Ingeniera metablica
de bacterias
Alfredo Martnez Jimnez y Guillermo Gosset Lagarda
Entre los compuestos generados por la indus-
tria qumica, los aromticos y los combusti-
bles se distinguen por tener un gran nmero
de aplicaciones en los sectores farmacutico,
de alimentos y energtico. Actualmente, estas
molculas se obtienen mediante procesos ba-
sados en refinacin y sntesis qumica a partir
del petrleo y derivados. Esto permite producir
compuestos aromticos y combustibles ti-
les con un costo de produccin relativamente
bajo. Sin embargo, la mayora de estos proce-
sos generan subproductos que contaminan
el medio ambiente. Por otro lado, depender
del petrleo como materia prima tiene la des-
ventaja de que no es renovable, por lo tanto,
en el futuro su disponibilidad ser limitada.
Por estos motivos, ha surgido el inters en la
bsqueda de alternativas tecnolgicas para
producir compuestos tiles mediante proce-
sos no contaminantes y que no dependan del
petrleo. Una de las alternativas ms promiso-
rias es la biotecnologa. Esta rea tecnolgica
puede definirse como el uso de organismos o
sus componentes, con el fin de generar bienes
y servicios. Todos los seres vivos tienen la ca-
pacidad de realizar transformaciones qumicas
debido a que poseen protenas especializadas
Biotecnologia V14 CS3.indd 373
llamadas enzimas que funcionan como catali-
zadores. La biotecnologa estudia y aprovecha
esta capacidad cataltica natural de los orga-
nismos para generar procesos biolgicos de
produccin de molculas tiles.
El conjunto de reacciones qumicas que
ocurren en un organismo se conoce como me-
373
tabolismo. Esta serie de transformaciones qu-
micas tiene el propsito de generar diversas
molculas que sern unidas en diferentes con-
figuraciones y as se generarn nuevos com-
ponentes celulares. Mediante este proceso la
clula crece hasta llegar a un punto en que se
divide dando lugar a nuevas clulas. Mediante
reacciones especficas, la energa qumica para
llevar a cabo estos procesos es extrada de las
molculas orgnicas, principalmente azcares.
As, cualquier clula puede considerarse como
una fbrica microscpica, capaz de llevar a
cabo un gran nmero de reacciones qumicas
diferentes. Sin embargo, en su estado natural,
las clulas generalmente no producen cantida-
des elevadas de los compuestos tiles desde
el punto de vista industrial. Por este motivo es
necesario modificar su metabolismo para que
adquieran tal capacidad, para que se convier-
tan en fbricas qumicas.
11/14/07 5:04:41 PM
 374 | Ingeniera metablica de bacterias
La ingeniera de vas metablicas
y la bacteria Escherichia coli
El rea de la biotecnologa que se relaciona al
estudio y la modificacin del metabolismo es la
ingeniera de vas metablicas (IVM). sta puede
definirse como la modificacin racional y direc-
ta de las reacciones que constituyen el meta-
bolismo de un organismo, con el propsito de
mejorar sus propiedades o su productividad
(Bailey, 1991). La IVM surge como una nueva
rea dentro de la biotecnologa como resultado
del cmulo de conocimientos generados por
varias disciplinas biolgicas que incluyen prin-
cipalmente a la bioqumica, la gentica, la bio-
loga molecular y las ciencias genmicas. En la
figura 1 se muestra un esquema que represen-
ta el flujo de informacin gentica en la clula,
as como las reas de la biologa y la ingeniera
que son utilizadas como herramientas tericas
y prcticas de la IVM. En la parte central de la
figura se muestra la relacin existente entre la
informacin gentica contenida en el genoma
de una clula, la composicin de protenas y su
efecto sobre el metabolismo. Este esquema re-
presenta el dogma central de la biologa mole-
cular, el cual dicta que la informacin gentica
fluye del cido desoxirribonucleico (ADN), hacia
el cido ribonucleico (ARN) y, finalmente, hacia
las protenas. Las protenas son las responsa-
bles de llevar a cabo la mayora de las funciones
celulares; por lo tanto, el tipo y la cantidad de
protenas especficas (proteoma) presentes en
una clula determinan qu funciones celulares
estarn activas.
El metabolismo es un proceso celular en
que participan un gran nmero de protenas di-
ferentes. La clula posee mecanismos para co-
ordinar cules protenas y en qu cantidad son
necesarias dependiendo de las condiciones ex-
ternas. Cualquier clula microbiana tpica tiene
el potencial gentico en su genoma para sinte-
tizar un nmero considerable de protenas. En
el caso de la bacteria Escherichia coli, se estima
que este nmero es cercano a 4400 protenas
diferentes. El control sobre cules protenas se
sintetizan ocurre principalmente a nivel de la
sntesis del ARN. Existen protenas, llamadas
Biotecnologia V14 CS3.indd 374
reguladores, que tienen la funcin de facilitar o
impedir que un gene sea transcrito en ARN. De
esta manera, mediante la regulacin gentica,
la clula tiene mecanismos para controlar que
slo se sinteticen las protenas necesarias para
una condicin ambiental determinada.
La posibilidad de modificar de manera di-
recta el metabolismo es el resultado del cono-
cimiento actual sobre las reacciones qumicas
que lo constituyen, las enzimas que catalizan
dichas reacciones y los genes que las codifi-
can. Debido a que el metabolismo es una red
muy extensa y compleja de reacciones, se ne-
cesitan metodologas que permitan analizarlo
cuantitativamente. Asimismo, se requieren
herramientas especializadas para modificar
de manera directa los componentes celulares.
El conjunto de instrumentos se presenta en la
figura 1.
La ingeniera gentica y sus tcnicas de
ADN recombinante surge en los aos setenta
como resultado del conocimiento acumulado
en el campo de la biologa molecular. Con ello
se abre la posibilidad de aislar, editar y modifi-
car el material gentico, logrndose incluso el
transplante de genes entre especies diferentes.
Una importante aplicacin de la ingeniera ge-
ntica ha sido el desarrollo de cepas bacteria-
nas con la capacidad de producir cantidades
elevadas de protenas teraputicas, como es el
caso de la insulina y la hormona de crecimiento
humanas (Olmos et al., 1994).
El desarrollo en aos recientes de las tc-
nicas de la biologa molecular ha permitido la
determinacin de las secuencias nucleotdicas
de genomas completos. Surge as la ciencia ge-
nmica, la cual tiene como objetivo el estudio
de la funcin, interrelacin y evolucin de to-
dos los genes de un organismo. La ciencia ge-
nmica se ha desarrollado con el apoyo de la
bioinformtica, interfase indispensable para el
anlisis terico de las secuencias de ADN depo-
sitadas en bases de datos.
La biologa estructural y las tcnicas de
ADN recombinante han sido aplicadas al estu-
dio y modificacin de protenas, desarrollndo-
se as la ingeniera de protenas. Esta disciplina
11/14/07 5:04:41 PM
 Ingeniera metablica de bacterias | 375

