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NOTAS SOBRE ESTERILIZACION CONTINUA

Research · July 2016

DOI: 10.13140/RG.2.1.4371.8644

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Mariano Gutiérrez-Rojas
Metropolitan Autonomous University
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�
NOTAS SOBRE ESTERILIZACION CONTINUA
Mariano Gutiérrez Rojas
Departamento de Biotecnología. Universidad Autónoma Metropolitana, Unidad Iztapalapa.
Av. Michoacán y Purísima. México, D.F. CP 09340, México. Tel: 724.49.99; FAX: 724.47.12;
e-mail: mgr@xanum. uam. mx
l. Introducción.
Los medios de cultivo usualmente se
manejan en fase líquida, por lo general son
portadores de microorganismos contaminantes
que inciden en la productividad de los procesos
biotecnológicos. Este problema se puede eliminar
con una esterilización adecuada. La esterilización
es una operación unitaria indispensable en los
procesos de fermentación en donde se desea
cultivar una sola especie de células, tejidos o
microorganismos. La esterilización de un medio
de cultivo se puede realizar por diferentes
métodos, entre los cuales los térmicos son los
más económicos, los más estudiados y por lo
tanto los más utilizados en la industria.
Dependiendo de la naturaleza del proceso, la
esterilización puede realizarse por lotes (EL} o
en continuo (EC). En el primer caso los
fermentadores que contienen el medio de cultivo,
se calientan hasta una cierta temperatura -cercana
a los 120ºC- misma que se mantiene constante
porun tiempo determinado. Finalmente, el medio
se enfría hasta la temperatura de cultivo. La
operación se realiza dentro del fermentador con
el auxilio de serpentines o chaquetas que forman
parte del mismo (ver Fig. la). En la EC el medio
se calienta rápidamente hasta una temperatura
mayor -cercana a los 140ºC- que se mantiene
constante por un tiempo muy corto, ver Fig. lb.
Sin pretender agotar el tema, el objetivo
de estas notas es recordar los principios de esta
operación unitaria. En el recordatorio se incluye
17
a los equipos más empleados, contrastando
conceptos tales como: tiempo de residencia en
la EC con el tiempo de mantenimiento en la EL.
A partir del análisis del comportamiento de un
fluido en un esterilizador tubular, se consideran
posibles desviaciones del flujo ideal con los que
se desarrolla un modelo de dispersión axial o de
retromezclado que permite explicar el
comportamiento físico de contaminantes en
suspensión dentro de una corriente de liquido; a
partir de la solución del modelo se propone una
metodología de cálculo para los equipos de EC,
con algunos ejemplos.
2. Equipos más empleados.
Para la EC se conocen dos tipos de equipos:
los esterilizadores tubulares y los esterilizadores
de placas. En la Fig. lb se presenta un esquema
de proceso que se inicia con la preparación del
medio de cultivo que alimenta un esterilizador
tubular en donde, por inyección de vapor directo
o indirecto, el medio se calienta de manera
instantánea hasta una temperatura T2. En esta
sección ( de retención) el medio se mantiene
isotérmico hasta que una válvula de expansión
(VE) libera la presión del sistema, para enfriar el
medio con el auxilio de un tanque ''flash" en
donde la mayor parte del medio, ya estéril,
condensa a la temperatura de cultivo.
En los esterilizadores de placas el
calentamiento y el enfriamiento se realiza
mediante métodos indirectos, a través de una
 (b)
�
de ---, ...-------..
Cultivo L

sj

MedioESTERIL
@, l1'C

.
T ºC T ºC
T2 = 12 O T2 = 14 O

TI= 22 TI= 22

t, min
-1 tt, � te j.--
Figura l. (a) Tanque esteriliz.ador por lotes; (b) sistema de esteriliz.ación continuo; (e) cinética de calentamiento del medio, caso por
lotes; (d) cinética de calentamiento del medio, caso continuo.

