parece interferir menos con la interacción H/anti-H que
N-acetilgalactosamina.
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El anti-H más común es una aglutinina fría, es decir, reacciona mejor a temperaturas inferiores a la
ambiental. Este anticuerpo reacciona más fuertemente con glóbulos de grupo 0, grupo A 2 y
subgrupos más débiles, reaccionando apenas con glóbulos de grupo A 1 y A1B. Las reacciones con
glóbulos de grupo B son intermedias. La distinción que realiza el anti-H entre los glóbulos rojos de
varios grupos ABO se debe aparentemente a la diferencia en el acceso a la fucosa que confiere la
especificidad H. El antígeno H de los glóbulos A 1 y A1B parece estar tan oculto que a todo efecto
podría estar ausente; por consiguiente, anti-H se halla ocasionalmente en el suero de individuos A 1 y
A1B. Anti-H de alto título puede reaccionar a temperatura ambiente y ser detectado en pruebas de
compatibilidad, pero es mucho más probable que se observe en procedimientos de detección de
anticuerpos, puesto que los glóbulos testigo empleados en tales pruebas pertenecen al grupo 0. Por
lo general, los dadores seleccionados para receptores de grupo A y AB serían A y AB
respectivamente; 80 % de estos dadores son A1 y A1B y, por consiguiente, sus glóbulos serían
compatibles con anti-H. El anti-H en individuos que no son de tipo “Bombay” parece ser un
anticuerpo hacia una sustancia natural. Anti-H no es causa de enfermedad hemolítica del recién
nacido.

Fenotipo Bombay

El primer ejemplo de lo que se llegó a conocer como el fenotipo “Bombay” fue informado en 1952
por Bhende y colaboradores. Aunque este estado parece ser más frecuente entre la población de
habla marathi de la India, se han reconocido aproximadamente 30 de tales sangres en diversas
partes del mundo. A todo efecto práctico, los glóbulos rojos de una persona del fenotipo Bombay
carecen de los antígenos del sistema ABO, en las pruebas de rutina, anti-A, anti-B o anti-H, no
producen la aglutinación de los glóbulos. La ausencia de reacción con anti-A y anti-B sugiere que
los glóbulos rojos pertenecen a un individuo de grupo 0. Sin embargo, glóbulos 0 reaccionan
fuertemente con anti-H y los glóbulos Bombay no reaccionan con anti-H. Las muestras de suero de
individuos Bombay contienen anti-A, anti-B y anti-H. La presencia de anti-H en el suero del
individuo constituye un indicio adicional de que sus glóbulos rojos no pertenecen al grupo 0.
Debido a la cantidad de anticuerpos en su suero, el receptor Bombay de una transfusión es
incompatible con dadores de grupos A, B, AB y 0; solamente podría ser compatible la sangre de
otra persona Bombay. El fenotipo Bombay se debe a la ausencia del gen común H, o, dicho de otra
forma, la presencia de h en el estado homocigótico. Para la formación del antígeno H, se requiere
H, a cuyo sustrato se adhieren los glúcidos A y/o B para formar los antígenos A y/o B. Los genes A
y B de los individuos Bombay parecen ser normales, puesto que se expresan mediante la producción
del antígeno en otros miembros de la misma familia que poseen por lo menos un gen H. Los hijos
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Hh que resultan de una pareja hh x HH (uno Bombay, el otro normal) tienen antígenos globulares A,
B y H normales. Presumiblemente, los glúcidos A y B se presentan en el individuo Bombay, pero no
pueden ligarse salvo al sustrato H; por consiguiente, el antígeno A, B o H no se forma en la
ausencia de un gen H. El genotipo hh se presenta por lo general en los hijos de un casamiento
consanguíneo. Con frecuencia, los padres son primos y ambos del genotipo Hh, sin embargo, un
informe de Yunis y colaboradores da cuenta de una familia donde un padre era Hh y el otro hh.
Como podría esperarse, los únicos hijos que demostraron el fenómeno Bombay eran aquellos que
heredaron h de cada padre; es decir, los hijos hh homocigotas. El símbolo 0h se emplea para
denominar glóbulos rojos del fenotipo Bombay. Cuando los estudios de una familia indican cuáles
genes ABO se heredaron, al símbolo se le da una sobreinscripción; por ejemplo, OAh describe una
persona del fenotipo Bombay quien es genéticamente AA o AO. Los individuos que poseen un gen
Se pero que son del genotipo hh no segregan el antígeno A, B o H en saliva. Tanto H como Se debe
ser heredado para que los antígenos ABH se presenten en saliva. A diferencia del anti-H hallado
ocasionalmente en el suero de individuos A1 y A1B, el anti-H en el individuo 0h, tiene actividad en
una amplia gama de temperaturas y es capaz de lisar glóbulos rojos. Si el complemento requerido
para la lisis ha deteriorado, el anticuerpo aglutinará glóbulos rojos H positivos. Debido a la
presencia simultánea de anti-A y anti-B en el suero 0h, las variaciones en las reacciones anti-H con
glóbulos de distinto grupo ABO no se observarán.

