CONOCIMIENTO TECNOLOGIA

BIOLOGÍA MOLECULAR
Y GENÉTICA
Narendra Vera, MD

INVESTIGACION PEDAGOGIA
ESTRUCTURA
DE LA CROMATINA
 ESTRUCTURA DE LA CROMATINA

Microscopio electrónico -->

Heterocromatina:
1. Constitucional
2. Facultativa

Corpúsculo de Barr
Cromosoma metafásico

Dos cromátides
 ESTRUCTURA DE LA CROMATINA

Gatos calico ---------->

METILACIÓN DEL DNA

 CO2
Glicina
Aspartato
N10
F-THF

N10
BASES NITROGENADAS F-THF
GLUTAMINA

Carbamoil P Aspartato
 NUCLEÓTIDOS

Nucleosido: base + desoxirribosa

Nucleótico: base + desoxirribosa + fosfato

PURINAS:
Adenina y Guanina

PIRIMIDINAS:
Citosina
Uracilo / Timina

Para la síntesis de BN se necesita:

Purinas Pirimidinas
• Glicina • Aspartato
• Aspartato • Carbamoil P
• Glutamina
• Se realizó un examen de heces a un
infante con gastroenteritis, se aisló un genoma
viral de RNA de doble cadena el cuál tenia
15% de uracilo. ¿Cuál es el porcentaje de
Guanina que hay en este genoma?
1. 15
2. 25
3. 35
4. 75
5. 85
SÍNTESIS DE NOVO DE PIRIMIDINAS Y PURINAS
DEFICIENCIAS EN LA VÍA DE SALVAMENTO DE LAS
PURINAS
 DEFICIENCIAS EN LA VÍA DE SALVAMENTO DE LAS
PURINAS

• Deficiencia de Adenosina Des-Aminasa (ADA)

ADA es una enzima necesaria para la desaminación de la Adenosina y la Desoxiadenosina
En la deficiencia de ADA se acumula el dATP y esto produce toxicidad en los leucocitos
Esta es una de las principales causas de SCID

• Síndrome de LESCH-NYHAN (recesiva ligada al cromosoma X)

Deficiencia de salvamento de las purinas por ausencia de HGPRT (convierte hipoxantina
en IMP y guanina en GMP)
Se presenta un exceso de producción de ácido úrico e incremento en la síntesis de novo
de las purinas
Presentación: deficiencia intelectual, automutilación, agresión, hiperuricemia (cristales
naranja en el pañal), gota y distonia
Tratamiento: Alopurinol
Febuxostat (2da línea)
CÓDIGO GENÉTICO
 REPLICACIÓN DEL DNA

CÓDIGO GENÉTICO
1. Específico: un codón = un AA
2. Degenerado: existe mas de un codón para un AA
3. Continuo
4. Universal: común a los organismo vivos
Un lactante de dos meses de edad que estuvo normal al momento de nacer
comienza a desarrollar problemas gastroinstestinales y cirrosis hepática. El
análisis molecular indica que hay una cantidad adecuada del mRNA que codifica
la galactosa 1-fosfato uridil transferasa (GALT); pero no se observa actividad de
dicha enzima. ¿Cuál seria la mejor explicación para esta situación?
a) Deleción del gen GALT
b) Mutación sin-sentido
c) Presencia de una secuencia de terminación de la transcripción prematura en
el DNA
d) Mutación del promotor
e) Mutación producida durante el “splicing” del RNA
 MUTACIONES del DNA

Severidad del daño:

Silente < < Cambio de sentido < Sin-sentido < Cambio del marco
Las mutaciones puntuales son: Silente, Cambio de sentido y Sin-sentido. Estas
son:
1. Deleciones: pérdida de bases, acortándose la longitud del gen.
2. Inserciones: aumento de la longitud del gen.
3. Sustituciones:
a) Transición: si cambia una purina por una purina; o pirimidina por pirimidina
b) Transversión: si cambia una purina por pirimidina; y pirimidina por purina

TIPOS:
1. Silente: cambia un nucleótido pero es el mismo aminoácido original
2. Con cambio de sentido: cambia un nucleótido y cambia el aminoácido
3. Sin-sentido: se forma un codón de término. La proteína no funciona
4. Cambio del marco de lectura: se aumenta o se pierde uno o mas
nucleótidos. Alteración en la proteína resultante
5. En el sitio de “splice”: un intron se queda retenido en el mRNA. Proteína
alterada
 REPARACIÓN del DNA

