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Instituto de
Salud Pública
Ministerio de Salud
AUTORES ISP:
T.M. Rodrigo Colina Morales
Encargado de Laboratorio de Agentes de Infecciones de
Transmisión Sexual ITS
Sección Bacteriología, Subdepto. Enfermedades Infecciosas
Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia
Instituto de Salud Pública de Chile
REVISORES INTERNOS
Dra. Paola Pidal Méndez
Jefe Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de
Referencia.
Instituto de Salud Pública de Chile.
I.- ALCANCE
Este documento de recomendaciones técnicas está dirigido a los laboratorios clínicos de la red asisten-
cial que realizan el diagnóstico serológico de Sífilis para las técnicas de VDRL, RPR y MHA-Tp.
II.- INTRODUCCION
La Sífilis es una enfermedad infecciosa sistémica causada por Treponema pallidum (T. pallidum) de re-
servorio humano exclusivo, y que cursa clínicamente en etapas. Se transmite preferentemente por contacto
sexual, por contacto directo con las lesiones, contacto directo con sangre y de la madre al hijo durante el
embarazo.
La Sífilis primaria corresponde a la primera etapa de la infección. El período de incubación es de 4 se-
manas (rango entre 1 y 90 días). La primera manifestación clínica, denominada chancro primario, aparece
en el punto de inoculación (puerta de entrada) del treponema, como una pequeña erosión que posterior-
mente se ulcera, es habitualmente única, indolora, con bordes bien definidos y que desaparece espontá-
neamente en un período de 3 a 8 semanas.
La Sífilis secundaria corresponde a la etapa de diseminación hematógena. Se manifiesta dentro
de los 6 primeros meses después de la infección, habitualmente 6 a 8 semanas. El comienzo del período
secundario se acompaña a menudo de síntomas similares a un estado gripal tales como fiebre, cefalea,
acompañado de un rash cutáneo y linfadenopatía generalizada. Las lesiones cutáneas más frecuentes pue-
den ser máculas, pápulas o lesiones pápulo escamosas, no pruriginosas, distribuidas simétricamente prin-
cipalmente en tronco y extremidades, es frecuente la localización palmo-plantar. En esta etapa las lesiones
son altamente infectantes por contener gran cantidad de treponemas en su superficie. Sin tratamiento estas
manifestaciones cutáneas y mucosas desaparecen espontáneamente. Se presentan en episodios de tres a
cuatro semanas de duración y en forma recurrente.
Cuando las manifestaciones visibles de la enfermedad desaparecen gradualmente se pasa al estado
de Sífilis latente precoz, que se caracteriza por la ausencia de signos clínicos, cuando la infección ha
ocurrido en los 12 meses previos al diagnóstico.
La Sífilis latente tardía es una etapa que se caracteriza por ausencia de signos clínicos, cuando la
infección inicial ha ocurrido en un tiempo mayor a los 12 meses previos. Esta etapa puede prolongarse por
décadas. En esta etapa la enfermedad no es transmisible por vía sexual.
La Sífilis terciaria corresponde a la etapa destructiva de la enfermedad, por lo general se desarrolla
muchos años después de la infección primaria en pacientes no tratados o tratados inadecuadamente. En las
lesiones de Sífilis Terciaria la presencia de treponemas es rara y las lesiones destructivas son producto de
una reacción de hipersensibilidad. Clínicamente puede presentar compromiso cardiovascular, de grandes
vasos y válvulas cardíacas, y la presencia de gomas sifilíticos que corresponden a lesiones granulomatosas
características de la sífilis tardía que se presentan en la piel, en las mucosas y los huesos. La neurosífilis
se puede manifestar en cualquiera de las etapas clínicas de la enfermedad y consiste en el compromiso
del Sistema Nervioso Central (SNC) por T. pallidum. Esta puede ser asintomática, pero con alteraciones en
el líquido cefalorraquídeo. Clínicamente se puede presentar como meningitis sifilítica, compromiso de los
pares craneanos, sífilis meningovascular, tabes dorsal y parálisis general progresiva.
La identificación del T. pallidum mediante el examen directo del exudado de la lesión (microscopía de
campo oscuro y/o fluorescencia directa) es una prueba definitiva para asegurar el diagnóstico, aunque un
resultado negativo del mismo no descarta la posibilidad de la enfermedad, ya que la presencia de trepone-
mas puede ser escasa dependiendo de los días de evolución y de tratamientos previos. Debido a las difi-
cultades que puede presentar la realización del diagnóstico directo, la experiencia indica que el diagnóstico
indirecto (serológico) se ha convertido en el procedimiento de uso más frecuente.