Z`\eZ`X^\ed`ZX Xe}c`j`j[\]clafjd\kXYc`Zfj
Y`f`e]fid}k`ZX Xe}c`j`j[\Zfekifcd\kXYc`Zf

dkjh_[dj[i

8IE
fhej[dWi
][decW [dp_cWi c[jWXeb_ice

jhWdiYh_fjecW fhej[ecW c[jWXebecW

`e^\e`\iX^\ek`ZX `e^\e`\iX[\gifk\eXj

Figura 1.
Herramientas tericas y experimentales de la ingeniera
de vas metablicas.

Biotecnologia V14 CS3.indd 375 11/14/07 5:04:42 PM

 376 | Ingeniera metablica de bacterias
tiene como objetivo la modificacin racional
de las propiedades de una protena, tomando
como base la informacin funcional y estruc-
tural. La ingeniera de protenas generalmente
se aplica al mejoramiento de enzimas. Entre las
mejoras que se realizan a este tipo de prote-
nas, se pueden citar: incrementar la actividad
especfica, cambiar la especificidad hacia nue-
vos substratos, eliminar la inhibicin alostrica,
entre otros.
El anlisis de flujos metablicos tiene como
objetivo determinar la distribucin y la mag-
nitud de los flujos de materia y energa en la
clula (Stephanopoulos et al., 1999). Este tipo
de estudios es posible debido a que se cono-
ce prcticamente la totalidad de las reacciones
qumicas que constituyen el metabolismo de
E. coli. Se sabe que en el metabolismo de esta
bacteria participan aproximadamente 994 en-
zimas y 794 metabolitos. En esta red metab-
lica algunas reacciones siempre estn activas
y otras se inducen o reprimen dependiendo de
las condiciones donde se encuentre la bacteria.
La complejidad del metabolismo ha generado
la necesidad del desarrollo de mtodos de es-
tudio especiales, basados en enfoques tericos
y experimentales. Uno de estos mtodos es el
diseo de modelos del metabolismo celular in
silico, es decir, simulados en una computado-
ra. En esta rea se fusionan la informtica y la
bioqumica. Ahora es posible simular, median-
te algoritmos implementados en programas de
computadora, los flujos en las reacciones me-
tablicas de una bacteria. As se pueden calcu-
lar los efectos sobre esta distribucin de flujos
por cambios en la composicin de nutrientes,
o la ausencia de una o varias enzimas. Este tipo
de estudios ha sido muy valioso para ayudar a
entender cules son los lmites tericos en la
capacidad de produccin de algunos metaboli-
tos y cules son las distribuciones de flujos que
permiten llegar a dicho resultado.
La determinacin de flujos metablicos en
una clula viva es otra aproximacin al estudio
del metabolismo celular. Esta metodologa se
basa en la utilizacin de molculas marcadas
con istopos. Esta metodologa es muy pode-
Biotecnologia V14 CS3.indd 376
rosa pues permite determinar la mayora de los
flujos metablicos intracelulares. Sin embargo
requiere de equipos costosos y clculos muy
complejos. La determinacin de flujos meta-
blicos se basa en el uso de molculas de az-
cares en las cuales uno o varios de sus tomos
de carbono son el istopo 13C. Los istopos son
tomos de un elemento que difieren en el n-
mero de neutrones en su ncleo. En el caso del
carbono, el istopo ms abundante es el 12C.
Utilizando tcnicas analticas es posible de-
terminar si una molcula contiene tomos del
istopo 12C o 13C. En este tipo de experimentos,
generalmente se utiliza glucosa marcada. La
glucosa es alimentada en un cultivo bacteriano
y, como resultado del metabolismo, sus tomos
de carbono terminan formando parte de la ma-
yora de los componentes celulares. Utilizando
mtodos analticos, es posible determinar la
posicin de los tomos de 13C en un gran n-
mero de molculas en la clula. Con esta infor-
macin y el conocimiento de la estequiometra
en la red metablica del organismo, es posible
calcular los flujos internos en la clula (Flores
et al., 2002).
El objetivo del anlisis de control metablico
(ACM) es definir la relacin cuantitativa de una
reaccin enzimtica sobre el flujo en una va
metablica completa. Cuando se desea modifi-
car el metabolismo de un microorganismo, una
de las principales preguntas es: cul o cules
de las actividades enzimticas debern ser mo-
dificadas para lograr un efecto especfico? No es
sencillo encontrar la respuesta a esta pregunta,
principalmente debido a la gran complejidad del
metabolismo celular. El ACM es la principal he-
rramienta que permite identificar las enzimas
clave dentro de vas metablicas especficas. La
relacin entre una actividad enzimtica y el flujo
metablico se expresa como un coeficiente de
control de flujo (CCF). El CCF se define como el
cambio en el flujo en una va metablica que re-
sulta al incrementar la actividad de una enzima
en particular. La determinacin de los CCF para
las enzimas dentro de una va metablica espe-
cfica, permite establecer cules de ellas son las
que limitan el flujo. Una vez que se identifican
11/14/07 5:04:42 PM

