Universidad Nacional Mayor De San Marcos

Universidad del Perú, Decana de América

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
E.A.P. DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
Departamento Académico de Química Básica y Aplicada

INFORME I
D4 I

INFORME I
RECONOCIMIENTO Y ANÁLISIS
DE FENITOÍNA SÓDICA.

CALIXTO FLORES, David

ESPINOZA MINAYA, María Isabel

MESA 4
ROMERO BUSTINZA, Isabel

SÁENZ HOLGUÍN, Vanessa

QUÍMICA MEDICINAL
INFORME I
RECONOCIMIENTO Y ANÁLISIS DE FENITOÍNA SÓDICA.
QUÍMICA MEDICINAL

INTRODUCCIÓN
La fenitoína sódica es un antiepiléptico de uso común. Es un compuesto aprobado por la FDA
en 1953 para su uso en convulsiones. La fenitoína actúa bloqueando la actividad cerebral no
deseada mediante la reducción de la conductividad eléctrica entre las neuronas, bloqueando
los canales de sodio sensibles al voltaje. Como bloqueador de los canales de sodio cardíacos,
la fenitoína tiene efectos como agente antiarrítmico.

Su espectro antiepiléptico es similar al de la carbamazepinay más limitado que el del

valproato: es eficaz frentea convulsiones tónico-clónicas generalizadas y frente acrisis
parciales, y no lo es frente a ausencias, mioclonías,ni convulsiones febriles.

La fenitoína representó un notable avance en el tratamientode la epilepsia y continúa

utilizándose ampliamenteen el tratamiento de las epilepsias parciales. Sinembargo, está
siendo sustituida como primera opción detratamiento por la carbamazepina y el valproato,
especialmenteen niños y en mujeres, debido a sus efectos secundariosy a la dificultad en
ajustar su dosis.La fenitoínaes uno de los pocos antiepilépticos en los que puedeempezarse el
tratamiento con la dosis estándar de300 mg/día o 5 mg/kg/día en adultos y con 5-10
mg/kg/díaen el niño, repartidos en dos tomas al día, sin necesidadde aumentar gradualmente
la dosis; sin embargo, la granvariabilidad individual en su metabolismo y la existenciade una
cinética no lineal saturable hace muy difícilajustar la dosis, por lo que debe recurrirse a la
monitorizaciónde los niveles séricos y a la utilización de nomogramasespeciales.

Inhibe los canales de sodio, bloqueando selectivamentelas descargas de alta frecuencia.

Además, la fenitoína regula la actividadde la ATPasa-Na+/K+ y tiende a restablecer
eldesequilibrio iónico provocado por un exceso de despolarización.A concentraciones altas
inhibe la entradade calcio durante la fase de despolarización y su movilizaciónintracelular,
interfiriendo con los sistemas dependientesde la calmodulina y de los nucleótidos cíclicose
inhibiendo la liberación de neurotransmisorestanto excitadores como inhibidores. Actúa más
en cortezacerebral que en diencéfalo. Afecta más las neuronasnormales que propagan las
descargas que las delfoco epiléptico y las que descargan anormalmente másque la
transmisión normal, careciendo de acción sedante.

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MARCO TEÓRICO
Nombre DCI: Fenitoína Sódica
Estructura Química:

Nombre Químico:Sal monosódica de 5,5-difenil-2,4-imidazolidinodiona

Fórmula:

Peso molecular: 274,25

Síntesis: Se trata el benzoaldehído con una solución de cianuro sódico, dos
moléculas de benzoaldehído se condensan (condensación benzoínica)
en una molécula de benzoína, la que luego se oxida a bencilo con ácido
nítrico o sulfato de cobre. El bencilo se calienta con úrea en presencia
de etóxido o isopropóxido de sodio para formar fenitoína sódica.

Benzoína Bencilo

Benzaldehído
Urea

Bencilo etóxido de sodio

Fenitoína Sódica

Solubilidad: Soluble en agua y en alcohol, prácticamente insoluble en cloruro de metileno.

Análisis microscópico: Cristales amorfos

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ANALITO: Tabletas de Fenitoína Sódica

Fecha de análisis: 15 de abril del 2011.

Lugar: Laboratorio de Química Medicinal de la Facultad de Farmacia y

Bioquímica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos.

Forma farmacéutica: Tabletas.

Concentración: 100 mg

Nº de Lote: 10102654

Fecha de vencimiento:Octubre del 2012.

OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA:

 Determinar la concentración y naturaleza del analito

 Comprobar si la muestra cumple con las especificaciones de la Farmacopea Inglesa.
 Reconocer los procedimientos de los análisis cualitativos mediante reacciones de
identificación necesarios para controlar el buen estado de la muestra.
 Reconocer los procedimientos de los análisis cuantitativos necesarios para controlar el
buen estado de la muestra.

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MATERIALES Y METODOS
A. Materiales

 Tabletas de Fenitoína sódica

 Pipeta
 Cuba cromatográfica
 Capilar
 Sistema de Solventes (Agua/alcohol)
 Reactivo de Mayer
 Reactivo de Dragendorff
 Formol
 Ácido sulfúrico
 Microscopio.

B. Métodos

Análisis cualitativo

Para el análisis cualitativo del analito se realizaron tres pruebas:

 Reacciones de reconocimiento

 Reacción de Le Rosen

Prueba con el Reactivo de Le Rosen: A la muestra triturada en una cápsula blanca

de porcelana se le añadió el reactivo de Le Rosen en cantidad de 2 a 3 gotas hasta
evidenciar cambio de coloración.

mg de Fenitoínasódica + gta de formol + gta de ácido sulfúrico Coloración marrón

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 Reacción de Dragendorff

Prueba con el reactivo de Dragendorff: A 1 mL de la muestra disuelta en una solución

de alcohol y agua, se le añadió el reactivo de Dragendorff en cantidad de 2 a 5 gotas
hasta notar cambio de coloración.

Miligramos de 2 gotas de reactivo Precipitado

solución problema + de Dragendorff naranja

 Reacción de Mayer

Prueba con el Reactivo de Mayer: A 1 mL de la muestra disuelta en una solución de

alcohol y agua, se le añadió el reactivo de Mayer en cantidad de 4 a 5 gotas hasta
notar cambio de coloración.

Miligramos de + 2 gotas de reactivo Precipitado blanco

solución problema de Mayer

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Análisis cuantitativo

Se procedió por el método de valoración de bases en medio no acuoso.

Para el análisis cuantitativo se utilizó volumetría de bases en medio no acuoso, para lo que se
procede a estandarizar el ácido perclórico tomando como patrón primario al biftalato de
potasio, donde se obtuvo una normalidad de 0.1 N.

Luego se procede a titular la fenitoína sódica, para lo cual se pulveriza la tableta con ayuda del
mortero y pilon, luego se procede a colocar el polvo dentro del matraz, se agrega ácido
acético y disolver; añadir 5 gotas de α – Naftol benceína (indicador) y proceder a titular con el
ácido perclórico previamente estandarizado, la solución cambiará de un color rojo a uno
verde.

Debido a ser una titulación en medio no acuoso se utilizó como valorante el ácido perclórico,
este método se basa en el nitrógeno amínico (que se encuentra encerrado en el círculo); en la
titulación se puede observar las siguientes reacciones:

H
N O Na
+ CH3COOH CH3COO- +
N
O H

HClO4 + CH3COOH CH3COOH2+ + ClO4 -

CH3COO- + CH3COOH2+ 2 CH3COOH

Por consiguiente el gasto obtenido del ácido perclórico es igual a la cantidad de Fenitoína
sódica que hay en la muestra problema.

Análisis microscópico
Se procedió a la disolver la tableta en agua, luego se
realizó un filtrado con la finalidad de separar las
partículas groseras de los cristales en solución. Se
depositóel filtrado en un portaobjetos y se procedió a
secar. Una vez evaporada toda el agua se colocó una
lámina cubreobjetos y se llevó la muestra para su
observación en el microscopio. Se observaron cristales
amorfos con bordes irregulares.

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Análisis Cromatográfico

Según farmacopea:

La fase móvil de la cromatografía es una mezcla filtrada y

desgasificada de agua, metanol, acetonitrilo, Solución de
trietilamina al 1% y ácido acético (500:270:230:5:1). Para el
estándar se disuelve una cantidad de ER Fenitoína USP pesada con
exactitud en la mezcla anterior, hasta obtener una solución con
una concentración conocida de aproximadamente 0,5 mg por mL.

Para valorar se pesa y pulveriza finamente no menos de 20 Tabletas,

se transfiere una porción del polvo, pesada con exactitud, que
equivalga aproximadamente a 250 mg de fenitoína, a un matraz
volumétrico de 500 mL, disolver y diluir a volumen con Fase móvil y
mezclar.

