V IBEROLAB

VALIDACIÓN ANALÍTICA CORRESPONDIENTE AL ENSAYO DE BIFENILOS POLICLORADOS (PCB´s)

EN MUESTRAS DE ACEITES AISLANTES SEGÚN NORMA ASTM D 4059-00

P. Roqué1, M. Manetti1, G. Mendizábal1 y P. Manzo1

1
CEQUIMAP (Centro de Química Aplicada), Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba, Medina
Allende esq. Haya de la Torre, Ciudad Universitaria, 5000, Córdoba, Argentina; e-mails: porque@fcq.unc.edu.ar,
mmanetti@fcq.unc.edu.ar, gmendizabal@fcq.unc.edu.ar y pmanzo@fcq.unc.edu.ar

RESUMEN. El presente trabajo involucra la 3.1 Materiales y equipo utilizado

determinación de una serie de parámetros de validación
como aspecto central para el aseguramiento de la calidad
analítica de los resultados en la determinación de PCB´s en
muestras de aceite aislante de acuerdo a los lineamientos de
la norma ASTM D 4059-004. Se determinaron los
siguientes parámetros: repetibilidad, precisión intermedia,
exactitud, además se realizó una experiencia de
comparación de analistas y se calculó la incertidumbre
metodológica.
1.- Introducción
El objetivo de toda estrategia de validación es probar la
aptitud del método en relación a su utilización posterior
con una finalidad predeterminada. Esto se logra mediante
la determinación de ciertos parámetros y la comparación de
los mismos con requisitos de calidad preestablecidos.
La normativa regulatoria oficial, imperante en Argentina,
involucra la utilización de la norma técnica ASTM D 4059-
004 para la determinación de PCB’s en muestras de aceites
aislantes. En virtud de este requisito oficial, de la necesidad
de garantizar la calidad analítica de los resultados y el
cumplimiento de los requisitos técnicos de la norma IRAM
301 ISO/IEC 170253, se estableció la necesidad de validar
la metodología.
-Cromatógrafo de Gases Agilent 6890 equipado con
inyector automático, bandeja para 100 viales y detector u-
ECD, todo el sistema controlado por ChemStation.
-Materiales de referencia certificados (MRC): Aroclors
1242, 1254 y 1260 en aceite aislante marca Accustandard.
-Solvente: Para el preparado de todas las soluciones de
material de referencia y para las muestras problema se
utilizó Hexano Grado Plaguicida (GP).
-Aceite Blanco: Se utilizó para realizar las diluciones de
los MRC. Aceite aislante YPF 64 (aceite comúnmente
utilizado por los fabricantes y reparadores de
transformadores). Matriz previamente analizada para
determinar la ausencia de PCB´s.
-Muestras reales: Muestras de Aceite aislante
contaminado con PCB´s obtenidas en muestreos a campo.
-Ácido Sulfúrico: Para el “clean up” (eliminación de
interferentes) de las muestras se utiliza Ácido Sulfúrico
grado pro–análisis (PA).
-Solvente de Lavado: Para el proceso de
reacondicionamiento del material de vidrio que entró en
contacto con muestras es necesario el empleo de Hexano
PA, Hexano GP y Acetona grado pro–análisis (PA).
-Material de Vidrio: Para la preparación de muestras se
utilizan tubos de 10 ml con tapa a rosca y cierre hermético
(tipo Hach).

2.- Objetivos
Determinar y Evaluar los siguientes parámetros de
validación: Repetibilidad, Precisión Intermedia, Exactitud e
Incertidumbre Expandida asociada al método.
3.- Materiales y Métodos
Las determinaciones de PCB´s fueron realizadas por
Cromatografía Gaseosa de acuerdo a la norma ASTM
D4059-00. Los ensayos fueron realizados utilizando la
Guía Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)
versión EP5-A21.
3.2 Metodología
-La metodología empleada para el cálculo de la
incertidumbre fue extraída de Michael Gluschke, et al. A
case Study in the practical estimation of mesurement
uncertainty, Accred Qual Assur 10:107-111 (2005)2.
-Estadísticos utilizados: Repetibilidad, Desviación
Estándar Diaria, Precisión Intermedia, Varianza Interdiaria,
Varianza Intercorrida, Desviación Estándar Relativa,
Coeficiente de Variación, Desviación Relativa de la
Concentración medida, Incertidumbre relativa de
Recuperación, Incertidumbre Combinada Relativa e
Incertidumbre Expandida Relativa.