las enzimas limitantes, mediante la aplicacin
de la ingeniera gentica se puede incrementar
el nivel de expresin de sus genes y por conse-
cuencia la actividad especfica.
Estrategias generales de ingeniera
de vas metablicas para incrementar
la produccin de un metabolito
de inters
La aplicacin ms frecuente de la IVM es la
modificacin del metabolismo con el fin de ge-
nerar cepas microbianas que puedan producir
una cantidad elevada de un metabolito parti-
cular. Existen estrategias generales de IVM que
se pueden aplicar con este fin, independiente-
mente del metabolito que se desee producir:
1) Con base en el conocimiento bioqumico de
la va metablica que sintetiza al compues-
to de inters, identificar a las enzimas que
son sujetas a control por inhibicin alostri-
ca, es decir, enzimas cuya actividad es inhi-
bida por sus productos u otros metabolitos
celulares. Estas son las enzimas clave que
regulan el flujo de carbono hacia una va es-
pecfica.
2) Para incrementar el flujo de carbono hacia
la va biosinttica de inters, identificar y eli-
minar los controles alostricos y transcrip-
cionales en las enzimas clave de esa va y en
los genes que las codifican.
3) Lograr un alto nivel de expresin de los ge-
nes que codifican para las enzimas clave a
las que ya se les elimin el control alost-
rico. Esto se logra insertando los genes de
inters en molculas de ADN llamadas pls-
midos, los cuales se replican en forma inde-
pendiente del cromosoma y se encuentran
en varias copias dentro de la clula.
4) Identificar y eliminar posibles pasos limi-
tantes dentro de la va de inters.
5) Incrementar la disponibilidad metablica
de los intermediarios del metabolismo cen-
tral que sean los precursores del metabolito
que se desea producir.
Estos puntos representan la serie de anlisis y
modificaciones mnimas a realizar con el propsi-
Biotecnologia V14 CS3.indd 377
Ingeniera metablica de bacterias | 377
to de generar una cepa de produccin mediante
la aplicacin de la IVM. A continuacin se presen-
tarn ejemplos de cmo se aplican estas estrate-
gias para el desarrollo de cepas de E. coli produc-
toras de compuestos aromticos y etanol.
Sntesis en E. coli de compuestos
aromticos con aplicacin industrial
mediante la introduccin de genes
heterlogos (caso melanina)
La va de sntesis de compuestos aromticos
es una fuente de metabolitos esenciales, as
como de un gran nmero de los llamados me-
tabolitos secundarios en bacterias y plantas.
Actualmente, la mayora de los compuestos
aromticos utilizados en la industria qumica
y de alimentos se obtienen por procesos de
sntesis qumica, empleando derivados de pe-
trleo como materia prima. Frecuentemente,
este tipo de procesos genera subproductos
que contaminan el medio ambiente. Utilizando
la ingeniera gentica de vas metablicas y de
protenas, es posible desarrollar cepas bacteria-
nas con el potencial para sintetizar molculas
tiles, hasta ahora slo obtenidas mediante
sntesis qumica. Estas cepas bacterianas utili-
zarn a la glucosa u otras fuentes renovables
de carbono como materia prima en procesos
biotecnolgicos no contaminantes.
Las tcnicas de ingeniera gentica permiten
el aislamiento de genes de cualquier organismo
y su modificacin para que sean funcionales en
otra especie. Siguiendo este esquema, ha sido po-
sible generar cepas de E. coli con la capacidad de
sintetizar protenas humanas de uso teraputico.
De la misma manera, se ha logrado la transferen-
cia a E. coli de genes que codifican para enzimas y
con esto modificar su metabolismo. Es as como
se abre la posibilidad de dotar a esta bacteria con
la capacidad de sintetizar metabolitos que se en-
contraran normalmente fuera de su repertorio
natural. En el caso de los compuestos aromticos,
existen ya varios ejemplos de cmo se pueden
extender las vas biosintticas naturales para que
este microorganismo pueda sintetizar nuevos
compuestos (figura 2).
11/14/07 5:04:42 PM
 378 | Ingeniera metablica de bacterias
Siguiendo esta estrategia, se han construi-
do cepas de E. coli con la capacidad de producir
directamente a partir de glucosa: cido qunico,
catecol, melanina e ndigo. Algunas cepas mo-
dificadas pueden producir precursores, los cua-
