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PracticaAislamientoDeMicroorganismos 21549 PDF
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Aislamiento de Microorganismos
Objetivos
Introducción
Materiales
Metodología
a) Dilución de la muestra.
1. Pesar 10 g o medir 10 mL de la muestra natural y en condiciones asépticas vaciar
en un matraz Erlenmeyer con 90 mL de SSI estéril, ó tomar 1 mL de una muestra
mixta de cultivos puros y en condiciones asépticas transferir a un tubo con 9 mL de
SSI estéril ó transferir 3 a 5 asadas de esporas de un alimento con desarrollo
visible de hongos a un tubo con SSI estéril.
2. Homogeneizar y a partir de esta suspensión preparar 2 diluciones decimales mas
(10-2 y 10-3), para ello emplear dos tubos con 9 mL de SSI estéril c/u. En el caso de
la muestra de alimento contaminado con hongos únicamente se realizan dos
diluciones.
Precauciones generales
Las estrías hechas para la siembra por agotamiento deben ser cerradas y
trazadas rápidamente.
Etiquetar perfectamente el material a sembrar.
Disposición de desechos
Materiales
Metodología
b) Aislamiento primario.
1. Identifique las colonias en las que observó un solo tipo de morfología y Gram.
2. Con base en sus resultados y las instrucciones del profesor proceda a aislar:
Una bacteria Gram negativa o
Una bacteria Gram positiva o
Un bacilo esporulado (realizar la confirmación de esporulación después de
incubar un mínimo de 5 días) o
Una actinobacteria o
Un hongo filamentoso ( o uno levaduriforme)
3. A partir de la colonia seleccionada inocular por agotamiento ( o por picadura en el
caso de un hongo filamentoso) una placa que contenga el medio de procedencia
(1ª resiembra).
4. Incubar 24 horas a una temperatura que debe ser acorde con la procedencia de la
colonia.
5. Guardar en refrigeración las cajas a partir de las cuales realizó el aislamiento.
Precauciones generales
Disposición de desechos
1. Verter los desechos de colorantes en los contenedores dispuestos en los
laboratorios.
2. Después de observar las preparaciones, sumergir los portaobjetos en una solución
sanitizante durante 10 minutos, lavar con detergente, enjuagarlos y colocarlos en un
frasco con alcohol al 95%.
3. En el caso de ruptura de las preparaciones, envolver los fragmentos con papel,
esterilizar el paquete en autoclave y después desecharlos en el contenedor de vidrio
roto.
1. Sellar con maskin-tape las cajas de Petri no seleccionadas y colocarlas en el
contenedor ubicado en el laboratorio 1A.
Materiales
Metodología
Características
iniciales
1ª resiembra
2ª resiembra
3ª resiembra
* Describir las colonias de acuerdo con las características revisadas en la Práctica 3.1 Técnicas de Siembra.
2
SRB
* Describir las colonias de acuerdo con las características revisadas en la Práctica 3.1 Técnicas de
Siembra. **Dibuja el campo microscópico con las observaciones microscópicas a color.
Precauciones generales
Algunas colonias de bacterias filamentosas son muy secas y duras, para realizar
un frote de éstas frota suavemente la colonia con el asa bacteriológica y
resuspende en una pequeña gota de agua sobre un portaobjetos.
Disposición de desechos
Materiales
Material por equipo:
Microscopio
Colorantes para tinción de Gram
Tubos de ensayo de 13x100 con TSA inclinado
Incubadoras a 28 y 37°C
Metodología
Precauciones generales
Disposición de desechos
Literatura de consulta
Madigan, M. T., J. M. Martinko y J. Parker. 2003. Brock. Biología de los microorganismos. 10ª Ed.
Prentice Hall Iberia. España.
Ramírez-Gama, R. M., B. Luna Millán, O. Velásquez Madrazo, L. Vierna García, A. Mejía Chávez, G.
Tsuzuki Reyes, L. Hernández Gómez, I. Müggenburg, A. Camacho Cruz y M del C. Urzúa
Hernández. 2006. Manual de Prácticas de Microbiología General. 5ª edición. Facultad de Química,
UNAM. México.
Tortora Gerard J., Fonke Beidell R. y Case Christine L. 1995. Microbiology an Introduction. 5a. ed.
The Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. 801 pp
Vullo, D., M. Wachsman, L. Alche. 2000. Microbiología en Práctica. Manual de laboratorio para la
enseñanza de Microbiología básica y aplicada. 1ª edición. Atlante S. R. L. Argentina