Equipar un cromatógrafo de líquidos con un detector a 254 nm y una

columna de 4,6 mm x 25 cm rellena con material L1. La velocidad de
flujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Cromatografiar el
estándar y registrar el cromatograma. Para proceder se debe inyectar
por separado volúmenes iguales (aproximadamente 25 mL) del
estándar y de la solución que contiene las tabletas a analizar en el
cromatógrafo, luego se registra los cromatogramas y se mide las
respuestas de los picos principales. La cantidad en mg de C15H12N2O2
en la porción de Tabletas tomada se calcula por la fórmula:

500C(rU/rS)

En donde C es la concentración en mg por mL de ER Fenitoína USP en la solución estándar; rU

y rS son las respuestas de los picos obtenidas a partir de la solución a valorar y la solución
estándar respectivamente.

La eficiencia de la columna no es menor de 6500 platos teóricos; el factor de asimetría no es

mayor de 1,5 y la desviación estándar relativa para inyecciones repetidas no es más de 2,0%.

En la práctica:
Sin embargo en la práctica se utilizó agua-alcohol (3:1) como fase móvil, un cromatofolio para
fase estacionaria, solución de tabletas de fenitoína sódica en agua y estándar de fenitoína y
como revelador vapores de yodo.

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Análisis Espectrofotométrico

Transiciones electrónicas en moléculas orgánicas.

Las bandas de absorción en las regiones Ultravioleta y Visible que presentan los compuestos
orgánicos se asocian con transiciones electrónicas en la capa de valencia. Los electrones
involucrados en dichas transiciones corresponden a aquellos mas débilmente atraídos por el
conjunto de núcleos atómicos que componen la molécula y cuyos estados pueden ser
descritos a través de orbitales moleculares que se expresan como combinaciones lineales de
orbitales atómicos de la capa de valencia. Las transiciones electrónicas a orbitales moleculares
más externos dan lugar a las denominadas transiciones Rydberg presentes en el Ultravioleta
de Vacío. Por otra parte las transiciones electrónicas que involucran a los electrones de las
capas internas son muy energéticas y se presentan en la región de los rayos X del espectro
electromagnético. Nuestro análisis se reducirá a las transiciones electrónicas en la capa de
valencia. A estos efectos resulta conveniente recordar la clasificación convencional de los
orbitales moleculares en la capa de valencia de los compuestos orgánicos.

Orbitales σ y σ*. Son orbitales moleculares localizados a lo largo del eje de unión de los
átomos. Los orbitales σ generan una densidad electrónica elevada en la región internuclear
teniendo un carácter fuertemente enlazante.

Los orbitales σ*, como todos los orbitales antienlazantes, presentan un plano nodal
perpendicular al eje del enlace en la región internuclear y tienen un acentuado carácter
antienlazante.

Orbitales π y π*. Estos orbitales se emplean en la descripción de los enlaces múltiples. Las
regiones de mayor densidad electrónica correspondiente a los mismos son aquellas
colaterales al eje del enlace. El carácter enlazante o antienlazante de estos orbitales es menos
acentuado que el de los orbitales σ.

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Orbitales n. Estos orbitales moleculares tienen un acentuado carácter local y describen pares
electrónicos libres asociados con heteroátomos (O, S, N, Hal). Energéticamente tienen
carácter no-enlazante.

Según el esquema anterior las transiciones electrónicas posibles dentro de la capa de valencia
son:

1. Transiciones οο*. Se presentan en todos los compuestos orgánicos. Son en general

de gran energía (UV de vacío) e intensidad.
2. Transiciones οπ* y πο*. Son posibles solo en compuestos insaturados. Son
transiciones de baja intensidad (regiones de definición de los orbitales involucrados
diferentes)en el UV lejano. Carecen de interés práctico.
3. Transiciones nο*. Se presentan en compuestos con heteroátomos (O, N, S, Hal),
generalmente en la región cercana a los 200 nm. La intensidad es variable
dependiendo de la naturaleza del orbital n.
4. Transiciones ππ*. Presentes solo en compuestos insaturados. En ausencia de
conjugación estas transiciones se presentan en UV de vacío. Dan lugar a bandas
intensas que `pueden aparecer en UV cercano si está presente insaturación
conjugada.
5. Transiciones nπ*. Presentes en compuestos insaturados con heteroátomos (grupos
carbonilo, nitro, azo, tiocarbonilo). Dan lugar a bandas débiles usualmente en la
región UV-cercana (baja energía de transición).