les, mediante transformaciones qumicas, dan
lugar a los compuestos: hidroquinona, benzo-
quinona, cido adpico, aspartamo, benzocana,
cido glico y pirogalol (LaDuca et al., 1999).
Varios de estos productos son sintetizados ac-
tualmente usando al petrleo como materia
prima. Al contar ahora con cepas bacterianas
capaces de producirlos a partir de glucosa, se
abre la posibilidad de desarrollar tecnologas
biolgicas sustentables no contaminantes.
En bacterias como E. coli, el repertorio meta-
blico de compuestos derivados de la va arom-
tica es limitado. Sin embargo, si se considera la
totalidad de los organismos que poseen esta va,
es posible observar la gran diversidad en com-
puestos que se derivan de la misma. Adems
del papel que estos compuestos juegan dentro
del metabolismo primario del organismo, se
han identificado funciones de proteccin contra
competidores, patgenos o depredadores, as
como una funcin estructural en plantas (ligni-
na). Entre los compuestos aromticos con un pa-
pel protector se encuentran las melaninas. Estos
son pigmentos que se han identificado en orga-
nismos desde bacterias hasta el hombre. Exis-
ten varios tipos de melaninas, uno de ellos, las
eumelaninas, provienen de la transformacin de
la tirosina por medio de la accin de la enzima
tirosinasa (Cabrera-Valladares et al., 2006). La eu-
melanina es un polmero aromtico; una de sus
principales caractersticas es el amplio rango de
absorcin dentro del espectro electromagntico.
Durante los ltimos aos ha crecido el inters
en este tipo de polmeros, debido a que se han
identificado algunas propiedades fisicoqumicas
importantes. Se sabe que la melanina puede ac-
tuar como fotoprotector, intercambiador cati-
nico, agente quelante, semiconductor amorfo, y
posee actividades antioxidantes y antivirales.
Las melaninas se pueden obtener mediante
extraccin a partir de tejidos animales o a par-
tir de cultivos de bacterias u hongos. Tambin
Biotecnologia V14 CS3.indd 378
se pueden obtener mediante sntesis qumica a
partir de L-dihidroxifenilalanina (L-dopa) u otras
molculas qumicamente similares. La extrac-
cin de melanina a partir de tejidos animales
presenta el problema de un bajo rendimiento
y, sobretodo, de variabilidad en la composicin
qumica del producto. En el caso de la extraccin
a partir de cultivos de cepas naturales produc-
toras de melaninas, el problema principal es el
bajo rendimiento. Finalmente, la produccin de
melaninas por medio de sntesis qumica es un
proceso costoso debido al bajo rendimiento du-
rante la sntesis de los precursores empleados.
Debido a las limitaciones de los mtodos
descritos anteriormente, existe el inters en el
desarrollo de cepas microbianas modificadas
que permitan la sntesis de melanina qumica-
mente homognea y con un nivel de produc-
cin elevado. Los procesos desarrollados a par-
tir de estas nuevas cepas han tenido un xito
limitado debido a que estas cepas no han sido
modificadas para sobreproducir compuestos
aromticos. Adems, se han utilizado genes
que codifican para tirosinasa provenientes de
hongos, los cuales no se expresan adecuada-
mente en E. coli.
Tomando en cuenta estos antecedentes, se
decidi trabajar en el desarrollo de cepas de E.
coli con una alta capacidad de produccin de
melanina. Esta bacteria carece de la capacidad
natural para sintetizar este polmero; sin em-
bargo, existen otras bacterias que s pueden
hacerlo. Considerando lo anterior, se decidi
utilizar las tcnicas de ingeniera gentica para
transferir de alguna de estas bacterias a E. coli
el gene que codifica para una tirosinasa. De las
bacterias que se sabe pueden producir melani-
na, se eligi a Rhizobium etli como organismo
donador del gene de la tirosinasa. R. etli es una
bacteria del suelo que se asocia con las plantas
de frijol para ayudarles a fijar nitrgeno y con
esto mejorar su capacidad de crecimiento. Con
base en la informacin sobre el genoma de esta
bacteria, se dise una estrategia para aislar el
gene melA que contiene la informacin para la
sntesis de la enzima tirosinasa. El gene melA
fue aislado e introducido a la bacteria E. coli. La
11/14/07 5:04:42 PM
 Ingeniera metablica de bacterias | 379