Reparación de una sola hebra de DNA: Reparación por escisión de nucleótido. XP

Reparación de la doble cadena de DNA

Por recombinación no Homologa. No requiere fragmentos homólogos
Puede haber perdida de DNA
Esta vía esta defectuosa en el cáncer por mutación del gen BRCA1 (mama/ovario)
 ORGANIZACIÓN FUNCIONAL DE LOS GENES

PROMOTOR: es el lugar donde de la RNA polimerasa tipo II se

unen al DNA para iniciar la transcripcion
AMPLIFICADOR: (Enhancer) es una porción de DNA que
altera la expresión de un gen al unirse a un factor de
transcripción
SILENCIADOR: sitio de unión para los reguladores negativos
ORGANIZACIÓN FUNCIONAL DE LOS GENES
 PROCESAMIENTO DEL RNA

Luego de que se forma la cadena de RNA este debe ser procesado para que se convierta
en mRNA
El procesamiento se produce en el núcleo y consta de 3 pasos:
1. Se añade el CAP: en el extremo 5‘ se añade la 7 metil-guanosina
2. Poliadenilación (cola de poli-A) del extremo 3‘
3. Splicig (proceso de corte y empalme de los exones)
SPLICING DEL PRE-mRNA
 RNA de Transferencia (tRNA)

ESTRUCTURA: Receptor para el aminoácido a un extremo y el ANTICODON

en el otro
“CHARGING”: unión al aminoácido que va a transferir
EMPAREJAMIENTO: por complementariedad del tRNA
y el mRNA
 SÍNTESIS DE PROTEÍNAS

INICIACIÓN: unión del mRNA a la sub-unidad pequeña del ribosoma

ELONGACION: se añaden los aminoácidos
TERMINACIÓN: se reconoce el codón de termino y se libera al polipéptido del Ribosoma
 CICLO CELULAR

TIPOS DE CÉLULAS
1. LÁBILES: No tienen periodo G0, se dividen rápidamente con un periodo G1 corto
2. QUIESCENTES: o Estables, pasan de G0 a G1 cuando son estimuladas
3. PERMANENTES: Permanecen en G0, se regeneran a partir de las células madre

14/07/2017
p53
TRANSPORTE EN LA CÉLULA
 SÍNTESIS Y ESTRUCTURA DEL COLÁGENO

1. Síntesis
2. Hidroxilación
3. Glicosilación
4. Exocitosis
5. Procesamiento
proteolítico
6. Entrecruzamiento
 SÍNTESIS Y ESTRUCTURA DEL COLÁGENO

OSTEOGÉNESIS IMPERFECTA
Es un desorden óseo de origen genético
La forma más frecuente es autosómica dominante con disminución de la producción de
Colágeno tipo I
Manifestaciones: múltiples fracturas con trauma mínimo, escleras azules, anormalidades
en los dientes y pérdida de la audición

SÍNDROME DE EHLERS-DANLOS
Falla en la síntesis del colágeno que causas piel hiperextensible, sangrado fácil y
articulaciones con hiperlaxitud. Se asocia con dislocación de articulaciones y aneurisma
de Aorta
La severidad varia según sea herencia autosómica dominante o recesiva.
Una paciente que nunca a tenido varicela quiere visitar a su
hermana, pero su sobrina actualmente esta enferma con varicela.
Para poder determinar si la paciente tiene anticuerpos contra el
virus varicela zoster, que examen de laboratorio indicaría?
TÉCNICAS DE LABORATORIO – ELISA
 TÉCNICAS DE LABORATORIO – “BLOT”

SOUTHERN: DNA
NORTHERN: RNA
WESTERN: Proteínas
 TÉCNICAS DE LABORATORIO – “BLOT”

Se realizo un examen de Southern-blot a una familia en la cual el hijo presenta una

tumoración y la hija es asintomática.
Reporte del SOUTHERN-BLOT:

Usted recibe el reporte, cuál es la mejor conclusión para este reporte?

a) La hija heredo el fragmento 1.5 Kb de su mamá
b) La hija va a desarrollar el mismo tumor que su hermano
c) La tumoración esta asociada con el fragmento 2.1 Kb
d) La enfermedad presenta un patrón autosómico dominante
e) La madre tuvo la tumoración pero regresiono espontáneamente
TÉCNICAS DE LABORATORIO - PCR
TÉCNICAS DE LABORATORIO – CITOMETRÍA DE FLUJO
VIH

Estudios diagnósticos
• ELISA: para detectar anticuerpos, aparecen entre 1-12 semanas de la infección aguda.
Sirve como escreaning con 99% de sensibilidad.
• Western blot: es positivo si dos aparacen dos bandas de direferentes regiones del
genoma del HIV. Prueba confirmatoria después del ELISA. 99% de especificidad.