cierta área de transporte de calor. Existen otros
equipos que se consideran variaciones de estos
dos. En todos los casos las etapas siempre son
las mismas: (i) calentamiento súbito del medio,
(ii) residencia del medio, a una temperatura
relativamente alta que garantice la desactivación
de los contaminantes, en la sección de retención
y (iii) enfriamiento instantáneo hasta la
temperatura de cultivo; de éstas, la etapa más
importante es la de destrucción de los
contaminantes. En esta etapa, para que la
desactivación de los contaminantes sea total, el
tiempo de exposición debe ser te que
conceptualmente es semejante al tiempo de
mantenimiento tm de la EL. En la Fig. 1 se
muestran las cinéticas típicas de calentamiento,
mantenimiento o retención y enfriamiento de un
medio de cultivo que se esteriliza por lotes
(Fig. le) y en continuo (Fig. ld), en donde se
pretende contrastar los conceptos de tiempo
mantenimiento (tm) de la EL y el de residencia
(te) de la EC. En el caso de la EL se pretende que
el calor cumpla con su cometido unos minutos,
mientras que en la EC el problema no es tan
simple, la pregunta que surge es ¿En la EC de
qué depende te? La respuesta inmediata es que
depende de la longitud del esterilizador y de la
velocidad del fluido, sin embargo, como las
dimensiones ( diámetro y longitud) son el objetivo
final del que pretende diseñar, entonces deben

18
considerarse otros factores como son: de la temperatura de exposición, según la
(i) la naturaleza, la cantidad de contaminantes y expresión de Arrhenius:
el criterio de esterilización, -Ea

(ii) el régimen de flujo y las desviaciones de la k = Ae RT • (2)

en donde A (min') es una constante específica
idealidad y
de cada microorganismo, el término Ea ( cal
(iii) las características fisicas del medio.
mol") es la energía requerida para la eliminación
total de contaminantes. En la Tabla 1 se muestran
En el primer grupo de factores, la
valores de A y Ea para algunos microorganismos,
temperatura del esterilizador, su incidencia en la
esta información se obtuvo a partir de la figura
naturaleza y en la cantidad de contaminantes son
7.41, pag. 402 de Bailey y Ollis (1977) y dan
las variables más relevantes. Al segundo grupo
sólo una idea de sus magnitudes.
pertenece como la velocidad del fluido que,
dependiendo de si el comportamiento del fluido
puede considerarse ideal o no, incidirá en los
tiempos de retención. En el tercer grupo se
1

Microorganismo A(min-1) Ea(cal mol")

encuentran variables como la dispersión de
partículas en suspensión. Con estos elementos, Escherichia coli 2.10Xl04º 60770
a continuación se pretende responder a las
preguntas clásicas para el diseño: ¿cuál o cuáles Bacillus subtilis 76420

¡
1.97Xl042
son las relaciones que guardan entre sí todas estas
(esporas)
variables? ¿cómo tratarlas simultáneamente? y
.,_
¿cómo relacionar estas variables con las Bacillus stearo-
dimensiones del equipo?
thermophylus 7.34Xl038 67770
(esporas)
3. Naturaleza, cantidad de contaminantes y
criterio de esterilización.
Tabla l. Valores aproximados de las constantes de la ecuación
(2) para algunos microorganismos
La destrucción térmica de una población
M0 ( contaminantes por litro), que se somete a una
temperatura T (K) durante un tiempo t (min), M0 se puede cuantificar experimentalmente y se
relaciona con k integrando la ecuación ( 1 ):
produciendo M aún viables, independientemente
de la naturaleza y cantidad de contaminantes, se M = M0e-k1 (3)
puede entender en términos de una cinética de es decir, los M contaminantes sobrevivientes
'
primer orden. Así, para el caso más simple de un después de una exposición de t min a la
tanque por lotes (ver Fig. la) se tiene: temperatura T ( contenida en k, ver ecuación 2),
k depende directamente de M0. Otra forma de
M0---;.M
expresar la ecuación (3) es la siguiente:
Mo
dM v'=In M =kt (4)
-=-k.M (1)
dt
donde se introduce un concepto muy utilizado
donde k ( constante de destrucción térmica) es
en esterilización: v (nabla), que es un número
específica para cada microorganismo y depende