\ei\e[debf_hklWje[h_jheiW#*#F

)#Z[en_#:#WhWX_de#^[fjkbeiedWje#-#F
CdE ( _`[ifhl`efeX
gWZ
)#Z[^_Zhegk_dWje }Z`[fhle`Zf Y\eqfhl`efeX
CdE> !
Ab[Xi_[bbWfd[kced_W[ (
idj[i_i 9k !( WhePWheO YWj7 >(
g`if^Xcfc }Z`[f^}c`Zf )#Z[^_Zhei_gk_cWje ZXk\Zfc }Z`[fX[g`Zf
gkc_YW \[^b_d] Ab[Xi_[bbWfd[kced_W[ 7Y_d[jeXWYj[hYWbYeWY[j_Yki
idj[i_i idj[i_i
Y\eqfZXeX |Y_Zef#Wc_deX[dpe_Ye Yeh_icWje C$]\e`cXcXe`eX XjgXikXdf
gkc_YW gkc_YW

|Y_Ze\b_Ye WdjhWd_bWje C$k`ifj`eX

c[b7
H^_peX_kc[j_b
][d[idW^
e[`^f _dZeb d\cXe`eX
Fi[kZecedWi
fkj_ZW
C$ki`gkf]Xef

Figura 2.
Compuestos aromticos sintetizados por Escherichia coli
mediante la introduccin de genes de otras especies mi-
crobianas. El nombre de los genes introducidos y el orga-
nismo del que provienen estn indicados en las flechas
que dan lugar a cada compuesto.