DESPISTAJE:
Detectar Antigeno (p24)
Detectar Anticuerpo

• PCR : carga viral

• Conteo CD4/CD8
Citometria de flujo
TÉCNICAS DE LABORATORIO – PCR rt
• Llega a su consulta Rn hijo de madre
portadora de VIH en TARGA, con carga viral no
detectable. Rn cuenta con dos ELISAS positivos
para VIH y esta tomando AZT.
• ¿Esta de acuerdo con el tratamiento?
• ¿El RN esta infectado con VIH?.
 TÉCNICAS DE LABORATORIO – CARIOTIPO

•Bandas G: T-A

•Bandas R: G-C
 FISH
Fluorescent in situ hybridisation
TÉCNICAS DE LABORATORIO – FISH
TÉCNICAS DE LABORATORIO –
Arrays de DNA
MECANISMO DE LAS ENFERMEDADES GENÉTICAS
Un hombre sano (A) tiene un hijo con retinoblastoma.
El padre de A y el hermano de A tuvieron
retinoblastoma. ¿Por qué el niño no tien RB?
1. Porque no es su hijo
2. RB es un gen recesivo
3. RB es un gen
pleiotropico
4. Penetrancia incompleta
5. Las mutaciones son
diferentes en cada
miembro de la familia
 TERMINOS DE GENÉTICA

CODOMINANCIA: ambos alelos contribuyen al fenotipo del heterocigoto

EXPRESIÓN VARIABLE: los pacientes con el mismo genotipo tiene fenotipos diferentes

PENETRANCIA INCOMPLETA: no todos los individuos que poseen el genotipo mutante

muestran el fenotipo mutante

PLEIOTROPIA: un solo gen contribuye a varios efectos fenotípicos

ANTICIPACIÓN: incremento de la severidad o presentación más temprana de una

enfermedad en las siguientes generaciones

PÉRDIDA DE LA HETEROCIGOSIS: si un paciente hereda o desarrolla una mutación en un

gen supresor tumoral, el alelo complementario debe delecionarse o mutar antes de que
se desarrolle el cáncer

MUTACIÓN DOMINANTE NEGATIVA: tiene un efecto dominante. Un heterocigoto

produce una proteína alterada no funcionante que además evita que la proteína normal
funcione
 TERMINOS DE GENÉTICA

MOSAICISMO: presencia de líneas celulares genéticamente diferentes en un paciente

HETEROGENEIDAD DE LOCUS: mutaciones en diferentes loci producen un fenotipo

similar

HETEROGENEIDAD DE ALELO: diferentes mutaciones en el mismo locus producen el

mismo fenotipo

HETEROPLASMIA: presencia de mtDNA normal y mutado resulta en expresión variable

DISOMIA UNIPARENTAL: el paciente recibe DOS copias del cromosoma de UNO de los
progenitores y ninguna del otro progenitor. Error de la Meiosis

IMPRONTA: en algunos loci solo un alelo esta activo el otro esta inactivo (impronta). Si el
alelo activo se deleciona entonces se produce enfermedad

SÍNDROME DE PRADER-WILLI: el gen Paterno es el activo y esta mutado

SÍNDROME DE ANGELMAN: el gen Materno es el activo y esta mutado
• Se detecta retinoblastoma en un niño, él tiene
una tumoración en un ojo. ¿Qué examen se
puede realizar para determinar si este tumor
es hereditario o esporádico?
TIPOS DE HERENCIA – ENFERMEDADES MONOGÉNICAS

AUTOSOMICA DOMINANTE
Es frecuente que se deba a defectos en genes
estructurales. Afecta a varias generaciones
Afecta tanto a hombre como a mujeres
Enfermedad mas frecuente :
Hipercolesterolemia familiar (deficiencia del
receptor LDL)

AUTOSOMICA RECESIVA
Es frecuente que este asociada a deficiencia de
enzimas
Generalmente solo se ve en una generación
Enfermedad mas frecuente : Anemia
drepanocitica
Un niño de 8 años es llevado al consultorio de dermatología por
sus padres. Sus padres han notado que su piel es muy sensible a la
luz solar y la historia clínica indica que se le han extirpado varios
melanomas durante su vida. Es muy probable que este paciente
tenga:
a) Un defecto en la endonucleasa AP
b) Un defecto en la reparación por escición del DNA dañado por
luz UV
c) Daño por exposición a agentes análogos de las pirimidinas
d) Deleción en sus genes que codifican la Helicasa
TIPOS DE HERENCIA – ENFERMEDADES MONOGÉNICAS