19
adimensional con un claro sentido fisico ya que,
1 aproximación del valor de u en relación a la
dependiendo de la magnitud del valor que
adquiere, se utiliza como un criterio para
establecer la tolerancia admitida al final de la EC.
Antes de ejemplificar la utilidad de estos
conceptos, es necesario detenerse un poco en el
comportamiento de flujo del medio en el
esterilizador.
4. Régimen de flujo y desviaciones de la
idealidad.
La velocidad promedio de un fluido en un
tubo (m s'), define al tiempo de retención o de
residencia como sigue:
- Flujo Longitud tubo
u=·--=
Area Tiempo de residencia
Esta definición solo es válida cuando el
flujo del fluido es ideal o tapón, i.e. cuando las
paredes del tubo no producen gradientes de
velocidad radial, y el fluido se comporta como
si fueran rebanadas concéntricas de fluido en
donde los efectos de la rugosidad del tubo se
pueden despreciar. El caso mas frecuente no es
este, normalmente se presentan desviaciones del
flujo ideal que inciden directamente en la
conceptualización y en el manejo de u. En la
Fig. 2 se muestra para cada régimen una
Flujo ideal o tapón
Régimen laminar
Régimen turbulento
Figura 2. Efecto de las desviaciones del flujo ideal sobre la velocidad promedio de un fluido en un tubo.
máxima velocidad, uM ax , del fluido dentro del
tubo. Se puede suponer que si el fluido contiene
partículas en suspensión, como es el caso de
sustratos insolubles o microorganismos
contaminantes en el medio, algunos
contaminantes podrían pasar sub-expuestos al
calor del esterilizador tubular. La consecuencia
se puede imaginar fácilmente: un sólo
sobreviviente sería suficiente para que el medio
resulte contaminado. Este riesgo se puede
minimizar evitando la suposición que un fluido
en un esterilizador tubular puede comportarse
como ideal.
,
5. Caracteristicas físicas del medio.
(5)
El comportamiento de un fluido puede
desviarse de la idealidad, en buena medida,
debido a que sus propiedades fisicas así lo
imponen, por ejemplo altas viscosidades del
medio favorecen Reynolds laminares; las
partículas en suspensión imparten una de las
características más indeseables de la EC: la
dispersión o la capacidad de ciertas partículas
suspendidas para distribuirse homogéneamente
en el seno del liquido siguiendo gradientes de
concentración independientes del flujo. Este
fenómeno también se conoce como
retro mezclado.
!
1
1
/Mn
D -
u= ( 0.5) UMax
-
-
� u= ( 0.82 ) ÜMax
20
 Una manera de saber qué tanto se aleja de
la idealidad el comportamiento de un fluido es
el número de Péclet (NpJ El NPe es un
adimensional que relaciona fuerzas inerciales y
fuerzas dispersas y se define como:
uL Fuerzas inerciales
N ---
Pe - D 2 - Fuerzas dispersas
donde L es la longitud del esterilizador (m), D2
es el coeficiente de dispersión (m2 s'). Cuando
las fuerzas inerciales predominan sobre las
dispersas el fluido se aproxima al ideal y el NP.
tiende a infinito porque D2 tiende a cero. Por el
contrario el flujo es disperso cuando el NP• tiende
a cero cuando D z es alto. El concepto de D z es
muy parecido al de la difusividad de un soluto
en un solvente, sólo que en el caso de las
de las esporas es necesario formular un modelo
matemático capaz de predecir y simular su paso
a través del esterilizador. En la Figura 3 se
muestra un esquema comparativo entre dos casos
extremos: (i) flujo ideal sin dispersión (Fig. 3a)
y (ii) cuando el flujo se aleja del ideal (Fig. 3b) y
la dispersión es dominante. En ambos casos el
(6)
medio, a una velocidad u, entra a un elemento
diferencial de volumen (.1 V= S .1z) en el que se
realiza un balance de esporas contaminantes M,
que entran por flujo (Fig. 3a) y por flujo y
dispersión (Fig. 3b ). Considerando el caso (ii)
en el estado estacionario, el modelo de dispersión
se deduce a partir de la ecuación de balance de
esporas:
Acumulación= (Ent. - Sal.)F1. + (Ent. - Sal.) Disp.
.
• UJO