Actualmente existen diferentes técnicas de laboratorio para el diagnóstico serológico de sífilis:
Son técnicas de bajo costo, fáciles de efectuar, se utilizan como pruebas de inicio en la detección sero-
lógica de sífilis y para evaluar la respuesta al tratamiento. La desventaja que presentan es que, debido a su
inespecificidad, pueden arrojar falsos resultados positivos.
Estas técnicas carecen de utilidad para monitorear los tratamientos, ya que suelen permanecer positivas
en el 85 a 90% de los pacientes tratados adecuadamente.
Es importante recordar que un resultado de examen no treponémico reactivo indica sospecha de in-
fección activa (en curso) o serología residual. En el diagnóstico de la Sífilis es fundamental el análisis del
examen clínico, los antecedentes epidemiológicos y los resultados de exámenes de laboratorio. Ninguno
de estos aspectos por si solo entrega un diagnóstico definitivo.
El uso de las técnicas treponémicas para confirmación de serología, está reservado para aquellos casos
en que el equipo clínico tratante lo considere pertinente y en todos los casos de gestantes sin antecedentes
MATERIALES
• Láminas de vidrio con anillos de parafina u otro similar de 14 mm de diámetro
• Micropipeta de 200 µL
• Tubos khan
• Soporte de madera para las láminas.
• Vaso precipitado de 50 mL
• Jeringa de vidrio de 1 ó 2 mL
• Aguja calibre 18G calibrada con 60 +/- 2 gotas /mL (Suero).
• Aguja calibre 21G calibrada con 100 +/- 2 gotas/mL (LCR).
• Frasco de vidrio de 30 mL con tapa esmerilada y de fondo plano, para preparación de antígeno
• Pipetas de vidrio 1 y 5 mL
• Propipetas
REACTIVOS
Suspensión antigénica
Solución salina amortiguada
Suero fisiológico al 0.9%
Suero fisiológico al 10%
Sueros controles: Reactivo, Reactivo débil, No Reactivo
EQUIPOS
• Rotador orbital adaptable a 180 +/- 2 rpm, que describa un circulo de ¾ de pulgada de diámetro en un
plano horizontal.
• Baño termorregulado a 56ºC
• Centrífuga
• Microscopio óptico, equipado con ocular 10x y un objetivo de 10x
• Termómetro ambiental
• Vitrina refrigerada (2-8ºC)
• Freezer para -20ºC
Figura Nº 1
Preparación del antígeno para VDRL.
Figura Nº 2.
Láminas para VDRL con 12 pocillos y ejemplo de dispensado de muestras.
3.4.4.- El resultado Reactivo se caracteriza habitualmente por grumos grandes o pequeños, pero el tamaño
es uniforme.
3.4.5.- Todo resultado Reactivo, Reactivo débil y No Reactivo rugoso debe ser analizado cuantitativamen-
te. Esporádicamente se puede presentar un fenómeno de prozona, el cual se debe a un exceso de
componente reactivo en el suero (anticuerpos reagínicos en muy alto nivel). Este fenómeno no es de
fácil reconocimiento, pero se puede sospechar por la presencia de floculación irregular y de grumos
débilmente unidos. Una reacción zonal se informa como Reactiva.
Figura Nº 3
Interpretación de lecturas de floculación microscópica.
Figura N° 4:
Esquema de diluciones para VDRL cuantificado.
Tabla Nº 1:
Ejemplo de interpretación de resultados de VDRL cuantificado.
3.5.9.- Si la reactividad continúa, seguir diluyendo la muestra de la siguiente manera: hacer una dilución 1:8
en tubo, colocando 700 µL de suero fisiológico y 100 µL de muestra y mezclar en vórtex.
3.5.10.- Transferir 50 µl de suero fisiológico al pocillo 5 y 6. Agregar 50 µL de la dilución 1:8 al pocillo 4.
Tomar otros 50 µL de esta dilución y mezclar 8 veces con los 50 µL de suero fisiológico del pocillo
5, de ahí tomar 50 µL y mezclar con los 50 µL de suero fisiológico del pocillo 6, mezclar 8 veces y
eliminar los últimos 50 µL.
3.5.11.- Agregar una gota de antígeno (17 µL) a cada pocillo.
REACTIVOS E INSUMOS
• Tarjetas recubiertas de plástico, cada una con 10 círculos de 18 mm de diámetro.
