METODOLOGIA PARA EL TRABAJO DE INVESTIGACIÓN

1. Para las causas de Contaminación de aguas

Para determinar las causas de contaminación se seguirán los siguientes pasos:

- Viaje a la zona de estudio para observación de efluentes y disposición de

residuos solidos
- Con la utilización de un checklist se verificará la forma de disposición de
efluentes y residuos sólidos.
- Se registraran parámetros ambientales de las zonas observadas.
- Se tomaran muestras de suelo y agua.
- Las muestras solidas serán colocadas en bolsas ziploc y las muestras
liquidas en frascos de polietileno. Ambas recipientes serán colocados en
una cooler que contendrá hielo para su posterior transporte al laboratorio
de análisis.
- Se realizaran los análisis químicos correspondientes para lo cual se
utilizará el procedimiento de absorción atómica para metales pesados.
- Se determinará las cusas de contaminación de las aguas referidas en el
estudio

2. Tipo y cantidad de Metales Pesdaos acumulados en el recurso choro.

Se seguirán los siguientes pasos:

- Se viajará a la zona de estudio para coordinar la forma de muestreo del

recurso bivalvo.
- Se realizará un muestreo de por lo menos 8 zonas de extracción del
recurso choro. El tamaño de la muestra es de 2 kilos aproximadamente
(el recurso debe estar con sus valvas respectivas). Las muestras serán
colocadas en bolsas con hielo hasta ser desembarcadas.
- Ni bien se tenga las muestras se les realizará un análisis organoléptico y
físico completo, para determinar la frescura y las características
anatómicas del recurso.
- También se recogerá de las zonas de extracción muestras de agua y
suelo, las cuales serán colectadas en bolsas ziploc y frascos de polietileno
respectivamente.

- Una vez en el laboratorio se procederá a lavar las muestras de

organismos con agua destilada, eliminando todo el material adherido a
las conchas, se separara el tejido blando de las conchas y se las colocara
en capsulas de porcelana. Se procederá a la eliminación de humedad en
estufa, luego se procedió a pulverizar las muestras y se las guardo en
frascos plásticos hasta su respectivo análisis químico.

Las muestras de agua se estabilizaran con 1 ml de ácido nítrico

concentrado y luego se filtrara para eliminación de solidos suspendidos.

Las muestras de sedimentos serán secadas, molidas y tamizadas par

malla de 63 um, posteriormente se las guardara en envases plásticos,
protegidos de la luz y el polvo hasta su análisis.

Para el análisis de absorción atómica:

Preparación de modificador de matriz (Lantano al 1%)
Se pesará 10g de Oxido de Lantano en un beacker de 250mL en la
Sorbona se agregará ácido clorhídrico concentrado poco a poco con
agitación constante, hasta lograr disolución y enrasarlo al volumen antes
mencionado, luego se le trasvasará a un matraz de 1000 ml y se enrasará
con agua destilada y se la homogenizará

Preparación de curvas (soluciones estándar)

De las soluciones estándar patrón de concentración de 1000 mg/l para
Absorción Atómica, se prepararan las diferentes concentraciones de la
curva del elemento de interés.
Preparación de las soluciones estándares de metales pesados
Se determinaran las curvas de calibración para cada elemento.

Se procederá a pipetear los valores determinados en cada curva por

separado en matraces volumétricos 100ml, se les colocará 1 ml de ácido
nítrico y en el caso de los estándares para las muestras de sedimentos se
colocará 1 ml del modificador de matriz (La al 1%) a cada uno, luego se
las enrasará con agua bidestilada y se homogenizará.

Preparación de las muestras para análisis

Bivalvos
Los tejidos seran sometidos a digestión acida, adicionando 5ml de ácido
nítrico (HNO3), a 1 gramo del tejido seco pulverizado en un vaso de
precipitación tapado con un vidrio reloj, por 24 horas. Una vez transcurrido
el tiempo de digestión, las muestras fueron sometidas a calor hasta
eliminación de humos marrones y disminución del líquido (acido)

El extracto se filtrará en papel Whatman N° 40 y se enrasará a un volumen

de 50 ml con agua bidestilada.

Agua
Se colocará 500 ml de agua a un embudo de separación. Con llave de
teflón y se le agregará 2 ml de la solución de APDC y 5 ml del acetato de
amonio.
En un cilindro graduado de 50 ml se midió 15 ml de cloroformo y se les
colocará en el embudo que contiene la muestra.
Se agitará por 2,5 minutos. La fase clorofórmica se transferirá a una fiola
de 50 ml de capacidad previamente lavada y filtrándola a través de papel
filtro Whatman N° 40, previamente lavados can cloroformo.
Se agregará 15 ml de cloroformo y se repitirá el proceso de agitación y
filtración.
Al extracto se colocará 1 ml de ácido nítrico al 50%
Se evaporará a sequedad y luego se disolverá el residuo en 10 ml de
ácido nítrico al 1 para su lectura en el espectrofotómetro.
 Sedimentos
Las muestras conservadas en envases plásticos se las colocará en
capsulas de porcelana y sometidas a 100°C en estufa por 1 hora para
eliminar la humedad contenida, luego se trasladaran las muestras a un
desecador por 20 minutos para enfriamiento y se procederá a pesar en
tubos de ensayo alrededor de 0.5 g de la muestra, una vez en la Sorbona
se colocará cuidadosamente en cada tubo, incluido el blanco, 1ml de
ácido nítrico concentrado para observar presencia o ausencia de
efervescencia. Luego se agregaran 4ml más de ácido nítrico concentrado.
Se mezclará agitando lentamente. Se procederá a colocar el tapón
interno y cubrir el borde del tubo con cinta de teflón y finalmente la tapa
rosca hasta cerrarlo herméticamente.
Previamente se preparará el baño de maría a un temperatura de 100 +/-
5 °C, donde se colocaran los tubos con las respectivas muestras por una
hora.
Luego de este tiempo se retiraran los tubos y se los colocaran en las
gradillas porta tubos hasta enfriamiento.
Se filtraran las muestras a través de papel filtro Whatman N° 40 en
matraces de 100ml, antes de enrasar se agregará 1 ml del modificador
de matriz (Lantano al 1%) y se enrasará con agua bidestilada.

Lectura de la muestra
Las lecturas de las muestras se realizaran en el espectrofotómetro de
Absorción Atómica. Se calibrará la curva de estándares para cada
elemento, luego se realizaran las lecturas del blanco y de las muestras
Instrumentalmente se realizaran 5 lecturas y manualmente 2, dando un
valor medio de 10 lecturas por muestra.

3. Efectos de los metales en la salud

Se seguirán los siguientes pasos

 - Con los resultados obtenidos se adquirirá textos relacionados con la salud
y los metales pesados para establecer la influencia de los mismos en la
salud de niños, jóvenes adultos, ancianos, damas y varones
- Se elaborará conclusiones de los efectos de los metales en la salud de
los pobladores de la zona de influencia del estudio.

4. Límites permisibles

Se seguirán los siguientes pasos

- Con los resultados obtenidos se adquirirá normas técnicas y legales para

establecer el cumplimiento de las mismas en el recurso choro.
- Se elaborará conclusiones del cumplimiento de la normatividad.