- Esporas muertas = O
partículas en suspensión. Con este argumento y
donde:
suponiendo que los contaminantes
termoresistentes fueran esporas suspendidas, el Entrada por flujo= Gasto M = u S MI z
comportamiento disperso debería siempre
tomarse en cuenta para el diseño de un Salida por flujo = Gasto M = u S MI,+,.,,
esterilizador continuo. (ozS :-)
Entrada por dispersión axial= - 1,
6. Modelo de dispersión o retromezclado.
Salida por dispersión axial= - (o- s
z dM)
dz
1
z+t,.z
Para analizar al comportamiento disperso
Esporas muertas = k S .1z M

��,SMl�I :
Esporas por Es poras por
l z+ !r¿ (a) Flujo z z +Az Fluj o (b)
1 -- .-.
:

u
- -+ -+
:
1
1
1
1
1 z Esporas por u SMI, uS Ml •.,, Esporas por
Dispersión Dispersión
1.= Ü z=L 1
1 -r----z
Mi M
z = O; Me z= L; M

-dM d2M -dM k

u-=-kM (e) D 2 --- u--= M (d)
dz dz' dz

Figura 3. Deducción del modelo de transporte y destrucción de contaminantes en un esterilizador continuo: (a) esquema para un flujo
no disperso; (b) esquema para flujo disperso; (e) modelo axial simplificado y (d) modelo de dispersión axial