• Pipetas plásticas desechables, que rinden un volumen de 50 µL por gota.
• Antígeno RPR, en ampollas de 1 o 3 mL.
• Frasco plástico para distribuir el antígeno.
• Aguja calibre 20G sin bisel, que rinde un volumen de 60 ± 2 gotas por mL de antígeno.
• Sueros Controles NR, R, Rd o Mínimo.
EQUIPOS
• Rotador orbital adaptable a 180 +/- 2 rpm, que describa un circulo de ¾ de pulgada de diámetro en un
plano horizontal.
• Refrigerador (2-8ºC)
• Freezer para -20ºC
• Cubierta humedecedora
3.- DESARROLLO
Antes de empezar a trabajar, el personal del laboratorio debe disponer y utilizar todos los elementos de
protección personal requeridos para la manipulación de sangre y fluidos biológicos: guantes, delantal de
bioseguridad, antiparras.
Figura Nº 5:
Ejemplo de tarjeta plástica RPR con 10 anillos
Figura Nº 6:
Interpretación de lectura de floculación macroscópica.
fondo negro y con luz potente. No emplear luz fluorescente porque las reacciones mínimas pueden
omitirse. Para distinguir mejor los resultados No Reactivos de los Reactivos mínimos, girar e incli-
nar ligeramente la tarjeta.
3.5.9.- Si la solución más diluida analizada (1:16) resulta reactiva, se prepara una dilución 1:16 de la
muestra de prueba, agregando 100 µL de suero a 1.5 mL de solución salina al 0.9%. Mezclar bien.
Deposite 50 µL de dilución 1:16 en el anillo Nº 1 y complete el procedimiento en la forma descrita
anteriormente hasta obtener un resultado No Reactivo.
Materiales
• Tubos de vidrio khan
• Placas de microtitulación con fondo en U
• Soporte con espejo de aumento para lectura del fondo de los pocillos.
Reactivos
• Kit de MHA-Tp:
• Reactivo antígeno: Suspensión de eritrocitos de pollo sensibilizados.
• Reactivo Control: Suspensión de eritrocitos de pollo no sensibilizados.
• Solución diluyente: Tampón fosfato salino que contiene componentes solubles de Treponema Reiter y
agentes estabilizadores.
• Control positivo: Suero de conejo inmune.
• Control negativo: Suero de conejo no inmune.
Equipos
• Centrífuga
• Micropipetas automáticas
• Refrigerador (2-8ºC)
• Freezer para -20ºC
3.1.2.- Si la muestra es sangre total se centrifuga a 2.500 rpm por 5 minutos para separar el suero, rotular
el tubo primario y secundario con el examen solicitado, número asignado y la fecha, utilizando una
etiqueta autoadhesiva impresa.
3.1.3.- Si las muestras no se procesan dentro de las 4 horas, se conservan refrigerados entre 2-8°C por un
máximo de 72 horas.
3.1.4.- Si las muestras no se procesan dentro de las 72 horas, se conservan congeladas a -20°C.
Tabla Nº 2.
Esquema de realización de las diluciones en prueba de MHA-Tp
3 4
Pocillo N° 1 2 control prueba
Solución diluyente µL 25 100 25 25
Muestra µl 25
25 25 25
Mezclar y transferir 25 25
Las lecturas correspondientes a +/- y 1+ ocurren ocasionalmente, debido al título bajo de anticuerpos
o a errores técnicos. A estos sueros se les debe repetir el examen. Si el resultado es el mismo, se deben
informar cómo no reactivo o reactivo mínimo respectivamente.
Tabla Nº3.
Lectura e Interpretación de resultados de prueba de hemaglutinación.
Interpretación:
Positivo o Reactivo: desde 4+ a 1+
Negativo o No Reactivo: -
Los resultados deben ser informados como Reactivo o No Reactivo, de acuerdo a la interpretación
realizada.
BIBLIOGRAFÍA
1.- Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”. “Manual de Técnicas
y Procedimientos para el Diagnóstico de Sífilis”. Abril 2010.
2.- S. A. Larsen, B. M. Steiner, A. H. Rudolph. Laboratory Diagnosis and Interpretation of Test for Syphilis.
Clin Microbiol Rev. 1995 Jan; 8(1): 1–21.
3.- Instituto de Salud Pública de Chile. “Manual de técnicas para Sífilis”. Liliana Urra. 2009.
4.- Centers for Disease Control and Prevention. “Manual of Tests for Syphilis”. 9th Edition. Disponible en:
http://www.cdc.gov/std/syphilis/manual-1998/