Determinación de los grupos ABO

Se efectúan por medio de sueros clasificadores: anti-A, anti-B, anti-AB (0). El tercero ayuda a
captar los que podrían pasar inadvertidos como el grupo anti-A y ser clasificados erróneamente
como 0.

Método de tubo (Landsteiner modificado por Schiff)

1 tubo de Kahn con l ml de solución fisiológica.

1 gota de sangre.
Homogeneizar.
Se llevan tres gotas de esta suspensión a cada uno de tres tubos de Kahn rotulados A, B, AB.
En el tubo rotulado A se coloca 1 gota de suero anti-A.
En el tubo rotulado con B se coloca 1 gota de suero anti-B.
En el tercer tubo 1 gota de suero anti-AB.
Se homogeiniza los tres tubos y se centrifugan a 1.000 rpm durante un minuto
Se observa si existe aglutinación inclinando y moviendo suavemente los tubos.

Si existe aglutinación a simple vista pertenece al grupo del suero que se le colocó. Si no se ve
aglutinación el resultado es una mezcla homogénea. Se incuban a 37º C si hay la sospecha de
crioaglutinación por aglutininas frías.

Sueros (anti-sueros) Grupo sanguíneo

Anti-A Anti-B Anti-AB
- - - 0
+ - + A
- + + B
+ + + AB

Método de Lee-Vicent (portaobjetos)

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En un portaobjetos se marcan con un lápiz graso a la izquierda un número 1 y a la derecha un

número 2.
Se coloca 1 gota del suero testigo A (anti-B) en la izquierda.
Se coloca 1 gota del suero testigo B (anti-A) a la derecha.
Se efectúa una punción digital y con una varilla se transfiere una pequeña cantidad a cada
una de las gotas de antisueros.
Se homogeiniza con una varilla distinta para cada extremo del portaobjetos.
Se efectúan suaves movimientos rotatorios durante 30 segundos.

Se observa aglutinación. A veces hay que llevar el tiempo a más de tres minutos para observar
aglutinación fina.
1 2

Anti-B Anti-A

Resultados

(1) (2)
+ - Grupo B
- + Grupo A
- - Grupo 0
+ + Grupo AB
Anti-B Anti-A
(Testigo A) (Testigo B)

Prueba de compatibilidad sanguínea (Landsteiner)

Para eliminar resultados erróneos se utiliza una prueba directa con una suspensión de glóbulos del
dador. En un tubo de Kahn se colocan 2 gotas de suero del receptor (al que se le va a transfundir).
Se le agrega 2 gotas de suspensión del 2-5 % en solución fisiológica de glóbulos del dador, más 2
gotas de solución fisiológica. Se centrifuga a 500 rpm, durante un minuto. Si existe aglutinación se
revela la incompatibilidad del receptor-dador.

Enfermedad Hemolítica del recién nacido (Eritroblastosis fetal)

Se asocia con fetos ABO incompatibles con la sangre de la madre. Casi siempre se trata de madres
del grupo 0 y el recién nacido (A ó B). La madre siente el estímulo de los glóbulos distintos a los de
ella y por lo tanto crea anticuerpos contra estos antígenos extraños. El niño se encuentra en una dura
lucha durante todo el embarazo contra los anticuerpos maternos que se adhieren a sus eritrocitos y
los aglutinan liberando la hemoglobina y por lo tanto destruyéndolos. En la clínica se observa
hiperbilirrubinemia neonatal, anemia y el diagnóstico se efectúa por frotis, observando esferocitosis.
Cuando la destrucción es masiva, el feto trata de compensar la pérdida de eritrocitos fabricando más
por parte de la médula o sea la anemia al nacer es aparente. Cuando no sucede esto, el feto no puede
sostener su ritmo de crecimiento y puede llegar a anoxia anémica que acentuada, provoca muerte
fetal intrauterina.
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PRÁCTICA DE LABORATORIO IV (R.M. 5905/07) 2do. Año 3er. cuatrimestre

La prueba de Coombs directa es por lo general negativa porque los anticuerpos no están
firmemente fijados a los aglutinógenos A ó B y puede ser dudosa o positiva entonces se establece el
diagnóstico con la prueba de elusión del anticuerpo.