21
 Sustituyendo en la ecuación de balance,
dividiendo entre S t!t.z y tomando el límite cuando
'1.z tiende a cero, el resultado se puede ver en la
Fig. 3d y corresponde al modelo matemático de
dispersión axial. Cuando la dispersión axial es
despreciable el resultado es el modelo
simplificado que se muestra en la Fig. 3c, que es
exactamente igual al modelo de EL de la ecuación
( 1) después de sustituir la velocidad u por su
expresión diferencial (dzJdt), lo que implica que
en flujo tapón con una velocidad constante, cada
elemento diferencial de volumen se mueve a
través del esterilizador tubular sin interactuar con
los elementos de volumen que lo rodean, es un
sistema totalmente segregado y se comporta
como un EL independiente.
Introduciendo dos nuevas variables
adimensionales en la ecuación de la Fig. 3c, M
M z
y z tal que: M = Mo y z = L, se puede
demostrar que el modelo de dispersión axial en
su forma adimensional, se reduce a la siguiente
expresión:
-
1 d2 M d M
-----=N M (7)
N --2 - R
Pe d Z dZ
donde NR es el número de reacción o de
Damkohler y se define como:
(8)
Una forma conveniente y sencilla de
resolver el modelo de la ecuación (7) es
empleando el siguiente procedimiento:
1. Con la figura de la pag 263 (Aiba et al., 1973)
y el criterio de esterilización V, se encuentra
el NR (si es que se conoce el NP.)
2. Si el NPe no se conoce, se puede suponer o
estimar a partir de la figura de la página 284
(Levenspiel, 1972) en donde se requiere
22
también el Reynolds del medio en el
esterilizador.
3. Con estos valores se puede estimar: la longitud,
el diámetro del esterilizador, la temperatura
en la sección de retención, o el nivel de
esterilidad deseado, según la información
disponible.
7. Ejemplos de cálculo.
EJEMPLO 1. En un esterilizador tubular
continuo (ETC) de 75 m de longitud por donde
circula un fluido con una velocidad promedio de
2. 5 ms', contaminado con esporas de Bacillus
stearothermophylus. Se desea estimar la
temperatura de operación que permita lograr un
nivel mínimo de esterilización con V = 41. 4.
Comparar el resultado para dos casos: (i) un
comportamiento ideal y (ii) considerando la
dispersión de las esporas para un NPe = 100.
Solución: Con la figura de la pag 263 (Aiba
et. al, 1973) a V = 41.4, le corresponde en la
ordenada un valor de IX 10-18 esporas
sobrevivientes al tratamiento térmico.
(i) Para el caso del comportamiento ideal
(NPe = a) en la abcisa se puede leer el
NR = 42. Donde k se obtiene despejando de
la ecuación (8), k = 84 min:'. Para estas
esporas, según la ecuación (2) y la
información de la Tabla 1, la temperatura de
operación debe ser de 129ºC.
(ii) Tomando en cuenta la dispersión, NP. = 100,
repitiendo el procedimiento se encuentra que
para un NR = 58 con k = 116 min:', la
temperatura de operación debe ser de 131 ºC.
EJEMPLO 2. Se pretende pasar por un
ETC tres formulaciones de un medio de cultivo
(gasto= 20 m3 h'), los coeficientes de dispersión,
en m2 s', son: 0.06, 0.6 y 6. La esterilización es
exitosa si V es 38.45. Suponiendo la misma
temperatura en los tres casos (k = 50 min'),
calcular el diámetro y la longitud del esterilizador
que se requiere en cada caso.
Solución: Con la figura de la pag 263 (Aiba
et. al, 1973), a V= 38.45 le corresponden
2x10-11 esporas sobrevivientes al tratamiento
térmico. El proceso iterativo comienza
suponiendo un NPe' la intersección en la figura
conduce a leer en la abcisa el NR. En seguida es
necesario un diámetro de tubo supuesto con el
que se calcula u, con el NPe y D2 se obtiene L,
con esta longitud se calcula el NR que debe ser
igual al obtenido con el NPc supuesto, éste será el
criterio de convergencia. Si el resultado no
concuerda, se tienen dos alternativas: modificar
el diámetro supuesto o bien proponer otro NPe'
Los cálculos son como sigue:
l. Suponiendo un NPe = 1000 ( caso en el que
D z = 0.06 m2 s') de la figura se obtiene que el
NR objetivo es de aproximadamente 40.
2. Suponiendo un diámetro de 2. 5 pulgadas
(0.0635 m); la velocidad promedio del fluido:
20m31�1
- - 4 =
u- h 3600s p(0.0635)2 m2
3. La longitud del esterilizador, a partir del NPe
supuesto, se calcula de la ecuación. ( 6):
0.06m2
1---1
s 100
L= ---110001 = 34.3m
s l.75m
4. El NR se calcula con la ecuación (8), de donde:
34.3m1:11
:¡;
1
l 1.;51
NR = =
El nuevo NR es menor que el NR 'objetivo ( 40), lo
que implica que el tubo debe ser más largo. Esto
se logra siguiendo cualquiera de las dos
estrategias siguientes: (i) suponiendo un NPe
mayor o bien, (ii) con una velocidad menor,
suponiendo un diámetro mayor.
(i) Suponiendo un NPc = 2500 ( de la figura se
obtiene un nuevo valor objetivo para
NR= 39.5} con un diámetro de 2.5 pulgadas,
la longitud requerida es de 85. 75 m y el nuevo
valor calculado de NR es de 40.8, que
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converge satisfactoriamente con el NR
objetivo.
(ii) Suponiendo un diámetro de tubo de 3.15
pulgadas (0.08 m) y conservando el
NPe = 1000, la velocidad del fluido es de 1.1
m s' y la longitud requerida de 5 4. 5 m lo que
genera un NR de 40.9 que también converge
satisfactoriamente con el NR objetivo.
En ambos casos el tiempo de retención promedio
es de 49s y cualquiera de los dos esterilizadores
cumpliría con los requerimientos del problema.
Sin embargo, la alternativa (ii) presenta el
inconveniente de que el diámetro seleccionado
no corresponde al estándar comercial. Por lo tanto
se sugiere seguir la estrategia (i) suponiendo
diámetros estándar.
Con diámetros de- 2. 5 y 3 .O pulgadas los
resultados convergentes en el NR, se muestran
en la Fig. 4. Como se esperaba, a medida que la
dispersión del fluido aumenta (mayor D ), se
requieren esterilizadores más largos.
r
1 75ms-' L.m
· dt=2.5'
350
300
250 dt=3'
200
150
50
o
0.06 0.6 6 60 Dz, m2 s ·1
16.3
Figura 4. Resultados de los cálculos para el Ejemplo 2
8. Referencias bibliográficas.
Aiba, S., Humphrey, A.E. and Millis,N.F.
1973. Biochemical Engineering. 2ª. Ed.
Academic Press Inc. London.
Bailey J. E. and Ollis D. F. 1977.
Biochemical Engineering Fundamentals.
McGraw-Hill Kogakusha, LTD. Nueva York.
Levenspiel O. 1972. Chemical Reaction
Engineering. 2ª Ed. Wiley Int. Edition, New York
23