Biotecnologia V14 CS3.indd 379 11/14/07 5:04:43 PM

 380 | Ingeniera metablica de bacterias
expresin de este gene en la bacteria permiti
la generacin de una cepa recombinante de E.
coli que adquiri la capacidad de sintetizar me-
lanina a partir de tirosina (Cabrera-Valladares et
al., 2006) (figura 3). Con esta cepa recombinan-
te de E. coli se desarroll un proceso fermen-
tativo con el cual se logr producir hasta 6 g/l
de melanina en la escalas de 1, 10 y 100 litros
(Lagunas-Muoz et al., 2006).
A la fecha, nuestro grupo de investigacin
contina mejorando la produccin de melani-
na a partir de clulas completas de E. coli. Sin
duda uno de los principales retos es producir
el pigmento a partir de fuentes de carbono de
menor precio que la tirosina. Esto se puede lo-
grar manipulando el metabolismo central del
carbono, es decir, canalizando la glucosa hacia
la formacin de los precursores de los amino-
cidos aromticos (fosfoenol piruvato y eritrosa-
4-fostato) y eliminando la regulacin de la va
de produccin de tirosina. En trabajos previos
hemos utilizado estrategias similares para
maximizar la produccin de fenilalanina (Bez
et al., 2004). Sin embargo, acoplar la produccin
de melanina a la generacin de tirosina requeri-
r de la aplicacin de estrategias novedosas de
la ingeniera de vas metablicas para lograr un
proceso de alto rendimiento. Aunado a esto, el
desarrollo de estos catalizadores nos proveer
del conocimiento necesario para producir me-
laninas de diversos colores, que tienen diferen-
tes propiedades y aplicaciones en campos tan
diversos como el de salud, cosmetologa, biol-
gicos, de barnices y pinturas, de sntesis qumi-
ca y fabricacin de polmeros conductores de
electricidad, entre otros.
Sntesis en E. coli de compuestos de
fermentacin con aplicacin industrial
mediante la introduccin de genes
heterlogos (caso etanol carburante
a partir de residuos agroindustriales)
El etanol anhidro o etanol carburante es un ex-
celente combustible que, adems, puede usar-
se como oxigenante de combustibles fsiles, o
bien como sustituto de gasolina. Los combus-
Biotecnologia V14 CS3.indd 380
tibles fsiles tienen una disponibilidad finita
y, dado el extensivo uso que actualmente se
hace de ellos, se agotarn en el presente siglo.
El etanol carburante se produce mediante tec-
nologas biolgicas a partir de material reno-
vable, no es contaminante como el petrleo,
su uso no incrementa la concentracin neta
de bixido de carbono en la atmsfera. Por
tanto, el uso del etanol carburante no propi-
cia el incremento de temperatura ni el cambio
climtico en el planeta. Actualmente existen
tecnologas consolidadas y bien desarrolladas
para producir etanol carburante. Dichas tec-
nologas utilizan como fuente de carbono a la
sacarosa proveniente de la caa de azcar, en
Brasil, y a la glucosa proveniente del almidn
de maz. en EE.UU. Mxico no es autosuficien-
te en la produccin de maz, es ms, se impor-
tan ms de ocho millones de toneladas al ao
de este grano para satisfacer las necesidades
directas de alimentacin de la poblacin, o in-
directas a travs de la engorda de ganado para
consumo humano. Entonces esta materia pri-
ma no es viable para la produccin de etanol
carburante. Por otro lado, an cuando Mxico
produce excedentes de sacarosa y los exporta,
este azcar proveniente de la caa de azcar
tampoco es una materia prima viable para pro-
ducir etanol. Las razones no son tecnolgicas
sino econmicas: tales excedentes no satisfa-
cen los altos volmenes requeridos para que el
etanol sea empleado como energtico, el costo
del etanol de sacarosa nacional (la ms costo-
sa del mundo) es mayor comparado con el de
la gasolina (Martnez et al., 2006).
Por su abundancia y capacidad de reno-
vacin sustentable, las materias primas ms
viables para la produccin de biocombusti-
bles resultan ser los azcares presentes en los
residuos agroindustriales (la lignocelulosa o
biomasa), siendo su bajo o nulo costo otro fac-
tor que favorece su uso. Los residuos de la in-
dustria azucarera, y potencialmente cualquier
residuo agroindustrial, son sustratos ms eco-
nmicos, pero ms complejos que la glucosa y
la sacarosa, y pueden ser convertidos en pro-
ductos tiles mediante procesos de fermenta-
11/14/07 5:04:43 PM
 Ingeniera metablica de bacterias | 381

Figura 3.
Lado izquierdo de la caja: cepa de E. coli silvestre (no pro-
ductora de melanina). Lado derecho: cepa de E. coli modi-
ficada por tcnicas de ingeniera metablica para producir
melanina.