Prueba de elusión del anticuerpo (Landsteiner y Miller)

Eritrocitos sensibilizados que se lavan tres veces con solución fisiológica fría de reciente
preparación. Se agrega a los eritrocitos lavados una cantidad de solución fisiológica cuatro veces
mayor a su volumen y se mezcla.
Se coloca a baño a 56º C, agitando continuamente durante 5 minutos y luego se centrifuga a 3.000
rpm en tubos previamente calentados y mientras la solución está caliente. El líquido rojizo
sobrenadante se separa rápidamente y este es el eluído al que se le realizan las pruebas.

SISTEMA RHESUS

Descubiertos también por Landsteiner y Wiener en 1940. Inyectando eritrocitos de mono Macacus
rhesus a conejos, se provocó la aparición de un anticuerpo que aglutinaba 30 de 45 de sangres
humanas (67 %). Esto llevó a manifestar la existencia de un antígeno común en el hombre y el
mono, llamado factor Rhesus o Rh y comprende seis antígenos conocidos: Rh0, rh’, rh’’, Hr0, hr’,
hr’’(Wiener). La característica principal de este factor es su actividad inmunitaria. Luego de
transfusiones de sujetos Rh (+) a un paciente Rh (-) o bien en el curso de un embarazo de una madre
Rh (-) portadora de un feto Rh (+), casi siempre en el momento del parto pero ocasionalmente en la
última fase del embarazo, aparece en el suero del sujeto Rh (-) una aglutinina, inmune, irregular,
activa sobre eritrocitos Rh (+), donde los hematíes Rh positivos tienen acceso a la circulación en
una persona Rh negativa.

Se puede dividir a los sujetos en grupos que aglutinan eritrocitos por reacción antígeno-anticuerpo
del tipo Rh (+) y otro grupo que no muestra aglutinación denominado Rh (-). Una de las
nomenclaturas de los factores Rh, pertenece a Wiener y la otra mas usada pertenece a dos
investigadores Fisher y Race que establece que el sistema Rh se determina por tres pares de genes
íntimamente ligados (D, C, E ó d, c, e). El factor de Wiener Rh 0, para Fisher-Race se convierte en
factor D. Dos factores frecuentemente asociados, con el Rh0 (D) se denominan: rh’ y rh". El rh’ se
convierte en factor C y el rh" en factor E.

Tabla de los distintos genotipos y nomenclaturas de factores:

Factor Wiener Fisher-Race Reacción antígeno-anticuerpo características

Rhesus Anti-D Anti-C Anti-E
Rh cDe + - -
Rh (+) Rh1 CDe + + -
Rh2 cDE + - +
Rh1Rh2 CDE + + + Dominante homocigota
rh cde - - - Recesivo homocigota
rh (-) rh’ Cde - + -
rh’’ cdE - - +
rh’rh’’ CdE - + +

La forma de armar los genotipos es tener en cuenta que para determinar el factor rhesus el antígeno
mas común en la población es el D o Rh0 o (+) y en menor escala el “d” o rh o (-). Para al resto,
existen solo dos posibilidades a tener en cuenta: C, c y E, e.