RECESIVA LIGADA AL CROMOSOMA X

Los varones hijos de madres heterocigotas tienen
50% de probabilidad de ser afectados.
No se hereda del padre al hijo varón
Se salta generaciones
Enfermedades: Distrofia de Duchene, S. Lesh –
Nyhan, Deficiencia de G6PD, Hemofilia A y B,
síndrome de Bruton.
 TIPOS DE HERENCIA

DOMINANTE LIGADA AL
CROMOSOMA X
Puede ser transmitida tanto por el
padre como por la madre
La madre la transmite al 50% de
sus hijas y a todos su hijos varones
El padre la transmite a todas sus
hijas pero no a los hijos varones
Ej. Enfermedad de Fabry

HERENCIA MITOCONDRIAL

Se transmite solo por la madre

Las hijas e hijos varones de una
mujer afectada pueden mostrar
signos de la enfermedad
Ej. Miopatias mitocondriales
14/07/2017 (raras)
 SINDROME DEL X FRAGIL

HERENCIA DOMINANTE LIGADA AL CROMOSOMA X

Repeticion de trinucleotido CGG (en número variable) en el gen FMR1
Se produce hipermetilación y disminución de la expresión del gen
Es la causa más frecuente de deficiencia mental heredada y autismo
Hallazgos: macro-orquidismo post puberal, cara larga con mandibula que protruye,
orejas grandes y evertidas, prolapso de válvula mitral
 UBICACIÓN CROMOSOMICA DE LOS DESORDENES GENÉTICOS
CROM Ejemplos de enfermedades
3 Enf von Hippel-Lindau, carcinoma de células renales
4 ADPKD (PKD2), acondroplasia, Enf. de Huntington
5 Sd Cri-du-chat, poliposis adenomatosa familiar
6 Hemocromatosis
7 Sd de Williams, fibrosis quistica
9 Ataxia de Friedreich
11 Tumor de Wilms, defectos del gen β-globina (ej. Anemia falciforme, β-
talasemia, MEN1)
13 Sd Patau, enfermedad Wilson, retinoblastoma (RB1), BRCA2
15 Sd. Prader-Willi, Sd. Angelman, Sd Marfan
16 ADPKD (PKDI), defectos del gen α-globina (ej. Talasemia)
17 Neurofibromatosis tipo 1, BRCA1, p53
18 Sd Edwards
21 Sd Down
22 Neurofibromatosis tipo 2, Sd DiGeorge (22q11)
X Sd. X frágil, agamaglobulinemia ligada al X, Sd Klinefelter (XXY)
TRISOMIAS
 TRANSLOCACION ROBERTSONIANA

Translocación cromosomal que generalmente afecta a los pares: 13, 14, 15, 21 y 22
Es uno de los tipos más frecuentes de translocación
Se produce entre cromosomas acrocentricos (el centrómero esta cerca al final

Si la translocación es balanceada ---->

no producirá alteraciones
TRANSLOCACION ROBERTSONIANA
SINDROME DE DOWN
Translocación no balanceada
 TRISOMIAS

• Riesgo se incrementa con edad materna.

• No disyunción.
• Dedos flexionados superpuestos.
• Pies en mecedora.
• Pronóstico muy pobre.

• Riesgo aumenta con edad materna.

• No disyunción.
• Anomalías renales.
• Pronóstico muy pobre
 Aneuploidía de los Cromosomas sexuales

• Es la única monosomía compatible con la vida

• El fenotipo es femenino: baja estatura, edema de muñecas y tobillos al nacer
• Amenorrea primaria, infertilidad, disgenesia gonadal
• En algunos casos presentan coartación de Aorta u otros defectos cardiacos congénitos
 Aneuploidía de los Cromosomas sexuales

• Fenotipo masculino
• Atrofia testicular
• Infertilidad
• Ginecomastia
• Baja testosterona
• Elevación de la FSH y LH
• Voz aguda
 Herencia Mitocondrial
• Esta estudiando ha una familia que consta de
tres generaciones, en las cuales hay hombres y
mujeres afectados por una rara enfermedad.
Los varones afectados tienen hijos sin
alteraciones y las mujeres afectadas
transmiten la enfermedad a sus hijos y a sus
hijas.
¿Qué tipo de herencia tiene esta enfermedad?
 Herencia mitocondrial

Neuropatia Optica hereditaria de Leber

Miopatias mitocondriales
 CONOCIMIENTO TECNOLOGIA

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INVESTIGACION PEDAGOGIA