Biotecnologia V14 CS3.indd 381 11/14/07 5:04:44 PM

 382 | Ingeniera metablica de bacterias
cin. En promedio el bagazo de caa de azcar
mexicano contiene 42% de celulosa y 28% de
hemicelulosa. sta ltima est compuesta de
polmeros de xilosa, cido urnico, radicales
acetilo, arabinosa y manosa. Tcnica y econ-
micamente es recomendable llevar a cabo una
hidrlisis qumica de la fraccin hemicelulsica,
generando jarabes que contienen xilosa, arabi-
nosa y glucosa, en una relacin 80, 5 y 15% y
una hidrlisis enzimtica de la fraccin celul-
sica (Ingram et al., 1999 y Martnez et al., 2000),
para generar glucosa y celobiosa. La mayora de
los microorganismos en la naturaleza utilizan
glucosa para llevar acabo sus actividades me-
tablicas. No obstante, la variedad de micro-
organismos que metabolizan pentosas y otras
hexosas, diferentes a la glucosa, es restringida;
ms an, no existen microorganismos silves-
tres capaces de metabolizar eficientemente
xilosa o arabinosa o mezclas de glucosa-xilosa
o glucosa-celobiosa en productos de fermenta-
cin. Los microorganismos ms eficientes en la
produccin de etanol, la levadura Saccharomy-
ces cerevisiae y la bacteria Zymomonas mobilis,
nicamente pueden usar glucosa, sacarosa y
fructosa para producir etanol, pero no tienen
la capacidad de metabolizar xilosa, arabinosa y
celobiosa, o mezclas de ellas. Mediante el uso
de la IVM se pueden disear y desarrollar cepas
de bacterias y levaduras con el propsito de
metabolizar y canalizar el flujo de esqueletos
de carbono hacia la formacin de etanol a par-
tir de pentosas como xilosa y arabinosa. Desde
el punto de vista tcnico e industrial, las cepas
ms exitosas han sido las construidas por IVM
a partir de E. coli mediante la introduccin de
vas forneas para producir etanol (Ingram et
al., 1999). Entre las estrategias utilizadas estn:
la integracin a cromosoma de los genes que
codifican para la piruvato descarboxilasa (pdc)
y alcohol deshidrogenasa (adh) de Zymomonas
mobilis, la interrupcin de vas que compiten
con el piruvato por la produccin de etanol
(Ingram et al., 1999) y la construccin de cepas
que eliminen el fenmeno de represin cata-
blica y puedan metabolizar pentosas y hexo-
Biotecnologia V14 CS3.indd 382
sas simultneamente. La figura 4 muestra el
esquema metablico ideal para la produccin
de etanol a partir de glucosa y xilosa en cepas
etanolognicas de E. coli.
Una de los microorganismos ms exitosos
que pretende ser utilizado a escala industrial
para producir etanol a partir de hidrolizados
de residuos agroindustriales es la cepa E. coli
KO11. Esta cepa es capaz de convertir todos
los azcares presentes en los hidrolizados del
bagazo de caa de azcar en etanol con rendi-
mientos mayores a 90% del terico, con con-
centraciones de etanol de 45 g/L. Sorprenden-
temente, esta cepa en cultivos anaerobios con
glucosa o xilosa incrementa sustancialmente
su velocidad especfica de crecimiento, el flu-
jo glicoltico y de consumo de azcares (Huer-
ta-Beristin et al., 2005). Actualmente varios
grupos en el mundo, incluyendo el nuestro de
ingeniera metablica en el Instituto de Bio-
tecnologa de la UNAM, estamos tratando de
mejorar cepas como la descrita anteriormente.
Los principales objetivos son obtener mayores
concentraciones de etanol en menor tiempo,
realizar la hidrlisis de la fraccin celulsica del
bagazo de caa en el mismo reactor para que
fermenten al mismo tiempo tanto las pentosas
y hexosas, provenientes de la fraccin hemice-
lulsica, como la glucosa, obtenida de la hidr-
lisis de la celulosa. Para lograr estos objetivos
se requiere de una coordinacin y colaboracin
estrecha entre actores del mbito tecnolgico
y cientfico, que definan los requerimientos de
un proceso industrial de ingeniera de vas me-
tablicas que permita mejorar los biocatlizado-
res productores de etanol a partir de residuos
agroindustriales.
Agradecimientos
Se reconoce el apoyo del Programa de Apo-
yo a Proyectos de Investigacin e Innovacin
Tecnolgica, UNAM, proyectos: IN220403 e
IN205005; y del Conacyt, proyectos: Conacyt-
Sagarpa 2004-C01-224 y Conacyt-Estado de
Morelos MOR-2004-C02-048.
11/14/07 5:04:45 PM
 Ingeniera metablica de bacterias | 383