Si es positivo entonces será “D”, por lo tanto CDE

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cDe CDE
CDe
cDE
cDe

Si es negativo será “d”, por lo tanto CdE

cde CdE
Cde
cdE
cde

A los fines prácticos en transfusiones de sangre y pruebas prenatales el más importante es el factor
D o Rh (+) y su contrapartida negativo. En una transfusión al receptor se lo agrupará como Rh 0
(como positivo) con un suero anti-Rh0 (anti-D) según se observe la reacción de aglutinación. Para
los dadores si se trata de un Rh (-) es necesario ensayar las pruebas para un rh' (C) y rh" (E).
Anticuerpos hacia cualquiera de estos antígenos (C, c, E, e) pueden ser producidos por un individuo
cuyos glóbulos rojos carecen de los mismos. También en obstetricia, si la embarazada es positiva no
requiere ninguna otra prueba. Pero si es negativa se efectúa con su pareja la prueba, si é1 es
negativo no se realiza ninguna otra prueba, si resulta ser positivo debe estudiarse el suero de la
mujer en busca de posibles anticuerpos anti-Rh desarrollados durante el embarazo actual, los
anteriores y los siguientes. La aparición de estos anticuerpos, salvo que se produzcan en las dos
últimas semanas de gestación, sirven como advertencia de una posible eritroblastosis del recién
nacido y se requerirán bolsas de sangre del banco de sangre del lugar, para compensar al neonato.
Los reactivos destinados a la tipificación Rh se preparan del suero de personas negativas que han
producido anti-D. Si bien se requieren anticuerpos para preparar reactivos para las pruebas, una de
las metas de un servicio de transfusión de sangre es la de evitar la formación de anticuerpos o
isoinmunización. El anticuerpo no es dañino con respecto a los hematíes del individuo que los
produce, pero puede provocar problemas transfusionales o en el embarazo. Cuando el anticuerpo se
fija al antígeno en la superficie de los glóbulos rojos in vivo los glóbulos rojos ya no son normales y
están destinados a ser destruidos. Los anticuerpos Rh rara vez causan la lisis de los glóbulos pero se
adhieren a los mismos y los sensibilizan. El bazo reconoce los glóbulos sensibilizados,
interpretando que deben ser eliminados de la circulación por estar dañados. Si una cantidad grande
de glóbulos, tal como un frasco de sangre Rh positiva, se transfunde accidentalmente en un paciente
Rh negativo cuyo suero contiene anti-D, puede resultar en una sobrecarga para el bazo. Los
productos tóxicos provenientes de la destrucción globular también pueden afectar el funcionamiento
del hígado, los riñones y el corazón. Los síntomas de una reacción transfusional experimentados por
el paciente pueden ser leves o la reacción puede ser de tal gravedad como para provocar su muerte.
Los síntomas precoces son escalofríos, fiebre y dolor en la parte baja de la espalda. Pueden ser
seguidos por dolor torácico, caída en la tensión sanguínea y shock, efectos que se cree son causados
por sustancias tales como la histamina liberada durante el transcurso de la reacción. El dolor dorsal
indica daño renal. Este puede ser resultado de la hemoglobina y las otras sustancias liberadas como
consecuencia de la lisis globular. Por lo general estas consecuencias trágicas pueden ser evitadas si
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se realizan las pruebas de detección de anticuerpo para poner de manifiesto la presencia del
anticuerpo con anterioridad a la transfusión. Cuando se detecta un anticuerpo en el suero de un
paciente, éste debe ser identificado. Se realizan pruebas con la sangre del dador elegido para
confirmar que el antígeno que corresponde al anticuerpo del paciente no se halla en sus glóbulos. Se
realiza la prueba de compatibilidad entre el suero del paciente y los glóbulos del dador para
asegurar que son compatibles.

Herencia de los factores Rh

Siguen los mismos pasos que los del sistema ABO, con las leyes mendelianas.

Técnica del factor Rh (Diamond- Abelson)

Sobre un portaobjetos limpio se colocan 1 o 2 gotas de sangre las que se enfrentan con el antígeno
anti- RH0 (anti-D). Se homogeiniza con varilla. Se coloca sobre lámpara a 40º C o a 37º C y luego
de tomar temperatura se lee. Se observa la formación de grumos, dato que se toma como (+). La
muestra homogénea se determina como (-). De todas maneras conviene observar a microscopio a
mínimo aumento, la formación de un puntillado que se toma como aglutinación leve (+).

Variantes de D

No todos los glóbulos rojos pueden ser clasificados como D positivo o D negativo mediante las
pruebas de aglutinación directas. Los glóbulos de algunos individuos reaccionan débil o lentamente
con el reactivo anti-D tal como es fabricado como un pools de sueros de muchos dadores de anti-D.
Un número aún menor de individuos tiene glóbulos rojos que no son aglutinados directamente por
anti-D pero sí cuando se aplica a los glóbulos la prueba antiglobulina luego de haberlos expuesto a
anti-D incompleto. Estos glóbulos se llaman Du.

Este tipo de sangre fue informado por primera vez por Stratton en 1946. En esa época, en Inglaterra
los antisueros no provenían de pools, usándose individualmente. Bajo estas condiciones de prueba
ciertos glóbulos rojos se aglutinaban en presencia de algunos de los sueros anti-D pero no por todos
los sueros. Los glóbulos que reaccionaban con un elevado porcentaje de los sueros empleados
fueron denominados Du de alto grado, mientras que los que reaccionaban con tan solo algunos de
los sueros empleados se denominaron Du de bajo grado.