1
P. Roqué et al. Validación analítica correspondiente al ensayo de (PCB’s) en muestras de aceites aislantes según Norma ASTM D 4059-00.

4.- Desarrollo
I 2
(1)
∑ ∑ (X ij 1 − X ij 2 ) 2
4.1 Precisión Sr =
i =1 j =1
= 0, 85 2
S dd = B2 −
A2
= 11, 24
4I 2
4.1.1 Experiencia de Repetibilidad Estimación de la Repetibilidad
Estimación de la
I Varianza Interdiaria
-Objetivo de la experiencia: Determinar los valores ∑ ( X i1. − X i 2. ) 2 (2)
A= i =1
= 1, 21
absolutos de las desviaciones estándar y los respectivos CV 2I S2
S = A − r = 1,10
2 2
a tres niveles de concentración, a los fines de compararlos Desviación Estándar
rr
2
con los especificados por la norma ASTM D 4059-00. Intradiaria Intercorrida
Estimación de la
-Diseño de la experiencia: Ensayos repetidos n veces, en I Varianza Intercorrida
un corto lapso de tiempo, en el mismo equipo, con el ∑ (X i. − X ... ) 2
(3)
B= i =1
= 3, 46
mismo operador (n=20). Experiencia efectuada con tres I −1
muestras reales de concentraciones cercanas a 5, 50 y 100 Desviación Estándar Diaria
mg/Kg (muestra A, B y C respectivamente).
-Especificación de Calidad: Intervalo de Repetibilidad donde:
para concentraciones de PCB´s en el orden de las 5, 50 y I = nº total de días,
100 mg/Kg deben ser iguales o menores a 1, 7 y 12 mg/Kg j = nº de corridas en el día,
respectivamente, lo que corresponde a Desviaciones Xij1 = resultado para el duplicado 1, corrida j en el día i,
Estándar de 0,5; 3,5 y 6 mg/Kg, según norma ASTM D Xij2 = resultado para el duplicado 2, corrida j en el día i,
4059-00. Xi1 = resultados promedio de la corrida1, día i
-Estadísticos empleados: Desviación Estándar y CV
(promedios de los duplicados);
-Resultados obtenidos:
Xi2 = resultados promedio de la corrida 2, día i
Tabla 1. Datos de Repetibilidad (promedios de los duplicados)
Muestra A Muestra B Muestra C
S T = S 2
dd + S 2
rr + S r
2
= 3 .6 1 m g / K g
Media (mg/Kg) 5.38 50.54 102.55
Desviación
0.15 (0.5)1 0.50 (3.5)1 1.25 (6)1 Tabla 2. Datos de Precisión Intermedia
estándar (mg/Kg)
CV (%) 2.9 1.0 1.2 Muestra M-50

1. Requisito de calidad ASTM 4059-00. Media (mg/Kg) 55.2

Desviación estándar (mg/Kg) 3.6
Como se observa en la tabla 1, las desviaciones estándar CV (%) 6.4
observadas en ambos ensayos cumplen con los requisitos
de calidad especificados en la norma ASTM D 4059-00. -Comparación entre Analistas:
Tabla 3. Datos comparación analistas
4.1.2 Ensayos de Precisión Intermedia
M-50 Analista GM M-50 Analista PR

-Objetivo de la experiencia: determinar los valores de las Media (mg/Kg) 55.1 55.4
desviaciones estándar en condiciones de variabilidad Desviación estándar
3.8 3.3
máxima dentro del mismo laboratorio y efectuar (mg/Kg)
comparación de desempeño entre dos analistas (PR y GM). CV (%) 7.0 6.0
-Diseño de la experiencia: Ensayo realizado, utilizando
Guía CLSI versión EP5-A2 que define, dos corridas -Test F para varianzas de dos muestras:
analíticas diarias (mañana-tarde) medidas por duplicado,
Tabla 4. Datos Test F
realizadas por dos analistas alternadamente (20 corridas por
M-50
analista). Experiencia efectuada con muestra de MRC
Fexperimental 0.41
concentración (49.4 ± 2.8) mg/Kg (M-50).
Fcrítico(1 cola, P 0.05) 1.69
-Especificación de Calidad: No hay valor prefijado en la
Resultado Fexp<Fcrit (cumple)
Norma ASTM D 4059-00 para este parámetro sin embargo
es determinante para el cálculo posterior de la
incertidumbre. -Test t para comparación de medias:
-Estadísticos empleados: Desviación Estándar, CV, F y t
Tabla 5. Datos Test t
Resultados obtenidos:
M-50
-Datos de precisión intermedia:
texperimental 0.73
tcrítico (2 colas, P 0.05) 2.02
Resultado texp<tcrit (cumple)

2
P. Roqué et al. Validación analítica correspondiente al ensayo de (PCB’s) en muestras de aceites aislantes según Norma ASTM D 4059-00.