Hidrocarburos saturados.
Los hidrocarburos saturados presentan todos sus electrones de la capa de valencia en
orbitales σ por lo tanto las únicas transiciones en ellos son las del tipo σσ* que se presentan en
el Ultravioleta de vacío. Estos compuestos son transparentes en toda la región Ultravioleta-
cercano y en el visible y son utilizados ampliamente como solventes.

Compuestos con pares electrónicos libres.

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Los compuestos saturados que contienen heteroátomos tales como oxígeno, nitrógeno,
azufre o halógenos presentan transiciones de tipo nσ*. Estas transiciones se ubican
generalmente en la región cercana a los 200 nm dando lugar a la denominada absorción final,
un incremento en la absorción hacia el límite de detección del equipo a longitudes de onda
inferiores a 200 nm, sin máximo definido. Las características de absorción en esta región
dependen de la naturaleza específica del heteroátomo y en particular de la energía del par
electrónico libre que disminuye al aumentar la electronegatividad. En los compuestos con
azufre y yodo las bandas de absorción de origen
nσ* pueden aparecer con máximos bien
definidos en la región del UV-cercano.

Compuestos aromáticos.
El cromóforo aromático es mucho más complejo
que los anteriormente estudiados. Esto se debe a
la presencia de varios orbitales π y π* muy
cercanos en energía (o degenerados) que hacen
al modelo orbital de descripción de las
transiciones electrónicas poco viable. La
interacción electrónica juega Aquí un papel muy
importante, complicando la descripción de los
estados del sistema

Figura: Espectro UV del benceno en hexano.

El benceno presenta en la región UV tres bandas

de absorción de origen ππ*. Estas bandas han recibido históricamente diferentes
denominaciones (una definición más rigurosa, basada en los elementos de simetría molecular,
queda fuera de este tratamiento).

1. Banda secundaria, bencenoide o α (λmax = 254 nm εmax= 250).

Esta banda de origen ππ* resulta de muy baja intensidad por ser prohibida por
simetría. Su presencia en el espectro se debe a la reducción de simetría por
movimiento vibracional (banda vibrónica) por lo que muestra una estructura fina
vibracional característica. La banda secundaria se hace más intensa en los derivados
bencénicos por reducción de la simetría molecular. Asimismo se mantiene en los
derivados bencénicos como una transición de los orbitales π locales del benceno por lo
que su posición muestra relativamente poca sensibilidad a la sustitución (efectos
batocrómicos moderados).

2. Banda primaria o p (λmax = 204nm εmax= 8800).

Esta banda de origen ππ* es también relativamente débil pero mucho más intensa
que la anterior. Esta banda se desplaza batocromicamente en los bencenos
sustituidos por presentar carácter de transferencia de carga entre el anillo aromático y
el sustituyente y puede llegar a sumergir a la más débil banda bencenoide.

3. Segunda banda primaria o β (λmax = 184nm εmax= 68000).

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Esta intensa banda presente en el UV lejano puede desplazarse hacia el UV cercano en

el caso de bencenos sustituidos por cromóforos de extensa conjugación (aromáticos
policondensados).

PARTE EXPERIMENTAL

Acidoperclórico Gasto: 3.33 ml

Cálculos:

mg = N x ml x Peq

mg = 0.1 x 3.33 x 274

Muestra problema + ácido mg = 91.27 mg/tab

acético (solvente) + α-
naftolbenceína (indicador)

Como se puede apreciar la cantidad de 91.27% de principio activo por tableta no cumple con
los requisitos puestos en la farmacopea que dice que el valor debe variar entre el 95 % y el
105%.

RESULTADOS

Análisis cualitativo:

En el análisis cuantitativo se obtuvo los siguientes resultados:

 Prueba con el reactivo de Dragendorff: Agregado el reactivo se formó un precipitado

de color naranja.
 Prueba con el Reactivo de Mayer: Se evidencia un cambio notorio de coloración a
amarillento.
 Prueba con el Reactivo de Le Rosen: Se forma una ligera cristalización de color
amarilla notoria en la cápsula blanca.

