1) Objetivos del curso de postgrado:

Ante esta nueva etapa de profundizacin del conocimiento

cientfico, los investigadores precisan obtener resultados cada vez
ms confiables y reproducibles. En este sentido, la citometra de flujo
constituye una herramienta importante.
Nuestro objetivo es familiarizar al investigador en el diseo de
experimentos inmunocitomtricos de marcadores biolgicos y
funcionales para su medicin por Citometra de Flujo Multicolorimtrica
(CMF MC).
Ser un objetivo central, aplicar eventos ocurridos en nuestra
experiencia para obtener todas las opciones posibles para definir los
biomarcadores a determinar, y ofrecer soluciones a los errores ms
frecuentes que se cometen.
. Este objetivo requiere que el investigador seleccione la
combinacin de fluorocromos ms adecuada, determine los controles
necesarios para validar el ensayo, realic el correcto anlisis de los
datos y el informe de los resultados.
Nuestro curso est orientado a profesionales biomdicos que utilizan
la CMF como herramienta invalorable al momento de identificar sub-
poblaciones celulares. Se han producido grandes avances
tecnolgicos que nos permiten conocer con mayor detalle cada una de
ellas en distintas condiciones, tanto normales como patolgicas. La
CMF MC es uno de los mtodos ms utilizados a diario en todos los
laboratorios y pretendemos facilitarles la tarea a todos aquellos
interesados en participar.

2) Programa analtico :

Unidad 1): Reglas para optimizar la eleccin de fluorforos en una

combinacin multicolorimtrica
.
1a. Definicion de inmunocitometria multicolorimetrica
1b. Configuracin ptica del citmetro de flujo
1c. Indice de tincin del fluorocrmo: concepto y aplicacin.
1d. Nivel de expresin de la protena blanco y su relacin con dichas
reglas.
1e. Sensibilidad de resolucin y poblaciones brillantes.
1f. Fluorocromos en tandem y sus limitaciones.
1g.Superposicin espectral en la emisin de fluorescencia. Su
influencia en la resolucin de poblaciones.

Docente a cargo: Bioq. Luis Ariel Billordo

Unidad 2): Controles en la citometra de flujo:

2a.Controles negativos en inmunofluorescencia directa e indirecta, con

anticuerpos monoclonales y policlonales.
2b.Autofluorescencia,FMO, controles isotpicos, controles isoclnicos.
2c.Controles de compensacin.
2d.Controles positivos.(control de desempeo del ensayo)

Docente a cargo: Bioq.y Farm. Plcida Baz

Unidad 3): Inmunomarcacin de fosfoprotenas (vas de sealizacin):

3a.Comparacin entre las distintas estrategias de deteccin de

fosfoepitpes.
3b.Factores experimentales influyentes en los resultados.
3c.Mtodos secuenciales y No secuenciales de inmunomarcacin.
3d.Protocolos y reactivos comerciales de permeabilizacin/Fijacin.
3e.Marcadores de superficie celular humanos/murinos validados para
inmunoanlisis de fosfoprotenas.

Docente a cargo: Bioq. Luis Ariel Billordo

Unidad 4): Artefactos citomtricos:

4a.Agregados celulares: dobletes, tripletes. Detritos.

4b.Clulas muertas: su influencia. Exclusin de las mismas.
4c.Corrimientos inespecficos del tubo de reaccin respecto a sus
controles negativos.
4d.Unin no deseada de los anticuerpos(principalmente va Fc-RFc).

Docente a cargo: Bioq.y Farm. Plcida Baz

Unidad 5): Interpretacin y anlisis de datos:

5a.Validacin interpretativa holstica de los datos citomtricos.

5b.Validacin de la compensacin.
5c.Nmero de eventos adquiridos; un abordaje estadstico.
5d.Mtodos de anlisis de datos: manual y automatizado.

Docente a cargo: Bioq. Luis Ariel Billordo

3) Caractersticas metodolgicas:

Curso terico con prctico, en el cual cada clase constar de 2 partes:

En la primera de ellas el docente har una introduccin terica del
tema, con un ejemplo del caso-problema y posterior discusin con el
alumnado. La presentacin ser de tipo expositiva en un formato
Power Point con ayuda del pizarrn en caso necesario.
En la segunda parte se les brindarn a los alumnos casos
problemticos a resolver relacionados a la unidad temtica
correspondiente, sta actividad ser realizada en 4 grupos de 5
alumnos cada uno. Una vez resueltos los casos, su solucin ser
expuesta al resto de la clase para ser discutida y analizada con el
docente.

4) Participacin de los docentes:

Baz, Plcida
Billordo, Luis Ariel

5) Recursos didcticos:

Diapositivas de Power Point.

Publicaciones cientficas (Papers) en formato digital (pdf).
Software de anlisis citomtrico (Flow Jo, Cell Quest, etc).

6) Carga Horaria:

20 horas reloj total, distribuido en 5 clases de 4 horas cada una. Las

mismas sern repartidas en 1hora 50min la parte terica y 1hora 50
min la parte prctica, con 20 min de receso en el intermedio.
Los das de dictado de clases sern los das martes de 13.30 hs a
17.30 hs.

7) Infraestructura:

1 aula ( 4to piso ,INIGEM, Hospital de Clnicas J. de San Martn).

1 Proyector audiovisual.

8) Nmero de inscriptos:

El nmero mximo ser de 20 alumnos, teniendo en cuenta el n de

docentes (dos) , el espacio y las caractersticas metodolgicas del
curso.

9) Procedimientos de evaluacin:

Examen final escrito individual (Va On line): Se evaluarn 5 casos

problemticos. La aprobacin del examen debe tener 3 casos
resueltos correctamente.
Los requisitos de aprobacin del curso sern una asistencia mnima
del 80 % (4 clases) y aprobacin del examen final.