Del análisis estadístico de comparación entre analistas, donde:

observados en las tablas 3, 4 y 5, surge que ambos analistas C obs =Promedio de los replicados del CRM;
miden con precisión y exactitud no diferenciables
estadísticamente para el nivel de confianza establecido del CCRM =Concentración certificada del analito;
95% n =Número de replicados;
u(Ccrm)= Incertidumbre estándar del CRM
4.2 Exactitud
-Incertidumbre Combinada Relativa:
Para la evaluación de este parámetro se realizó el análisis
de un material de referencia certificado, en una matriz uc ( Pcb´s ) = RSD 2 + urel ( R m ) 2 + ∆ 2 = 0,134
semejante a la de la muestra. Se comparó el promedio de
los valores obtenidos con el valor de referencia certificado, -Incertidumbre Expandida:
siendo la diferencia el sesgo del método.
-Especificación de Calidad: No hay valores prefijados en U ( PCB´s ) = 2uc ( PCB´s ) = 0, 264
la Norma ASTM D 4059-00 para este parámetro.
-Diseño de la experiencia: Se analizaron n veces muestras El análisis de la incertidumbre combinada se hizo en
de MRC (M-50) de concentración (49,4 ± 2.8) mg/Kg en forma relativa incorporando tres componentes: uno de
condiciones de precisión intermedia (n=80). precisión, uno de exactitud y otro de recuperación. Con el
-Resultados obtenidos: valor de la incertidumbre combinada relativa se calculó el
valor de la incertidumbre expandida relativa utilizando para
Tabla 6. Datos obtenidos para Exactitud con muestra de M-50 ello un factor de cobertura K igual a 2. Valor porcentual
Valor Incertidum obtenido 26,4%.
Desviación Valor
medio bre del Sesgo
Muestras estánda MRC
obtenido MRC (mg/Kg)
(mg/Kg) (mg/Kg)
(mg/Kg) (mg/Kg)
5.- Conclusiones
M-50 55.2 3.6 49.4 2.8 5.8
Los valores de precisión obtenidos en la validación son
Del ensayo de exactitud realizado se evidencia un sesgo comparativamente menores a los establecidos por la Norma
positivo con respecto al MRC. ASTM 4059-00 por lo tanto cumplen con los requisitos de
calidad preestablecidos.
4.3 Calculo de Incertidumbre Se determinó la presencia de un sesgo positivo en la
metodología, el cual es considerado en el cálculo posterior
-Objetivo: Establecer la incertidumbre para los ensayos de de la incertidumbre a pesar que la norma no establece
muestras problema. requisitos para este componente.
-Especificación de Calidad: No hay valores prefijados en Metodológicamente, consideramos que la complejidad de
la Norma ASTM D 4059-00 para este parámetro. las muestras, en función de la cantidad de analitos
-Estadísticos empleados: Incertidumbre expandida. presentes que se cuantifican en conjunto, es el factor de
-Componentes para el cálculo de la Incertidumbre: mayor incidencia en el valor de sesgo observado.
Comparativamente consideramos que la exactitud es el
ST componente de mayor aporte a la incertidumbre del
RSD = = 0, 065 (1)
Cobs método, dado que el factor relativo correspondiente al
sesgo duplica el valor de precisión (desviación estándar
Desviación Estándar Relativa relativa), mientras que el factor relativo a la recuperación,
es prácticamente despreciable.
_ 2
_
u ( Rm )  ST2   u (CCRM )  −4
urel ( R m ) = _ =  2  
+  = 8,32 ×10
C Bibliografía
( Rm )  n × C obs   CRM 
(2)
Incertidumbre relativa de Recuperación Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). User Verification of
Performance for Precision and Trueness; Approved Guideline-Second
Edition. CLSI document EP5-A2.
Michael Gluschke, et al. A case Study in the practical estimation of
Cobs − CCRM mesurement uncertainty, Accred Qual Assur 10:107-111 (2005).
∆= = 0,117 (3) IRAM 301/ISO/IEC 17025 Requisitos generales para la competencia de
CCRM los laboratorios de ensayo y de calibración.
ASTM D 4059-00. Standard Test Method for Análisis of Polichlorinated
Desviación Relativa de la Concentración medida Biophenyls in Insulating Liquids by Gas Chormatography.