Con los antisueros de alto título, provenientes de pools, no puede diferenciarse entre la mayoría de
los glóbulos Du y los otros glóbulos Rh positivos. Algunos glóbulos D u pueden reaccionar
lentamente con anti-D cuando se emplea la técnica del portaobjeto o la reacción puede ser más débil
que lo normal si se emplea la técnica de prueba modificada en tubo. Los glóbulos D u de bajo grado
pueden no reaccionar con ninguna de las técnicas de aglutinación directa, pero la reacción se
obtendrá en la prueba del Du. La definición de aceptación general de un glóbulo Du, es un glóbulo
con el cual no se obtiene reacción con suero Anti-Rh 0 (Anti-D) para la prueba salina en tubo, pero
reacciona con anti-D incompleto en la técnica modificada en tubo, la técnica en portaobjetos y/o en
la prueba del Du. El hecho que no se logre una reacción con glóbulos D u positivos en la prueba
salina en tubo probablemente sea una función del tipo de anticuerpo (aglutininas salinas) que se
emplean para preparar el reactivo. En las muchas familias que se han estudiado, se ha demostrado
que la herencia del Du ha sido directa. En padres de Du de alto grado, todo hijo que hereda el D u
también es Du de alto grado. No se detecta el antígeno D u cuando se halla presente el D, tal como en
el genotipo D/Du. No existe anti- Du, los individuos Rh negativos, estimulados con glóbulos D u
pueden producir anti-D pero no elaboran anti- Du.
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El antígeno Du parece ser distinto al D, tanto cuali como cuantitativamente, pero se considera que
los individuos Du son Rh positivos. Dadores aparentemente Rh negativos en las pruebas iniciales
deben ser probados para el Du y si resultaran ser Du positivos, su sangre debe ser administrada
únicamente a receptores Rh positivos. Mujeres embarazadas, aparentemente Rh negativas, deben
ser probadas para el Du, en el período prenatal, para establecer si podrían o no requerir RhoGAM en
el momento del parto.

Algunos laboratorios prefieren emplear sangre Rh negativa para todo receptor transfusional D
negativo sin realizar previamente la prueba del Du. Aunque el paciente no sufriera ningún perjuicio,
cierta sangre Rh negativa será innecesariamente usada para individuos Du. Cuando se realiza la
prueba del Du los controles son imprescindibles; por lo contrario, un paciente Rh negativo con una
prueba antiglobulina (Coombs) directa positiva puede ser clasificado erróneamente como D u. En la
prueba del Du, el control consiste en una prueba antiglobulina directa o un control con albúmina en
el cual se sustituye albúmina bovina por el reactivo anti-D. Tan sólo cuando el control es negativo
puede considerarse válido el resultado de la prueba del D u. Pacientes que son D negativos, Du
positivos con un Coombs directo negativo pueden recibir sangre Rh positiva, pero los pacientes D
negativos, Du positivos con un Coombs directo positivo deben recibir sangre Rh negativa.
Al considerar el empleo de sangre Rh positiva para individuos realmente Du, debe tomarse en
cuenta el hecho que algunos individuos Du positivos han producido anti-D, pero también lo han
hecho algunos individuos D positivos.
Enfermedad hemolítica del recién nacido por incompatibilidad del Rh

Además del antígeno D se descubrió que otros antígenos (E, e, C, c) son capaces de inmunizar a
madres negativas. El antígeno E puede ser producido tanto por madres rhesus (+) como negativo
para el antígeno D (CDe/cDe) las cuales son negativas para el antígeno E. La formación del
anticuerpo anti-C es rara en individuos D (+).