]bkYeiW n_beiW

No?<>=
jhWdifehj[Z[]bkYeiW FJI jhWdifehj[Z[n_beiW
No?;
7JF
n_beiW 7:F

7JF
7:F
lWZ[bWi
f[djeiWi
\ei\Wje
]bkYb_i_i lWZ[PocededWi
ceX_b_i_dj[]hWZW[d
;iY^[h_Y^_WYeb_fWhW
bWfheZkYY_d[\_Y_[dj[
Z[[jWdeb

g`ilmXkf
[\ZXiYfo`cXjX 9E(
f_hklWje XZ\kXc[\_[f
D7:!
D7:>!>! !9e7
f_hklWje
D7:>!>!
\ehcWjeb_WiW
WY[j_b#9e7 WY[jWbZ[^Ze XcZf_fc
D7:>!>!
WY[jWbZ[^ZeZ[i^_Zhe][dWiW D7:>!>! [\j_`[if^\eXjX
bWYjWje \ei\ejhWdiWY[j_bWiW
Z[i^_Zhe][dWiW F_
WbYe^eb D7:! D7:!
D7:! 9e7 Z[i^_Zhe][dWiW
WY[job#F
lW^ecbe]WZ[
7JF fheZkYY_dZ[[jWdeb
WY[jWje#Y_dWiW
7:F

bWYjWje \ehcWje WY[jWje \kXefc

bW\ehcWY_dZ[bWYjWje"\ehcWjeoWY[jWje\k[_dWYj_lWZWfWhW\Wleh[Y[hbWidj[i_iZ[[jWdeb

Figura 4.
Esquema metablico ideal para la produccin de etanol a
partir de glucosa y xilosa en cepas etanolognicas de E. coli.

Biotecnologia V14 CS3.indd 383 11/14/07 5:04:45 PM

 384 | Ingeniera metablica de bacterias
Bibliografa
Bez, J. L. et al., Metabolic engineering and protein direc-
ted evolution increase the yield of L-phenylalanine
synthesized from glucose in Escherichia coli, en Biote-
chnol. and Bioeng., 87, 2004.
Cabrera-Valladares, N. et al., Expression of the melA gene
from Rhizobium etli CFN42 in Escherichia coli and cha-
racterization of the encoded tyrosinase, en Enzyme
Microb. Technol., 38, 2006.
Flores, S. et al., Analysis of carbon metabolism in Escheri-
chia coli strains with an inactive phosphotransferase
system by 13C labeling and NMR spectroscopy, en Me-
tab. Eng., 4, 2002.
Huerta-Beristin, G. et al., Ingeniera metablica para in-
crementar el flux y rendimiento de etanol en Escheri-
chia coli etanolognica, en Revista Mexicana de Inge-
niera Qumica, vol. 4, 2005.
Biotecnologia V14 CS3.indd 384
Ingram, L. O. et al., Enteric bacterial catalyst for fuel etha-
nol production, en Biotechnology Progress, 15, 1999.
LaDuca, R. J. et al., Metabolic pathway engineering of aro-
matic compounds, en Davies y Demain (eds.), Manual
of industrial microbiology and biotechnology, Was-
hington, American Society for Microbiology, 1999.
Lagunas-Muoz, V. H. et al., Optimum melanin produc-
tion using recombinant Escherichia coli, en J. Appl.
Microbiol., 101, 2006.
Martnez, A. et al., Etanol carburante a partir de bagazo
de caa?, en Claridades Agropecuarias, 2006.
Olmos, J. et al., Production in Escherichia coli of a rat chi-
meric proinsulin polypeptide carrying human A and B
chains and its preparative chromatography, en J. Bio-
technol., 38, 1994.
Stephanopoulos, G., Metabolic fluxes and metabolic en-
gineering, en Metabolic Engineering, 1, 1999.
11/14/07 5:04:45 PM