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Análisis cuantitativo:

Valorante: HClO4 0.104 N M.P: Fenitoína sódica

Gasto = 3.2 mL. Masa = 274.25
Peso equivalente = 274.25
mg = N x mL x PEq
mg = 0.104 x 3.2 x 274.25
mg = 91.25

100 mg Fenitoína sódica 100% Hay 91.25 % de Fenitoína

sódica por tableta.
91.25mg Fenitoína sódica x

Análisis Cromatográfico

Se obtuvo el siguiente Rf para la muestra:

RfMP = 0.3/3.2 = 0.09

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Análisis Espectrofotométrico

Ultravioleta:
Absorción λ 254:
Transición π π* del
bencil
(banda secundaria o α)

Absorción UV de
Fenitoína sódica:
UV 254 Absorción λ 260:
Transición n π*
del par de
electrones del
Oxígeno

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FENITOÍNA EN HPLC
 Bombas : (#3) Shimadzu LC-6ª
 Detector : UV-VIS Shimadzu SPD-
6AV
 Horno :Shimadzu CTO-6A
 Columna analítica :ODS RP,150 x
4.6mm, 5mcm, Waters
 Controlador : Shimadzu SCL-6ª
 Integrador :Shimadzu CR-6A
Cromatopac
 Fase móvil: agua-metanol (50:50
v/v)
 Ajuste de ph=4,9
 Buffer fosfato 0.052Mph=4,9
 Membrana: 0.45mcm Millipore
 Flujo: 1ml/min
 Longitud de onda : 214 nm
 Temperatura :37+-1ºC

FENITOÍNA EN IR
Absorción infrarroja <460> en fase sólida

Pesar exactamente alrededor de 300 mg de Fenitoína Sódica y

disolver en
50 ml de agua en una ampolla de decantación.

Agregar 10 ml de ácido clorhídrico 3 N y extraer con tres

porciones sucesivas de 100, 60 y 30 ml, respectivamente, de una
mezcla de éter y cloroformo 1 en 2.

Evaporar los extractos combinados y secar el residuo de

Fenitoína a 105 °C durante 4 horas: el espectro de absorción
infrarroja de una dispersión en bromuro de potasio del residuo así
obtenido debe presentar máximos sólo a las mismas longitudes
de onda que el de una preparación similar de Fenitoína SR FA.

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(3) Tensión
=C-H

(4) R2N- (2) -C=C-

H Aromático

(1)Amida Huella Digital

(1) La absorción a 1650 cm-1 es intensa lo que probablemente nos indique la presencia de un
grupo carbonilo (-C=O), pero a esta baja frecuencia sugiere que se trata de una amida.
(2) , (3) La combinación de la tensión aromática C=C aproximadamente a 1600 cm-1 y la
tensión =C-H por encima de 3000 cm-1 son diagnósticos sobre la presencia de un anillo
aromático.
(4) Presenta una tensión N-H, cuando aparece esta tensión a una frecuencia q varía entre 3200
y 3500 cm-1 se está observando una amina primaria o secundaria; pero al presentar solo un
pico se puede decir que se está presente a una amina secundaria (R2N-H).

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CONCLUSIONES

 El porcentaje de fenitoína sódica encontrado en un comprimido de 100mg analizado

fue de 91.2704%, dicho valor no se encuentra dentro del rango establecido por la
Farmacopea Americana; por lo tanto se concluye que los comprimidos de fenitoína
sódica procedentes del laboratorio Marfan. Corporación Medco, no cumplen con las
exigencias porcentuales de principio activo por comprimido establecidos.

 Las reacciones de identificación cualitativa (Dragendorff, Mayer y Le Rosen)

resultaron positivas, lo cual indica que efectivamente los comprimidos contienen
fenitoína sódica y no otro compuesto; puesto que dichas reacciones detectan el grupo
funcional que distingue a la fenitoína de otras sustancias químicas.

DISCUSIONES
 Las tres reacciones realizadas (Dragendorff, Mayer y Le Rosen) evidencian
cambios notorios en la coloración inicial de amarillo opaco original de la muestra a
tonalidades diferentes e incluso ligera cristalización, esto evidencia la presencia
de alcaloides que son el objetivo de reconocimiento de estas reacciones.

 Como se puede apreciar la cantidad de 91.24% de principio activo por tableta no

cumple con los requisitos puestos en la farmacopea que dice que el valor debe
variar entre el 95 % y el 105%.

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BIBLIOGRAFÍA

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América USP 30 NF 25. Baltimore: Port City Press; 2006.
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imidazolidinedione (Phenytoin) from Almond. ChemTech. 2009 March;1(1):47-52.
 L. G. Wade, Jr. Espectroscopía de infrarrojo y espectrometría de masas. Química
Orgánica. 5ta ed. Madrid: Pearson Prentice Hall; 2004. p. 490-519.
 Flores, Jesús. Fármacos antiepilépticos y anticonvulsivos. Farmacología Humana. 3ra
ed. Barcelona: Masson, S.A.; 1997. p. 489-511

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