Si los anticuerpos no se presentan durante el primer embarazo, es posible que una inmunización
resulte del paso de los glóbulos fetales a la circulación materna en el parto. Aun una pequeña
cantidad de glóbulos puede ser suficiente para inmunizar a la madre. Los anticuerpos de reciente
formación no pueden dañar al recién nacido, pero los anticuerpos permanecen en la circulación
materna dando lugar a que un próximo feto incompatible pueda desarrollar enfermedad hemolítica.
Los hematíes fetales no serán dañados si el feto no hubiera heredado el mismo antígeno que produjo
el anticuerpo en la madre. Los anticuerpos atraviesan la placenta desde la madre al feto y las células
de éste son destruidas en forma continua (hemolizadas) porque el anticuerpo está dirigido contra el
antígeno que no existe en los eritrocitos de la madre y sí en el feto. La causa mas común es el anti-D
en mujeres Rh negativas, pero cualquiera de los anticuerpos inmune puede atravesar placenta
incluyendo los anti-A y anti-B de una madre perteneciente al grupo 0. El anti-D materno es
estimulado casi siempre por los eritrocitos fetales, que antes del parto pasaron por la placenta hasta
la circulación materna. El diagnóstico se realiza tan pronto como una embarazada tiene anticuerpos
Rh (sabiendo que es negativa) ya que los sucesivos niños Rh (+), de cualquier grupo ABO,
requerirán tratamiento. Los problemas patológicos de la enfermedad hemolítica del recién nacido
surgen de la reacción inmunológica primaria, que provoca la hemólisis de los eritrocitos. Los
anticuerpos maternos atraviesan la placenta rápidamente durante el embarazo y los antígenos
eritrocíticos fetales se forman rápidamente, por lo tanto el feto deberá luchar durante toda su
gestación contra un proceso hemolítico. Con frecuencia mantiene su capacidad adecuada para al
transporte de oxígeno incrementando la eritropoyesis, pero si la hemólisis supera la capacidad de
esta última se produce una anemia progresiva y el feto puede morir dentro del útero, por anemia,
insuficiencia cardíaca, hipoproteinemia y edema. Los que llegan a término son anémicos al nacer y
si existe ictericia es leve, pues la hemólisis se produce en el hígado y el bazo. La bilirrubina, de la
metabolización de la hemoglobina liberada, atraviesa placenta para su excreción a través del sistema
biliar da la madre, por eso no existe gran concentración en el nonato. En el niño afectado se observa
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gran cantidad de reticulocitos y esferocitos (eritrocitos nucleados) en la sangre circulante, lo que

refleja los esfuerzos que efectúa la médula ósea para compensar la destrucción de los glóbulos
rojos, por eso a esta enfermedad se la llama Eritroblastosis fetal.

Prueba de Coombs

Se basa en la determinación de anticuerpos llamados incompletos que pueden encontrarse

recubriendo eritrocitos o bien estar en el plasma. Estos anticuerpos corresponden a la fracción
gammaglobulínica de las proteínas séricas y por lo tanto se creó un suero anti-gammaglobulina
humana o suero de Coombs (en conejo). Éste aglutina directamente a los eritrocitos cuando los
anticuerpos revisten a a los mismos y si no están o están en suspensión no los aglutina. De aquí
surgen dos pruebas de Coombs: directa e indirecta.

Coombs directa

En la muestra los anticuerpos están adheridos a los eritrocitos.

1. Se prepara una solución salina al 2% de glóbulos lavados cuatro veces. El lavado es un toque de
varilla gruesa con sangre entera, más 1 ml de solución fisiológica, se homogeiniza y se vuelca
el contenido del tubo. Luego se agrega 1 ml de solución fisiológica y se repite el proceso cuatro
veces, con lo que queda se agrega solución fisiológica obteniéndose: una solución al 2%.
2. Se agrega 1 gota de la suspensión globular más 1 gota del suero de Coombs en un tubo de
hemólisis.
3. Se centrifuga 1 minuto a 1.000 rpm.

Si existe aglutinación en el fondo del tubo, la cual se la observa inclinando levemente éste,
buscando los grumos de eritrocitos.

Se usa para ver la existencia de eritrocitos con anticuerpos bloqueados incompletos para el
diagnóstico de anemias hemolíticas producidas por anticuerpos, para descubrir accidentes
transfusionales, combinaciones Rh-anticuerpos de eritrocitos del recién nacido en la eritroblastosis.

Coombs indirecta

En la muestra los anticuerpos están en suspensión en el suero.

1. Suspensión 4-5% de eritrocitos lavados Rh (+) compatibles con el sistema ABO en solución
salina.
2. En un tubo de hemólisis se colocan 3 gotas de la suspensión, más 3 gotas del suero a estudiar.
3. Incubar a 37º C durante 1-2 horas.
4. Se lavan los eritrocitos cuatro veces con solución salina.
5. Se suspenden los eritrocitos en 1 gota de solución salina.
6. Se le agrega 1 gota de suero de Coombs. Se centrífuga 1 minuto a 1.000 rpm y se observa
aglutinación

Se demuestra la presencia de anticuerpos incompletos circulantes en suero. En la inmunización

materno fetal el factor Rh puede poner de manifiesto anticuerpos en el suero de la madre antes del
parto. Es de mucho valor para seguir el curso de sensibilización postransfusionales frente al factor
Rh u otros grupos sanguíneos y resulta positiva en algunas anemias hemolíticas adquiridas.